Name: Isolamento e lespansione delle staminali mesenchimali stromali derivate / cellule da placenta umana Tissue (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-06T14:10:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: Impara a isolare e espandere cellule stromali mesenchimali da tessuto placentare umano. Questo metodo dettagliato include dissezione anatomica, digestione enzimatica e coltura per adesione plastica.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

RP è stata sostenuta da un Salute e Medical Research Council (National NHMRC) Postdoctoral Fellowship Training. VS è stato sostenuto da una Università del Queensland Internazionale Postgraduate Student borsa di studio. MRD è stato sostenuto dalla NHMRC e Inner Wheel Australia. Ringraziamo personale medico e infermieristico per l&#39;assistenza nella consenso del paziente e la raccolta del campione. Ringraziamo il Prof. Nickolas Fisk, il Prof. Kerry Atkinson e il Dr Rohan Lourie per le discussioni penetranti in ostetricia, sviluppo feto-placentare e di anatomia placenta.

<ol><li>Brooke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+applications+of+mesenchymal+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic applications of mesenchymal stromal cells.</a> Semin Cell dev Biol. 18, 846-858 (2007).</li>
<li>Wei, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells%3A+a+new+trend+for+cell+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Phamacol+Sin%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells: a new trend for cell therapy.</a> Acta Phamacol Sin. 34, 747-754 (2013).</li>
<li>Ma, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunobiology+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Immunobiology of mesenchymal stem cells.</a> Cell Death Differ. 21, 216-225 (2014).</li>
<li>Timmins, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closed+system+isolation+and+scalable+expansion+of+human+placental+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Closed system isolation and scalable expansion of human placental mesenchymal stem cells.</a> Biotechnol Bioeng. 109, 1817-1826 (2012).</li>
<li>Barlow, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+human+placenta-+and+bone+marrow-derived+multipotent+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Dev%22%5BJournal%5D)">Comparison of human placenta- and bone marrow-derived multipotent mesenchymal stem cells.</a> Stem Cell Dev. 17, 1095-1107 (2008).</li>
<li>Jones, B. J., Brooke, G., Atkinson, K., McTaggart, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunosuppression+by+placental+indoleamine+2%2C3-dioxygenase%3A+a+role+for+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Immunosuppression by placental indoleamine 2,3-dioxygenase: a role for mesenchymal stem cells.</a> Placenta. 28, 1174-1181 (2007).</li>
<li>Parolini, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+cell+therapy+using+placenta-derived+cells%3A+disease+mechanisms%2C+cell+biology%2C+preclinical+studies%2C+and+regulatory+aspects+at+the+round+table%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Dev%22%5BJournal%5D)">Toward cell therapy using placenta-derived cells: disease mechanisms, cell biology, preclinical studies, and regulatory aspects at the round table.</a> Stem Cell Dev. 19, 143-154 (2010).</li>
<li>Benirschke, K., Burton, G. J., Baergen, R. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBenirschke%2C+K+%22Pathology+of+the+Human+Placenta%22">Pathology of the Human Placenta</a>. , 6 edn (2012).</li>
<li>Moore, K., Persaud, T., Torchia, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMoore%2C+K+%22The+developing+human%3A+clinically+oriented+embryology%22">The developing human: clinically oriented embryology</a>. , Elsevier/ Saunders. (2013).</li>
<li>Parolini, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+isolation+and+characterization+of+cells+from+human+term+placenta%3A+outcome+of+the+first+international+Workshop+on+Placenta+Derived+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: isolation and characterization of cells from human term placenta: outcome of the first international Workshop on Placenta Derived Stem Cells.</a> Stem cells. 26, 300-311 (2008).</li>
<li>Brooke, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manufacturing+of+human+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells+for+clinical+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Brit+J+Haematol%22%5BJournal%5D)">Manufacturing of human placenta-derived mesenchymal stem cells for clinical trials.</a> Brit J Haematol. 144, 571-579 (2009).</li>
<li>Pelekanos, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+trafficking+and+endocytosis+of+CXCR4+in+fetal+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+cell+biology%22%5BJournal%5D)">Intracellular trafficking and endocytosis of CXCR4 in fetal mesenchymal stem/stromal cells.</a> BMC cell biology. 15, 15(2014).</li>
<li>Chen, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecule+mesengenic+induction+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+to+generate+mesenchymal+stem%2Fstromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Small molecule mesengenic induction of human induced pluripotent stem cells to generate mesenchymal stem/stromal cells.</a> Stem Cells Transl Med. 1, 83-95 (2012).</li>
<li>Heazlewood, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+incidence+of+contaminating+maternal+cell+overgrowth+in+human+placental+mesenchymal+stem%2Fstromal+cell+cultures%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">High incidence of contaminating maternal cell overgrowth in human placental mesenchymal stem/stromal cell cultures: a systematic review.</a> Stem Cells Transl Med. 3, 1305-1311 (2014).</li>
<li>Horn, P., Bork, S., Wagner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+isolation+of+human+mesenchymal+stromal+cells+with+red+blood+cell+lysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Standardized isolation of human mesenchymal stromal cells with red blood cell lysis.</a> Methods Mol Biol. 698, 23-35 (2011).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).</li>
<li>Friedenstein, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precursors+for+fibroblasts+in+different+populations+of+hematopoietic+cells+as+detected+by+the+in+vitro+colony+assay+method%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hematol%22%5BJournal%5D)">Precursors for fibroblasts in different populations of hematopoietic cells as detected by the in vitro colony assay method.</a> Exp Hematol. 2, 83-92 (1974).</li>
<li>Caplan, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells.</a> J Orthop Res. 9, 641-650 (1991).</li>
<li>Futrega, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microwell-mesh%3A+A+novel+device+and+protocol+for+the+high+throughput+manufacturing+of+cartilage+microtissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The microwell-mesh: A novel device and protocol for the high throughput manufacturing of cartilage microtissues.</a> Biomaterials. 62, 1-12 (2015).</li>
