Name: Approccio chirurgico per occlusione dellarteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 30 s
Description: Impara il metodo Longa per occlusione dell'arteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi. Questa tecnica offre maggiore sopravvivenza e riproduce efficacemente l'ischemia per studiare nuove terapie.

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Questo lavoro è stato finanziato dal National Institute of Health, dal National Heart Lung and Blood Institute (NIH e NHLBI; HL125572-01A1) e il fondo di avviamento LSUHSC-S a F.N.E. Gavins.

Questo protocollo e gli esperimenti riportati nel video sono stati approvati dal Comitato LSUHSC-S Institutional Animal Care e Uso e sono in conformità con le linee guida del NIH. NOTA: Maschio C57BL / 6 topi che pesano 25 - 29 g sono stati utilizzati in questo studio. I topi sono stati mantenuti su una dieta chow pellet di serie con libero accesso all&#39;acqua, sotto un / buio ciclo 12 ore di luce in gabbie a ventilazione individuale. La procedura viene eseguita in condizioni di sterilità utilizzando tecniche sterili (ad esempio, guanti sterili, strumenti sterili). Preparativi 1. Pre-chirurgiche <ol><li> Indurre l&#39;anestesia utilizzando una combinazione di ketamina (150 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg) iniettato per via intraperitoneale (ip). Monitorare profondità dell&#39;anestesia per pizzico piedi inizialmente ogni 3-5 minuti e ogni 10 minuti una volta che si ottiene l&#39;anestesia. Mentre l&#39;animale è sotto anestesia, somministrare una pomata oculare sterile per prevenire la secchezza. La dose iniziale di ketamina / xylazina solito dura abfuori 30-40 minuti. Una dose aggiuntiva può essere somministrata se necessario, verificata dalla risposta dell&#39;animale ad una presa piede. </li><li> Posizionare topi in posizione supina su un tappetino temperatura regolata e mantenere la temperatura corporea a 36,5 ± 0,1 ° C, che è stato verificato utilizzando una sonda rettale. </li><li> Radere al collo e disinfettare la pelle con il 70% di alcol etilico. </li></ol> 2. occlusione della MCA (figura 1) <ol><li> Effettuare una incisione collo linea mediana utilizzando Iris forbici diritte e ritrarre (con divaricatori) i tessuti molli per esporre i vasi. </li><li> Sezionare il CCA e l&#39;ECA dal tessuto circostante con pinze Dumont senza danneggiare il nervo vago. </li><li> Fare una sutura temporanea da un nodo sciolto intorno al CCA con 6-0 seta. </li><li> Fare una sutura permanente intorno alla Corte dei conti e le imbarcazioni più piccole che si estendono da esso legando strettamente i vasi (distale alla biforcazione del CCA). </li><li> Fare un aro suturaund prossimale ECA alla biforcazione CCA. </li><li> Posizionare una clip microvasi intorno all&#39;arteria carotide interna (ICA) e l&#39;arteria pterigopalatino (PPA). </li><li> Fai una piccola incisione nella ECA utilizzando micro dissezione forbici a molla e inserire un monofilamento di silicio a punta 180 micron. Eseguire il taglio più vicino alla sutura permanente possibile per facilitare la manipolazione del filamento. </li><li> Stringere la sutura temporaneo intorno ECA con il filamento inserito e rimuovere la clip dei microvasi. </li><li> Tagliare la Corte dei conti tra il, sutura distale permanente e il punto di ingresso del filamento utilizzando micro dissezione forbici a molla. </li><li> Guida il filamento attraverso l&#39;ICA fino a quando si avverte resistenza (circa 9 -. 10 micron al di là della biforcazione del CCA) nel MCA. NOTA: Nel caso troppa resistenza è sentita mentre la maggior parte del filamento è ancora visibile, il filamento può essere entrata nella PPA. In questo caso, tirare il filo di nuovo alla biforcazione, delicatamente push in avanti nelle ICA con pinze Dumont, e far avanzare il filamento fino a che non può essere visualizzato nella ICA. </li></ol> 3. riperfusione <ol><li> Dopo un periodo di occlusione di 30 minuti, togliere il filamento tirando delicatamente indietro con pinze Dumont e garantire la sutura intorno l&#39;estremità aperta della Corte dei conti. </li><li> Rimuovere la sutura temporaneo intorno CCA allentando con attenzione la legatura con Dumont pinze e sangue flusso viene ripreso attraverso il CCA. </li><li> Chiudere l&#39;incisione con una sutura chirurgica continuo. Chiusura della pelle può essere realizzata sia suture continue o interrotte. graffette cutanee sono anche un metodo accettabile. </li><li> Iniettare topi con 1 ml di via sottocutanea soluzione salina come il volume di rifornimento e con le carprofen analgesici (5 mg / kg, sc) per il sollievo del dolore e il disagio dalla procedura chirurgica, segni che indicano è necessario un sollievo dal dolore includono schiena curva, il cappotto non battuti, ridotta attività, anormaleatteggiamento, e