Name: Nuovo approccio per la registrazione simultanea di attività simpatica renale del nervo e pressione del sangue con linfusione endovenosa in consapevole, topi sfrenati. (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-14T12:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 8 s
Description: Impara a registrare l'attività del nervo simpatico renale in topi coscienti e liberi, evitando gli effetti confondenti dell'anestesia. Questa tecnica chirurgica consente valutazioni affidabili del tono autonomo in condizioni fisiologiche.

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S.M.H. è stato sostenuto da borse di studio post-dottorati dal istituti canadesi per Health Research (CIHR), Heart & Stroke Foundation del Canada (HSFC) e Alberta Innova Health Solutions (AiHS); J.E.H. è sostenuta da una sovvenzione dal National Heart, Lung and sangue Istituto PO1HL-51971.

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</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Qui abbiamo delineato, ha dimostrato e convalidato un metodo novello per la valutazione mirato del RSNA in topi coscienti, liberi di muoversi e di riposare comodamente nelle loro gabbie di casa. A seguito di impianto chirurgico di un radiotelemeter di pressione arteriosa, un catetere di infusione endovenosa e un design personalizzato elettrodo bipolare RSNA, topi recupero da un intervento chirurgico e sono stati lasciati indisturbati per 48-72 ore. Topi è rimasto comodamente depositati nella loro gabbia a casa in ogni mo...

Interesse nel usando topi in diverse aree della ricerca biomedica continua ad espandersi con lo sviluppo di innumerevoli modelli geneticamente. Per la maggior parte, progressi tecnici hanno tenuto il passo con l'uso aumentato dei topi in fisiologia e ora c'è un'impressionante selezione di dispositivi miniaturizzati, sviluppato specificamente per la misurazione di parametri fisiologici importanti nei topi. Anche se telemetriche dispositivi per la misura di autonomica diretta tono nervoso nel ratto cosciente sono stati disponibili per oltre un decennio, dispositivi miniaturizzati per valutare l'attività del nervo in topi coscienti non sono attualmente disponibili. Gli investigatori in genere aggirare questa limitazione valutando il contributo del sistema nervoso autonomo con metodi indiretti (cioè le catecolammine del plasma o nelle urine, blocco farmacologico autonomico, analisi spettrale dei reticoli di sangue pressione/pulsazioni)1.
Mentre questi metodi forniscono preziose informazioni, il risultato è un quadro globale di tono nel complesso autonomo, piuttosto che rivelare il discreto contributo di popolazioni isolate dei nervi al fenomeno in esame. In alternativa, registrazione diretta delle attività dai nervi specifici è stato eseguito in topi anestetizzati, che pone una moltitudine di preoccupazioni. È estremamente difficile mantenere stabile la pressione sanguigna all'interno della gamma fisiologica in un mouse anestetizzato per diverse ore dopo chirurgia. Infatti, in questi tipi di esperimenti, la pressione sanguigna è spesso non dichiarata o presentata a livelli estremamente bassi (cioè 60-80 mmHg contro > 100 mmHg in un mouse cosciente)2. La fragilità del sistema cardiovascolare ha esibito in una preparazione del mouse anestetizzati spesso osta ad una valutazione significativa di attività autonoma del nervo, dato il rapporto codipendente fra pressione sanguigna e del tono simpatico3, 4.
Per risolvere questa limitazione, un nuovo metodo per la registrazione diretta di attività simpatica renale del nervo (RSNA) in consapevole, topi sfrenati, indisturbati all'interno della loro casa gabbie è stato sviluppato. Sia l'approccio chirurgico e sperimentale per la corretta implementazione di questa tecnica è descritta in dettaglio. Questa preparazione consente al ricercatore di registrare simultaneamente la pressione arteriosa tramite radiotelemetria oltre ai RSNA, con in più la capacità di infondere per via endovenosa agenti di interesse senza disturbare il mouse.
Ventiquattro ore post-chirurgia, topi si comportano normalmente e non presentano segni di dolore o angoscia. Le registrazioni sperimentali possono quindi iniziare 48-72 ore successive post-all'intervento mentre il mouse si riposa comodamente nella sua gabbia a casa con accesso illimitato a cibo, acqua e arricchimento ambientale. Cancella le tracce RSNA sono presentate e le risposte caratteristiche di questa popolazione di nervo ai movimenti normali fisici dell'animale (come mangiare e governare) sono dimostrate oltre alla modulazione farmacologica della pressione arteriosa sistemica. La qualità e la specificità del segnale RSNA è ulteriormente convalidato dal blocco gangliare. Questo manoscritto contiene il complemento audiovisivo per una descrizione inizialmente pubblicato di questa tecnica5.