<li>Liu, Y., Goldberg, A. J., Dennis, J. E., Gronowicz, G. A., Kuhn, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((One-step+derivation+of+mesenchymal+stem+cell+%28MSC%29-like+cells+from+human+pluripotent+stem+cells+on+a+fibrillar+collagen+coating%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">One-step derivation of mesenchymal stem cell (MSC)-like cells from human pluripotent stem cells on a fibrillar collagen coating.</a> PloS one. 7, 33225(2012).</li>
<li>Maleki, M., Ghanbarvand, F., Reza Behvarz, M., Ejtemaei, M., Ghadirkhomi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+mesenchymal+stem+cell+markers+in+multiple+human+adult+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Comparison of mesenchymal stem cell markers in multiple human adult stem cells.</a> Int J Stem Cell. 7, 118-126 (2014).</li>
<li>Hass, R., Kasper, C., Bohm, S., Jacobs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Different+populations+and+sources+of+human+mesenchymal+stem+cells+%28MSC%29%3A+A+comparison+of+adult+and+neonatal+tissue-derived+MSC%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Different populations and sources of human mesenchymal stem cells (MSC): A comparison of adult and neonatal tissue-derived MSC.</a> Cell Commun Signal. 9, 12(2011).</li>
<li>Bianco, P., Robey, P. G., Simmons, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells%3A+revisiting+history%2C+concepts%2C+and+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells: revisiting history, concepts, and assays.</a> Cell stem cell. 2, 313-319 (2008).</li>
<li>Bianco, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+meaning%2C+the+sense+and+the+significance%3A+translating+the+science+of+mesenchymal+stem+cells+into+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+med%22%5BJournal%5D)">The meaning, the sense and the significance: translating the science of mesenchymal stem cells into medicine.</a> Nature med. 19, 35-42 (2013).</li>
<li>Da Silva Meirelles, L., Caplan, A. I., Nardi, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+search+of+the+in+vivo+identity+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cells%22%5BJournal%5D)">In search of the in vivo identity of mesenchymal stem cells.</a> Stem cells. 26, 2287-2299 (2008).</li>
<li>Caplan, A. I., Correa, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+MSC%3A+an+injury+drugstore%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">The MSC: an injury drugstore.</a> Cell Stem Cell. 9, 11-15 (2011).</li>
<li>Wegmeyer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+Stromal+Cell+Characteristics+Vary+Depending+on+Their+Origin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Dev%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal Stromal Cell Characteristics Vary Depending on Their Origin.</a> Stem Cell Dev. , (2013).</li>
<li>Guillot, P. V., Gotherstrom, C., Chan, J., Kurata, H., Fisk, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+first-trimester+fetal+MSC+express+pluripotency+markers+and+grow+faster+and+have+longer+telomeres+than+adult+MSC%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cells%22%5BJournal%5D)">Human first-trimester fetal MSC express pluripotency markers and grow faster and have longer telomeres than adult MSC.</a> Stem cells. 25, 646-654 (2007).</li>
<li>Covas, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+mesenchymal+stromal+cells+obtained+from+diverse+human+tissues+share+functional+properties+and+gene-expression+profile+with+CD146%2B+perivascular+cells+and+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hemol%22%5BJournal%5D)">Multipotent mesenchymal stromal cells obtained from diverse human tissues share functional properties and gene-expression profile with CD146+ perivascular cells and fibroblasts.</a> Exp Hemol. 36, 642-654 (2008).</li>
<li>Crisan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+perivascular+origin+for+mesenchymal+stem+cells+in+multiple+human+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+stem+cell%22%5BJournal%5D)">A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs.</a> Cell stem cell. 3, 301-313 (2008).</li>
<li>Pelekanos, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+transcriptome+and+immunophenotype+analysis+of+renal+and+cardiac+MSC-like+populations+supports+strong+congruence+with+bone+marrow+MSC+despite+maintenance+of+distinct+identities%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+cell+res%22%5BJournal%5D)">Comprehensive transcriptome and immunophenotype analysis of renal and cardiac MSC-like populations supports strong congruence with bone marrow MSC despite maintenance of distinct identities.</a> Stem cell res. 8, 58-73 (2012).</li>
<li>da Silva Meirelles, L., Chagastelles, P. C., Nardi, N. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+reside+in+virtually+all+post-natal+organs+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells reside in virtually all post-natal organs and tissues.</a> J Cell Sci. 119, 2204-2213 (2006).</li>
<li>James, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+Signaling+Pathways+Governing+MSC+Osteogenic+and+Adipogenic+Differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Scientifica+%28Cairo%29%22%5BJournal%5D)">Review of Signaling Pathways Governing MSC Osteogenic and Adipogenic Differentiation.</a> Scientifica (Cairo). 2013, 684736(2013).</li>
<li>Xu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-Talking+between+PPAR+and+WNT+Signaling+and+Its+Regulation+in+Mesenchymal+Stem+Cell+Differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Cross-Talking between PPAR and WNT Signaling and Its Regulation in Mesenchymal Stem Cell Differentiation.</a> Curr Stem Cell Res Ther. , (2015).</li>
<li>Zhuang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Mechanisms+of+PPAR-gamma+Governing+MSC+Osteogenic+and+Adipogenic+Differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Molecular Mechanisms of PPAR-gamma Governing MSC Osteogenic and Adipogenic Differentiation.</a> Curr Stem Cell Res Ther. , (2015).</li>
<li>Moore, K., Persaud, T., Torchia, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMoore%2C+K+%22Before+We+Are+Born%3A+Essentials+of+Embryology+and+Birth+Defects%22">Before We Are Born: Essentials of Embryology and Birth Defects</a>. , Elsevier Health Sciences. 8 edn (2011).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+mesenchymal+stem+cells+of+fetal+and+maternal+origins+demonstrate+different+therapeutic+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Placental mesenchymal stem cells of fetal and maternal origins demonstrate different therapeutic potentials.</a> Stem Cell Res Ther. 5, 48(2014).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

