Name: Allevamento la mosca della frutta Drosophila melanogaster Sotto axeniche e Gnotobiotic Condizioni (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: Impara a allevare Drosophila melanogaster in condizioni asseniche e gnotobiotiche per studiare il microbiota e i tratti dell'ospite. Questo metodo permette di controllare e manipolare i microrganismi associati.

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Alcuni dettagli di questo protocollo sono state ottimizzate con l&#39;aiuto del Dr. Adam Dobson, che ha anche fornito utili commenti sul manoscritto. Questo lavoro è stato sostenuto dalla Fondazione per il National Institutes of Health (FNIH) codice di autorizzazione R01GM095372 (JMC, A (CN) W, AJD, e AED). FNIH codice di autorizzazione 1F32GM099374-01 (PDN), e Brigham Young University fondi di avvio (JMC, MLK, MV). costi di pubblicazione sono stati sostenuti dalla Brigham Young University College of Life Sciences e del Dipartimento di Scienze della flora e fauna.

1. Coltura dei batteri (Inizio ~ 1 settimana prima di prendere le uova) <ol><li> Preparare MRS modificato (20) mmrs piastre e tubi di brodo (Tabella 1). Versare 20 ml mMRS agar in ogni piatto 100 millimetri di Petri e lasciare raffreddare / asciugare durante la notte, o 5 ml mMRS brodo in provette mm 18. </li><li> Streak Acetobacter pomorum, A. tropicalis, Lactobacillus brevis, e L. plantarum su mMRS piastre di agar. Incubare Acetobacter notte a 30 ° C. Incubare anaerobicamente Lactobacillus posizionando le piastre in un contenitore ermetico e inondazioni con anidride carbonica prima della sigillatura. Incubare a 30 ° C per una notte. Nota: L. colonie brevis potrebbero non essere visibili fino 24-48. Le piastre possono essere conservati a 4 ° C e le colonie possono essere usati fino a 3 settimane. </li><li> Due o tre giorni prima di trasferire le uova dechorionated alla dieta sterile (sezione 5), scegliere una singola colonia dalla piastra mMRS in una provetta conmMRS tenenti brodo. Crescere Acetobacter con agitazione e crescere Lactobacillus statico per 24 ore o fino a quando torbido, sia a 30 ° C. </li></ol> 2. Preparare sterile dieta <ol><li> Preparare dieta sterile (Tabella 2) in un pallone da 2 L Erlenmeyer. Microonde la dieta fino a quando non ha bollito per 3 volte consecutive; mix tra ogni ebollizione. </li><li> Porre il pallone su un piatto mescolare per mantenere mescolando durante il trasferimento dieta per provette da centrifuga coniche. Trasferire 7,5 ml di dieta per 50 ml provette da centrifuga. Liberamente tappare i tubi, e mettere in un rack in polipropilene autoclavabile coperto. </li><li> Sterilizzare dieta volo usando autoclave a 121 ° C e 15 psi per 25 min. Rimuovere rack da autoclave, e scuotere immediatamente ciascun rack orizzontale per garantire la dieta non separarsi durante il raffreddamento. Fare attenzione a non scuotere i rack in verticale per impedire il trasferimento di dieta per il coperchio o bordi dei tubi. Lasciare che la dieta raffreddare su un agitatore per esattamente 45 minuti eancora una volta scuotere la dieta in senso orizzontale a mano. Nota: La dieta può essere conservato a 4-15 ° C per un massimo di una settimana. </li><li> Come alternativa all&#39;utilizzo di rack autoclavabili coperte (passaggi 2.1-2.3), o ad alzare le mosche sulle diete contenenti conservante acido, effettuare le seguenti operazioni: <ol><li> Preparare 1 L dieta liquida in un pallone 2 L con un ancoretta nel pallone. Autoclave la dieta. </li><li> Dopo la sterilizzazione in autoclave, aggiungere 10 ml di conservanti e mescolare continuamente su un piatto mescolare riscaldata. Quando l&#39;agar è raffreddato a 50-60 ° C, spostare il pallone in una piastra di mescolare riscaldata in un armadio biosicurezza e mantenere la temperatura pallone per riscaldamento a 50-60 ° C. </li><li> Nel gabinetto biosicurezza, pipetta ~ 7,5 ml individualmente in tubi conici. </li></ol></li></ol> 3. Preparare Gabbie deposizione delle uova <ol><li> Fai piastre di agar succo d&#39;uva da microonde 100 ml di acqua, lievito di birra 10 g di birra, 10 g di glucosio, e 1 g di agar. Portare a ebollizione per 3 volte nella fase 1.1 e aggiungere 10 g di uva congelato succo concentrate per aumentare la visibilità delle uova sulla piastra di agar. </li><li> Quando agar è raffreddato a 55 ° C, versare 20 ml in 100 mm Petri e lasciare solidificare. </li><li> Coprire la superficie delle piastre di agar con una pasta di lievito mescolando lievito 1 g di birra con acqua 15 g. Versare pasta di lievito sulla piastra di agar assicurandosi che la superficie è coperta, quindi versare l&#39;eccesso, lasciando dietro di sé una sottile residuo di lievito. Se si utilizzano più piastre, la pasta può essere sequenziale versato a più piastre. </li><li> Trasferire