Name: Utilizzo di una batteria di chimici ed ecotossicologici metodi per la valutazione dellefficacia dei processi di trattamento delle acque reflue per rimuovere estrogenica Potenza (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Scopri metodi chimici ed ecotossicologici per valutare l'efficacia dei trattamenti delle acque reflue nella rimozione di contaminanti estrogenici. Questa tecnica aiuta a proteggere gli ecosistemi acquatici.

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I progetti presentati in questo documento sono stati finanziati da Severn Trent Water e Brunel University London. Gli autori desiderano ringraziare Alan Henshaw e John Churchley per aver fornito assistenza sul campo e in laboratorio. T.J.C. ringrazia la Heinz Endowments per il supporto. M.R.M. ringrazia lo Steinbrenner Institute per la Steinbrenner Doctoral Fellowship e la Carnegie Mellon University per la Presidential Fellowship.

<ol><li>Bergman, Å, Heindel, J., Jobling, S., Kidd, K., Zoeller, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-of-the-science+of+endocrine+disrupting+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Lett%22%5BJournal%5D)">State-of-the-science of endocrine disrupting chemicals.</a> Toxicol. Lett. 211, (2012).</li>
<li>Rodgers-Gray, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+juvenile+roach+%28Rutilus+rutilus%29+to+treated+sewage+effluent+induces+dose-dependent+and+persistent+disruption+in+gonadal+duct+development%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Exposure of juvenile roach (Rutilus rutilus) to treated sewage effluent induces dose-dependent and persistent disruption in gonadal duct development.</a> Environ. Sci. Technol. 35 (3), 462-470 (2001).</li>
<li>Jobling, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+sexual+maturation+and+gamete+production+in+wild+roach+%28Rutilus+rutilus%29+living+in+rivers+that+receive+treated+sewage+effluents%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+reprod%22%5BJournal%5D)">Altered sexual maturation and gamete production in wild roach (Rutilus rutilus) living in rivers that receive treated sewage effluents.</a> Biol. reprod. 66 (2), 272-281 (2002).</li>
<li>Tyler, C. R., Der Eerden, B. V. an, Jobling, S., Panter, G., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+vitellogenin%2C+a+biomarker+for+exposure+to+oestrogenic+chemicals%2C+in+a+wide+variety+of+cyprinid+fish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+B%2C+Biochem.+Syst.+Environ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Measurement of vitellogenin, a biomarker for exposure to oestrogenic chemicals, in a wide variety of cyprinid fish.</a> J. Comp. Physiol. B, Biochem. Syst. Environ. Physiol. 166 (7), 418-426 (1996).</li>
<li>Jobling, S., Nolan, M., Tyler, C. R., Brighty, G., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Widespread+sexual+disruption+in+wild+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Widespread sexual disruption in wild fish.</a> Environ. Sci. Technol. 32 (17), 2498-2506 (1998).</li>
<li>Jobling, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicted+exposures+to+steroid+estrogens+in+U.K.+rivers+correlate+with+widespread+sexual+disruption+in+wild+fish+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Predicted exposures to steroid estrogens in U.K. rivers correlate with widespread sexual disruption in wild fish populations.</a> Environ. Health Perspect. 114, Suppl 1. 32-39 (2006).</li>
<li>Baynes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Additional+treatment+of+wastewater+reduces+endocrine+disruption+in+wild+fish+-+a+comparative+study+of+tertiary+and+advanced+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Additional treatment of wastewater reduces endocrine disruption in wild fish - a comparative study of tertiary and advanced treatments.</a> Environ. Sci. Technol. 46 (10), 5565-5573 (2012).</li>
<li>Routledge, E. J., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogenic+activity+of+surfactants+and+some+of+their+degradation+products+assessed+using+a+recombinant+yeast+screen%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Estrogenic activity of surfactants and some of their degradation products assessed using a recombinant yeast screen.</a> Environ. Toxicol. Chem. 15 (3), 241-248 (1996).</li>
<li>Grover, D. P., Balaam, J., Pacitto, S., Readman, J. W., White, S., Zhou, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocrine+disrupting+activities+in+sewage+effluent+and+river+water+determined+by+chemical+analysis+and+in+vitro+assay+in+the+context+of+granular+activated+carbon+upgrade%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Endocrine disrupting activities in sewage effluent and river water determined by chemical analysis and in vitro assay in the context of granular activated carbon upgrade.</a> Chemosphere. 84 (10), 1512-1520 (2011).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+determination+of+steroid+oestrogens+in+waters+using+chromatography+and+mass+spectrometry+%282008%29+Methods+for+the+Examination+of+Waters+and+Associated+Materials%22">The determination of steroid oestrogens in waters using chromatography and mass spectrometry (2008) Methods for the Examination of Waters and Associated Materials</a>. (2008), Environment Agency. Bristol, UK. (2008).</li>
<li>Van den Belt, K., Berckmans, P., Vangenechten, C., Verheyen, R., Witters, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+the+in+vitro%2Fin+vivo+estrogenic+potencies+of+17beta-estradiol%2C+estrone%2C+17alpha-ethynylestradiol+and+of+17beta-estradiol%2C+estrone%2C+17alpha-ethynylestradiol+and+nonylphenol%5BTitle%5D)+AND+%22Aquat.+toxicol%22%5BJournal%5D)">Comparative study on the in vitro/in vivo estrogenic potencies of 17beta-estradiol, estrone, 17alpha-ethynylestradiol and of 17beta-estradiol, estrone, 17alpha-ethynylestradiol and nonylphenol.</a> Aquat. toxicol. 66 (2), 183-195 (2004).</li>
<li>Mills, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+ecotoxicity+of+17%CE%B1-ethinylestradiol+using+TAML%2Fperoxide+water+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Removal of ecotoxicity of 17α-ethinylestradiol using TAML/peroxide water treatment.</a> Sci. Rep. 5, 10511(2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22EN+14962%3A2006+Water+quality+-+Guidance+on+the+scope+and+selection+of+fish+sampling+methods%22">EN 14962:2006 Water quality - Guidance on the scope and selection of fish sampling methods</a>. , British Standards Institute. London, UK. (2006).</li>
<li>Beresford, N., Brian, J. V., Runnalls, T. J., Sumpter, J. P., Jobling, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogenic+activity+of+tropical+fish+food+can+alter+baseline+vitellogenin+concentrations+in+male+fathead+minnow+%28Pimephales+promelas%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Estrogenic activity of tropical fish food can alter baseline vitellogenin concentrations in male fathead minnow (Pimephales promelas).</a> Environ. Toxicol. Chem. 30 (5), 1139-1145 (2011).</li>
<li>Nolan, M., Jobling, S., Brighty, G., Sumpter, J. P., Tyler, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+histological+description+of+intersexuality+in+the+roach%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Fish+Biol%22%5BJournal%5D)">A histological description of intersexuality in the roach.</a> J. Fish Biol. 58 (1), 160-176 (2001).</li>
<li>Dascenzo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+of+natural+estrogen+conjugates+in+municipal+sewage+transport+and+treatment+facilities%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">Fate of natural estrogen conjugates in municipal sewage transport and treatment facilities.</a> Sci. Total Environ. 302 (1-3), 199-209 (2003).</li>
<li>Gomes, R. L., Birkett, J. W., Scrimshaw, M. D., Lester, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+determination+of+natural+and+synthetic+steroid+estrogens+and+their+conjugates+in+aqueous+matrices+by+liquid+chromatography%2Fmass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Environ.+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Simultaneous determination of natural and synthetic steroid estrogens and their conjugates in aqueous matrices by liquid chromatography/mass spectrometry.</a> Int. J. Environ. Anal. Chem. 85 (1), 1-14 (2005).</li>
<li>Metcalfe, C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogenic+potency+of+chemicals+detected+in+sewage+treatment+plant+effluents+as+determined+by+in+vivo+assays+with+Japanese+medaka+%28Oryzias+latipes%29%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Estrogenic potency of chemicals detected in sewage treatment plant effluents as determined by in vivo assays with Japanese medaka (Oryzias latipes).</a> Environ. Toxicol. Chem. 20 (2), 297-308 (2001).</li>
<li>Stalter, D., Magdeburg, A., Wagner, M., Oehlmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ozonation+and+activated+carbon+treatment+of+sewage+effluents%3A+Removal+of+endocrine+activity+and+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Water+Res%22%5BJournal%5D)">Ozonation and activated carbon treatment of sewage effluents: Removal of endocrine activity and cytotoxicity.</a> Water Res. 45 (3), 1015-1024 (2011).</li>
<li>Caldwell, D. J., Mastrocco, F., Anderson, P. D., Länge, R., Sumpter, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Predicted-no-effect+concentrations+for+the+steroid+estrogens+estrone%2C+17%CE%B2-estradiol%2C+estriol%2C+and+17%CE%B1-ethinylestradiol%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Predicted-no-effect concentrations for the steroid estrogens estrone, 17β-estradiol, estriol, and 17α-ethinylestradiol.</a> Environ. Toxicol. Chem. 31 (6), 1396-1406 (2012).</li>
<li>Gardner, M., Comber, S., Scrimshaw, M. D., Cartmell, E., Lester, J., Ellor, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+significance+of+hazardous+chemicals+in+wastewater+treatment+works+effluents%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Total+Environ%22%5BJournal%5D)">The significance of hazardous chemicals in wastewater treatment works effluents.</a> Sci. Total Environ. 437, 363-372 (2012).</li>
<li>Filby, A. L., Shears, J. A., Drage, B. E., Churchley, J. H., Tyler, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+advanced+treatments+of+wastewater+effluents+on+estrogenic+and+reproductive+health+impacts+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Sci.+Technol%22%5BJournal%5D)">Effects of advanced treatments of wastewater effluents on estrogenic and reproductive health impacts in fish.</a> Environ. Sci. Technol. 44 (11), 4348-4354 (2010).</li>
<li>Magdeburg, A., Stalter, D., Oehlmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+effluent+toxicity+assessment+at+a+wastewater+treatment+plant+upgraded+with+a+full-scale+post-ozonation+using+aquatic+key+species%5BTitle%5D)+AND+%22Chemosphere%22%5BJournal%5D)">Whole effluent toxicity assessment at a wastewater treatment plant upgraded with a full-scale post-ozonation using aquatic key species.</a> Chemosphere. 88 (8), 1008-1014 (2012).</li>
<li>Collins, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TAML+oxidant+activators%3A+a+new+approach+to+the+activation+of+hydrogen+peroxide+for+environmentally+significant+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">TAML oxidant activators: a new approach to the activation of hydrogen peroxide for environmentally significant problems.</a> Acc. Chem. Res. 35 (9), 782-790 (2002).</li>
<li>Collins, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Designing+Ligands+for+Oxidizing+Complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Acc.+Chem.+Res%22%5BJournal%5D)">Designing Ligands for Oxidizing Complexes.</a> Acc. Chem. Res. 27 (9), 279-285 (1994).</li>
<li>Truong, L., Denardo, M. A., Kundu, S., Collins, T. J., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Assays+as+Developmental+Toxicity+Indicators+in+The+Design+of+TAML+Oxidation+Catalysts%5BTitle%5D)+AND+%22Green+Chem%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Assays as Developmental Toxicity Indicators in The Design of TAML Oxidation Catalysts.</a> Green Chem. 15 (9), 2339-2343 (2013).</li>
<li>Murk, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+estrogenic+potency+in+wastewater+and+surface+water+with+three+in+vitro+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Toxicol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Detection of estrogenic potency in wastewater and surface water with three in vitro bioassays.</a> Environ. Toxicol. Chem. 21 (1), 16-23 (2002).</li>
<li>Test No 455: The Stably Transfected Human Estrogen Receptor-alpha Transcriptional Activation Assay for Detection of Estrogenic Agonist-Activity of Chemicals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22OECD+Guidelines+for+the+Testing+of+Chemicals%2C+Section+4%22">OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4</a>. , OECD Publishing. Paris. (2009).</li>
<li>Kolle, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+house+validation+of+recombinant+yeast+estrogen+and+androgen+receptor+agonist+and+antagonist+screening+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+in+Vitro%22%5BJournal%5D)">In house validation of recombinant yeast estrogen and androgen receptor agonist and antagonist screening assays.</a> Toxicol in Vitro. 24 (7), 2030-2040 (2010).</li>
<li>Lee, O., Tyler, C. R., Kudoh, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+transient+expression+assay+for+detecting+environmental+oestrogens+in+zebrafish+and+medaka+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Development of a transient expression assay for detecting environmental oestrogens in zebrafish and medaka embryos.</a> BMC Biotechnology. 12, 32(2012).</li>
<li>Brian, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+prediction+of+the+response+of+freshwater+fish+to+a+mixture+of+estrogenic+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Accurate prediction of the response of freshwater fish to a mixture of estrogenic chemicals.</a> Environ Health Perspect. 113 (6), 721-728 (2005).</li>
<li>Test No 229: Fish Short Term Reproduction Assay. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22OECD+Guidelines+for+the+Testing+of+Chemicals%2C+Section+2%22">OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2</a>. , OECD Publishing. Paris. (2009).</li>
<li>Test No 230: 21-day Fish Assay: A Short-Term Screening for Oestrogenic and Androgenic Activity and Aromatase Inhibition. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22OECD+Guidelines+for+the+Testing+of+Chemicals%2C+Section+2%22">OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 2</a>. , OECD Publishing. Paris. (2009).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