La placenta è fisicamente grande organo feto-materna, da cui MSC fetale o materno può essere isolata 22. Qui, abbiamo fornito una panoramica dettagliata di anatomia placentare e istruzioni su come sezionare specificamente decidua (materna), villi coriali (fetale), e il tessuto piatto corionica (fetale) (Passo 2.2-2.4). Successivamente, abbiamo delineato un protocollo robusto che permette l&#39;isolamento MSC da ciascuno di questi tre tessuti (passo 2.5-2.6). Espansione placentare MSC è efficiente e culture apparire simile a midollo osseo culture MSC (Figure 3 e 4). Differenziamento osteogenico è affidabile (Figura 5B), mentre la differenziazione adipogenico è generalmente meno efficiente (Figura 5C) 5. Molti nuovi arrivati ​​al campo saranno presumere che le culture derivate da fetale villi coriali o tessuti piastra coriali saranno arricchiti per fetale MSC. Tuttavia, nelle nostre mani fearricchimento delle cellule tal è solo transitoria quando media espansione MSC standard come DMEM-LG + 10% FBS è utilizzato 5. Qui forniamo risultati rappresentativi utilizzando tessuti placentari derivati ​​da un bambino di sesso maschile. Utilizzando tessuti di placenta da un bambino di sesso maschile, le cellule fetali sono facilmente identificabili come avere i cromosomi XY, mentre le cellule materne sono identificabili come avere i cromosomi XX. La figura 6 mostra XY risultati FISH per una cultura rappresentante. Mentre MSC fetale (XY) sono arricchiti (fino all&#39;80%) nelle colture iniziali derivate da fetale villi corionica o tessuti piastra coriali, queste stesse culture sono rapidamente superate (~ 100%) materna (XX) MSC nei primi due passaggi . In mezzo standard, composto da DMEM-LG + 10% FBS, i pochi MSC materno-derivati ​​che contaminano i tessuti fetali outcompete le cellule fetali di derivazione nella cultura. Un passo fondamentale delineato in questo protocollo è un apprezzamento dell&#39;anatomia placentare e da dove fetalee dei tessuti materni può essere più efficace raccolta. Come indicato nella sezione rappresentante risultati, la dissezione di tessuto fetale non consentire l&#39;arricchimento transitoria per MSC feto-derivati. Miglioramenti in espansione medio formulazione, attraverso specifiche medie supplementazione fattore di crescita esogena dovrebbero consentire l&#39;espansione selettiva delle popolazioni MSC fetali-derivati, e la produzione di un prodotto cellulare che si arricchisce per fetale piuttosto che cellule materne (il nostro gruppo sta attualmente sviluppando tali formulazioni di media). La fabbricazione delle popolazioni MSC fetali può avere un numero di vantaggi, come MSC fetale sono preteso per avere una maggiore angiogenesi e proprietà immunosoppressive che equivalente popolazioni MSC materni 37. In ciascuno dei protocolli di isolamento descritti, abbiamo usato circa 10 g di tessuto. Un intero placenta è tipicamente 500-750 g, e nel lavoro precedente abbiamo dimostrato che attraverso il tessuto automatizzato digest e un bioreattore proc espansione delle celluleesses che dovrebbe essere possibile produrre oltre 7.000 dosi di cellule clinici da una sola placenta 4. Questi numeri evidenziano la potenziale idoneità di MSC placentare-derivati ​​nelle terapie MSC allogeniche, e il significato di questo metodo indipendentemente dall&#39;origine MSC (fetale o materno). Dal punto di vista terapeutico, è più critico che gli utenti hanno una comprensione completa del prodotto cellulare e la capacità di produrre in modo affidabile questo prodotto cellulare. Ci auguriamo che il nostro video vi aiuterà i ricercatori a capire l&#39;anatomia della placenta, isolare MSC dalla placenta, e anticipare la probabile composizione delle cellule fetali o materna delle loro culture.

