Nefrotossina microiniezione in Zebrafish per creare un modello danno renale acuto

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di utilizzare il pesce zebra per osservare l'effetto delle nefrotossine come la gentamicina o il cisplatino per modellare il danno renale acuto. Il vantaggio principale di questa tecnica è che il modello zebrafish consente l'imaging in tempo reale del danno cellulare e della rigenerazione dopo un danno renale acuto. Per iniziare questa procedura, preparare uno strumento di manipolazione embrionale per posizionare gli embrioni per la micro iniezione attaccando una punta di caricamento del gel all'estremità di un ago da dissezione dritto da cinque pollici e fissarlo con nastro adesivo o super colla.

Quindi, preparare alcuni aghi per microiniezione affusolati sottili tirando i bicchieri di borosilicato lucidati a fuoco con filamento utilizzando un estrattore per pipette. Quindi, utilizzare una lama di rasoio o un bordo a pinza fine per tagliare le punte dell'ago per creare punte di iniezione angolari affilate. Successivamente, posizionare gli aghi su una striscia di argilla da modellare in una capsula di Petri per proteggere le punte degli aghi.