impianti di depurazione sono la principale via di contaminazione delle acque di superficie con EDC. Una valutazione dell&#39;efficacia di rimozione di attività endocrina di processi di trattamento convenzionali, avanzata o emergenti richiede l&#39;uso di una varietà di saggi chimici e biologici. L&#39;analisi chimica utilizzando l&#39;analisi non mirati e mirata fornisce dati qualitativi o quantitativi sull&#39;efficacia della rimozione dei singoli componenti e permette quindi una valutazione da effettuare sulla base degli standard di qualità ambientale o concentrazioni prevedibili senza effetti per i composti o miscele di composti analizzati. La generazione di prodotti di trasformazione derivanti dalla mineralizzazione incompleta di sostanze dopo il trattamento e la presenza di componenti biologicamente attivi sconosciuti nelle acque reflue limita l&#39;utilità del solo test chimici. Una combinazione di in vivo e in vitro biosaggi in combinazione con chimico analiticolo screening ry fornisce una serie di strumenti utili per determinare l&#39;efficacia di rimozione EDC emergendo processi di trattamento delle acque reflue. Questi test, se condotta a fianco di tradizionali parametri di qualità dell&#39;acqua e di altri end-point tossicologici e microbiologici consentono una valutazione critica delle tecnologie di trattamento delle acque reflue attuali ed emergenti. E &#39;importante notare che gli schermi di estrogeni a base di lievito (ad esempio, SI) non sono l&#39;unico in vitro per determinare la potenza estrogenica di prodotti chimici e reflui. Sono stati sviluppati un certo numero di stabilmente trasfettate test basati cellule di mammiferi anche, per esempio, l&#39;ER-CALUX 27 e hERα-HeLa-9903 28 con cellule di cancro al seno umano o cellule tumorali cervicali rispettivamente. Il SI è stato paragonato a saggi cellulari a base di mammiferi simili ed è stato trovato per avere un elevato livello comparabile di riproducibilità, veri tassi positivi e veri negativi estrogenici di identificazione 29, starebbeugh a volte è considerato un po &#39;meno sensibili 27. Un vantaggio di saggi reporter di lievito base è che in laboratori senza esperienza significativa con colture cellulari di mammifero YES può essere facilmente adottata, in quanto richiede misure di controllo biologico meno rigorosi e tecniche sterili (SI può essere eseguita sul banco se necessario) . I saggi a base di cellule umane richiedono anche di CO 2 incubatori e luminometri rispetto ai lettori di incubazione e micropiastre standard utilizzati nella SI. Saggi di estrogeni a base giornalista Due lievito (sì, Saccharomyces cerevisiae e A-SI, Arxula adeninivorans) stanno attualmente intraprendendo percorsi inter-laboratorio per la validazione di ISO 19040 &quot;Qualità dell&#39;acqua - Determinazione del potenziale estrogenico delle acque e delle acque reflue&quot; evidenziando le industrie interesse per queste tecniche. Ci sono un certo numero di limitazioni dei metodi descritti che include la potenziale contaminazionedei campioni durante il campionamento, conservazione dei campioni e l&#39;analisi con sostanze estrogeniche provenienti dall&#39;ambiente campo o laboratorio o da contaminazione umana (per esempio, plastificanti, tensioattivi, prodotti per la cura personale). Questo tipo di contaminazione nel saggio SI (o altri saggi reporter di base cellulari) elevare lo sfondo e l&#39;impatto utilizzo del test. I campioni di acqua o solventi conservati in bottiglie di plastica può facilmente causare falsi positivi. I falsi negativi sono anche di preoccupazione sia come LCMS / MS e il test YES richiedono SPE concentrarsi estrogeni a livelli rilevabili. La matrice, la scelta di SPE sorbente e eluizione solvente può influenzare l&#39;efficienza di estrazione ei tipi di composti eluiti. Utilizzando cartucce C18 SPE per l&#39;estrazione utilizzando le condizioni descritte in questo protocollo può generare un bias negativo, come composti altamente polari e di base sarebbero stati mal conservati dal assorbente. Inoltre, questo protocollo richiede ricostituzione dell&#39;eluente SÌ eluiti dal metanoolo di etanolo per evaporazione a secchezza azoto funder conseguente perdita di composti volatili. Di conseguenza, il protocollo potrebbe fornire sottovalutato attività estrogenica di campioni esaminati. Queste limitazioni sono particolarmente importante se si considera il test YES come composti sconosciuti o inattesi potrebbe essere perso, perché non sono stati estratti o sono persi a causa di evaporazione. Inoltre, la tecnica LCMS / MS si avvale di standard interni marcati per correggere per il recupero; questo approccio non può essere usato con il test YES. Limitazioni significative di test in vivo di effluenti includono elevati costi e il tempo necessario per la valutazione rispetto ai metodi in vitro. Attualmente l&#39;uso di test embrionali pesce per rilevare attività estrogenica è limitata. Tuttavia, vi è stato un certo successo con la produzione di estrogeni transgenico sensibile incandescente embrioni di pesce 30, che potrebbero avere future applicazioni. pesciolini Fathead (utilizzati in questo ProtoColo) sono una specie di laboratorio comuni e VTG induzione in pesci di sesso maschile è un bio-marcatore ben documentata di esposizione estrogenica e una misura quantificabile di acque di scarico dell&#39;effluente estrogenicità 22 o altri composti estrogenici o miscele 31. Linee direttrici OCSE per interferenti endocrini sono stati convalidati usando adulti vairone a testa grossa, Medaka giapponesi e zebrafish 32,33, con VTG essere un biomarker sensibile di esposizione agli estrogeni in tutte e tre le specie. Tuttavia, VTG induzione non direttamente correlata alla compromissione riproduttiva e quindi le conseguenze ecologiche di esposizione delle acque reflue, come si vede in scarafaggio gravemente intersessuati 3. D&#39;altra parte, scarafaggio non sono una «specie di laboratorio&quot; classici per la ricerca ecotossicologia a causa delle loro grandi dimensioni, molto tempo generazione (2-3 anni per raggiungere la maturità sessuale), stile riproduttivo; gruppo di deposizione delle uova (di allevamento) si svolge una volta l&#39;anno, e la difficoltà di individuare i maschi dalle femmine (diversi durantela stagione riproduttiva). Tuttavia, questa specie normalmente gonochoristic è stato molto ben studiato nel Regno Unito, a causa della scoperta che a valle di effluenti di acque reflue estrogenici, pesci di sesso maschile esposto perturbazioni alla loro endocrinologia (ad esempio, presenza di vitellogenin femminile-specifica nel sangue) e istopatologia (ovotestis - sviluppare le uova nel testicolo e / o condotti riproduttivi femminili) 5,6. Pertanto, come una futura applicazione di questi protocolli, scarafaggio (o specie simili) potrebbe essere una specie sentinella selvatiche utile per mostrare se reali miglioramento della qualità delle acque di scarico (e ridotta) estrogenicità sono visti nei fiumi che ricevono effluenti trattati avanzato. Possono anche essere impiegati in fine tubazioni per monitorare effluenti tecnologicamente migliorati da piante scala pilota 7. Quando si considera che le specie da utilizzare nelle valutazioni delle acque reflue in vivo vi è un compromesso tra le specie di laboratorio di test utilizzando relativamente rapido e controllati rispetto alpiù campo base, ma più rispettosa dell&#39;ambiente rilevanti, test utilizzando specie autoctone. Tuttavia, tali valutazioni in vivo sono costi elevati e dovrebbe essere considerata solo come la serie finale di test seguenti valutazioni utilizzando l&#39;analisi chimica e test in vitro. Passaggi critici all&#39;interno dei protocolli descritti comprendono la preparazione e la manipolazione dei campioni e oggetti di vetro (ad esempio, bottiglie e apparecchiature di campionamento devono essere pre-trattati con superficie detergente idoneo attiva) per evitare la contaminazione dei campioni da contaminanti ambientali, tra cui limitare il contatto dei campioni con la plastica e altri materiali che possono produrre falsi positivi. Questo è altrettanto importante durante la progettazione e la costruzione di sistemi di esposizione acquari e pesci. Idealmente acquari (scorte abitative e durante le esposizioni) dovrebbe essere costruito con materiali a basso assorbimento 32 con il minimo rischio di contaminazione. L&#39;acciaio inossidabile può essere utilizzato per serbatoi acque nere effluenti o sull&#39;acqua.Mentre i serbatoi di una costruzione di vetro sono preferiti per acquari (come questo offre anche un facile osservazione del pesce). L&#39;impiego di tubi in plastica a basso grado o tubo deve essere evitata 32, 34 e PVC ABS può essere utilizzato se &#39;correttamente esperto&#39;, cioè, a sinistra per filtrare eventuali contaminanti in acqua corrente di diluizione per almeno 12 ore prima dell&#39;uso. tubo in silicone di grado medico è stato impiegato con successo nella nostra struttura per la consegna pompa peristaltica di prodotti chimici e di acqua delle acque reflue / diluizione ai serbatoi. Oltre a considerare la contaminazione estrogenica nella costruzione e la gestione del sistema di Aquatics, è anche importante per pensare la dieta del pesce; molti alimenti di pesce proprietà sono stati trovati per essere estrogenica per i pesci. Pertanto, è importante per testare tutti gli alimenti per l&#39;attività (per esempio, nella schermata di estrogeni lievito, vedere Beresford et al. 14) prima di utilizzarli in questi tipi di studi. Risoluzione dei problemidei protocolli di analisi di analisi chimica o sì descritti è semplificata se i campioni di garanzia della qualità compresi i viaggi multipli, di laboratorio e gli spazi di solventi vengono analizzati insieme a controlli positivi e campioni reali per eliminare i falsi risultati positivi e falsi negativi. Positivo (ad esempio, EE2) e negativo (solo acqua di diluizione) il controllo dovrebbe sempre essere utilizzato nei test in vivo per confermare la sensibilità del biomarcatore biologico previsto o endpoint (cioè, VTG o istopatologia), e consentire a qualsiasi contaminazione inaspettata da rilevare ( ad esempio, dal set sperimentale up, dieta, o acque di diluizione). Tutte le modifiche nel protocollo devono essere convalidati prima di effettuare qualsiasi studio. Con una regolamentazione più severa di composti estrogenici che entra nell&#39;ambiente tramite effluenti WWTP è prevedere che più efficaci tecnologie di trattamento delle acque di scarico dovranno essere sviluppati. La batteria di test descritti in questo manoscritto complimentare laecotossicologiche e chimiche test di valutazione normalmente applicati al trattamento delle acque reflue degli scarichi dell&#39;impianto effluenti. Pertanto, futura applicazione di questo tipo di batteria olistica della prova dovrebbe consentire agli sviluppatori di tecnologia delle acque reflue, e gestori di impianti, di attuare i disegni più ecologicamente sicuro in considerazione i migliori metodi per rimuovere entrambe le sostanze chimiche estrogeniche regolamentati specifici e attività biologica complessiva.