Mesenchimali staminali / cellule stromali (MSC) stanno emergendo come un candidato promettente per l&#39;utilizzo nelle terapie a base di cellule 1. La maggior parte delle applicazioni sembrano indirizzare MSC-mediata riparazione dei tessuti o regolazione immunitaria 2. In molte di queste applicazioni, allogenico MSC può essere efficace come MSC autologhe 3. L&#39;uso di MSC allogeniche ha il vantaggio economico di essere compatibile con la produzione su larga scala di dosi multiple di cellule da un unico tessuto sorgente 4 per trattare molti pazienti. Storicamente, gli studi pre-clinici e clinici hanno utilizzato MSC-derivate dal midollo osseo 4. Il midollo osseo viene generalmente raccolti dalla cresta iliaca di un donatore volontario. Questo processo è invasivo, e solo una piccola quantità di midollo (~ 20 ml) viene raccolto attraverso un&#39;unica foratura. Generare numeri clinicamente significativi di MSC richiede una espansione in vitro. Cellulare la potenza diminuisce con il numero di passaggio <sup&gt; 3, creando un paradosso dove il numero teorico di cellule necessario per efficacia clinica è aumentato più la popolazione cellulare è espanso. In contrasto aspirati di midollo osseo, placenta termine è fisicamente grande tessuto di partenza (tipicamente 500-750 g 4), che può essere raccolto asetticamente corso di taglio cesareo senza rischi per il donatore. MSC derivato dalla placenta presentano durature proliferazione 5 e immunomodulante capacità di 6, superiore alle ossa MSC derivate dal midollo. In uno studio precedente, abbiamo dimostrato che un singolo placenta termine conteneva MSC sufficienti per la produzione di fino a 7.000 dosi cliniche 4. Queste caratteristiche rendono placenta un tessuto fonte ideale per la produzione di MSC allogeniche. La placenta è un organo feto-materna, che consiste di tessuto fetale e materno 7, e quindi MSC di origine fetale o materno può essere, teoricamente, isolato. I seguenti riferimenti forniscono deinformazioni tailed sullo sviluppo e la patologia, nonché esame microscopico e macroscopico della placenta umana e degli annessi 8,9. La placenta corretta è composto in gran parte dei vasi sanguigni fetali e secretoria e cellule di sostegno chiamate trofoblasto, che costituiscono i villi coriali coperti dal frondosum chorion (piatto) 8. I villi placentari ramificati sono bagnate nel sangue materno consegnati dalle arterie uterine a spirale, che consente di nutrienti, ormoni e lo scambio di gas tra il feto e la madre. La placenta è ancorato al endometrio tramite cellule stromali deciduali materne e fetali trophoblasts extravillious si alternano nella matrice extracellulare 8. I villi convergono sulla piastra corionica fetale dove formano il cordone ombelicale 8. Un risultato del primo workshop internazionale sulle cellule staminali placentari-Derived (2008) è stato un apprezzamento della necessità di standardizzare l&#39;isolamento e characterization di cellule dalla placenta umana termine 10. A causa dell&#39;anatomia della placenta, dissezione dei diversi tessuti, l&#39;isolamento di MSC e dei risultati attesi cultura può essere schiacciante per i nuovi arrivati ​​al campo. In questo protocollo, la raccolta dei tessuti placentari coriali, seguito da isolamento MSC e l&#39;espansione è accuratamente dettagliata. MSC caratterizzazione mediante citometria di flusso e nella differenziazione in vitro sono considerati di routine 5,11-13, e quindi solo brevemente descritti. Come evidenziato in una recente revisione sistematica della letteratura 14, MSC ottenuto dai villi coriali placentari sono generalmente assunti come fetale. Sebbene, solo il 18% degli studi ha esaminato l&#39;origine del MSC ottenuto, e di questi, solo la metà degli studi riportati MSC fetale e l&#39;altra metà riferito popolazioni MSC materni o misti. Ciascuna delle tre componenti del tessuto descritti (villi coriali, piastra e decidua coriali basale) sono bozzettoosed soprattutto del feto membrana / villi, e una piccola percentuale di cellule materne uterine di derivazione, che rimangono attaccati alla placenta consegnato. Forniamo dati che dimostrino che isolare MSC dal lato materno della placenta, piuttosto che la parte fetale della placenta, come abbiamo riportato in precedenza 5,11, è un materiale di partenza più appropriato se MSC materna sono desiderati. Questo protocollo descrive anche l&#39;uso di XY FISH per validare contributo fetale o materno per colture cellulari. Mentre questo è un protocollo standard del produttore, questa analisi è spesso trascurato e la sua importanza sottovalutata 14.