piastre di agar nel fondo di una gabbia. Nota: Un contenitore deli 32 oz è un buon sostituto per gabbie Fly acrilici. <ol><li> Rendere coperchi per contenitori deli 32 oz tagliando un foro nella parte superiore e incollando una mesh traspirante sopra il foro con colla non tossici. Se la colla è idrosolubili impediscono esposizione all&#39;acqua al coperchio. </li></ol></li><li> Trasferimento 200-300 vola nel contenitore e coprire con il coperchio. Coprire il buco rete protetta con un coperchio piatto di Petri vuota Prevent evaporazione dalla superficie agar e aggiungere una carta velina umida all&#39;interno del coperchio se desiderato. Incubare mosche a 25 ° C durante la notte per 16-20 ore. </li></ol> 4. raccogliere le uova <ol><li> Preparare un setaccio per la raccolta delle uova, ponendo rete di nylon in una boccola in plastica. </li><li> Per recuperare la piastra con le uova su di esso, rimuovere mosche dalla gabbia trasferendo in un contenitore vuoto. Se stessi mosche saranno utilizzati il ​​giorno successivo, trasferire immediatamente ad una nuova gabbia contenente una piastra di agar succo d&#39;uva appena yeasted. Le mosche possono essere utilizzati per 3-5 giorni sequenziali </li><li> Rimuovere mosche morte dal agar con un pennello pulito, facendo attenzione a non rompere l&#39;agar. </li><li> Raccogliere uova sciacquando piastra di agar con acqua distillata, delicatamente spazzolatura uova dalla superficie agar, e versando l&#39;impasto sulla maglia. Ripetere 3-4 volte fino a quando tutti o la maggior parte delle uova sono state rimosse dalla piastra di agar. </li></ol> 5. Dechorionate uova e trasferimento sterile DIET <ol><li> Preparare la armadio biosicurezza spruzzando l&#39;interno (compresi i lati) con il 70% di etanolo. Pulire il fondo con un tessuto di laboratorio, e sterilizzare il cappuccio con luce UV per ~ 15 min. Sterilizzare tutti i materiali di consumo non-biologici (campioni tazze, pennello, pinze, contenitori di rifiuti, 400 ml di acqua e 100 ml di ipoclorito di sodio allo 0,6%), a spruzzo con etanolo e subito messa in cabinet biosicurezza. Sterilizzare con luce UV per 15 min. </li><li> Avviare il primo di 2 lavaggi di ipoclorito di sodio posizionando la bussola con le uova in una tazza 120 ml campione o altro contenitore sterile. Versare lentamente ~ 90 ml di soluzione di ipoclorito di sodio 0,6% nella boccola fino a poco sotto il bordo. </li><li> Lavare le uova per 2,5 min. Periodicamente risospendere le uova utilizzando pinze per spostare la boccola su e giù nella soluzione di ipoclorito. </li><li> Trasferire la bussola direttamente in una seconda tazza esemplare, pre-riempita con 90 ml di candeggina, all&#39;interno dell&#39;armadio biosicurezza. </li><li> Ripeterepasso 5.3 all&#39;interno dell&#39;armadio biosicurezza. Alla fine del secondo trattamento candeggiante, le uova dovrebbero iniziare ad aderire ai lati della boccola. </li><li> Effettuare i passaggi 5,7-5,8 nell&#39;armadio biosicurezza. </li><li> Eliminare la candeggina e lavare la bussola con acqua sterile per 3 volte. Risospendere le uova più volte durante ogni lavaggio spostando la bussola con una pinza. Alla fine del terzo lavaggio più uova devono essere fissati al lato della boccola. </li><li> Utilizzando un pennello sterilizzati in etanolo, trasferire uova dal lato della boccola alla dieta sterile. Trasferire le uova singolarmente o in piccoli lotti. Obiettivo per 30-50 uova per fiala. Lasciare i tappi allentato per permettere l&#39;ossigeno di entrare nel tubo. Se fiale devono rimanere axeniche, trasferimento in un incubatore di insetti; altrimenti, aggiungere batteri come sotto. </li></ol> 6. Fare Gnotobiotic Flies Utilizzando 4 batteriche Specie <ol><li> preparare batteri <ol><li> Preparare un armadio biosicurezza sterilizzato con forniture necessarie (pipettes, scatole punta pipette, provette da centrifuga sterilizzati, brodo MRS, e rastrelliere provetta) come al punto 4.1. Pulire l&#39;esterno di provette con un laboratorio di etanolo imbevuto wipe prima di mettere in armadio biosicurezza. </li><li> Pellet i batteri in primo luogo il trasferimento di 500 ml di crescita durante la notte per una provetta per microcentrifuga sterile. Se la densità batterica è bassa, aggiungere fino a 1,5 ml a ciascuna provetta o in sequenza rimuovere surnatante e aggiungere la cultura in più per lo stesso tubo. Rimuovere campioni dal cabinet biosicurezza e centrifugare per 10 minuti a 10.000 x g. Utilizzare puntali con filtro per evitare la contaminazione tra i campioni. </li><li> Determinare la densità di ciascuna coltura misurando OD 600. Se si utilizza un lettore di piastre multi-bene, trasferire 200 ml di ogni cultura ad una piastra a 96 pozzetti in 1, 2 e 4- diluizioni. </li><li> Determinare la quantità