Preoccupazioni per quanto riguarda gli effetti negativi dei composti alterano il sistema endocrino sulla fauna selvatica salute riproduttiva ha portato l&#39;Unione europea a mettere due sostanze estrogeniche (estradiolo e di etinilestradiolo) su una &quot;watch list&quot; ai sensi della direttiva quadro sulle acque (WFD). EDC comprendono una varietà di classi chimiche, tra cui gli estrogeni naturali e sintetici steroidi, farmaci, pesticidi e prodotti chimici industriali e componenti di prodotti di consumo con effetti negativi noti sulla fauna selvatica. Alcuni di questi composti possono potenzialmente avere un impatto sulla salute umana 1. La ricerca ha dimostrato che gli effluenti da impianti di depurazione sono estrogenica a pescare 2 e di conseguenza molte acque che ricevono sono anche estrogenica per i pesci 3. Questo è stato dimostrato attraverso indagini nazionali del Regno Unito che ha mostrato un aumento delle concentrazioni di vitellogenina (una femmina specifica proteina tuorlo precursore 4) nel sangue di pesce maschio selvatico e un alto prevalenza di intersessualità (sviluppo di uova e / o condotti riproduttivi femminili nel testicolo di pesci di sesso maschile) nelle specie ittiche normalmente gonochoristic 5,6. depurazione convenzionale è tipicamente un processo in tre fasi che consiste di uno screening preliminare seguita da trattamento primario e secondario che rimuove sia sciolto e sospese materia organica. L&#39;efficacia di rimozione dell EDC dipende dalle proprietà fisico-chimiche delle sostanze e l&#39;efficacia del processo di trattamento applicato. Per molti la rimozione EDC tramite adsorbimento e degradazione biologica può essere significativo, ma incompleta. Trattamento terziario, come la filtrazione a sabbia, può essere efficace ad aumentare la rimozione EDC 7 mentre il trattamento avanzato tramite ossidazione avanzata (ad esempio l&#39;ozono) o il carbone attivo può essere efficace nel raggiungere quasi completa rimozione 7. La valutazione di ogni nuova tecnologia per il trattamento delle acque reflue needs per determinare l&#39;efficacia del processo proposto nella rimozione EDC. Una batteria di test, tra cui analisi chimiche mirate al fianco di test ecotossicologia, utilizzando in vivo e in vitro saggi biologici, fornisce dati completi per questo scopo. Anche se molto utile a fini normativi, analisi chimica mirata può fornire solo dati sui composti (e metaboliti specifici) monitorati. Test biologici permettono inoltre il &quot;rilevamento&quot; degli effetti avversi dei metaboliti e il trattamento delle acque reflue generate trasformazione di sottoprodotti che altrimenti sarebbero individuare, 8,9. Questo documento descrive l&#39;uso di una batteria di test chimici e di laboratorio ecotossicità per valutare l&#39;efficacia di un certo numero di processi di depurazione avanzati ed emergenti nel rimuovere la potenza estrogenica di greggio e liquami trattati e acque recipienti.