<table><tbody><tr><td>Reagents</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>14185-052</td><td>Nome lungo: Soluzione salina bilanciata Hanks</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td></td><td>Nome lungo: Siero fetale bovino sostitutivo</td></tr><tr>della<td>tripsina</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>12563-029</td><td>Nome lungo: TrypLE Select</td></tr><tr><td>DMEM-LG</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>11885-092</td><td>Nome lungo: Dulbecco' s Modified Eagles Glucosio medio-basso</td></tr><tr><td>DMEM-HG</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>11965118</td><td>Nome lungo: Dulbecco' s Eagles modificato Glucosio medio-alto (4,5 g/L)</td></tr><tr><td>PBS (senza Mg+Ca+)</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>14190-250</td><td>Nome lungo: Dulbecco's Phosphate tamponato soluzione salina, magnesio e calcio libero</td></tr><tr><td>Anti- anti-Gibco</td><td>/Invitrogen</td><td>15240-062</td><td>Nome lungo: soluzione antibiotica-antimicotica x100</td></tr><tr><td>polvere di paraformaldeide o soluzione al 4%</td><td>qualsiasi&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi I</td><td>Invitrogen</td><td>17100-017&nbsp;</td><td>2.500 U/ml</td></tr><tr><td>Dnase I</td><td>Sigma</td><td>D5025</td><td>10 mg/ml in&nbsp; 0,15 M NaCl</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Invitrogen</td><td>17105-041&nbsp;</td><td>10 mg/ml in acqua (20.000 U/ml).</td></tr><tr><td><forte>Materiale</forte></td><td><forte>Azienda</forte></td><td><forte>Numero di catalogo</forte></td><td><forte>Commenti</forte></td></tr><tr><td><forte>Monouso:</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 ml provette da centrifuga</td><td>Falcon o di qualsiasi marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, plactico sterile (25 cm e 10 cm di diametro)</td><td>Nunc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filtri cellulari (100 &mu; m)</td><td>Becton Dickinson</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>175 e 75 cm2 (T175 e T75) fiasche per colture tissutali</td><td>Nunc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5 ml, 10 ml, 25 ml pipette serologiche sterili</td><td>qualsiasi marca</td><td></td><td></td></tr><tr><td><forte>Materiale</forte></td><td><forte>Azienda</forte><</td><td>forte>Numero di catalogo</forte></td><td><forte>Commenti</forte></td></tr><tr><td>Equipaggiamento:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Centrifuga&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; incubatore per coltura tissutale 37 &deg; C, 5% CO2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Armadio</td><td></td><td></td><td></td> di sicurezza biologica</tr><tr><td>&nbsp; Forbici e pinzette</td><td></td><td></td><td></td>sterili</tr><tr><td>Rack per tubi&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette-boy o equivalenti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>tipo Gilson pipetter e puntali sterili 1.000 &; l, 200 & micro; l, 20 &micro;l.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>incubatrice a dondolo o agitante (37 &deg; C)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>dispositivi</td><td></td><td></td><td></td>di protezione individuale</tr>, <tr><td>soluzioni per la pulizia (adatte per sangue)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>contenitori per rifiuti, contenitori per lo smaltimento corretto di tessuti/sangue</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><forte>Reagenti per la caratterizzazione delle MSC</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><forte>Anticorpo (Clone ID)</forte></td><td>Produttore</td><td>N. di catalogo</td><td>Isotype</td></tr><tr><td>CD73 (AD2)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-095-183</td><td>IgG1 di topo</td></tr><tr><td>CD105 (43A4E1)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-094-941</td><td>IgG1 di topo</td></tr><tr><td>CD90/Thy-1 (AC122)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-095-403</td><td>IgG1 di topo</td></tr><tr><td>CD45 (5B1)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-080-202</td><td>IgG2a di topo</td></tr><tr><td>CD34 (AC136)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-954</td><td>IgG2a di topo</td></tr><tr><td>HLA-DR (AC122)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-095-298</td><td>IgG2a di topo</td></tr><tr><td>CD31 (PECAM-1)</td><td>BD Pharmingen 555446</td><td></td><td>IgG1 di topo</td></tr><tr><td>CD146 (541-10B2)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-849</td><td>IgG1 di topo</td></tr><tr><td>CD44 (DB105)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-095-180</td><td></td></tr> <tr><td>Controlli dell'isotipo IgG1 di topo (ID clone)</td><td>Produttore</td><td>N. di catalogo</td><td></td></tr><tr><td>Isotipo di IgG1 di topo (IS5-21F5)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-214</td><td></td></tr><tr><td>Isotipo di IgG1 di topo (IS5-21F5)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-212</td><td></td></tr><tr><td>Isotipo IgG1 di topo (IS5-21F5)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-092-213</td><td></td></tr><tr><td>IgG2a di topo (S43.10)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-837</td><td></td></tr><tr><td>IgG2a di topo (S43.10)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-098-849</td><td></td></tr><tr><td>Tampone MACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-221</td><td></td></tr><tr><td>Differenziazione osteogenica</td><td>Produttore</td><td>Codice prodotto</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-HG</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>11965118</td><td>Nome lungo: Dulbecco' s Modified Eagles Medio-alto glucosio (4,5 g/L)</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td></td><td>Nome lungo: siero fetale bovino</td></tr><tr><td>Anti- anti-Gibco</td><td>/Invitrogen</td><td>15240-062</td><td>Nome lungo: soluzione antibiotico-antimicotica x100</td></tr><tr><td>Desametasone</td><td>Sigma</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-glicerolo Phophate</td><td>Sigma</td><td>50020</td><td></td></tr><tr><td>Acido L-ascorbico 2-fosfato</td><td>Sigma</td><td>A8960-5G</td><td></td></tr><tr><td>Alizarin Red S</td><td>Sigma</td><td>A5533-25G</td><td>Per colorazione con matrice di calcio</td></tr><tr><td>Differenziazione adipogenica</td><td>Manufacturer</td><td>Codice prodotto</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-HG</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>11965118</td><td>Nome lungo: Dulbecco' s Modified Eagles Medio-alto glucosio (4,5 g/L)</td></tr> <tr><td>FBS</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td></td><td>Nome lungo: siero fetale bovino Anti</td></tr><tr><td>- anti-Gibco</td><td>/Invitrogen</td><td>15240-062</td><td>Nome lungo: soluzione antibiotica-antimicotica x100</td></tr><tr><td>insulina</td><td>Sigma</td><td>I2643</td><td></td></tr><tr><td>Desametasone</td><td>Sigma</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>Indometacina</td><td>Sigma</td><td>I7378</td><td></td></tr><tr><td>3-isobutile-1-metil xantina</td><td>Sigma</td><td>I5879</td><td></td></tr><tr><td>Olio Red O soluzione</td><td></td><td>Sigma O1391-250ML</td><td>Per colorazione del vacuolo lipidico</td></tr><tr><td>XY Kit FISH per determinare l'origine fetale o materna delle cellule</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>XY kit FISH omosoma</td><td>Vysis (Abbott Molecular)</td><td>07J20-050</td><td>Nome lungo: CEP X SpectrumOrange/Y SpectrumGreen Kit di sonde per DNA fluorescenti con etichetta diretta</td></tr></tbody></table>

isolamento e l&#39;espansione delle staminali mesenchimali stromali derivate / cellule da placenta umana tissue

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

Le cellule staminali/stromali mesenchimali (MSC) sono candidati promettenti per l'uso nelle terapie cellulari. Nella maggior parte dei casi, la risposta terapeutica sembra essere dipendente dalla dose cellulare. La placenta a termine umana è ricca di MSC ed è un tessuto fisicamente grande che viene generalmente scartato dopo la nascita. La placenta è un materiale di partenza ideale per la produzione su larga scala di dosi cellulari multiple di MSC allogeniche. La placenta è un organo feto-materno da cui è possibile isolare il tessuto fetale o materno. Questo articolo descrive l'anatomia placentare e la procedura per sezionare il tessuto decidua (materno), i villi coriali (fetali) e la placca corionica (fetale). Il protocollo delinea quindi come isolare le MSC da ciascuna regione tissutale sezionata e fornisce un'analisi rappresentativa delle MSC espanse derivate dai rispettivi tipi di tessuto. Questi metodi sono destinati all'isolamento preclinico delle MSC, ma sono stati anche adattati per la produzione clinica di MSC placentare per uso terapeutico umano.