<table><tbody><tr><td>Filo a trefoli multipli in acciaio inossidabile rivestito in teflon</td><td>A-M Systems</td><td>793200</td><td>0,001 pollici di diametro nudo; 0,0055 pollici di diametro rivestito</td></tr><tr><td>#11 Lama per bisturi</td><td>Fisher Scientific</td><td>ALMM9011</td><td></td></tr><tr><td>Saldatore e saldatura</td><td></td><td></td><td>Qualsiasi marca o modello adatto</td></tr><tr><td>Connettori maschio a pin miniaturizzati</td><td>A-M Systems</td><td>520200</td><td>Ottone con placcatura in oro</td></tr><tr><td>Connettori maschio miniaturizzati femmina</td><td>A-M Systems</td><td>520100</td><td>Ottone con placcatura in oro</td></tr><tr><td>Guaina termorestringente</td><td>Radio Shack</td><td>Modello #: 278-1610 |&nbsp; Catalogo #: 2781610</td> Tubo in polietilene 90 (PE90) <td>da 1,6 mm di diametro</td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>CA-63018-703</td><td>Diametro interno 0,86 mm; diametro esterno 1,27 mm</td></tr><tr><td>Microscopio da dissezione</td><td>Leica Microsystems Leica</td><td>M80</td><td>Qualsiasi marca o modello adatto anche</td></tr><tr><td>Tubo in polietilene 10 (PE10)</td><td>Braintree Scientific</td><td>PE10&nbsp; 50 FT</td><td>0,28 mm di diametro interno; 0,61 mm di diametro esterno</td></tr><tr><td>Super Colla Liquid</td><td>Loctite</td><td>n/a</td><td>Formula Liquida; qualsiasi marca adatta</td></tr> Super <tr><td>Colla Gel</td><td>Loctite</td><td>n/a</td><td>Gel Formula; qualsiasi marca adatta</td></tr><tr><td>Tubo in polietilene</td><td>Scientific Commodities</td><td>BB31695-PE/13</td><td>Per piedistallo 2,7 mm di diametro interno; 4,0 mm di diametro esterno</td></tr><tr><td>Servizi di sterilizzazione ospedaliera e Pacchetti di sterilizzazione con ozono Contatta</td><td></td><td></td><td>i servizi di sterilizzazione dell'ospedale locale</td></tr><tr><td>Anestesia con isoflurano</td><td>Abbott</td><td>05260-05</td><td></td></tr><tr><td>Cuscinetti termici isotermici Deltaphase e tavolo chirurgico</td><td>Braintree Scientific</td><td>39OP</td><td>Mantieni caldi i cuscinetti termici in un 37&deg; C bagnomaria; Tavolo chirurgico corrispondente essenziale</td></tr><tr><td>Glicopirrolato</td><td>Amdipharm Mercury Company Limited</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di vaporizzazione isoflurano e flussometro</td><td>Braintree Scientific</td><td>VP I</td><td>Include fornitura di ossigeno di grado medico</td></tr><tr><td>Forbici per tessuti</td><td>Fine Science Tools</td><td>14173-12</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla fine</td><td>Fine Science Tools</td><td>15006-09</td><td></td></tr><tr><td>Piccoli applicatori con punta in cotone</td><td>Fisher Scientific</td><td>23400100</td><td></td></tr><tr><td>Fine Straight Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>#5, FST by Dumont Biologie Tip</td></tr><tr><td>Angled Ropeps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td>#5/45 FST by Dumont</td></tr><tr><td>Small Absorbent Spears</td><td>Fine Science Tools</td><td>18105-03</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Sigma Aldrich</td><td>BR701605&nbsp; ALDRICH</td><td></td></tr><tr><td>Kwik-Sil 2 componenti Polimero siliconico</td><td>World Precision Instruments (WPI)</td><td>KWIK-SIL</td><td>Acquista punte specializzate extra da WPI</td></tr><tr><td>5-0 Polysorb Suture</td><td>Tyco