<table><tbody><tr><td>Lavapiastre Wellwash Versa</td><td>Thermo Scientific</td><td>5165010</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di piastre</td><td>Molecular Devices</td><td>SpectraMax 340PC</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore</td><td>Memmert</td><td>INB 400</td><td>37 &#176; Incubazione C necessaria per il saggio della carpa</td></tr><tr><td>Fisherbrand whirlimixer</td><td>Fisher</td><td>Scientific 13214789</td><td></td></tr><tr><td>Icemaker</td><td>Scotsman</td><td>AF80</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta digitale multicanale F1 a 12 canali</td><td>Thermo Scientific Finnpipette</td><td>4661070</td><td></td></tr><tr><td>kit ELISA</td><td>Biosense Laboratories</td><td>V01018401-096 (Fathead minnow) V01003402-096 (Carpa)</td><td></td></tr><tr><td>Provette per microfuge, 0,5 ml</td><td>Alpha labs</td><td>LW2372</td><td></td></tr><tr><td>Provette per microfuge, 1,5 ml</td><td>Alpha labs</td><td>LW2375</td><td></td></tr><tr><td>Acido solforico, 95-98%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>258105</td><td></td></tr><tr><td>Histology</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Processor per tessuti</td><td>Leica Biosystems</td><td>TP1020</td><td></td></tr><tr><td>Dispenser di cera</td><td>Thermo Scientific Raymond Lamb</td><td>E66HC</td><td></td></tr><tr><td>Stampo per inclusione in metallo</td><td>Leica Biosystems</td><td>Varie</td><td></td></tr><tr><td>Piastra riscaldante</td><td>Thermo Scientific Shandon</td><td>3120063</td><td></td></tr><tr><td>Piastra fredda (EG1150 C)</td><td>Leica Biosystems</td><td>14038838037</td><td></td></tr><tr><td>Pinza riscaldata (EG F)</td><td>Leica Biosystems</td><td>14038835824</td><td></td></tr><tr><td>Microtomo</td><td>Leica Biosystems</td><td>RM2235</td><td></td></tr><tr><td>Bagno di galleggiamento della sezione di paraffina</td><td>Elettrotermico</td><td>MH8517</td><td></td></tr><tr><td>Banco di essiccazione per vetrini</td><td>Elettrotermico</td><td>MH6616</td><td></td></tr><tr><td>Coloratore automatizzato Stainmate</td><td>Thermo Scientific Shandon</td><td>E103/S10L</td><td></td></tr><tr><td>Cassette, Histosette II, biopsia</td><td>Simport</td><td>M493</td><td></td></tr><tr><td>Cera di paraffina</td><td>Thermo Scientific Raymond Lamb</td><td>W1</td><td></td></tr><tr><td>Histo-Clear II</td><td>National Diagnostics</td><td>HS-202</td><td></td></tr><tr><td>IMS (miscela di etanolo), IDA99</td><td>Tennants</td><td>ID440</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini di adesione polisinica</td><td>Thermo Scientific Gerhard Menzel</td><td>J2800AMNZ</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini coprioggetti, 22x50 mm</td><td>VWR</td><td>631-0137</td><td></td></tr><tr><td>Histomount</td><td>National Diagnostics</td><td>HS-103</td><td></td></tr><tr><td>Ematossilina Harris GURR</td><td>VWR</td><td>351945S</td><td></td></tr><tr><td>Eosina, 1%, acquosa</td><td>Piramide Inovation</td><td>S20007-E</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand scatole di scorrimento</td><td>Fisher Scientific</td><td>11701486</td><td></td></tr><tr><td>Lame per microtomo, MB35</td><td>Thermo Scientific Shandon</td><td>3050835</td><td></td></tr><tr><td>Bouin' s soluzione</td><td>Sigma Aldrich</td><td>HT10132-1L</td><td></td></tr><tr><td>Yeast screen</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flow cabinet</td><td>Labcaire Systems Ltd</td><td>SC12R</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore raffreddato</td><td>LMS Incubatore raffreddato</td><td>303</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore</td><td>Memmert</td><td>INB 400</td><td></td></tr><tr><td>Shaker</td><td>Grant</td><td>PSU-10i</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand whirlimixer</td><td>Fisher Scientific 13214789</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agitatore per piastre</td><td>Heidolph Titramax 100</td><td>544-11200-00</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta digitale multicanale F1 a 12 canali</td><td>Thermo Scientific Finnpipette</td><td>4661070</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta a 12 canali, elettronica</td><td>Sartorius</td><td>735441</td><td></td></tr><tr><td>micropiastre</td> <td>a fondo piatto a 96 pozzettiMP Biomedicals Thermo Scientific Nunc Sarstedt</td><td>76-232-05 260860 82.1581.001</td><td>Abbiamo scoperto che queste piastre multipozzetto producono tutte</td></tr><tr><td>acqua di grado HPLC</td> a basso fondo <td>Rathburn</td><td>RH1020</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo assoluto</td><td>Hayman Kimia</td><td>F200238</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di potassio monobasico anidro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5655</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di ammonio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-2939</td><td></td></tr><tr><td>Idrossido di potassio, pellet</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-1767</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di magnesio, anidro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M-2643</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di ferro (III)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>307718</td><td></td></tr><tr><td>L-Leucina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-8912</td><td></td></tr><tr><td>L-Istidina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-6034</td><td></td></tr><tr><td>Adene,</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-2786</td><td></td></tr>, <tr><td>L-Argenina, cloridrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-6969</td><td></td></tr>, <tr><td>L-Metionina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M-5308</td><td></td></tr>, <tr><td>L-tirosina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-8566,</td><td></td></tr><tr><td>L-isoleucina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-7403</td><td></td></tr>, <tr><td>L-lisina, cloridrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-8662</td><td></td></tr><tr><td>L-Fenilalanina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5482</td><td></td></tr><tr><td>Acido L-glutammico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-8415</td><td></td></tr><tr><td>L-Valina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V-0513</td><td></td></tr><tr><td>L-Serina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-4311</td><td></td></tr><tr><td>Tiamina, cloridrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-1270</td><td></td></tr><tr><td>Piridossina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5669</td><td></td></tr><tr><td>D-Acido pantotenico, sale emicalcico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-5155</td><td></td></tr><tr><td>Inositolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-5125</td><td></td></tr><tr><td>D-Biotina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B-4639</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-Glucosio anidro; anomeri misti</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7021</td><td></td></tr><tr><td>Acido L-aspartico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-4534</td><td></td></tr><tr><td>L-treonina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T-8441</td><td></td></tr><tr><td>Solfato di rame (II), anidro</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-1297</td><td></td></tr><tr><td>Clorofenolorosso-&#946;-D galattopiranoside (CPRG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10884308001</td><td></td></tr><tr><td>Glicerolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-2025</td><td></td></tr><tr><td>17 &beta;-estradiolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-8875</td><td></td></tr><tr><td>Steroidi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Rathburn</td> Soluzione di ammoniaca Rathburn <td></td><td></td></tr><tr><td>Acetato</td> di <td>etile Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nitrato di rame (II)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diclorometano</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,4,16,16-d4-17&#946;-estradiolo</td><td>CDN Isotopi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,4,16,16-d4-estrone</td><td>CDN Isotopi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,4,16,16-d4-17&#945;-etinilestradiolo</td><td>CDN Isotopi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>17&#946;-estradiolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Estrone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>17&#945;-etinilestradiolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Esano</td><td>Rathburn</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acido cloridrico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metanolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carbonato acido di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Idrossido di sodio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cartuccia di stirene divinilbenzene (Isolute ENV+) cartuccia di estrazione in fase solida (200 mg/6 ml)</td><td>Biotage</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isolute cartuccia di estrazione in fase solida amminopropilica (500 mg/6 ml)</td><td>Biotage</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fish studyTubo collettore in silicone </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>arancione-bianco 0,63 foro pk 6</td><td>Watson Marlow</td><td>982.0063.000</td><td></td></tr><tr><td>connettori diritti per foro 0,5/0,8 pk 20</td><td>Watson Marlow</td><td>999.2008.000</td><td></td></tr><tr><td>tubo in silicone pumsil 0,8 foro 15 m</td><td>Watson Marlow</td><td>913.A008.016</td><td></td></tr><tr><td>Pompa persitaltica multicanale serie 200</td><td>Watson Marlow</td><td>205CA</td><td></td></tr><tr><td>Tubo in silicone x 15 m (serbatoi di dosaggio)</td><td>VWR</td><td>SFM1-3250</td><td></td></tr> tubo <tr><td>in silicone x 15 m (grande per afflusso/uscita)</td><td>VWR</td><td>SFM1-5450</td><td></td></tr><tr><td>2,5 L vetro winchester pk 4</td><td>Fisher Scienctific</td><td>BTF-505-050B</td><td></td></tr><tr><td>ancoretta magnetica 51 x 8 mm pk 10</td><td>Fisher Scienctific</td><td>FB55595&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Etile 3-amminobenzoato metanosulfonato (MS222)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E10521-10G</td><td></td></tr><tr><td>17&alfa;-etilestradiolo</td><td>Sigma</td><td>Aldrich E4876-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo assoluto</td><td>Hayman Kimia</td><td>F200238</td><td></td></tr><tr><td>SPE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1/8 pollici tubi in PTFE 'cannucce' codificati a colori pk 4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57276</td><td></td></tr><tr><td>guaine monouso per collettore</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57059</td><td></td></tr><tr><td>tubi di filtrazione senza fritte 6 ml pk 30</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57242</td><td></td></tr><tr><td>adattatori di riserva pk 12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57020-U</td><td></td></tr><tr><td>peso in acciaio inox per collettore pk 4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>57278</td><td></td></tr><tr><td>maschio Luer plug per collettore pk 12</td><td>Collettore per vuoto Sigma Aldrich</td><td>504351</td><td></td></tr><tr><td>SPE</td><td>Rubinetti di arresto Sigma Aldrich</td><td>57265</td><td></td></tr><tr><td>per aspirazione principale (supelco) pk 12</td><td>Waters</td><td>WAT054806</td><td></td></tr><tr><td>Sep-Pak Plus C18 scatola cartucce 50&nbsp;</td><td>Waters</td><td>WAT020515</td><td></td></tr><tr><td>Metanolo HPLC grado 2,5 L</td><td>Fisher Scientific</td><td>M/4056/17</td><td></td></tr><tr><td>Fiale di vetro da 7 ml con coperchi (58 x 17 mm) pk 399</td><td>Fisher Scientific</td><td>TUL-520-031K</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo assoluto</td><td>Hayman Kimia</td><td>F200238</td><td></td></tr><tr><td>pompa per vuoto, es., pompa per vuoto serie VP</td><td>Camlab</td><td>1136915</td><td></td></tr></tbody></table>