Qui descriviamo i metodi per la dissezione dei tessuti fetali e materni da placenta umana termine, seguito da isolamento e l&#39;espansione delle cellule stromali / staminali mesenchimali (MSC) da questi tessuti.

Isolamento e l&#39;espansione delle staminali mesenchimali stromali derivate / cellule da placenta umana Tissue

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

L'obiettivo generale di questa procedura è isolare ed espandere cellule staminali mesenchimali derivate da tessuto placentare umano. Ciao, sono Mike Doran. Sono un responsabile di gruppo presso la Queensland University of Technology presso il Translational Research Institute di Brisbane, Australia.Ciao, mi chiamo Rebecca Pelekanos e sono una ricercatrice presso il Centro per la Ricerca Clinica dell'Università del Queensland. Oggi illustrerò la procedura di isolamento delle MSC. La placenta normalmente viene scartata dopo il parto.Essendo il tessuto di peso compreso tra cinque e 700 grammi, rappresenta una fonte unicamente ampia di cellule staminali mesenchimali allogeniche. In generale, le persone alle prime armi con l'isolamento di cellule staminali mesenchimali dalla placenta incontrano difficoltà perché non sono familiari con l'anatomia della placenta, non sanno come processare il tessuto e non sanno quali tipi di cellule, materne o fetali, popoleranno la coltura finale di cellule staminali mesenchimali. Per assistere i ricercatori, discutiamo questi dettagli importanti in questo video.Il primo passaggio di questa procedura consiste nell'orientarsi rispetto all'anatomia della placenta. Il secondo passaggio consiste nell'eseguire la dissezione manuale di 10 grammi di tessuto proveniente dalla decidua, dai villi coriali o dalla lamina coriale, utilizzando forbici. I primi due passaggi vengono qui riassunti nuovamente in forma schematica.Nel passaggio tre, i tessuti della decidua, dei villi coriali o della placca coriale vengono ulteriormente tritati in piccoli pezzi con le forbici. Nel passaggio quattro, le cellule vengono liberate dai frammenti di tessuto mediante digestione di uno o due ore in dispasi e collagenasi I. Nel passaggio cinque, le cellule vengono separate dal tessuto fibroso lavandole attraverso un filtro per cellule. Le cellule vengono quindi raccolte, risospese nel mezzo di coltura e poste in fiasche di coltura.Le cellule stromali mesenchimali, MSC, verranno selezionate in base alla loro propensione all'adesione plastica e alla capacità di sopravvivere e proliferare nel mezzo di coltura cellulare. Infine, nella sezione dei risultati, le MSC espanse possono essere caratterizzate e conservate per utilizzi futuri in esperimenti. La placenta è un organo temporaneo che permette lo scambio di nutrienti e prodotti di scarto tra feto e madre durante la gravidanza.La placenta può essere facilmente raccolta in modo asettico dopo un parto cesareo e il sicuro parto del bambino. La placenta è composta principalmente da vascolarizzazione e membrane di origine fetale. Tuttavia, contiene anche alcune cellule materne.La placenta è collegata all'utero sia da cellule deciduali di origine materna, derivate dall'utero, sia da trofoblasti invasivi di origine fetale. Di solito non è possibile distinguere ad occhio l'interfaccia precisa tra i tessuti materni e fetali. Tuttavia, il lato fetale della placenta è facilmente identificabile come il lato in cui si trova il cordone ombelicale.Dopo il parto del neonato, rimane solo uno strato sottile di tessuto deciduale collegato alla placenta. Attraverso l'orientamento fisico della placenta, è possibile individuare i tre tessuti che preleveremo oggi. Il primo tessuto da prelevare sarà la decidua materna.Il marcatore verde indica il tessuto deciduale che rimane sulla superficie dopo che la placenta si è staccata dalla parete uterina. Il secondo tessuto che verrà prelevato dall'interno della placenta è costituito dalle villosità corioniche fetali. Questo è indicato dai cerchi blu nei diagrammi.Il terzo tessuto da prelevare sarà la placca corionica fetale. Questo tessuto è identificato dai marcatori rossi sui diagrammi. Bene, cominciamo.Posizionare la placenta all'interno della cappa a sicurezza biologica. Aprire le membrane fetali e orientarsi rispetto alle parti della placenta. Il lato fetale con l'inserzione del cordone ombelicale, la corioamnios laeve o il sacco amniotico.La superficie fetale della placenta presenta evidenti vasi sanguigni di grandi dimensioni nella placca coriale, con la membrana amniotica sovrastante, che, ancora una volta, può essere facilmente separata per via meccanica. Il lato materno è opposto al lato fetale e presenta chiari cotiledoni o lobi. Assicurarsi che la superficie materna sia rivolta verso l'alto.Tagliare pezzi di spessore pari a 0,5 cm dal lato materno della placenta o dalla decidua. Durante le dissezioni, posizionare i frammenti di tessuto in una piastra di Petri contenente soluzione salina equilibrata di Hank (Hank's Balanced Salt Solution, HBSS) per mantenere i tessuti umidi. Agitare i tessuti nelle piastre con HBSS per rimuovere parte del sangue.Trasferire una quantità sufficiente di tessuto da riempire il tubo fino al segno di 10 millilitri di un tubo da 50 millilitri, circa 10 grammi. Nota: in questa fase è possibile isolare più tessuto se alla fine della procedura sono necessarie un numero maggiore di cellule. Assicurarsi che la superficie fetale sia rivolta verso l'alto.Rimuovere meccanicamente la membrana amniotica dalla superficie fetale della placenta, lasciando intatto il disco coriale. Tagliare