diminuzione dell&#39;appetito. </li><li> Osservare topi durante il recupero dall&#39;anestesia in una gabbia riscaldata a 30 ° C utilizzando una lampada di calore regolata mediante un regolatore di temperatura e posizionare purè chow in una capsula di Petri sul pavimento della gabbia per incoraggiare un&#39;alimentazione. I topi sarà alloggiato uno per gabbia durante il periodo di riperfusione. </li></ol> 4. Chirurgia Sham <ol><li> topi soggetti alla stessa procedura, senza l&#39;inserimento monofilamento. </li></ol> Neurologici 5. post-operatorie punteggi (Tabella 1; Figura 2) <ol><li> Neurologicamente valutare topi dopo il periodo di riperfusione adeguato utilizzando un sistema di punteggio 18 punti la valutazione del generale; Il motore; Sensoriale; Propriocezione. Un punteggio neurologico più alto corrisponde ad una riduzione della funzione neurologica. NOTA: I topi che sono giudicati non risponde e in grado di camminare saranno sacrificati. Altri criteri di eutanasia umano includeranno una perdita di peso superiore al 20%, di respiratoriastress e infezione intorno all&#39;area chirurgica. Una camera di CO 2 sarà utilizzato per l&#39;eutanasia e il metodo fisico per confermare la morte sarà dislocazione cervicale o toracotomia. </li></ol> 6. Misurazione del cervello Infarct Volume (Figura 3) <ol><li> Indurre l&#39;anestesia utilizzando una combinazione di ketamina (150 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg) iniettato ip profondità Monitor di anestesia pinch piedi inizialmente every 3 - 5 minuti e ogni 10 minuti una volta raggiunto l&#39;anestesia. </li><li> Posizionare topi in posizione supina e tagliare la pelle dall&#39;addome al collo seguito dal peritoneo utilizzando iris forbici diritte. </li><li> Sollevare lo sterno con pinze Dumont e tagliare le costole per esporre il cuore. </li><li> Aprire il sinistro e il lato destro del torace utilizzando due coppie di emostatici, esponendo il cuore. </li><li> Inserire un ago 26 G attaccato ad una siringa da 5 ml nel ventricolo sinistro e tagliare l&#39;atrio destro. Profumato con temperatura ambiente o soluzione fisiologica phosphate salina tamponata (PBS) finché il fluido diventa chiaro (di solito 3 - 5 minuti). </li><li> Rimuovere il cranio con cautela fuori dal cervello utilizzando iris forbici diritte e pinze Dumont. </li><li> Tagliare i bulbi olfattivi e il cervelletto con una lama di rasoio in modo che il cervello si adatta nella matrice. Utilizzare questa matrice per tagliare il cervello in anche segmenti. Raffreddare la matrice prima dell&#39;uso per mantenere il tessuto fresco. Posizionare il cervello nella matrice e impostarlo su ghiaccio. </li><li> Tagliate il cervello in segmenti coronale 2 mm con due lame di rasoio. Effettuare il primo taglio con una lama di rasoio a partire da 2 mm dalla parte superiore e lasciare questo lama di rasoio sul posto. Fare un altro 2 mm taglio dietro la prima. Rimuovere la prima lama di rasoio con il tessuto allegata. Ripetere questo processo fino a quando tutto il tessuto è stato tagliato a fette. NOTA: Ci dovrebbe essere di 4 - 5 segmenti al termine. </li><li> Posizionare i segmenti in 24 pozzetti contenenti 2% 2,3,5-triphenyltetrazalium cloruro (TTC), che viene poi posta in un bagno d&#39;acqua superficiale unt 37 ° C per 20 min. Posizionamento ciascun segmento in un pozzo individuo aiuta a tenerli nell&#39;ordine in cui sono stati tagliati. Assicurarsi che la soluzione TTC copre completamente i segmenti di tessuto. Dopo 10 min girare tutte le fette su. </li><li> Mettere una piccola quantità di formalina al 10% nei pozzetti di una nuova piastra da 24 pozzetti e trasferire i segmenti da questa piastra nell&#39;ordine in cui sono stati tagliati. </li><li> Scansione segmenti nel computer e analizzare le dimensioni dell&#39;infarto come percentuale della fetta intera cervello 6 utilizzando il software di analisi ImageJ (NIH 1,57 Immagine Software) 6. <ol><li> Outline dell&#39;area infartuata per generare una misura dell&#39;area. Successivo misurare l&#39;intero emisfero controlaterale per determinare l&#39;area. Dividere la zona infartuata dalla zona dell&#39;emisfero controlaterale e moltiplicare per 100 per determinare il volume dell&#39;infarto. </li></ol></li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Dal suo concepimento 20 anni fa, il modello MCAO di ictus umana coinvolge l&#39;inserimento di un filamento è stato utilizzato in un gran numero di studi. Ciò è principalmente dovuto al fatto che imita ciò accade clinicamente nella forma più comune di ictus (cioè, ictus ischemico). Il corpo striato è più sensibile all&#39;ischemia rispetto alla corteccia cerebrale, e come tale, la lunghezza del tempo ischemico si tradurrà in se sia il striato e la corteccia dorsolaterale saranno interessati, o solo il corpo str...