di mMRS in cui diluire ciascun pellet cellulare (5.2.2) utilizzando uno spettrofotometro lettura della piastra e le seguenti equazioni. Piano di aggiungere abbastanza brodo per inoculare 50 &amp;# 956; l per ogni flacone mosca. <ol><li> Raccogliere OD 600 letture di 1: 1, 1: 2 e 1: 4 diluizione ciascuna coltura batterica su uno spettrofotometro piastriforme lettura. Selezionare la diluizione per ogni ceppo batterico che produce un valore di 600 OD sono compresi tra 0,1 e 0,2 e utilizzare questo valore e il suo fattore di diluizione corrispondente come &#39;O&#39; e &#39;D&#39; nelle formule indicate in 6.1.4.2 o 6.1.4.3. </li><li> Se si utilizza le 4 specie qui descritte, normalizzare le cellule per unità formanti colonia equivalente (CFU) / ml densità (OD 600 alla conversione CFU determinato in precedenza 20) utilizzando questa equazione: E = ((OB) x V x D) / C dove E = volume di risospendere pellet in (ml), O = OD 600 batteri, B = OD 600 supporti vergini, D = fold-diluizione, V = coltura batterica ml prima della centrifugazione, C = OD 600 di costante predeterminata. Vedere file di codice supplementare per gli esempi di calcoli utilizzando queste equazioni. per spettrofotometros che automaticamente vuoto, usare &quot;O&quot; al posto di &quot;OB&quot;. Nota: Le costanti predeterminate (unità OD 600, normalizzati a 10 7 CFU ml -1, costanti derivati ​​in 20) sono i seguenti: A. tropicalis (0.052), A. pomorum (0,038), L. brevis (0,056), L. plantarum (0,077). </li><li> Se si utilizzano altre specie batteriche (senza CFU / OD 600 costante è disponibile), normalizzare la densità di OD 600 = 0.1 utilizzando questa equazione: E = ((OB) x V x D) /0.1 OD 600 Nota: Le unità sono le stesse come nel passaggio 6.1.4.2. Vedere file di codice supplementare per gli esempi di calcoli utilizzando queste equazioni. </li></ol></li><li> Nel gabinetto biosicurezza, rimuovere il surnatante con una pipetta e risospendere il pellet in mMRS freschi o PBS come calcolato al punto 6.1.4.2. </li></ol></li><li> Seminare batteri <ol><li> Trasferimento 50 ml di batteri ai tubi conici con sterili dieta und dechorionated uova in armadio biosicurezza. Aggiungere batteri dopo il trasferimento uovo per evitare contaminazione tra fiale. </li><li> Posizionare provette inoculate in un incubatore a 25 ° C. </li></ol></li></ol> 7. Misurare CFU carico / prova di sterilità <ol><li> Per misurare il carico CFU in tutto omogenati corpo mosca, trasferimento 5 mosche (5-7 giorni dopo Eclosion) in una provetta da 1,7 ml microcentrifuga contenente 125 ml di sfere di ceramica e 125 ml di brodo mMRS. Omogeneizzare mosche usando un omogeneizzatore tessuto per 30 secondi a 4,0 m / sec. <ol><li> In alternativa, omettono perline e mano omogeneizzare in provette da microcentrifuga con pestelli in plastica per 1 min. </li><li> Se la quantificazione del microbiota intestinale, superficie sterilizzare le mosche per rimuovere i microbi esogeni 22. Trasferimento vola a una provetta contenente 100 ml etanolo al 70% per 1 min, aspirare l&#39;etanolo, e trasferimento in una nuova provetta per homogenizations. Se il contenuto di DNA dell&#39;intestino sarà misurato, sciacquare fo 1 min con ipoclorito di sodio 0,6% prima del lavaggio etanolo. </li></ol></li><li> Diluire l&#39;omogeneizzato con 875 microlitri mMRS, vortex per 5 secondi, e pipetta 120 ml di omogeneizzato nel primo pozzetto di una micropiastra. </li><li> Eseguire due sequenziali 1: 8 diluizioni con 10 microlitri omogeneizzato e 70 microlitri MRS nei prossimi due pozzi. <ol><li> Rimuovere 10 ml dal primo pozzo e aggiungerlo al secondo pozzetto contenente 70 ml MRS. Mescolare il contenuto del secondo pozzo accuratamente, trasferimento 10 microlitri dal secondo pozzo alla terza pozzetto contenente 70 microlitri MRS, e omogeneizzare. Questo porta a 3 le concentrazioni totali di originale omogeneizzato 1.000 ml: Non diluito, 1: 8, e 1:64. </li></ol></li><li> Trasferire 10 ml di ogni diluizione ad una lastra mMRS (utilizzando una pipetta multicanale se desiderato). Leggermente inclinare il piatto per diffondere la diluizione diversi millimetri verso il basso la superficie agar e consentire il liquido si asciughi prima di spostare il piatto. Il liquido si asciuga in The piastra rapidamente se le piastre sono 2 giorni di età, riducendo miscelazione di due goccioline adiacenti. </li><li> Incubare a 30 ° C per 1-2 giorni. Rimuovere le piastre dal termostato volta distinti, singole colonie sono visibili, e contare da una diluizione con 10-100 colonie isolate. </li><li> Calcola CFU per volare utilizzando l&#39;equazione E = C x D / P x V / F, dove E = CFU per volare, C = numero di colonie contato, D = diluizione, P = ml placcato, V = volume di volare omogenato, e F = numero di mosche omogeneizzati. </li></ol>