Healthcare</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Silk Suture</td><td>Braintree Scientific</td><td>SUT-S&nbsp; 104</td><td>Marca Deknatel, bobina</td></tr><tr><td>Sonda per radiotelemetria</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>TA11-PAC10</td><td></td></tr><tr><td>Ricevitore per radiotelemetria</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>PhysioTel RPC-1</td><td></td></tr><tr><td>Riferimento</td><td>per la pressione ambientale Data Sciences International (DSI)</td><td>Apr-01</td><td></td></tr><tr><td>Adattatore di uscita per pressione</td><td>Data Sciences International (DSI)</td><td>R11CPA</td><td></td></tr><tr><td>Rena Pulse Tubing</td><td>Braintree Scientific</td><td>RPT-040</td><td></td></tr><tr><td>Infusion Swivel</td><td>Instech Solomon</td><td>375/D/22</td><td></td></tr><tr><td>Braccio di supporto girevole & Monta</td><td>Instech Solomon</td><td>SMCLA</td><td></td></tr><tr><td>Bottone Polisulfone&nbsp;</td><td>Instech Solomon</td><td>LW62S/6</td><td></td></tr><tr><td>Molla in acciaio inossidabile</td><td>Instech Solomon</td><td>PS62</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond adesivo chirurgico</td><td>3M</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Triplo unguento antibiotico</td><td>Fougera</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab 8 canali Sistema di acquisizione dati & Software</td><td>ADInstruments</td><td>PowerLab 8/35</td><td></td></tr><tr><td>Cavo isolato in PVC</td><td>Belden</td><td>Cavo di collegamento audio in PVC 32 AWG</td><td></td></tr><tr><td>Preamplificazione Headstage</td><td>Dagan Corporation</td><td>Modello 4002</td><td></td></tr><tr><td>Amplificatore differenziale</td><td>Dagan Corporation</td><td>EX4-400</td><td></td></tr><tr><td>Sodio nitroprussiato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71778-25G</td><td></td></tr><tr><td>Fenilefrina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6126-5G</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione fisiologica sterile 0,9% NaCl</td><td>Beckton Dickinson Contatta il</td><td></td><td>fornitore ospedaliero locale</td></tr><tr><td>esametonio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0879-5G</td><td></td></tr><tr><td>Tavolo antivibrante superiore in acciaio inossidabile</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Progettato su misura internamente; La solida piastra in acciaio su un piano di lavoro è adatta anche</td></tr><tr><td>gabbia di Faraday</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Tagliacapelli per piccoli animali progettata e costruita su misura</td></tr><tr><td></td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Drugstore, regolabarba da uomo adatto</td></tr><tr><td>Crema Dipilatoria</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Marca Veet, formula per pelli sensibili</td></tr><tr><td>10% Povidone</td><td>Iodio Purdue Prodotti</td><td>Betadiene</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanolo</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Microdivaricatori in acciaio</td><td>n/a</td><td>n/a</td><td>Prodotto internamente. Piega una graffetta d'acciaio e anello 4-0 seta per formare un divaricatore</td></tr><tr><td>Emostati</td><td>Fine Science Tools</td><td>13011-12</td><td></td></tr><tr><td>Pistola termica</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-201-27</td><td></td></tr></tbody></table>