L&#39;ictus è la causa quinta di morte nel mondo, con una persona che muore dalla malattia ogni 4 minuti. Oltre 800.000 americani soffrono un ictus ogni anno, che non solo è devastante per il paziente, ma anche per le loro famiglie. L&#39;ictus è la principale causa di disabilità adulta e la spesa annua è stimata nell&#39;ordine dei $ 36500000000 1 nonostante poche opzioni di trattamento che sono disponibili. Attivatore tissutale del plasminogeno (tPA) è l&#39;unico Food and Drug Administration (FDA) concesso in licenza farmaco per l&#39;ictus ischemico. Tuttavia, è efficace solo se somministrato a pazienti entro 3-6 ore dall&#39;inizio della corsa, e in questi casi avvantaggia solo il 4% dei pazienti 2. Pertanto, è imperativo che riproducibile, clinicamente rilevanti modelli animali di ictus sono utilizzati per aiutare nello sviluppo di strategie terapeutiche potenziali e trattamenti per questa malattia. È importante notare che in vitro </em&gt; modelli, mentre utile nel modellare alcuni aspetti della disfunzione cerebrale, non sono in grado di ricapitolare le complesse interazioni fisiologici che si verificano nel cervello e periferia a seguito di un ictus. Di conseguenza, i modelli in vivo sono essenziali. Il tipo più comune di ictus ischemico è di origine, che rappresentano il 87% degli ictus totali. Altri colpi sono emorragia intracerebrale (9%) e di emorragia subaracnoidea (4%), e sono causati spesso da emboli all&#39;arteria cerebrale media (MCA). Ciò è attribuibile alla curva prominente alla radice del MCA, che provoca il flusso sanguigno laminare entrare nel cervello per diventare perturbato. La MCA nasce dalla arteria carotide interna (ICA) e percorsi lungo il solco laterale, dove ramifica e progetti alle gangli della base e le superfici laterali del frontale, parietale e lobi temporali, tra il motore primario e corteccia sensoriale. Il circolo di Willis è stato creato da arterie cerebrali posteriori essendocollegato alle arterie cerebrali e comunicante posteriore arterie. Il filamento o di sutura modello intraluminale di MCAO è uno dei più ampiamente utilizzato nella ricerca ictus. Tuttavia, ci sono un paio di diverse varianti di questo modello, e questi sono basati sul fatto che il micro-filamento viene inserito nell&#39;arteria carotide esterna (ECA, chiamato il metodo Longa) 3, oppure se viene inserita nella ICA (denominato Koizumi metodo) 4. Nel metodo di Koizumi, l&#39;arteria carotide comune (CCA) sul lato della chirurgia deve essere legato in modo permanente se il filamento viene rimosso per prevenire le emorragie dall&#39;incisione nella CCA, mentre nel metodo Longa è l&#39;ECA che deve essere legato in modo permanente 5 . Qui il metodo Longa sarà utilizzato come riteniamo che questo è un gran lunga superiore e un modello più clinicamente rilevante chirurgica di ictus ischemico. Inoltre, l&#39;uso di un monofilamento di silicio a punta, in particolare con il metodo Longa, produce moltoriproducibile MCAO rispetto ai monofilamenti fiamma smussati, che spesso producono occlusione incompleta e / o emorragia subaracnoidea 6. Il metodo filamento intraluminale può essere utilizzato come modello di permanente o transitorio 4,6 occlusione. Per eseguire il modello transitorio, il filamento viene rimosso dopo un periodo di ischemia (ad esempio, 30 min, 60 min, o 2 ore), e riperfusione è permesso che accada. Questo modello, in qualche misura, simula il ripristino del flusso sanguigno dopo l&#39;intervento spontaneo o terapeutico (ad esempio, la somministrazione tPA) per lisare un coagulo tromboembolico nell&#39;uomo. Per il modello permanente, il filamento viene semplicemente lasciato in posizione per un periodo di tempo (ad esempio, 24 ore), quindi si verifica nessuna riperfusione. Un altro vantaggio del metodo filamento intraluminale è il fatto che una craniotomia non deve essere eseguito, permettendo al cranio per essere lasciata intatta ed evitando eventuali variazioni della pressione intracranica e temperatura. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; In questo video ci dimostra come eseguire il metodo filamento intraluminale Longa per indurre MCAO e riperfusione. Mostriamo anche come eseguire il punteggio neurologico 18 punti e determinare il volume dell&#39;infarto con cloruro di 2,3,5-triphenyltetrazalium (TTC) colorazione.