<ol><li>McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Giving+microbes+their+due--animal+life+in+a+microbially+dominant+world%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Giving microbes their due--animal life in a microbially dominant world.</a> J Exp Biol. 218, (Pt 12) 1968-1973 (2015).</li>
<li>Smith, K., McCoy, K. D., Macpherson, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+axenic+animals+in+studying+the+adaptation+of+mammals+to+their+commensal+intestinal+microbiota%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Use of axenic animals in studying the adaptation of mammals to their commensal intestinal microbiota.</a> Semin Immunol. 19 (2), 59-69 (2007).</li>
<li>Rieder, L. E., Larschan, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wisdom+from+the+fly%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">Wisdom from the fly.</a> Trends Genet. 30 (11), 479-481 (2014).</li>
<li>Arias, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+melanogaster+and+the+development+of+biology+in+the+20th+century%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Drosophila melanogaster and the development of biology in the 20th century.</a> Methods Mol Biol. 420, 1-25 (2008).</li>
<li>Lee, W. J., Brey, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+microbiomes+influence+metazoan+development%3A+insights+from+history+and+Drosophila+modeling+of+gut-microbe+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">How microbiomes influence metazoan development: insights from history and Drosophila modeling of gut-microbe interactions.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 29, 571-592 (2013).</li>
<li>Erkosar, B., Leulier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+adult+microbiota%2C+gut+homeostasis+and+longevity%3A+novel+insights+from+the+Drosophila+model%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Transient adult microbiota, gut homeostasis and longevity: novel insights from the Drosophila model.</a> FEBS Lett. 588 (22), 4250-4257 (2014).</li>
<li>Chandler, J. A., Lang, J. M., Bhatnagar, S., Eisen, J. A., Kopp, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+communities+of+diverse+Drosophila+species%3A+ecological+context+of+a+host-microbe+model+system%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Bacterial communities of diverse Drosophila species: ecological context of a host-microbe model system.</a> PLoS Genet. 7 (9), e1002272(2011).</li>
<li>Broderick, N. A., Buchon, N., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiota-induced+changes+in+drosophila+melanogaster+host+gene+expression+and+gut+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Microbiota-induced changes in drosophila melanogaster host gene expression and gut morphology.</a> MBio. 5 (3), 01117(2014).</li>
<li>Wong, C. N., Ng, P., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-diversity+bacterial+community+in+the+gut+of+the+fruitfly+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Low-diversity bacterial community in the gut of the fruitfly Drosophila melanogaster.</a> Environ Microbiol. 13 (7), 1889-1900 (2011).</li>
<li>Staubach, F., Baines, J. F., Kunzel, S., Bik, E. M., Petrov, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+species+and+environmental+effects+on+bacterial+communities+associated+with+Drosophila+in+the+laboratory+and+in+the+natural+environment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Host species and environmental effects on bacterial communities associated with Drosophila in the laboratory and in the natural environment.</a> PLoS One. 8 (8), e70749(2013).</li>
<li>Brummel, T., Ching, A., Seroude, L., Simon, A. F., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+lifespan+enhancement+by+exogenous+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Drosophila lifespan enhancement by exogenous bacteria.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (35), 12974-12979 (2004).</li>
<li>Cox, C. R., Gilmore, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Native+microbial+colonization+of+Drosophila+melanogaster+and+its+use+as+a+model+of+Enterococcus+faecalis+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Native microbial colonization of Drosophila melanogaster and its use as a model of Enterococcus faecalis pathogenesis.</a> Infect Immun. 75 (4), 1565-1576 (2007).</li>
<li>Ridley, E. V., Wong, A. C., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbe-dependent+and+nonspecific+effects+of+procedures+to+eliminate+the+resident+microbiota+from+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Microbe-dependent and nonspecific effects of procedures to eliminate the resident microbiota from Drosophila melanogaster.</a> Appl Environ Microbiol. 79 (10), 3209-3214 (2013).</li>
<li>Rogers, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+divergence+in+gastrointestinal+microbiota+in+physically-separated+genetically+identical+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Functional divergence in gastrointestinal microbiota in physically-separated genetically identical mice.</a> Sci Rep. 4, 5437(2014).</li>
<li>Chaston, J. M., Newell, P. D., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metagenome-wide+association+of+microbial+determinants+of+host+phenotype+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Metagenome-wide association of microbial determinants of host phenotype in Drosophila melanogaster.</a> MBio. 5 (5), 01631-01714 (2014).</li>
<li>Huang, J. H., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consumption+of+dietary+sugar+by+gut+bacteria+determines+Drosophila+lipid+content%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+Letters%22%5BJournal%5D)">Consumption of dietary sugar by gut bacteria determines Drosophila lipid content.</a> Biology Letters. , (2015).</li>
<li>Shin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+microbiome+modulates+host+developmental+and+metabolic+homeostasis+via+insulin+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Drosophila microbiome modulates host developmental and metabolic homeostasis via insulin signaling.</a> Science. 334 (6056), 670-674 (2011).</li>
<li>Storelli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+plantarum+promotes+Drosophila+systemic+growth+by+modulating+hormonal+signals+through+TOR-dependent+nutrient+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus plantarum promotes Drosophila systemic growth by modulating hormonal signals through TOR-dependent nutrient sensing.</a> Cell Metab. 14 (3), 403-414 (2011).</li>
<li>Wong, A. C., Chaston, J. M., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inconstant+gut+microbiota+of+Drosophila+species+revealed+by+16S+rRNA+gene+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22ISME+J%22%5BJournal%5D)">The inconstant gut microbiota of Drosophila species revealed by 16S rRNA gene analysis.</a> ISME J. 7 (10), 1922-1932 (2013).</li>
<li>Newell, P. D., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interspecies+interactions+determine+the+impact+of+the+gut+microbiota+on+nutrient+allocation+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Interspecies interactions determine the impact of the gut microbiota on nutrient allocation in Drosophila melanogaster.</a> Appl Environ Microbiol. 80 (2), 788-796 (2014).</li>
<li>Broderick, N. A., Lemaitre, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut-associated+microbes+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Gut+Microbes%22%5BJournal%5D)">Gut-associated microbes of Drosophila melanogaster.</a> Gut Microbes. 3 (4), 307-321 (2012).</li>
<li>Ren, C., Webster, P., Finkel, S. E., Tower, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+internal+and+external+bacterial+load+during+Drosophila+aging+without+life-span+trade-off%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Increased internal and external bacterial load during Drosophila aging without life-span trade-off.</a> Cell Metab. 6 (2), 144-152 (2007).</li>
<li>Wong, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Host+as+the+Driver+of+the+Microbiota+in+the+Gut+and+External+Environment+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The Host as the Driver of the Microbiota in the Gut and External Environment of Drosophila melanogaster.</a> Appl Environ Microbiol. 81 (18), 6232-6240 (2015).</li>
<li>Dobson, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Host+genetic+determinants+of+microbiota-dependent+nutrition+revealed+by+genome-wide+analysis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Host genetic determinants of microbiota-dependent nutrition revealed by genome-wide analysis of Drosophila melanogaster.</a> Nat Commun. 6, 6312(2015).</li>
<li>Bakula, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+persistence+of+a+microbial+flora+during+postembryogenesis+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invertebr+Pathol%22%5BJournal%5D)">The persistence of a microbial flora during postembryogenesis of Drosophila melanogaster.</a> J Invertebr Pathol. 14 (3), 365-374 (1969).</li>
<li>Ryu, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+immune+homeostasis+by+the+homeobox+gene+caudal+and+commensal-gut+mutualism+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Innate immune homeostasis by the homeobox gene caudal and commensal-gut mutualism in Drosophila.</a> Science. 319 (5864), 777-782 (2008).</li>
<li>Blum, J. E., Fischer, C. N., Miles, J., Handelsman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequent+replenishment+sustains+the+beneficial+microbiome+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22MBio%22%5BJournal%5D)">Frequent replenishment sustains the beneficial microbiome of Drosophila melanogaster.</a> MBio. 4 (6), 00860(2013).</li>
<li>Bitner-Mathe, B. C., Klaczko, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasticity+of+Drosophila+melanogaster+wing+morphology%3A+effects+of+sex%2C+temperature+and+density%5BTitle%5D)+AND+%22Genetica%22%5BJournal%5D)">Plasticity of Drosophila melanogaster wing morphology: effects of sex, temperature and density.</a> Genetica. 105 (2), 203-210 (1999).</li>
<li>Edward, D. A., Chapman, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex-specific+effects+of+developmental+environment+on+reproductive+trait+expression+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Ecol+Evol%22%5BJournal%5D)">Sex-specific effects of developmental environment on reproductive trait expression in Drosophila melanogaster.</a> Ecol Evol. 2 (7), 1362-1370 (2012).</li>
<li>Ridley, E. V., Wong, A. C., Westmiller, S., Douglas, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+the+resident+microbiota+on+the+nutritional+phenotype+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Impact of the resident microbiota on the nutritional phenotype of Drosophila melanogaster.</a> PLoS One. 7 (5), e36765(2012).</li>
<li>Newell, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+function+and+comparative+genomic+analyses+of+the+Drosophila+gut+microbiota+identify+candidate+symbiosis+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">In vivo function and comparative genomic analyses of the Drosophila gut microbiota identify candidate symbiosis factors.</a> Front Microbiol. 5, 576(2014).</li>
<li>Dewhirst, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogeny+of+the+defined+murine+microbiota%3A+altered+Schaedler+flora%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Phylogeny of the defined murine microbiota: altered Schaedler flora.</a> Appl Environ Microbiol. 65 (8), 3287-3292 (1999).</li>
<li>Min, K. T., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wolbachia%2C+normally+a+symbiont+of+Drosophila%2C+can+be+virulent%2C+causing+degeneration+and+early+death%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Wolbachia, normally a symbiont of Drosophila, can be virulent, causing degeneration and early death.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 94 (20), 10792-10796 (1997).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