nuovo approccio per la registrazione simultanea di attività simpatica renale del nervo e pressione del sangue con l'infusione endovenosa in consapevole, topi sfrenati.

Novel Approach for Simultaneous Recording of Renal Sympathetic Nerve Activity and Blood Pressure with Intravenous Infusion in Conscious, Unrestrained Mice.

Nervi simpatici renali contribuiscono notevolmente a fenomeni sia fisiologici e patofisiologici. Valutazione attività renale del nervo simpatico (RSNA) è di grande interesse in molti settori della ricerca, come la malattia renale cronica, ipertensione, insufficienza cardiaca, diabete e obesità. Inequivocabile valutazione del ruolo del sistema nervoso simpatico è dunque indispensabile per una corretta interpretazione dei risultati sperimentali e la comprensione dei processi di malattia. RSNA è stato tradizionalmente misurato nei roditori anestetizzati, tra cui topi. Tuttavia, topi esibiscono solitamente molto bassa pressione arteriosa sistemica e instabilità emodinamica per diverse ore durante l'anestesia e la chirurgia. Interpretazione significativa del RSNA è confuso da questo stato non-fisiologica, dato l'intimo rapporto tra tono nervoso simpatico e stato cardiovascolare. Per risolvere questa limitazione degli approcci tradizionali, abbiamo sviluppato un nuovo metodo per la misurazione RSNA in topi coscienti, liberi di muoversi. Topi cronicamente sono stati strumentati con radio-telemetri per il monitoraggio continuo della pressione arteriosa come pure un catetere di infusione venosa giugulare ed elettrodo bipolare personalizzati per la registrazione diretta di RSNA. A seguito di un periodo di recupero di 48-72 ore, il tasso di sopravvivenza era al 100% e tutti i topi si sono comportati normalmente. A questo punto di tempo, RSNA è stato registrato con successo nell'80% dei topi, con segnali vitali acquisiti fino a 4 e 5 giorni dopo l'intervento in 70% e il 50% dei topi, rispettivamente. Pressione fisiologica di sangue sono stata registrata in tutti i topi (116±2 mmHg; n = 10). RSNA registrato aumentato con mangiare e governare, come affermato nella letteratura. Inoltre, RSNA è stato convalidato da blocco gangliare e modulazione di pressione sanguigna con agenti farmacologici. Qui, è descritto un metodo efficace e gestibile per la registrazione libera di RSNA in topi coscienti, liberi di muoversi.

Seguendo il protocollo descritto, il tasso di sopravvivenza era 100% - tutti i topi instrumentati in questo studio è sopravvissuto e ha recuperato bene dopo la procedura chirurgica. Entro 24 ore dalla preparazione chirurgica, tutti i topi si sono comportati normalmente, esibendo mangiare tipico, comportamenti esplorativi e governare. Gli animali non hanno mostrato alcun segno di dolore o angoscia in questo momento. 48 ore dopo la chirurgia, un segnale RSNA verificabile e chiaro è stato re...

Topi anestetizzati mostrano non-fisiologica pressione arteriosa sistemica, che preclude una valutazione significativa del tono autonomo dato l'intima relazione tra pressione sanguigna e il sistema nervoso autonomo. Così, è descritto un metodo novello per attività simpatica renale contemporaneamente record del nervo e pressione del sangue con l'infusione endovenosa in topi coscienti.

Nuovo approccio per la registrazione simultanea di attività simpatica renale del nervo e pressione del sangue con l'infusione endovenosa in consapevole, topi sfrenati.

Renal sympathetic nerves contribute significantly to both physiological and pathophysiological phenomena. Evaluating renal sympathetic nerve activity ...

L'obiettivo generale di questo nuovo metodo chirurgico e sperimentale è valutare l'attività simpatica renale in topi coscienti e non trattenuti senza effetti confondenti dell'anestesia. Dato il recente interesse per i modelli murini, questo approccio fornisce una tecnica accessibile con cui il tono autonomo può essere valutato in modo affidabile nei topi coscienti. Il vantaggio principale di questa tecnica è che l'attività nervosa può essere valutata nel topo cosciente e comodamente a riposo senza fattori confondenti come l'anestesia o la contenzione.Dopo aver preparato il topo per l'intervento chirurgico, posizionarlo sul lato destro con l'estremità rostrale rivolta verso la sinistra del chirurgo. Per prima cosa, fai un'incisione di cinque millimetri nella regione medio-dorsale con il bisturi. In secondo luogo, praticare un'incisione più grande nella pelle sovrastante il fianco sinistro perpendicolare alla colonna vertebrale in due millimetri caudale alla gabbia toracica.Da lì, scavare un ago in acciaio inossidabile calibro 13 per via sottocutanea fino al sito di uscita dorsale. Quindi, utilizzare un elettrodo RSNA preparato. Passalo attraverso l'ago e tira indietro l'ago in modo

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Gli 8-Channel High Throughput CODA sistema non invasivo della pressione arteriosa misura la pressione arteriosa in un massimo di 8 topi o ratti contemporaneamente. Questa coda polsino sistema utilizza la pressione del volume di Registrazione (VPR) per misurare la pressione arteriosa attraverso la determinazione del volume di sangue coda.

Misurazione della pressione sanguigna nei topi mediante pressione del volume di registrazione, una coda-bracciale Metodo

Questo video dimostra una tecnica di studio dell'attività dei nervi simpatici renali (RSN) in risposta ai cambiamenti della pressione arteriosa nei ratti. Dopo aver collegato un catetere sensibile alla pressione all'arteria femorale, i nervi simpatici renali vengono esposti. I nervi vengono quindi sollevati su un elettrodo di registrazione e la loro attività elettrica viene registrata. Successivamente, viene iniettato un farmaco vasocostrittore per aumentare la pressione sanguigna e vengono...