utilizzo di una batteria di chimici ed ecotossicologici metodi per la valutazione dell&#39;efficacia dei processi di trattamento delle acque reflue per rimuovere estrogenica potenza

Use of a Battery of Chemical and Ecotoxicological Methods for the Assessment of the Efficacy of Wastewater Treatment Processes to Remove Estrogenic Potency

I composti che alterano il sistema endocrino rappresentano un rischio sostanziale per l'ambiente acquatico. L'etinilestradiolo (EE2) e l'estrone (E1) sono stati recentemente inclusi in una lista di inquinanti ambientali ai sensi della direttiva quadro europea sulle acque. Gli impianti di trattamento delle acque reflue municipali contribuiscono in modo determinante alla potenza estrogenica delle acque superficiali. Gran parte della potenza estrogenica degli effluenti degli impianti di trattamento delle acque reflue (WWTP) può essere attribuita allo scarico di estrogeni steroidei tra cui estradiolo (E2), EE2 ed E1 a causa della rimozione incompleta di queste sostanze nell'impianto di trattamento. Una valutazione dell'efficacia dei processi di trattamento delle acque reflue richiede la determinazione quantitativa delle singole sostanze, il più delle volte effettuata utilizzando metodi di analisi chimica. I metodi più frequentemente utilizzati includono la gascromatografia-spettrometria di massa (GCMS/MS) o la cromatografia liquida-spettrometria di massa (LCMS/MS) utilizzando il monitoraggio a reazione multipla (MRM). Sebbene molto utile ai fini normativi, l'analisi chimica mirata può fornire solo dati sui composti (e sui metaboliti specifici) monitorati. I metodi ecotossicologici assicurano inoltre che eventuali sottoprodotti prodotti o composti estrogenici sconosciuti presenti siano valutati anche attraverso la misurazione della loro attività biologica. Sono disponibili numerosi saggi biologici in vitro, tra cui lo screening degli estrogeni del lievito (YES), per misurare l'attività estrogenica dei campioni di acque reflue. L'analisi chimica in combinazione con i biosaggi in vivo e in vitro fornisce un'utile cassetta degli attrezzi per la valutazione dell'efficacia e dell'idoneità dei processi di trattamento delle acque reflue rispetto ai composti che alterano il sistema endocrino estrogenico. Questo articolo utilizza una serie di test chimici ed ecotossicologici per valutare i processi convenzionali, avanzati ed emergenti di trattamento delle acque reflue in studi di laboratorio e sul campo.