<html> Il metodo qui descritto è uno dei diversi approcci per embrione dechorionation 8,11,18,25,26,27, insieme con altri metodi di allevamento mosche axeniche, tra cui il trasferimento seriale di adulti axeniche 18,27 o 13,18 trattamento antibiotico. Altri metodi includono dechorionation lavaggi etanolo e ridurre 11,25,26 o estendono 8 Trattamento ipoclorito. Diverse fasi di lavaggio può essere di aiuto l&#39;allevamento di diversi genotipi mosca: in un precedente s...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/54219/rearing-fruit-fly-drosophila-melanogaster-under-axenic-gnotobiotic">Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions</a>. The Protocol was updated.
Step 6.1.4.2 of the Protocol was updated from:
If using the 4 species described here, normalize cells to equivalent colony forming unit (CFU)/ml densities (OD600 to CFU conversion determined previously20) using this equation: 
E = ((O-B) x V x D)/C 
where E = volume to resuspend pellet in (&#956;l), O = OD600 bacteria, B = OD600 blank media, D = fold-dilution, V = &#181;l bacterial culture prior to centrifugation, C = OD600 of predetermined constant. See Supplemental Code File for examples of calculations using these equations. For spectrophotometers that automatically blank, use &#34;O&#34; in place of &#34;O-B&#34;. 
Note: The predetermined constants (units OD600, normalized to 107 CFU ml-1, constants derived in20) are as follows: A. tropicalis (0.052), A. pomorum (0.038), L. brevis (0.056), L. plantarum (0.077).
to:
If using the 4 species described here, normalize cells to equivalent colony forming unit (CFU)/ml densities (OD600 to CFU conversion determined previously20) using this equation: 
E = ((O-B) x V x D)/C 
where E = volume to resuspend pellet in (&#956;l), O = OD600 bacteria, B = OD600 blank media, D = fold-dilution, V = &#181;l bacterial culture prior to centrifugation, C = OD600 of predetermined constant. See Supplemental Code File for examples of calculations using these equations. For spectrophotometers that automatically blank, use &#34;O&#34; in place of &#34;O-B&#34;. 
Note: The predetermined constants (units OD600, normalized to 107 CFU ml-1, constants derived in20) are as follows: A. tropicalis (0.053), A. pomorum (0.038), L. brevis (0.077), L. plantarum (0.056).