Registrazione dei cambiamenti nell'attività del nervo simpatico renale in risposta alla pressione arteriosa nei ratti

Questo film dimostra come acquisire l'emodinamica sistemica e epatici nei topi. L'intero controllo comprende l'acquisizione dei parametri vitali, pressione sanguigna sistemica, pressione venosa centrale, portata arteria epatica comune, e di pressione della vena porta e la portata portale in topi.

Monitoraggio della sistemici e epatica parametri emodinamici nei topi

L'obiettivo di questo protocollo è valutare la pressione sanguigna sistemica in topi coscienti che si muovono liberamente utilizzando dispositivi di radio-telemetria impiantabili.

Misurazione della pressione sanguigna a lungo termine in topi liberi di muoversi utilizzando la telemetria

Metodi per misurare le risposte cardiovascolari e simpatiche a manipolazioni del sistema nervoso centrale (SNC) sono importanti per far progredire la neuroscienza. Questo protocollo è stato sviluppato per aiutare gli scienziati con misurare e quantificare i cambiamenti acuti nell'attività comprensiva renale del nervo (RSNA) in ratti anestetizzati (non-sopravvivenza).

Quantificare i cambiamenti acuti nell'attività comprensiva renale del nervo in risposta a manipolazioni del sistema nervoso centrale in ratti anestetizzati

Qui, descriviamo una configurazione per la registrazione simultanea di elettrocardiografia e pressione sanguigna intra-arteriosa (BP) in ratti sperimentali, che possono essere fatto con attrezzatura standard in strutture per animali e possono essere applicati a fisiologiche o farmacologiche studi per studiare i meccanismi patogeni o terapeutici nella medicina cardiovascolare.

Elettrocardiografia simultanea registrazione e invasiva sangue pressione misura in ratti

Il baroriflesso è un meccanismo di regolazione della frequenza cardiaca da parte del sistema nervoso autonomo in risposta ai cambiamenti della pressione sanguigna. Descriviamo una tecnica chirurgica per impiantare trasmettitori di telemetria per la misurazione continua e simultanea dell'elettrocardiogramma e della pressione sanguigna nei topi. Questo può determinare la sensibilità baroriflessa spontanea, un importante marker prognostico per le malattie cardiovascolari.

Impianto combinato di ECG telemetrico e trasmettitori di pressione sanguigna per determinare la sensibilità baroriflessa spontanea in topi coscienti

Il presente protocollo descrive una misurazione continua a lungo termine del flusso sanguigno renale in ratti coscienti e contemporaneamente la registrazione della pressione sanguigna con cateteri impiantati (riempiti di liquido o per telemetria).

Misurazione continua a lungo termine del flusso sanguigno renale nei ratti coscienti

Qui, presentiamo un protocollo per la denervazione simpatica renale (RDN) nei topi con ipertensione indotta dall'infusione di angiotensina II. La procedura è ripetibile, conveniente e consente di studiare i meccanismi regolatori della RDN sull'ipertensione e l'ipertrofia cardiaca.

Miglioramento della denervazione renale ha attenuato l'ipertensione indotta dall'infusione di angiotensina II

Questo protocollo descrive un metodo per ottenere registrazioni in vivo di singoli neuroni ad alta densità dal tronco encefalico di topi fissati alla testa. Questo approccio viene utilizzato per misurare l'attivazione del potenziale d'azione dei neuroni nel grigio periacqueduttale ventrolaterale - una regione del tronco encefalico inattiva durante il sonno REM (Rapid Eye Movement) - prima e durante l'anestesia generale.

Registrazioni acute multi-elettrodo a unità singola dal tronco encefalico di topi fissati alla testa

Impara a registrare l'attività del nervo simpatico renale in topi coscienti e liberi, evitando gli effetti confondenti dell'anestesia. Questa tecnica chirurgica consente valutazioni affidabili del tono autonomo in condizioni fisiologiche.

Nuovo approccio per la registrazione simultanea di attività simpatica renale del nervo e pressione del sangue con linfusione endovenosa in consapevole, topi sfrenati. (Video) | JoVE Journal

Nuovo approccio per la registrazione simultanea di attività simpatica renale del nervo e pressione del sangue con l'infusione endovenosa in consapevole, topi sfrenati.

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