I tentativi di comprendere l&#39;impatto dei miglioramenti ai processi di trattamento delle acque reflue o per determinare la tecnologia più appropriata per adeguare le attrezzature come trattamento terziario in impianti di depurazione esistenti per quanto riguarda l&#39;efficacia della rimozione di attività perturbatrice a livello endocrino di scarichi idrici, richiede non solo la misura della sostanza chimica chiave componenti che entrano le opere ma richiede l&#39;analisi dei prodotti di degradazione che possono anche avere attività endocrina perturbatrice. In acque di scarico domestiche, le sostanze più estrogeniche presenti sono gli ormoni steroidei, estrone (E1), 17β-estradiolo (E2) e 17α-etinilestradiolo (EE2) 5,8. Estrogeni steroidi sono escreti principalmente dal corpo come una miscela di coniugati inattivi 16,17. Questi estrogeni coniugati sono sostanzialmente deconjugated nel sistema fognario per l&#39;attività batterica e l&#39;ulteriore degradazione avviene nel trattamento delle acque reflue. Gli steroidi deconjugated are rimosso dal flusso delle acque reflue per assorbimento fanghi o biodegradata durante il trattamento secondario causando la formazione, in primo luogo di sottoprodotti di trasformazione e, infine completa mineralizzazione può verificarsi del componente attivo iniziale. L&#39;analisi chimica di tutti i singoli composti nella corrente effluente sarebbe difficile, lungo e costoso e non coprirebbe componenti attivi sconosciuti presenti in un campione. Inoltre, una somma del contributo estrogenica di ciascun componente fornirà soltanto un&#39;indicazione della potenza estrogenica cumulativo di un campione dei composti analizzati. Questo è un rischio in cui i processi di trasformazione generano sostanze estrogeniche sconosciute o dove l&#39;influente è di origine industriale. Combinando analisi chimica con in vivo e in vitro biosaggi ecotossicologici fornisce una soluzione per la presenza di componenti estrogenici sconosciuti in miscele quali acque reflue trattate. In vitro come il lievito Estrogen Screen (SI) sono stati ampiamente utilizzati per determinare l&#39;attività estrogenica di acque di scarico e per aiutare a identificare i componenti attivi nei campioni trattati 8,18,19. Tuttavia, il confronto tra in vivo e in vitro possono essere significativi 11 e una valutazione globale di nuovi processi per quanto riguarda il trattamento di interferente endocrino potenza richiede una batteria di test chimici ed ecotossicologia. Per stabilire se i singoli impianti o processi di trattamento rimuovere i composti attivi dal flusso di acque reflue può essere ottenuta utilizzando l&#39;analisi chimica, che segue l&#39;estrazione del campione, la concentrazione e la pulizia dell&#39;estratto prima dell&#39;analisi, il più delle volte effettuata utilizzando LCMS (/ MS) o GCMS (/ MS) metodi. I dati ottenuti dalle analisi chimiche possono essere utilizzati per determinare la conformità con i singoli concentrazioni prevedibili senza effetti (PNEC) 20 o standard di qualità ambientales (SQA) 21 dei singoli composti specifico e quindi tali metodi sono di vitale importanza per i dati di conformità alle normative. Inoltre, mirati o metodi non-targeting analisi chimica permettono l&#39;identificazione e la quantificazione di composti o isomeri individuali rispetto ai metodi biologici, che forniscono una risposta totale. metodi di analisi chimica consentono pertanto la valutazione di composti discreti per essere fatto per incontrare e per affrontare queste sfide trattamento delle acque reflue su base impianto di trattamento individuale. Studi hanno dimostrato che il trattamento delle acque reflue convenzionale (ad esempio, impianti a fanghi attivi) può essere altamente efficace nella rimozione di ormoni steroidei naturali sebbene rimozione del ormone sintetico EE2 tende ad essere meno efficace. Studi sul campo utilizzando trattamenti che utilizza tecniche come l&#39;ozono, carbone granulato attivato (GAC) e membrane hanno dimostrato, anche se ad alto costo, che possono essere usati come soluzione end-of-pipe per rimuovere EE2 al di sotto preditti livelli di effetto e al di sotto dei limiti di rilevabilità. La figura 3 mostra la rimozione di EE2 utilizzando GAC in un impianto di trattamento delle acque reflue comunali scala pilota. Gli studi intrapresi su scala pilota negli impianti di trattamento delle acque reflue municipali utilizzando estremità del tubo trattamento GAC mostrano anche la riduzione della potenza estrogenica seguente GAC misurata utilizzando la schermata di lievito estrogeni (SI) come si vede in figura 4. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/54243/54243fig3.jpg" /> Figura 3. dati di campo Esempio che mostra la rimozione di etinilestradiolo in seguito al trattamento terziario avanzato. (A) I campioni sono raccolti presso l&#39;impianto di trattamento seguente (impianto a fanghi attivi) trattamento convenzionale seguendo le procedure descritte per la conservazione del campione. (B) I campioni vengono estratti mediante estrazione in fase solida, ripulito per rimuovere sostanze che interferiscono con il normale SPE fase epermeazione di gel cromatografia. (C) L&#39;estratto concentrato pulito è concentrata ad un volume basso e analizzato utilizzando negativo ioni elettrospray LCMS / MS in modalità MRM. I risultati sono calcolati utilizzando la standardizzazione interno utilizzando standard interni marcati con isotopi. Nell&#39;esempio illustrato, EE2 è presente nell&#39;effluente finale ASP ad una concentrazione superiore al prevista senza effetto (PNEC) di 0,1 ng / L e viene rimosso utilizzando GAC e ozono (O 3) ad una concentrazione di materiali. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54243/54243fig3large.jpg" target="_blank">Fare click qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/54243/54243fig4.jpg" /> Figura 4. Foto di una piastra di test Yeast Estrogen schermo (SI) (A) mostrando cambiamento di colore dal giallo al rosso, relativa ad attività estrogenica dei campioni. Trame create dalla proiezione piastra di test SI corretti assorbanza (540nm) dello standard estradiolo (B), attivato processo a fanghi effluenti (ASP) e Carbone attivo granulare (GAC) trattati campioni di acque di scarico degli effluenti (C). Ogni campione è stato testato in duplicato. Effluenti ASP e GAC sono stati estratti e concentrati utilizzando i metodi SPE di cui al punto 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54243/54243fig4large.jpg" target="_blank">Si prega di cliccare qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> Ozonizzazione è anche efficace nella rimozione di estrogeni steroidei e attività estrogenica da impianti di trattamento delle acque reflue trattate in modo convenzionale. L&#39;ozono è in grado di ossidare una vasta gamma di contaminanti organici e sostanze organiche disciolte in campioni di acque reflue e fornisce proprietà di disinfezione. L&#39;efficacia di ozonizzazione dipende dalle caratteristiche dell&#39;acqua quali pH, quantità di materia organica e la dose applicata di ozono. Estrogeni che sono mal rimossi dal trattamento convenzionale può essererimossi dalle acque di scarico con dosi comprese tra 0,8 e 2 mg O 3 / mg DOC. L&#39;ozono è un agente ossidante selettiva, che reagisce con i siti di elettroni ricchi (legami insaturi carbonio-carbonio, composti aromatici, inclusi alcoli aromatici), che rende l&#39;ozono applicabile per la ripartizione di un numero di EDC. Tuttavia, l&#39;eliminazione di singoli composti non comporta necessariamente la mineralizzazione completa del composto originale. Le sostanze organiche seguente ozonizzazione può essere trasformata intermedi generatrici o trasformazione ossidazione sottoprodotti che includono un numero di basso peso molecolare, classi di composti polari quali aldeidi, chetoni, acidi carbossilici, acidi cheto, e composti bromurati. Esempi includono, bromato, formaldeide, acetaldeide e acidi carbossilici. Uso in vivo e in vitro biosaggi è stato dimostrato che, sebbene l&#39;ozono ossida solo parzialmente alcune sostanze chimiche, i risultanti principali metaboliti hanno una minore estrogENIC potenza e quindi l&#39;applicazione di ozono a un appropriato della dose risulta in una elevata rimozione di attività estrogenica. Uno dei principali vantaggi di ulteriore trattamento di reflui è la riduzione della femminilizzazione dei pesci maschi a ricevere acque; un effetto negativo che può portare ad una riduzione della fertilità 3. Studi in vivo a base di pesce (per esempio, scarafaggio o vairone a testa grossa) esposti a cellule o ovociti femminili germinali delle acque reflue spettacolo nel testicolo di pesci di sesso maschile (ad esempio, come si vede in figura 5). Intersessualità o maschio VTG è assente o significativamente ridotta nei pesci in seguito al trattamento avanzato come GAC 7 o ozono 22. Questi studi mostrano che prodotti di trasformazione ottenuti durante ozonizzazione non sono estrogenici, tuttavia questo non affronta la tossicità dell&#39;effluente prodotta. Questo problema è stato risolto in altri studi, ad esempio, uno studio condotto da Magdeburgo et al. <sup&gt; 23 che dimostra che l&#39;ossidazione dell&#39;ozono sottoprodotti sono tossici per trota arcobaleno ma questa tossicità può essere rimosso mediante filtrazione sabbia valle dopo ozonizzazione. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/54243/54243fig5.jpg" /> Figura 5. microfotografie di un maschio normale (A) e intersessuali (B, C) ​​gonadi da adulto lasca (Rutilus rutilus) esposti ad acque reflue in un campo base di valutazione. Photomicrograph-A, raffigura una sezione istologica di normale testicoli maschili. Photomicrograph-B e -C, raffigura sezioni istologiche di un pesce maschio intersessuale, essendo stati esposti al processo a fanghi attivi delle acque di scarico degli effluenti per sei mesi. Le frecce indicano ovociti presenti nel tessuto testicolare. Barra della scala rappresenta 100 micron di ogni microfotografia. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54243/54243fig5large.jpg" target="_blank">Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <p class="jove_content" fo:keep-together.within-page = &quot;1&quot;&gt; Il costo elevato della fine del trattamento tubo con l&#39;ozono, GAC o tecnologia a membrana richiede lo sviluppo di alternative a basso costo, metodi sostenibili per la perturbazione del sistema endocrino chimica (EDC) rimozione. Inoltre, adsorbimento e separazione metodi semplicemente separano EDC da una fase all&#39;altra anziché eliminare tramite degradazione. Attivatori TAML sono stati sviluppati per catalizzare l&#39;ossidazione di idrogeno perossido di microinquinanti organici nelle acque reflue 12,24 - 26. TAML attivatori con H 2 O 2 in modo efficace degradano EE2 e altri estrogeni steroidei in acqua pura di laboratorio così come negli effluenti provenienti da impianti di trattamento delle acque reflue municipali e nei campioni di urina a spillo 12. Gli studi di laboratorio, mostra TAML / H 2 O 2 trattamento fornisce alta rimozione estrogeni steroidi tra cui la rimozione EE2 e riduce sostanzialmente attività estrogenica misurata in vitro utilizzando il saggio biologico YES e substantially diminuisce femminilizzazione dei pesci in vivo misurata usando il saggio biologico VTG (Figura 1 e Figura 6). <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/54243/54243fig6.jpg" /> Figura 6. la concentrazione media EE2 e attività estrogenica in trattati e acque non trattate serbatoio (A) e vitellogenin plasma basale e pesci esposti maschio (B). A) la concentrazione EE2 (ng / L, barre blu scuro) è stata misurata da LCMS / MS , attività estrogenica (EE2 equivalente ng / L, barre di colore verde scuro) è stata misurata mediante in vitro schermo lievito estrogeni (sI). B) vitellogenin plasma (ng / ml, bar azzurre) la concentrazione di pesciolini fathead maschi sono stati misurati tramite un enzima quantitativa linked immunosorbent assay (ELISA). EE2 risultati delle analisi chimico indicati come &lt;0,03 ng / L EE2 (cioè, inferiore a limite di rilevazione (LOD)) sono stati trattati come aventi la metà LOD (vale a dire, </em&gt; 0.015 ng / L EE2) per l&#39;utilizzo nei calcoli delle medie, errore standard e l&#39;analisi statistica. EE2 e attività estrogenica sono concentrazioni medie misurate campionati sopra l&#39;esposizione di 21 giorni. Plasma VTG è stata misurata prima dell&#39;esposizione (baseline) e dopo l&#39;esposizione 21 giorni. Il regime di trattamento consisteva; controllo negativo (acqua di diluizione solo), EE2 + H 2 O 2 + TAML, EE2 + H 2 O 2, e EE2-only. Le barre di errore in grafico-A rappresentano l&#39;errore standard della media, barre di errore in grafico-B rappresentano la deviazione standard. Le lettere di cui sopra bar grafico-B rappresentano somiglianza statistica. Questa cifra è stata modificata da Mills et al. 12 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54243/54243fig6large.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a>