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Erratum: Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

La maggior parte degli animali sono intimamente associati con i batteri ( &#39;microbiota&#39;) dalla nascita alla morte 1. I confronti di ( &#39;convenzionale&#39;) gli animali privi di microrganismi ( &#39;axeniche&#39;) e di microrganismi-associati hanno dimostrato microbi influenzano diversi aspetti della salute degli animali, tra cui metabolica, nutrizionale, vascolari, epatiche, respiratorio, immunologico, endocrino, e la funzione neurologica 2. La mosca della frutta Drosophila melanogaster è un modello chiave per comprendere molti di questi processi in presenza di microbi 3,4 e per studiare l&#39;influenza microbiota su 5,6 salute degli animali. Nessuna specie batterica è presente in ogni individuo ( &#39;core&#39;), ma Acetobacter e Lactobacillus specie numericamente dominano il microbiota di entrambi D. laboratorio-allevati e catturati in natura melanogaster. Altro Acetobacteraceae (compresi Komagataeibacter e Gluconobacter), Firmicutes (come Enterococcus e Leuconostoc), e Enterobacteriaceae sono sia spesso presente in individui Drosophila a bassa abbondanza, o irregolarmente presenti in grande abbondanza 7-12. Il microbiota di Drosophila e mammiferi è incostanti all&#39;interno e attraverso le generazioni 14,19. Microbiota incostanza può portare a rumore fenotipica quando si misurano i tratti microbiota-dipendente. Ad esempio, la memorizzazione Acetobacteraceae influenza lipidi (trigliceridi) in Drosophila 15-18. Se Acetobacteraceae sono più abbondanti nella mosche di una fiala che in un altro 19, mosche isogenici possono avere diversi fenotipi 20. Una soluzione per il problema del microbiota incostanza nei topi 14 è stato in pratica dal 1960, con l&#39;introduzione di una comunità definita di 8 specie microbiche dominanti per cuccioli di topo ogni nuova generazione (alterata Schaedler flora),assicurando che ogni cucciolo è esposto agli stessi membri chiave del microbiota del mouse. Questa pratica controlla per la composizione microbica anche quando il microbiota non è l&#39;obiettivo primario di studio 32, e imposta precedente per assicurare la presenza di microbi chiave in una varietà di condizioni sperimentali. Per definire l&#39;influenza dei microbi sulla Drosophila nutrizione, diversi protocolli per derivare linee di volo axenici sono state sviluppate, compresa ipoclorito dechorionation di embrioni (sia derivato de novo ogni generazione o mantenuta generationally mediante trasferimento diete sterili) e trattamento antibiotico 13. Ci sono benefici per diversi approcci, come la facilità e rapidità sia per il trattamento di antibiotici e di trasferimento seriale, contro un maggior controllo delle variabili confondenti con de novo dechorionation (ad esempio, la densità d&#39;uovo, i microbi contaminanti residui, fuori bersaglio effetti antibiotici). Indipendentemente dal metodo dipreparazione, introduzione di specie microbiche specificati axeniche embrioni permette cultura della Drosophila con definite le comunità ( &#39;gnotobiotic&#39;). In alternativa, mimando l&#39;uso di flora Schaedler, questa comunità potrebbe essere inoculato alle uova convenzionalmente stabilite (seguenti passaggi 6-7 solo) per assicurare la presenza di microbi trait-influenzano in ogni flacone ed evitare complicazioni del microbiota incostanza. Qui si descrive il protocollo per l&#39;allevamento axeniche e gnotobiotic Drosophila da de novo dechorionation di embrioni, e per confermare la presenza di introdotto o contaminazione microbica taxa.

