Rilevazione rapida molecolare e la differenziazione dei virus influenzali A e B
30 gennaio 2017
Descriviamo un test rapido, molecolare a base di Influenza A e B. Il saggio Influenza rileva ogni bersaglio entro 15 minuti utilizzando l'amplificazione isotermica con primer specifici per l'influenza seguita da rilevamento di target con sonde segnale molecolare. Il saggio e influenza A B è facile da usare e richiede minimi hands-on tempo per eseguire.
L'obiettivo generale di questo test è diagnosticare o escludere l'infezione da virus influenzale nei pazienti che presentano un sistema respiratorio. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della diagnostica clinica, come la diagnosi delle cause chiave delle infezioni respiratorie. Il vantaggio principale di questa tecnica è che si tratta di un metodo rapido che può essere utilizzato in ambito di assistenza nominativa.
A dimostrare la procedura sarà Sam Kaplan, un tecnico del nostro laboratorio. Per raccogliere un campione di tampone nasale, inserire il tampone nella narice che ha il drenaggio più visibile o che è più congestionata. Con una leggera rotazione, spingere il tampone nella narice fino a quando non incontra resistenza e ruotare più volte contro la parete nasale prima di rimuoverlo lentamente dalla narice.
Successivamente, conservare il tampone e trasportarlo in una fiala contenente tre millilitri di terreno di trasporto virale. Quindi, portare il campione e il ricevitore di campioni blu a temperatura ambiente prima del test. La base di prova arancione può essere testata senza la necessità di riscaldarla a temperatura ambiente.
Lasciare tutti i provini nella pellicola fino a poco prima dell'uso. Quindi accendere lo strumento, inserire l'ID utente e premere OK.To iniziare il processo di test, toccare Esegui test sullo schermo dello strumento. Quindi, inserisci l'ID del paziente utilizzando la tastiera su schermo o lo scanner di codici a barre e premi OK. Successivamente, aprire il coperchio e inserire la provetta di base del test arancione nel supporto della base del test arancione.
Verificare che sullo schermo venga visualizzato il test corretto e premere OK. Quindi inserire il ricevitore di campioni blu nel supporto del ricevitore di campioni blu e attendere che il ricevitore di campioni si riscaldi. Successivamente, rimuovere il sigillo laminato posizionando due dita sul bordo del ricevitore del campione per assicurarsi che rimanga in posizione. Quindi posizionare il tampone del paziente da testare nel ricevitore del campione.
Mescolare energicamente il tampone e il liquido per 10 secondi e premere la testa del tampone contro il lato del ricevitore del campione per aiutare a rimuovere il campione dal tampone. Se i tamponi di prova sono conservati in un mezzo di trasporto virale, agitare il mezzo di trasporto virale per 10 secondi e aggiungerne 200 microlitri al ricevitore del campione. Quindi premere OK per procedere.
Successivamente, premere la cartuccia di trasferimento bianca nel ricevitore di campioni blu. Continuare a premere sul ricevitore del campione finché l'indicatore arancione non si alza. Quindi sollevare e collegare la cartuccia di trasferimento alla base di prova.
L'indicatore arancione dovrebbe scendere una volta che il trasferimento della cartuccia è collegato correttamente. Chiudere il coperchio e non aprire finché non viene visualizzata la schermata Risultati. Ora tocca Esegui test QC nella schermata iniziale.
Selezionare il test QC da eseguire. Quindi confermare il tipo di test in modo che corrisponda al campione QC destinato al test facendo clic su OK e seguendo le istruzioni sullo schermo per completare il test. Al termine dell'esecuzione del test, osservare i risultati del test visualizzati sullo schermo con le interpretazioni per la presenza di influenza A, B o sottotipi sconosciuti e ripetere il test per i risultati non validi.
Successivamente, pulire lo strumento e l'area circostante del banco con una soluzione di etanolo al 70% o candeggina al 10%. Questa figura mostra i valori medi di CT determinati dal test RP per i campioni positivi e negativi per ciascun sottotipo di influenza. I risultati dimostrano che i campioni falsi negativi determinati dal test dell'influenza A e B erano dovuti a campioni a bassa carica virale.
Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in 15 minuti se eseguita correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che durante l'impostazione iniziale del test, la cartuccia di trasferimento deve essere collegata alla base del test fino a quando non scatta in posizione. Se questi due pezzi non sono fissati correttamente, la corsa fallirà e dovrà essere ripetuta dall'inizio.
Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire questo test diagnostico per l'influenza. Non dimenticare che lavorare con campioni di pazienti potenzialmente infetti dall'influenza può essere estremamente pericoloso e che durante l'esecuzione di questa procedura è necessario prendere sempre precauzioni, come indossare dispositivi di protezione individuale adeguati.
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Panoramica
Questo articolo descrive un saggio rapido basato su metodi molecolari per la rilevazione dei virus dell'influenza A e B. Il saggio utilizza l'amplificazione isoterma e sonde molecolari a spia, consentendo di ottenere risultati in soli 15 minuti.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Diagnostica clinica
- Biologia molecolare
- Malattie infettive
Sfondo
- I virus dell'influenza sono cause significative di infezioni respiratorie.