Perturbano il sistema endocrino composti (EDC) pongono un rischio sostanziale per l&#39;ambiente acquatico. impianti di trattamento delle acque reflue urbane sono tra i principali la potenza estrogenica delle acque di superficie. La metodologia fornita in questo articolo consente di valutare l&#39;efficacia e l&#39;adeguatezza dei processi di trattamento delle acque reflue rispetto alla rimozione EDC.

Utilizzo di una batteria di chimici ed ecotossicologici metodi per la valutazione dell&#39;efficacia dei processi di trattamento delle acque reflue per rimuovere estrogenica Potenza

Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in ...

L'obiettivo generale della serie di test descritti in questo articolo, comprese le metodiche di chimica analitica e metodi in vitro e in vivo, è determinare l'efficacia delle tecnologie emergenti e innovative per il trattamento delle acque reflue nel rimuovere contaminanti estrogenici. Queste metodiche possono contribuire a rispondere a domande fondamentali nell'ingegneria ambientale, ad esempio nella selezione dei processi di trattamento delle acque reflue più efficaci in relazione alla variabilità della potenza estrogenica delle acque reflue. Il principale vantaggio di queste tecniche è che sono sensibili a concentrazioni molto basse di composti attivi, evidenziando così le migliori tecnologie per la protezione della vita acquatica.Le procedure saranno dimostrate dal ricercatore postdottorato, dott. Chris Green, dalla studentessa laureanda, Angela Pinzon, dalla ricercatrice, dott.ssa Alice Baynes, e dalla tecnica senior di ricerca, Nicola Beresford. Il processo di SPE richiede una rigorosa attenzione alla pulizia e all'ordine al fine di prevenire la contaminazione dei campioni. Pulire preventivamente tutte le provette, i rubinetti e i fritti con metanolo.Prima di analizzare i campioni, collegare i tubi di trasferimento al collettore di estrazione e risciacquare l'intero sistema con acqua deionizzata. Per analizzare i campioni, collegare innanzitutto i foderi monouso per valvola, quindi collegare le cartucce SPE in stirene-divinilbenzene. Successivamente, pipettare cinque millilitri di acetato di etile in ciascun serbatoio per condizionare le cartucce.Durante questo passaggio, assicurarsi che l'SPE sia sigillato. Quindi, accendere la pompa a vuoto per ottenere una portata di 10 millimetri al minuto. Prima che le cartucce si asciughino, aggiungere cinque millilitri di metanolo, seguiti da cinque millilitri di acqua.È molto importante che le cartucce per estrazione in fase solida non si secchino. Dopo che l'acqua è stata in gran parte aspirata, spegnere la pompa e riempire nuovamente ogni serbatoio della cartuccia con acqua. Successivamente, collegare tubi in PTFE da 1/8 di pollice tra i serbatoi delle cartucce e i flaconi in vetro per il campione.Ora, regolare il vuoto su una portata inferiore a 10 millilitri al minuto e lasciare che l'intero campione passi attraverso la cartuccia. Successivamente, asciugare completamente le cartucce di estrazione in fase solida finché il contenuto della cartuccia non cambia colore. Utilizzare un vuoto o un flusso di gas.Ora, caricare fiale di raccolta in vetro pulite e asciutte da 10 millilitri su un portaprovette e posizionare il portaprovette all'interno del manifold di estrazione. Verificare che ogni inserto sia posizionato sopra una fiala. Riempire i serbatoi del campione con due volte quattro millilitri, per un totale di otto millilitri di diclorometano, accendere la pompa del vuoto e lasciare che il liquido passi attraverso la SPE e vada a finire nelle fiale di raccolta.Quindi, utilizzare un concentratore per ridurre il volume in tutti i vial di raccolta a un millilitro. Trasferire ogni campione in un vial per autosampler e concentrarlo ulteriormente fino a 100 microlitri, utilizzando un apparecchio a flusso di azoto. La fase successiva del processo consiste nell'utilizzare la cromatografia su gel per rimuovere le interferenze macromolecolari.Per prima cosa, iniettare 95 microlitri dell'estratto del campione eluito nell'HPLC dotato di GPC. Concentrare l'estratto GPC fino a 200 microlitri, utilizzando un concentratore e l'apparato per l'evaporazione con flusso di azoto, quindi portare a due millilitri con esano. Successivamente, montare sul manifold per SPE i liner monouso, le cartucce amino purple e i serbatoi per cartucce, nonché i viali di raccolta in vetro da 10 millilitri.Ora, aggiungere due millilitri di esaano in ciascuna cartuccia per condizionarle e scartare il solvente. Successivamente, caricare l'estratto del campione GPC nel serbatoio ed aspirarlo attraverso. Mettere da parte la raccolta dell'estratto e sostituire la provetta nel portaprovette per raccogliere il lavaggio.Successivamente, fai passare due millilitri di acetato di etile e esano al 30 percento in volume attraverso la cartuccia. Poi, aggiungi altri due millilitri di acetato di etile e esano, quindi scarta le raccolte della soluzione di lavaggio e riposiziona la provetta da raccolta da 10 millilitri nel supporto. Ora, aggiungi due millilitri di acetato di etile e acetone al 50 percento in volume nel serbatoio e avvia la pompa a un flusso basso, inferiore a due millilitri al minuto.Dopo che il liquido è passato, aggiungere altri due millilitri di acetato di etile al 50 percento al serbatoio. Utilizzare ora un concentratore per ridurre il volume dell'estratto a un millilitro. Successivamente, trasferire il campione in una provetta di vetro più piccola ed evaporare l'estratto fino a incipiente seccatura mediante apparecchiatura per evaporazione con azoto. Aggiungere 100 microlitri di metanolo, mescolare accuratamente il campione e trasferirlo in una provetta per autosampler con inserto da 0,3 millilitri.Quindi, eseguire l'analisi LC-MS/MS dell'estratto. Il giorno precedente l'inizio del saggio, preparare un mezzo di crescita fresco e inocularlo con il ceppo di HER conservato su tenax. Il giorno successivo, prepararsi per il saggio effettuando diluizioni seriali di 100 microlitri delle sostanze chimiche in esame o degli estratti di effluente, e successivamente la curva standard di E2 in etanolo.Ora, trasferire aliquote di 10 microlitri in una piastra sterile da 96 pozzetti etichettata. Successivamente, lasciare la piastra scoperta per far evaporare l'etanolo. Poi, preparare 50 millilitri di mezzo di crescita, aggiungendo 0,5 millilitri di soluzione CPRG.Dal coltura di lieviti di 24 ore, misurare la torbidezza a 620 nanometri per stimare la densità cellulare. Successivamente, aggiungere 40 milioni di cellule di lievito ai 50 millilitri di mezzo saggio. Trasferire il mezzo saggio inoculato in una vaschetta sterile ed utilizzare una pipetta multicanale per trasferire 200 microlitri di mezzo in ciascun pozzetto della piastra saggio.Sostituire il coperchio della piastra del saggio, sigillare i bordi con del nastro e agitare vigorosamente la piastra per due minuti utilizzando uno shaker per piastre. Successivamente, incubare la piastra a 32 gradi Celsius in un armadio riscaldante con ventilazione naturale. Dopo tre giorni di incubazione, ripetere l'agitazione, quindi lasciare sedimentare il lievito per circa un'ora.Infine, misurare l'assorbanza luminosa dei campioni a 540 e 620 nanometri. Campioni d'acqua provenienti da un impianto convenzionale di trattamento delle acque reflue per attivare il processo di fanghi attivi sono stati analizzati mediante LCMS con elettrospray a ioni negativi: l'etinilestradiolo era presente a una concentrazione superiore al livello predetto di assenza di effetti. Utilizzando trattamenti avanzati delle acque, come il carbonio attivo granulare, o GAC, è stato possibile ridurre sostanzialmente i livelli di etinilestradiolo.Tutti gli estratti di acque reflue sono stati analizzati utilizzando uno standard interno marcato isotopicamente, picco rosso, per consentire la quantificazione. Il saggio di screening lievito-estrogeni è risultato chiaramente sensibile all'estradiolo standard, ma non ha mostrato alcuna risposta all'etanolo, che sostanzialmente rappresenta il bianco. Le cellule del test di screening con lievito hanno risposto in modo evidente all'effluente del processo di fanghi attivi, mentre l'effluente trattato con carbone attivo granulare (GAC) ha prodotto una risposta ridotta, sebbene fosse comunque più attivo dal punto di vista biologico rispetto al bianco.Utilizzando questa nuova tecnologia di trattamento delle acque reflue, sia la concentrazione di etinilestradiolo, mostrata in blu, sia l'attività estrogenica, mostrata in verde, sono state significativamente ridotte dal trattamento combinato con perossido di idrogeno e TAML. Gli impianti di trattamento delle acque reflue rappresentano la principale fonte di contaminazione delle acque superficiali con sostanze estrogeniche. Nuovi approcci per migliorare i processi di trattamento dell'acqua richiedono test approfonditi dell'attività estrogenica.Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di una serie di test chimici ed ecotossicologici necessari per misurare l'attività estrogenica in campioni d'acqua. È estremamente importante assicurarsi che la contaminazione dei campioni ed estratti sia ridotta al minimo mediante un'accurata manipolazione di campioni ed estratti. Ad esempio, le plastiche comunemente utilizzate contengono composti estrogenici; pertanto, è essenziale includere controlli negativi per verificare la contaminazione chimica e controlli positivi per accertare che il metodo di estrazione abbia funzionato e che vi sia un buon recupero degli estrogeni aggiunti artificialmente.