<table><tbody><tr><td>Lievito di birra</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>903312</td><td>http://www.mpbio.com/product.php?pid=02903312</td></tr><tr><td>Glucosio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158968-3KG</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/158968?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fisher--Lab Scientific</td><td>fly802010</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/drosophila-agar-8-100mesh-10kg/nc9349177</td></tr><tr><td>Welch's 100% succo d'uva concentrato</td><td>Walmart o altri negozi di alimentari</td><td>9116196</td><td>http://www.walmart.com/ip/Welch-s-Frozen-100-Grape-Juice-Concentrate-11.5-oz/10804406</td></tr><tr><td>gabbia: 32 once Contenitore per gastronomia rotondo traslucido</td><td>Webstaurant Store</td><td>999L5032Y</td><td>http://www.webstaurantstore.com/newspring-delitainer-sd5032y-32-oz-translucent-round-deli-container-24-pack/999L5032Y.html</td></tr><tr><td>Coperchio per contenitore per gastronomia rotondo traslucido</td><td>Webstaurant Store</td><td>999YNL500</td><td>http://www.webstaurantstore.com/newspring-delitainer-ynl500-translucent-round-deli-container-lid-60-pack/999YNL500.html</td></tr><tr><td>Bottiglie</td><td>Stock Genesee Scientific</td><td>32-130</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=32-130</td></tr><tr><td>Droso-Tappi</td><td>Genesee Scientific</td><td>49-101</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=49-101</td></tr><tr><td>Rete in nylon</td><td>Genesee Scientific</td><td>57-102&nbsp;</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/715/?product=57-102</td></tr><tr><td>Boccola in plastica</td><td>Home Depot</td><td>100404002</td><td>http://www.homedepot.com/p/Carlon-1-in-Non-Metallic-Terminal-Adapter-E943FR-CTN/100404002</td></tr><tr><td>Tappo boccola in plastica</td><td>Home Depot</td><td>100153897</td><td>http://www.homedepot.com/p/1-1-4- in boccola isolata in plastica rigida-2-Pack-2-27529/100153897</td></tr><tr><td>Specimen Cup</td><td>MedSupply Partners</td><td>K01-207067</td><td>http://www.medsupplypartners.com/covidien-specimen-containers.html</td></tr><tr><td>Repeater M4</td><td>Eppendorf</td><td>4982000322</td><td>https://online-shop.eppendorf.us/US-en/Manual-Liquid-Handling-44563/Dispensers--Burettes-44566/Repeater-M4-PF-44619.html</td></tr><tr><td>50 ml Provette per centrifuga</td><td>TrueLine TrueLine</td><td>TR2003</td><td>https://www.lpsinc.com/Catalog4.asp?catalog_nu=TR2003</td></tr><tr><td>Scatole per alimenti</td><td>USA Scientifico</td><td>2316-5001</td><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=2316-5001</td></tr><tr><td>Matrice di lisi D Bulk</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>116540434</td><td>http://www.mpbio.com/search.php?q=6540-434&s=Search</td></tr><tr><td>Puntali per pipette con filtro, 300 &; l</td><td>USA Scientific</td><td>1120-9810</td><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1120-9810</td></tr><tr><td>Piastre di Petri</td><td>Vendita di prodotti da laboratorio</td><td>M089303</td><td>https://www.lpsinc.com/Catalog4.asp?catalog_nu=M089303</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Laboratories, INC.</td><td>2701</td><td>http://www.deconlabs.com/products.php?ID=88</td></tr><tr><td>Pennello</td><td>Walmart</td><td>5133</td><td>http://www.walmart.com/ip/Chenille-Kraft-5133-Acrylic-Handled-Brush-Set-Assorted-Sizes-colors-8-Brushes-set/41446005</td></tr><tr><td>Pinze</td><td>Fisher</td><td>08-882</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-medium-pointed-forceps-3/p-128693</td></tr><tr><td>Candeggina per uso domestico (6-8% ipoclorito)</td><td>Walmart</td><td>550646751</td><td>http://www.walmart.com/ip/Clorox-Concentrated-Regular-Bleach-121-fl-oz/21618295</td></tr><tr><td>Universal Peptone</td><td>Genesee Scientific</td><td>20-260</td><td>https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=20-260</td></tr><tr><td>estratto di lievito</td><td> Fisher Scientific</td><td>BP1422-500</td><td></td></tr><tr><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-bioreagents-microbiology-media-additives-yeast-extract-3/bp1422500?matchedCatNo=BP1422500 Fosfato dipotassico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3786-1KG</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=P3786-1KG&interface=All&amp; 
N=0& mode=match%20partialmax& lang= 
en& regione=US& focus=prodotto</td></tr><tr><td>Citrato di ammonio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>25102-500g</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=25102-500g&interface=All&N 
=0& mode=match%20partialmax& lang= 
en& regione=US& focus=prodotto</td></tr><tr><td>Acetato di sodio</td><td>VWR</td><td>97061-994</td><td>https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=97061-994</td></tr><tr><td>Solfato di magnesio</td><td>Fisher Scientific</td><td>M63-500</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/magnesium-sulfate-heptahydrate-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-3/m63500?matchedCatNo=M63500</td></tr><tr><td>Solfato di manganese</td><td>Sigma Aldrich</td><td>10034-96-5</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search?term=10034-96-5&interface=CAS%20No.&N=0&mode=match 
%20parzialemax& lang=en& region =US& focus=prodotto</td></tr><tr><td>MRS Powder</td><td>Sigma Aldrich</td><td>69966-500G</td><td>http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/69966?lang=en&region=US</td></tr><tr><td>Lettore di piastre a 96 pozzetti</td><td>BioTek (Epoch)&nbsp;</td><td>NA</td><td>http://www.biotek.com/products/microplate_detection/epoch_microplate_ spectrophotometer.html</td></tr><tr><td>1,7 ml Provette per centrifuga</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1615-5500</td></tr><tr><td>Puntali per pipette con filtro, 1.000 &mu; l</td><td>USA Scientific</td><td>1122-1830</td><td>http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1122-1830</td></tr><tr><td>Piastre da 96 pozzetti</td><td>Greiner Bio-One</td><td>655101</td><td>https://shop.gbo.com/en/usa/articles/catalogue/article/0110_0040_0120_0010/ 13243/</td></tr><tr><td>Perline in ceramica</td><td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>6540-434</td><td></td></tr><tr><td>Omogeneizzatore tissutale</td> http://www.mpbio.com/product.php?pid=116540434 <td>MP Biomedicals, LLC.</td><td>116004500</td><td>http://www.mpbio.com/product.php?pid=116004500</td></tr><tr><td>Classe 1 Cabina di BioSicurezza</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>Modello 1395</td><td>http://www.thermoscientific.com/en/product/1300-series-class-ii-type-a2-biological-safety-cabinet-packages.html</td></tr></tbody></table>

allevamento la mosca della frutta<em&gt; drosophila melanogaster</em&gt; sotto axeniche e gnotobiotic condizioni

Rearing the Fruit Fly Drosophila melanogaster Under Axenic and Gnotobiotic Conditions

L'influenza dei microbi su una miriade di tratti e comportamenti animali è stata sempre più riconosciuta negli ultimi anni. Il moscerino della frutta Drosophila melanogaster è un modello per la comprensione delle interazioni microbiche con gli ospiti animali, facilitato da approcci per allevare campioni di grandi dimensioni di Drosophila in condizioni prive di microrganismi (axenici) o con comunità microbiche definite (gnotobiotici). Questo lavoro delinea un metodo per la raccolta di embrioni di Drosophila, la deteroionazione e la sterilizzazione con ipoclorito e il trasferimento a una dieta sterile. Gli embrioni sterilizzati vengono trasferiti in una dieta sterile in provette da centrifuga da 50 ml e le larve e gli adulti in via di sviluppo rimangono privi di microbi esogeni fino all'apertura delle fiale. In alternativa, i moscerini con un microbiota definito possono essere allevati inoculando dieta sterile ed embrioni con specie microbiche di interesse. Descriviamo l'introduzione di 4 specie batteriche per stabilire un microbiota gnotobiotico rappresentativo in Drosophila. Infine, descriviamo gli approcci per confermare la composizione della comunità batterica, compreso il test se la Drosophila axenica rimane priva di batteri nell'età adulta.

Allevamento di successo di mosche axeniche è confermata da isolamento di non CFU da homogenizations tutto il corpo di D. adulti melanogaster (figura 1). In alternativa, se l&#39;omogeneizzato placcato produce colonie, i flaconi sono contaminati e devono essere eliminati. Per mosche gnotobiotic, ciascuna delle quattro isolati batterici sono stati isolati da pool di 5 maschi adulti, dimostrando differenze CFU vitali totali associati con mosche adulte <str...

Un metodo per l&#39;allevamento di Drosophila melanogaster in condizioni axeniche e gnotobiotic è presentato. Fly embrioni vengono dechorionated in ipoclorito di sodio, trasferiti asetticamente alla dieta sterili, e allevati in contenitori chiusi. Inoculando dieta ed embrioni con i batteri porta ad associazioni gnotobiotic, e la presenza di batteri è confermata dalla placcatura di tutto il corpo omogenati Drosophila.