il disco coriale in strisce profonde circa mezzo centimetro nel tessuto dei villi sottostante. Successivamente, dissezionare il tessuto dei villi coriali profondo circa un centimetro nella placenta a partire dal punto in cui è stato rimosso il disco coriale.Posizionare i tessuti in HBSS e misurare circa 10 millilitri del tessuto, come fatto in precedenza. Trasferire i pezzi di tessuto, con il minimo trasferimento di liquido, in una piastra di Petri da 10 centimetri e tagliarli in piccoli pezzi di circa un millimetro cubo, utilizzando delle forbici. Trasferire il tessuto tritato nuovamente nel tubo da 50 ml.Ripetere per tutti i campioni di tessuto rimanenti. Aggiungere il mezzo di digestione appena preparato in rapporto almeno uno a uno con il tessuto. Capovolgere il tubo diverse volte per mescolare.Incubare i tessuti nel tubo con il mezzo di digestione per uno o due ore a 37 gradi in un incubatore agitato. Quando la soluzione di digestione del tessuto avrà assunto un aspetto torbido e i vasi sanguigni bianchi saranno visibili in soluzione, aggiungere 15 millilitri di HBSS per diluire gli enzimi nel mezzo di digestione. Eseguire una breve centrifugazione a impulsi, fino a quando la centrifuga raggiunge 340 g per cinque secondi, quindi arrestarla.Questo farà sì che i detriti più grandi si accumulino sul fondo del tubo. Riportare i campioni all'interno della cappa biologica. Posizionare un filtro per cellule in un nuovo tubo da 50 millilitri.Trasferire con pipetta il soprannatante contenente le cellule mononucleate nel filtro, raccogliendo l'eluito nel nuovo tubo. Lasciare i detriti di tessuto placentare nel primo tubo. Aggiungere 15 millilitri di HBSS ai detriti placentari, agitare vigorosamente per recuperare ulteriori cellule e sottoporre il campione a centrifugazione rapida.Di nuovo, pipettare il soprannatante nel tubo con il filtro cellulare posto nel tubo di raccolta. Potrebbe essere più indicato versare il soprannatante direttamente nel filtro cellulare, a seconda della consistenza del campione. Lavare il filtro cellulare con 5 millilitri di HBSS.Scartare il tubo contenente i detriti del tessuto placentare. Centrifugare il campione del soprannatante per cinque minuti a 340 g per ottenere un pellet cellulare. I globuli rossi sono visibili come uno strato alla base del pellet, mentre le cellule mononucleate, incluse le MSC, formano uno strato più chiaro sopra i globuli rossi.Riportare i campioni nella cappa a sicurezza biologica. Decantare con attenzione il soprannatante e scartarlo. Agitare il tubo più volte con un dito per staccare il pellet cellulare e risospendere il pellet cellulare in 35 millilitri di mezzo per MSC.Trasferire la sospensione cellulare in un’una fiasca T175 per ogni 10 mil di tessuto e coltivare in un incubatore a 37 gradi con 5%CO2. Dopo l’isolamento, cambiare il mezzo di coltura dopo 48 ore. Alimentare le colture una volta alla settimana fino a confluenza.Le colture dovrebbero essere confluenti dopo circa 14 giorni. Infine, espandere e criopreservare le cellule, analizzare le caratteristiche delle cellule staminali mesenchimali (MSC) e utilizzarle negli esperimenti. Dopo 48 ore di coltura, le MSC si saranno attaccate alla plastica per colture cellulari, mentre le popolazioni di cellule ematopoietiche e altre cellule non si saranno attaccate.In questo momento, il mezzo viene sostituito con 35 millilitri di mezzo di coltura fresco. L'aspetto del sopranatante della coltura può variare notevolmente tra donatori di placenta. L'esempio uno e due illustrano questa variazione.Queste due isolazioni sono state eseguite contemporaneamente, ma a partire da due placenti diversi. Una volta lavate, le colture risultano prive di globuli rossi e detriti tissutali, come mostrato nell'esempio tre, e i successivi risultati di espansione sono generalmente costanti. Dopo il cambio di mezzo a 48 ore, solo poche cellule sono attaccate alla fiasca.Sette giorni dopo l'isolamento, sono visibili colonie di MSC di tipo fibroblastico, anche se sono presenti anche cellule non MSC, come cellule rotonde o debolmente aderenti. Tredici giorni dopo l'isolamento, le colonie di MSC di tipo fibroblastico sono ampie e spesso il monostrato di MSC è sufficientemente confluenziale e pronto per il passaggio. A partire dal passaggio, il monostrato di MSC sviluppa una morfologia caratteristica simile a un vortice in condizioni di confluenza.I MSC placentari mostrano un profilo classico di marcatori MSC mediante analisi di citometria a flusso. Le cellule sono positive per CD73, CD105 e CD90, e negative per i marcatori ematopoietici CD45, CD34 e HLA-DR. I MSC placentari generalmente subiscono una differenziazione osteogenica robusta, ma una differenziazione adipogenica scarsa.Molte pubblicazioni presuppongono che le cellule isolate dal corion fetale producano MSC fetali dopo la coltura. Tuttavia, come riportato in precedenza, tutte le colture ottenute dal corion fetale mediante questo protocollo si arricchiscono rapidamente di MSC materni, come ci si aspetterebbe per le colture di MSC deciduali materne. I dati qui mostrati quantificano la composizione cellulare fetale e materna delle colture di MSC placentari isolate da tessuti deciduali, da villi coriali e dalla lamina coriale.Dopo aver guardato questo video, dovresti avere un'idea abbastanza chiara di come isolare e coltivare MSC derivati da tessuto placentare. Speriamo che questi metodi ti risultino utili nella tua ricerca e nelle applicazioni cliniche che potrebbero impiegare MSC derivati dalla placenta.