<table><tbody><tr><td>Topi maschi C57BL / 6</td><td>Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME</td> <td># 000664</td><td></td></tr><tr><td>ketamina cloridrato</td><td>Morris & Dickson, Shreveport, LA</td><td>67457-108-10</td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Akorn, Inc, Lake Forest, IL</td><td>NADA# 139-236</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di controllo della temperatura CC</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-90-8D</td><td></td></tr><tr><td>Mini sonda termistore rettale</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-80-5D-02</td><td></td></tr><tr><td>Termoforo</td><td>FHC, Bowdoin, ME</td><td>40-90-2-06</td><td></td></tr><tr><td>Clippers</td><td>Amazon, Bellevue, WA</td><td>#64800</td><td></td></tr><tr><td>70% etanolo</td><td>Worldwide Medical Products, Bristol, PA</td><td>#51011023</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio da dissezione</td><td>Olympus, Center Valley, PA</td><td>SZ40</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per iride (diritte)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>11251-20</td><td></td></tr><tr><td>Pinze Dumont (punta piegata a 45 gradi)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>11297-00</td><td></td></tr><tr><td>Clip per micro vasi</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla per micro dissezione (diritte)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>14088-10</td><td></td></tr><tr><td>Divaricatori (smussati)</td><td>Fine Science Tools, Foster City, CA</td><td>18200-11 (Helen usata 17022-13)</td><td></td></tr><tr><td>Applicatori con punta in cotone</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>23-400-100</td><td></td></tr><tr><td>Spugne di garza</td><td>Covidien, Mansfield, MA</td><td>#9023</td><td></td></tr><tr><td>7-0 sutura chirurgica intrecciata in seta</td><td>Braintree Scientific, Braintree, MA</td><td>SUT-S103</td><td></td></tr><tr><td>0,9% cloruro di sodio</td><td>Morris & Dickson, Lake Forest, IL</td><td>0409-4888-20</td><td></td></tr><tr><td>6-0 sutura media MCAO (monofilamento rivestito in gomma siliconica)</td><td>Doccol Corporation, Sharon, MA</td><td>6023PKRe</td><td></td></tr><tr><td>Sofsilk 6-0 seta intrecciata rivestita in silicone</td><td>Covidien, Mansfield, MA</td><td>SUT-14-1</td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>Pfizer, New York, NY</td><td>NADA# 141-199</td><td></td></tr><tr><td>Puralube</td><td>Dechra, Norwich, Regno Unito</td><td>NDC 17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>Regolatore di temperatura Physitemp</td><td>Harvard Apparatus, Holliston, MA</td><td>TCAT-2AC</td><td></td></tr><tr><td>Lampada termica</td><td>Harvard Apparatus, Holliston, MA</td><td>HL-1</td><td></td></tr><tr><td>Sonda doppler laser</td><td>AD Instruments, Colorado Springs, CO</td><td>MSP100XP</td><td></td></tr><tr><td>piastre a 24 pozzetti</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>#353226</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered soluzione salina (PBS)</td><td>Life Technologies, Carlsbad, CA</td><td>20012-050</td><td></td></tr><tr><td>Lamette da barba a filo singolo</td><td>Fisher Scientific, Waltham, MA</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-trifeniltetrazalium cloruro (TTC)</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>T8877-50G</td><td></td></tr><tr><td>Affettatrice per matrici cerebrali di topo</td><td>Braintree Scientific, Braintree, MA</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>Bagno d'acqua</td><td>VWR, Radnor, PA</td><td>#182</td><td></td></tr><tr><td>10% formalina</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>HT501128-4L</td><td></td></tr><tr><td>Software di analisi ImageJ</td><td>NIH, Bethesda, MD</td><td>download</td><td></td>gratuito</tr><tr><td>Divaricatore</td><td>Acquisto di dispositivi medici, Newcastle, CA</td><td>MP-740</td><td></td></tr></tbody></table>

