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DOI: 10.3791/54173-v
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I meccanismi di ridimensionamento cellulare e intracellulare rimangono sfuggenti. L'uso di estratti di embrioni di Xenopus è diventato sempre più comune per chiarire i meccanismi di regolazione delle dimensioni degli organelli. Questo metodo descrive la preparazione dell'estratto embrionale e un nuovo saggio di scala nucleare attraverso il quale è possibile identificare i meccanismi di regolazione delle dimensioni nucleari.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di utilizzare gli estratti di uova ed embrioni di Xenopus per produrre un test in cui i nuclei di grandi dimensioni si restringono più piccoli. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave sulla biologia delle cellule nucleari, ad esempio quali sono i meccanismi che regolano le dimensioni nucleari? Il vantaggio principale di questa tecnica è che la composizione e le attività dell'estratto libero da cellule di Xenopus sono facilmente manipolabili per valutare i fatti sulle dimensioni nucleari.
Dopo aver preparato gli estratti di uova di Xenopus, lo sperma demembranato e i nuclei assemblati secondo il protocollo di testo, raccogli le uova appena deposte tenendo le rane su una capsula di Petri di vetro riutilizzabile. Favorire la deposizione delle uova applicando una leggera pressione sulla parte bassa della schiena vicino alla cloaca. Appoggiare il piatto a circa 45 gradi per consentire alle uova di raccogliersi lungo il bordo del piatto.
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