- Una diagnosi rapida è fondamentale per una gestione efficace del paziente.
- I metodi attuali possono richiedere tempi di elaborazione più lunghi.
- Questo saggio mira a fornire risultati rapidi in un formato facile da usare.
Scopo dello studio
- Sviluppare un saggio rapido per la diagnosi delle infezioni da virus dell'influenza.
- Migliorare l'efficienza della diagnostica clinica nelle malattie respiratorie.
- Facilitare decisioni tempestive riguardo al trattamento in ambito sanitario.
Metodi Utilizzati
- Amplificazione isoterma con primer specifici per l'influenza.
- Rilevamento dei bersagli mediante sonde molecolari a spilla.
- Prelievo del campione mediante tampone nasale.
- Tempo minimo di manipolazione richiesto per il saggio.
Risultati principali
- Il saggio fornisce risultati entro 15 minuti.
- Procedura semplice da usare, adatta per ambienti clinici.
- Rileva efficacemente sia il virus dell'influenza A che quello dell'influenza B.
- Dimostrato da un tecnico di laboratorio.
Conclusioni
- Il saggio è uno strumento rapido ed efficiente per la diagnosi dell'influenza.
- Può migliorare in modo significativo l'assistenza ai pazienti con infezioni respiratorie.
- Studi futuri potrebbero ampliarne l'applicazione nella diagnostica clinica.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Progetto
Il rilevamento molecolare rapido dei virus dell'influenza supporta decisioni diagnostiche tempestive nella gestione delle malattie respiratorie. Il tempo di analisi dell'assay, pari a 15 minuti, consente un triage tempestivo in contesti assistenziali puntuali, riducendo la latenza diagnostica. Questa capacità aiuta a ridurre i rischi nello sviluppo di antivirali nelle fasi iniziali, fornendo dati affidabili sullo stato di infezione.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione del Target
- Valore scientifico: Consente la conferma dello stato di infezione da influenza in modelli preclinici, supportando studi di validazione del bersaglio.
- Valore operativo: Fornisce un risultato rapido in un sistema chiuso, riducendo il tempo di manipolazione manuale e il rischio di contaminazione.
Sviluppo di screening e saggi
- Valore scientifico: Genera segnali di rilevamento quantitativi mediante sonde a faro molecolare per l'ottimizzazione del saggio.
- Valore operativo: Fornisce risultati riproducibili su campioni nasofaringei congelati e archiviati, supportando la robustezza del saggio.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Valore scientifico: Facilita il monitoraggio longitudinale della carica virale in sistemi rilevanti per la malattia, contribuendo alla riduzione dei rischi meccanicistici.
- Valore operativo: Permette un allineamento trasversale tra i team di virologia e tossicologia attraverso un output standardizzato.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Il saggio si inserisce nei flussi di lavoro della fase iniziale di scoperta, in cui è necessaria una rapida conferma dello stato di infezione prima di procedere all'ottimizzazione del capostazione.
- Biologia della scoperta: Supporta la verifica delle ipotesi distinguendo l'infezione da influenza di tipo A e di tipo B in coorti sperimentali.
- Screening: Consente la preparazione di campioni biologici standardizzati per successivi test di screening antivirali.
- Analisi: Fornisce risultati qualitativi e semi-quantitativi utili per confrontare l'efficacia antivirale in diverse condizioni.
- Ricerca traslazionale: Collega la rilevazione precoce dell'infezione alla continuità preclinica attraverso un rilevamento virale costante.
- Riutilizzo aziendale: Rappresenta un modulo diagnostico riutilizzabile per studi sui virus respiratori in progetti multipli.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Riduce l'ambiguità meccanicistica nei modelli di infezione fornendo una chiara differenziazione dei sottotipi influenzali.
- Valore operativo: Garantisce standardizzazione e riproducibilità grazie a un'operazione senza pipetta e in sistema chiuso.
- Valore strategico: Migliora le decisioni di proseguimento o interruzione nei programmi antivirali consentendo una rapida conferma dell'infezione.
- Impatto sul portafoglio: Supporta la priorizzazione dei composti adeguata al rischio in base a dati tempestivi sull'interazione con il bersaglio.
Considerazioni sull'implementazione
- Richiede una formazione nella raccolta di tamponi nasofaringei e nella manipolazione dei campioni in mezzo di trasporto virale.
- Dipende dalla manutenzione dello strumento e dalla stabilità dei reagenti per prestazioni costanti.
- Necessita di un allineamento del protocollo tra i diversi team per il tracciamento dei campioni e l'interpretazione dei risultati.
- Deve tenere conto della ridotta sensibilità nei campioni con carica virale bassa, come osservato nei confronti tra campioni congelati.
- Traggo beneficio da controlli ambientali per prevenire la contaminazione da ampliconi in contesti ad alta capacità.