approccio chirurgico per occlusione dell&#39;arteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

L&#39;ictus è una delle principali cause di morte nel mondo e continua ad essere una delle principali cause di disabilità per adulti a lungo termine. Circa 87% degli ictus ischemico sono di origine e si verificano nel territorio dell&#39;arteria cerebrale media (MCA). Attualmente l&#39;unico Food and Drug Administration (FDA) ha approvato farmaco per il trattamento di questa malattia devastante è attivatore tissutale del plasminogeno (tPA). Tuttavia, tPA ha una piccola finestra terapeutica per l&#39;amministrazione (3-6 ore), ed è efficace solo nel 4% dei pazienti che effettivamente ricevono. La ricerca attuale si concentra sulla comprensione della fisiopatologia di ictus al fine di trovare potenziali bersagli terapeutici. Così, modelli affidabili sono cruciali, e il modello MCA occlusione (MCAO) (anche definito il filamento o di sutura modello endoluminale) è considerato il modello più clinicamente rilevante chirurgica di ictus ischemico, ed è abbastanza non invasiva e facilmente riproducibile. Tipicamente il modello MCAO viene utilizzato con i roditori, in particolare con i topi dovutea tutte le variazioni genetiche disponibili per questa specie. Qui si descrive (e presente nel video) come eseguire con successo il modello MCAO (con riperfusione) nei topi per generare dati affidabili e riproducibili.

I topi sottoposti a 30 minuti di ischemia cerebrale MCAO-indotta (Figura 1), seguito da un periodo di riperfusione (24 hr e 1 sett sono presentati qui, ma la lunghezza della riperfusione può essere variata). La mortalità durante MCAO è stato minimo (circa il 2%). ischemia Post, il tasso di mortalità (entro le prime 24 ore) è stato di circa il 26%. Laser Doppler flussimetria stata utilizzata per confermare sang...

Per comprendere la fisiopatologia di ictus, è importante utilizzare modelli affidabili. Questo documento descrive uno dei modelli di ictus più frequentemente utilizzati nei topi, chiamato il modello cerebrale media occlusione dell&#39;arteria (MCAO) (anche chiamato il filamento intraluminale o modello di sutura) con riperfusione.