Allevamento la mosca della frutta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sotto axeniche e Gnotobiotic Condizioni

The influence of microbes on myriad animal traits and behaviors has been increasingly recognized in recent years. The fruit fly Drosophila melanogaster is ...

L'obiettivo generale di questo procedimento è allevare moscerini della frutta privi di microorganismi associati. Questo metodo può aiutare qualsiasi ricercatore nel campo di Drosophila a controllare, manipolare o studiare la microbiota, inclusa la sua relazione con vari tratti dell'ospite. Il principale vantaggio di questa tecnica è che consente ai ricercatori di allevare moscerini della frutta in assenza completa di microorganismi esterni.Generalmente, chi è alle prime armi con questo metodo incontrerà difficoltà, poiché le fasi di sterilizzazione e risciacquo devono essere eseguite senza introdurre alcun microbo contaminante. Per iniziare l'esperimento, effettuare un'incisione (streak) su piastre di agar MRS modificato, o mMRS, utilizzando colture precedentemente preparate. Incubare le piastre per tutta la notte a 30 gradi Celsius.Incubare le colture anaerobiche in un contenitore ermetico, inondando il contenitore con anidride carbonica prima della chiusura. Il giorno successivo, selezionare una singola colonia dalla piastra mMRS e trasferirla in un tubo da saggio contenente brodo mMRS. Far crescere le specie di *Lactobacillus* in condizioni statiche e le specie di *Acetobacter*

rearing-fruit-fly-drosophila-melanogaster-under-axenic-gnotobiotic

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Biologia dello sviluppo

L'embrione di Drosophila è circondato da membrane esterne protettive. Per accedere all'embrione, il corion, la più esterna delle membrane, viene spesso rimosso. Questo video descrive un metodo comunemente usato per la decorionazione utilizzando l'ipoclorito di sodio. Il protocollo di esempio dimostra la procedura impiegando tecniche sterili necessarie per l'allevamento di animali axenici o gnotobiotici.

drosofila Raccolta e decorionazione degli ovuli: un metodo per rimuovere lo strato di uova più esterno

Il microbiota della Drosophila influisce sullo sviluppo, l'immunità e la fisiologia dell'animale. Questo video descrive un metodo per quantificare i batteri delle mosche determinando le unità formanti colonie da preparati di tutto il corpo. Il protocollo presentato dimostra la tecnica con le mosche, allevate in condizioni gnotobiotiche utilizzando quattro specie batteriche.

Conteggio delle unità formanti colonie (CFU): quantificazione dei batteri dai corpi dei moscerini

Fonte: Siva-Jothy, J. A., et al. Infezione batterica orale e caduta in Drosophila melanogaster. J. Vis. Esp. (2018)Il video mostra l'infezione orale di Drosophila melanogaster con batteri patogeni. Include la preparazione di fiale infettive e il trasferimento di mosche affamate per consentire l'ingestione batterica. La procedura cattura la colonizzazione intestinale, seguita dalla sterilizzazione superficiale e dall'omogeneizzazione delle mosche. Infine, mostra la quantificazione del carico...

Infezione orale di Drosophila melanogaster con batteri patogeni

Questo manoscritto riporta un protocollo dettagliato per l'allevamento, su base regolare, di una popolazione di Drosophila melanogaster utilizzando una gabbia per la popolazione di mosche.

Mantenimento di un<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Cage Popolazione

Forniamo un protocollo dettagliato per un saggio di Drosophila melanogaster sulla lunghezza del percorso di foraggiamento. Discutiamo della preparazione e della manipolazione degli animali da laboratorio, di come eseguire il test e di analizzare i dati.

Foraggiamento protocollo percorso di lunghezza per<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Le larve

Questo protocollo descrive metodi per esporre oralmente e di infettare il moscerino della frutta Drosophila melanogaster con batteri patogeni e per misurare il numero di batteri infettivi capannone dopo l'infezione dell'intestino. Descriviamo ulteriormente l'effetto di mutanti immuni sulla sopravvivenza vola dopo l'infezione batterica orale.

Infezione batterica orale e spargimento in Drosophila melanogaster

Le mosche adulte Drosophila melanogaster sono state ampiamente utilizzate come organismi modello per studiare i meccanismi molecolari alla base delle risposte immunitarie innate antimicrobiche dell'ospite e delle strategie di infezione microbica. Per promuovere lo stadio larvale di D. melanogaster come sistema modello aggiuntivo o alternativo, viene descritta una tecnica di iniezione larvale.

Drosophila melanogaster Protocollo di iniezione della larva

È stato stabilito un metodo per riattivare le cellule staminali neurali quiescenti negli espianti cerebrali di Drosophila in coltura. Utilizzando questo metodo, il ruolo dei segnali sistemici può essere disaccoppiato dai segnali intrinseci del tessuto nella regolazione della quiescenza, dell'ingresso e dell'uscita delle cellule staminali neurali.

Riattivazione delle cellule staminali neurali negli espianti cerebrali di Drosophila in coltura

Qui forniamo dettagli su come preparare i lisati ed eseguire la traduzione in vitro utilizzando embrioni di Drosophila .

Traduzione di mRNA in vitro senza cellule nei lisati di Drosophila

Le cellule del sangue di Drosophila, o emociti, si alternano tra i siti residenti e la circolazione.  Nella larva, gli emociti residenti (sessili) si localizzano in microambienti induttivi, le tasche ematopoietiche, mentre gli emociti circolanti si muovono liberamente nell'emolinfa. L'obiettivo di questo protocollo è l'isolamento e la quantificazione standardizzati di queste due popolazioni di emociti, comportamentali distinte ma interscambianti.

Saggio popolazioni cellulari del sangue<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

Impara a allevare Drosophila melanogaster in condizioni asseniche e gnotobiotiche per studiare il microbiota e i tratti dell'ospite. Questo metodo permette di controllare e manipolare i microrganismi associati.

Allevamento la mosca della frutta

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