isolation-expansion-mesenchymal-stemstromal-cells-derived-from-human

Research

Ricerca

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Abbiamo identificato la placenta come organo principale ematopoietiche durante lo sviluppo. Abbiamo trovato che le cellule staminali ematopoietiche (HSC) sono entrambi generati e ampliato nella placenta in unica nicchie microambientali. Qui, descriviamo le tecniche sperimentali necessari per l'isolamento e la visualizzazione di cellule staminali nella placenta del mouse.

Isolamento e analisi delle cellule staminali ematopoietiche dalla placenta

Questo protocollo descrive l'isolamento e la successiva espansione delle cellule stromali mesenchimali e le cellule endoteliali che formano colonie senza l'uso di siero animale per generare le coppie a fini di trapianto autologo sperimentali.

Isolamento e di espansione degli animali siero gratuito di cordone ombelicale umano derivato cellule stromali mesenchimali (MSC) e cellule endoteliali progenitrici formanti colonia (ECFCs)

Le cellule staminali mesenchimali (MSC) hanno un potenziale di differenziazione verso la linea osteoblastica quando vengono stimolate con fattori solubili o biomateriali specifici. Questo lavoro presenta una nuova opzione per la somministrazione di MSC dalla membrana amniotica umana (AM-hMSCs) che impiega la matrice ossea bovina Nukbone (NKB) come scaffold.

Isolamento di cellule staminali mesenchimali umane e la loro coltivazione in poroso Bone Matrix

Qui, presentiamo un protocollo per la dissezione di cordone umano ombelicale (UC) e il campione placenta fetale in cavo rivestimento (CL), gelatina di Wharton (WJ), cavo-placenta giunzione (CPJ), e placenta fetale (FP) per l'isolamento e caratterizzazione di cellule stromali mesenchimali (MSC) utilizzando la tecnica di espianto.

Isolamento e caratterizzazione di cellule mesenchimali stromali dal Cordone ombelicale e placenta fetale

Cordone ombelicale umano (UC) possono essere ottenuti durante il periodo perinatale a seguito di termine prematuro e postterm consegna. In questo protocollo, descriviamo l'isolamento e la caratterizzazione di UC-derivati di cellule staminali mesenchimali (MSCs-UC) da OSSC a 19-40 settimane della gestazione.

Isolamento e caratterizzazione di umani cellule staminali mesenchimali del cordone ombelicale-derivato da prematuri e neonati a termine

Il tessuto adiposo è un'ottima fonte di cellule staminali mesenchimali. Qui, portiamo l'estrazione, la coltivazione e la caratterizzazione passo dopo passo di cellule staminali derivate dal tessuto adiposo (ADSC) da topi svizzeri tessuto adiposo epididimale.

Isolamento, espansione in vitro e caratterizzazione di cellule staminali mesenchimali da tessuto adiposo epididimo di topo

Questo protocollo descrive e confronta due metodi rappresentativi per differenziare le hiPSC in cellule stromali mesenchimali (MSC). Il metodo monostrato è caratterizzato da un costo inferiore, da un funzionamento più semplice e da una più facile differenziazione osteogenica. Il metodo dei corpi embrioidi (EBs) è caratterizzato da un minor consumo di tempo.

Confronto di due metodi rappresentativi per la differenziazione di cellule staminali pluripotenti indotte umane in cellule stromali mesenchimali

L'isolamento delle MSCalteMFGE8 di BAMBI, uno dei tre principali sottogruppi che costituiscono UC-MSC umane eterogenee, è utile per comprendere appieno le caratteristiche e le funzioni di questo sottotipo per la sua futura applicazione per migliorare l'efficacia clinica in malattie specifiche. Qui, presentiamo un metodo per lo smistamento di BAMBIhighMFGE8high UC-MSC.

Isolamento di cellule stromali mesenchimali umane derivate dal cordone ombelicalead altoMFGE8

L'eterogeneità trascrizionale all'interno delle cellule stromali umane di derivazione adiposa può essere definita a livello di singola cellula utilizzando marcatori di superficie cellulare e geni osteogenici.  Descriviamo un protocollo che utilizza la citometria a flusso per l'isolamento di sottopopolazioni cellulari con aumentato potenziale osteogenico, che può essere utilizzato per migliorare la ricostruzione scheletrica craniofacciale.

Isolamento e arricchimento di Human derivate da tessuto adiposo cellule stromali di Osteogenesi avanzata

Spine dendritiche di neuroni piramidali sono i siti di maggior sinapsi eccitatorie in mammiferi corteccia cerebrale. Il metodo descrive un'analisi quantitativa 3D di morfologie della colonna vertebrale nei neuroni piramidali glutamatergici corticali umane derivate da cellule staminali pluripotenti indotte.

Quantificazione tridimensionale di spine dendritiche da piramidale neuroni derivate da cellule staminali umane pluripotenti indotte

Impara a isolare e espandere cellule stromali mesenchimali da tessuto placentare umano. Questo metodo dettagliato include dissezione anatomica, digestione enzimatica e coltura per adesione plastica.

Isolamento e l'espansione delle staminali mesenchimali stromali derivate / cellule da placenta umana Tissue

Esplora altri video