Approccio chirurgico per occlusione dell&#39;arteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

L'obiettivo generale del metodo Longa è riprodurre l'ischemia alla radice dell'arteria cerebrale media, o MCA, poiché gli ictus ischemici nell'uomo si verificano più comunemente a causa dell'occlusione della MCA. Questo metodo può aiutarci a rispondere a domande fondamentali nel campo dell'ictus, come ad esempio come individuare un bersaglio terapeutico adeguato per il trattamento di questa malattia. Il principale vantaggio del metodo Longa rispetto ad altre tecniche è il tasso di sopravvivenza.Si osserva anche un aumento delle interazioni tra cellule leucocitarie ed endoteliali e del volume dell'infarto con questa tecnica. La procedura sarà dimostrata da Shantel Vital, responsabile del mio laboratorio. Dopo aver indotto l'anestesia in un topo maschio C57 black six seguendo il protocollo descritto, monitorare la profondità dell'anestesia mediante una pinzatura del piede e applicare un unguento oculare sterile per prevenire l'essiccamento.Quindi, rasare il collo dell'animale. Posizionare il topo in posizione supina su un tappetino con temperatura regolata e inserire una sonda rettale per monitorare e mantenere una temperatura corporea di 36,5 più o meno 0,1 gradi Celsius. Successivamente, utilizzare alcol etilico al 70% per disinfettare la pelle.Successivamente, utilizzando forbici dritte per iridectomia, effettuare un'incisione mediana e retrarre i tessuti molli per esporre i vasi. Utilizzando pinze di Dumont, dissezionare l'arteria carotide comune, o CCA, e l'arteria carotide esterna, o ECA, dai tessuti circostanti senza danneggiare il nervo vago. Con seta 7-0, realizzare una sutura temporanea annodando un punto lasco intorno alla CCA.Quindi, eseguire una sutura permanente attorno all'arteria carotide esterna (ECA) e ai vasi più piccoli che si diramano da essa, legando strettamente i vasi. Ora, posizionare una sutura attorno all'ECA a monte della biforcazione della carotide comune (CCA). Successivamente, applicare una pinza per microvasi sull'arteria carotide interna (ICA) e sull'arteria pterigo-palatina (PPA).Utilizzando forbici a molla per microdissezione, praticare una piccola incisione nell'ECA il più vicino possibile al punto del punto di sutura permanente e inserire un monofilamento con punta in silicone di 180 micrometri. Una volta inserito il filamento, stringere il punto di sutura temporaneo attorno all'ECA e rimuovere la pinza per microvasi. Utilizzare le forbici a molla per microdissezione per tagliare l'ECA tra il punto di sutura distale permanente e il punto di inserimento del filamento.Guidare il filamento attraverso l'arteria carotide interna (ICA) fino a quando si avverte una resistenza nell'arteria cerebrale media (MCA). Per ulteriori dettagli, consultare il protocollo descritto nel testo. Dopo un periodo di occlusione di 30 minuti, rimuovere il filamento utilizzando pinzette di Dumont per estrarlo delicatamente e fissare il ligamento attorno all'estremità aperta dell'arteria carotide esterna (ECA).Rimuovere il punto di sutura temporaneo attorno all'arteria carotide comune allentando con cura il legaccio per consentire il ripristino del flusso ematico attraverso l'arteria carotide comune. Rimuovere i retrattori, quindi utilizzare un punto di sutura chirurgico continuo per chiudere l'incisione. Iniettare nel topo un millilitro di soluzione salina per via sottocutanea per il ripristino del volume e carprofene come analgesico per alleviare il dolore e il disagio provocati dall'intervento chirurgico.Osservare il topo durante il recupero dall'anestesia in una gabbia dedicata riscaldata a 30 gradi Celsius e posizionare del mangime tritato in una piastra di Petri sul fondo della gabbia per incoraggiare l'alimentazione. Valutare neurologicamente i topi, dopo il periodo di riperfusione appropriato, utilizzando un sistema di punteggio a 18 punti, valutando i punteggi generali, motori, sensoriali e della propriocettività. Un punteggio neurologico più elevato corrisponde a una funzione neurologica ridotta.Per misurare il volume dell'infarto cerebrale, dopo aver indotto l'anestesia e averne monitorato la profondità secondo il protocollo