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Viene presentato un protocollo per l'estrazione e la pre-concentrazione di estradiolo da campioni d'acqua utilizzando un sistema automatizzato e miniaturizzato.

Un metodo semplice per Automated fase solida estrazione di campioni di acqua per l&#39;analisi immunologiche di piccole inquinanti

Questo manoscritto descrive come preparare biochip fluidici con cellule epiteliali branchiali di trota iridea per l'uso in un sensore di impedenza portatile per celle elettriche.  Viene inoltre descritto il protocollo per l'esecuzione di un test rapido di tossicità dell'acqua potabile con il sensore.

Preparazione e test di impedenza a base di biochip fluidici con le cellule RTgill-W1 per valutare rapidamente campioni di acqua potabile per la tossicità

Un protocollo per lo screening dell'attività endocrina negli estratti organici di campioni d'acqua, compresi gli effluenti delle acque reflue trattate e l'acqua superficiale (ricevente), è stato adattato utilizzando i biosaggi di transattivazione in vitro disponibili in commercio con arresto di divisione ("congelamento e scongelamento").

Lo screening per Endocrine attività in acqua mediante disponibili in commercio<em&gt; In Vitro</em&gt; Transattivazione Bioassays

Questo articolo riassume gli attributi di progettazione e l'efficacia dei sistemi di trattamento che trattano le acque di scarico urbane e l'irrigazione dell'agricoltura per rimuovere i pesticidi e altri contaminanti associati alla tossicità acquatica.

Sistemi di trattamento vegetale per la rimozione dei contaminanti associati alla tossicità dell&#39;acqua superficiale nell&#39;agricoltura e nella rottura urbana

Questo articolo presenta una schermata di estrogeno ottimizzato lievito per quantificare ligandi in prodotti di cura personale (PCPs) che legano l'alfa recettori dell'estrogeno (ERα) e/o beta (ERβ). Il metodo incorpora due opzioni di substrato colorimetrico, una sei giorni incubazione refrigerata per uso nei corsi di laurea e gli strumenti statistici per l'analisi dei dati.

Rilevamento di ligandi estrogenici nei prodotti di cura personale utilizzando un lievito estrogeno schermo ottimizzato per il laboratorio di insegnamento universitari

L'esposizione a sostanze tossiche ambientali possa avere un impatto acutamente sviluppo con effetti a lungo termine. Protocolli dettagliati sono forniti per illustrare una strategia utilizzando un modello di laboratorio efficace per studiare l'effetto di embrionale precoce esposizione al bisfenolo A. Forniamo analisi comportamentale per monitorare l'efficacia della nostra esposizione tossico bio-saggi e fecondità.

Conseguenze a lungo termine del comportamento e riproduttive di embrionale esposizione alle sostanze tossiche della basso-dose

Vi presentiamo un protocollo per l'analisi non mirati utilizzando tempo di spettrometria di massa di volo come un perfetto strumento per identificare prodotti farmaceutici nelle acque. Dimostriamo l'applicazione dell'irradiazione UV per la loro eliminazione. Analisi che coinvolgono irradiazione, composto isolamento, identificazione e modellazione cinetica dei profili di degradazione sono illustrata.

Identificazione di prodotti farmaceutici per l'ambiente acquatico, mediante HPLC-ESI-Q-TOF-MS ed eliminazione di eritromicina attraverso la degradazione indotta da foto

La modellazione Quantitative structure-activity relationship (QSAR) è un metodo rappresentativo assistito dalla bioinformatica nello screening tossicologico. Questo protocollo dimostra come valutare computazionalmente i rischi di interferenti endocrini (ED) in ambienti acquatici. Utilizzando l'OCSE QSAR Toolbox, il protocollo implementa un test in silico per analizzare la tossicità delle ED nei pesci.

In Silico Modeling Method for Computational Aquatic Toxicology of Endocrine Disruptors: A Software-Based Approach Using QSAR Toolbox

L'inquinamento colpisce tutti i biomi. Gli ambienti marini sono stati particolarmente colpiti, in particolare le barriere coralline, uno degli ecosistemi più sensibili sulla Terra. La biorisanamento è la capacità degli organismi di degradare i contaminanti. Qui, descriviamo le metodologie per isolare e testare i microbi che presentano capacità di biorimediazione e potenziali caratteristiche probiotiche per i coralli.

Prospezione ceppi microbici per biorimediazione e lo sviluppo di probiotici per la ricerca e la conservazione dei metaorganismi

Presente qui è un protocollo dettagliato per l'uso di embrioni di pesce zebra Tg(vtg1: mCherry) per il rilevamento di effetti estrogenici. Il protocollo riguarda la propagazione del pesce e il trattamento degli embrioni e sottolinea il rilevamento, la documentazione e la valutazione dei segnali fluorescenti indotti da composti interferenti endocrini (EDC).

Utilizzo degli embrioni di pesce zebra Tg(Vtg1:mcherry) per testare gli effetti estrogenici dei composti interferenti endocrini

Abbiamo ottimizzato un recettore degli estrogeni disponibile in commercio β reporter per lo screening di alimenti primati umani e non umani per l'attività estrogenica. Abbiamo convalidato questo saggio mostrando che la soia alimentare umana estrogenica nota si registra in alto, mentre altri alimenti non mostrano alcuna attività.

Screening per fitoestrogeni utilizzando un recettore degli estrogeni a base cellulare β test reporter

Scopri metodi chimici ed ecotossicologici per valutare l'efficacia dei trattamenti delle acque reflue nella rimozione di contaminanti estrogenici. Questa tecnica aiuta a proteggere gli ecosistemi acquatici.

Utilizzo di una batteria di chimici ed ecotossicologici metodi per la valutazione dellefficacia dei processi di trattamento delle acque reflue per rimuovere estrogenica Potenza (Video) | JoVE Journal

Utilizzo di una batteria di chimici ed ecotossicologici metodi per la valutazione dell'efficacia dei processi di trattamento delle acque reflue per rimuovere estrogenica Potenza

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