descritto, posizionare il topo in posizione supina e utilizzare forbici dritte da iridectomia per tagliare la cute dall'addome al collo, prima di incidere il peritoneo. Utilizzando pinze di Dumont, sollevare lo sterno e tagliare le costole. Successivamente, usare due paia di pinze emostatiche per aprire i lati destro e sinistro del torace, esponendo il cuore.Inserire un ago da 26 gauge collegato a una siringa da cinque millimetri nel ventricolo sinistro e tagliare l'atrio destro. Quindi, perfondere il cuore con soluzione salina fisiologica a temperatura ambiente o PBS finché il liquido non diventa limpido. Con forbici dritte Iris e pinze, rimuovere la testa dell'animale ed estrarre con attenzione il cervello dal cranio.Quindi, utilizzare una lametta per rimuovere il bulbo olfattivo e il cervelletto in modo che il cervello possa entrare nella matrice. Dopo aver raffreddato la matrice, inserire il cervello al suo interno e appoggiarla sul ghiaccio. Successivamente, con una lametta, effettuare un primo taglio nel cervello a due millimetri dal vertice, lasciando la lametta in posizione.Con una seconda lametta, effettuare un altro taglio di due millimetri dietro il primo. Quindi, rimuovere la prima lametta con il tessuto attaccato. Ripetere questo processo fino a quando tutto il tessuto non è stato sezionato.Posizionare ogni segmento nell'ordine in cui sono stati tagliati in una pozzetta di una piastra a 24 pozzetti contenente cloruro di 2,3,5-trifeniltetrazolio, o TTC, al 2%, e inserire la piastra in un bagno d'acqua tiepida a 37 gradi Celsius per 20 minuti. Dopo un'incubazione di 10 minuti, capovolgere le fette. Successivamente, aggiungere una piccola quantità di formalina al 10% nelle pozzette di una nuova piastra a 24 pozzetti e trasferire i segmenti nelle pozzette contenenti formalina, rispettando l'ordine di taglio.Dopo aver acquisito i segmenti nel computer, utilizzare il software di analisi ImageJ per analizzare l'estensione dell'infarto come percentuale dell'intera sezione cerebrale, delineando l'area interessata dall'infarto per ottenere una misura dell'area. Successivamente, misurare l'intero emisfero controlaterale per determinarne l'area. Infine, dividere l'area dell'infarto per l'area dell'emisfero controlaterale e moltiplicare il risultato per 100 per determinare il volume dell'infarto.Come mostrato qui, la flussimetria Doppler laser è stata utilizzata per confermare la perfusione del flusso sanguigno nella regione dell'arteria cerebrale media (MCA) prima e dopo la riperfusione della MCA. Quando il legame temporaneo della carotide comune (CCA) viene rilasciato dopo 30 minuti di ischemia, per consentire la rimozione del filamento e la riperfusione, si verifica un aumento della perfusione che raggiunge appena meno del 100% della perfusione di base dopo cinque minuti di riperfusione. Nella tabella sono riportati i punteggi neurologici relativi alla valutazione dei deficit generali, sensoriali, motori e propriocettivi.Questo grafico illustra che il punteggio per 27 topi dopo 24 ore era di 12,56 ± 0,7 ed è rimasto elevato anche una settimana dopo, con un valore di 11,50 ± 1,5. Un punteggio neurologico più alto indica una funzione neurologica ridotta. I volumi di infarto hanno mostrato andamenti simili al punteggio neurologico dopo 24 ore.Come mostrato qui, 24 ore dopo l'occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAo), i topi presentavano ampi volumi di infarto che risultavano aumentati una settimana dopo l'ictus. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita entro 15 minuti se effettuata correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è fondamentale mantenere la temperatura a 36,5 gradi Celsius.Al termine di questa procedura, possono essere eseguiti anche altri metodi, come la legatura e puntura del ceco. Questo ci permette di rispondere ad ulteriori domande, ad esempio sugli effetti della sepsi prima e dopo l'ictus. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come indurre ischemia inserendo un monofilamento nell'arteria cerebrale media e rimuovendolo per consentire la riperfusione.Non dimenticare che lavorare con strumenti come forbici Iris e pinze può essere pericoloso e si devono sempre prendere precauzioni.

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Occlusione filamentosa dell'arteria cerebrale media è un modello comune per lo studio di ictus ischemico nei topi.

Corsa di modellazione in Mouse - Medio occlusione dell&#39;arteria cerebrale con il Modello Filament

Dimostriamo nel video un metodo per produrre una occlusione dell'arteria cerebrale media in topi adulti utilizzando un monofilamento intraluminale. Mostriamo anche come valutare il grado di infarto cerebrale da 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) colorazione.

Modello murino di Mezzo occlusione dell&#39;arteria cerebrale

Il modello intraluminale occlusione cerebrale nei topi viene qui presentato. Il grado di infarto cerebrale viene valutata da un punteggio neurologico e colorazione violetto cresolo, una colorazione alternativa alla TTC, che offre il grande vantaggio di testare in parallelo molti marcatori di interesse.

Modello murino di MCAO intraluminale: valutazione infarto cerebrale da colorazione viola cresile

Descriviamo un modello murino di ictus indotto dall'occlusione dell'arteria cerebrale media utilizzando una sutura rivestita di silicone. Il protocollo può essere applicato per indurre un'occlusione permanente o un'ischemia temporanea, seguita da riperfusione.

Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dell&#39;arteria Medio e visualizzazione di Infarct Area

L'occlusione di filamento intraluminal dell'arteria cerebrale centrale è il modello più utilizzato in vivo di colpo sperimentale nei roditori. Approccio chirurgico alternativo per consentire la riparazione dell'arteria carotica comune avviene qui, che permette la riperfusione dell'arteria carotica comune e un completo riperfusione nel territorio dell'arteria cerebrale media.

Occlusione dell'arteria cerebrale centrale consentendo di riperfusione tramite riparazione dell'arteria carotica comune nei topi

Un modello murino di ischemia-riperfusione cerebrale è istituito per studiare la patofisiologia del colpo. Abbiamo distalmente legare l'arteria cerebrale centrale di destra e l'arteria carotica comune di destra e ripristinare il flusso sanguigno dopo 10 o 40 min di ischemia.

Occlusione del vaso due Mouse modello di Ischemia-riperfusione cerebrale

Il protocollo mira a fornire metodi per l'encefalomiosinangiosi - innesto di un lembo muscolare temporale vascolare sulla superficie piale del tessuto cerebrale ischemico - per il trattamento dell'ictus ischemico acuto non moyamoya. L'efficacia dell'approccio nell'aumentare l'angiogenesi viene valutata utilizzando un modello transitorio di occlusione dell'arteria cerebrale media nei topi.

Un modello per il trattamento dell'encefalomiosinangiosi dopo ictus indotto da occlusione dell'arteria cerebrale media nei topi

Questo protocollo dimostra un modello unico di ictus del topo con un infarto di medie dimensioni e un eccellente tasso di sopravvivenza. Questo modello consente ai ricercatori preclinici sull'ictus di estendere la durata dell'ischemia, utilizzare topi anziani e valutare gli esiti funzionali a lungo termine.

Un modello modificato di occlusione dell'arteria cerebrale media transcranica per studiare gli esiti dell'ictus nei topi anziani

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire un modello di occlusione dell'arteria cerebrale media distale (dMCAO) attraverso l'elettrocoagulazione transcranica in topi C57BL/6J e valutare il successivo comportamento neurologico e le caratteristiche istopatologiche.

Induzione di ictus ischemico acuto nei topi utilizzando la tecnica di occlusione dell'arteria media distale

Questo protocollo descrive il processo di preparazione alla riperfusione dell'occlusione dell'arteria cerebrale media attraverso l'arteria carotide comune.

Una preparazione del modello modificata per la riperfusione dell'occlusione dell'arteria cerebrale media

Impara il metodo Longa per occlusione dell'arteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi. Questa tecnica offre maggiore sopravvivenza e riproduce efficacemente l'ischemia per studiare nuove terapie.

Approccio chirurgico per occlusione dell'arteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi

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