Name: Fabbricazione di invertito colloidale cristallo poli (glicole etilenico) Scaffold: una piattaforma Cell Culture tridimensionale per il fegato Tissue Engineering (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: Scopri la fabbricazione di scaffold a cristallo colloidale invertito in PEG per l'ingegneria tissutale epatica. Questo metodo tridimensionale migliora la funzionalità delle cellule Huh-7.5 per test farmacologici avanzati.

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Gli autori desiderano ringraziare il sostegno di un Research Foundation Fellowship nazionale (NRF -NRFF2011-01) e Programma di ricerca competitiva (NRF-CRP10-2012-07).

Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti da rivelare.

Ponteggi ingegneria dei tessuti sono in rapida evoluzione per fornire tutti i segnali fisici e biochimici necessari per rigenerare, mantenere o riparare tessuti per l&#39;applicazione della sostituzione di organi, lo studio delle malattie, lo sviluppo di farmaci, e molti altri 57. In ingegneria dei tessuti del fegato, epatociti umani primari rapidamente perdono le loro funzioni metaboliche, una volta isolati dal corpo, creando un grande bisogno di ponteggi di ingegneria e sviluppo di piattaforme per mantenere...

Il fegato è un organo altamente vascolarizzato con una moltitudine di funzioni, tra cui la disintossicazione del sangue, metabolismo di xenobiotici, e la produzione di proteine ​​del siero. tessuto epatico ha un complesso microstruttura tridimensionale (3D), composto da più tipi di cellule, canalicoli biliari, sinusoidi, e zone di diversa composizione biomatrice e concentrazioni di ossigeno differenti. Data questa struttura elaborata, è stato difficile creare un modello di fegato corretta in vitro 1. Tuttavia, vi è una crescente domanda di funzionale in modelli in vitro di hosting epatociti umani come piattaforme per la tossicità test anti-droga 2 e studiare malattie associate con il fegato 3. Piattaforme di ingegneria tissutale epatica corrente hanno semplificato la complessità del fegato isolando uno, o concentrandosi su alcuni, dei parametri del fegato, cioè co-coltura delle cellule 4, composizione biochimica della zonaL microambienti 5, dinamica del flusso 6,7 e la configurazione del Biomatrice 8. Configurazione della biomatrice può essere suddiviso in parametri quali materiali impalcatura, la composizione di matrice extracellulare (ECM) proteine, matrice di rigidezza nonché la progettazione e la struttura del ponteggio. C&#39;è stato un aumento negli studi di ingegneria dei tessuti utilizzando idrogel sintetici, in particolare poli (glicole etilenico) (PEG) idrogel 9, data la possibilità di regolare le proprietà meccaniche, bioattività, e velocità di degradazione del idrogel. Per quanto riguarda la ricerca di fegato legati, l&#39;idrogel biocompatibile è stata applicata per lo studio infezione da virus della malattia epatica 3. Come un design della piattaforma degli epatociti, numerosi studi hanno utilizzato epatociti panino culture 10,11 e l&#39;incapsulamento delle cellule all&#39;interno di un idrogel 12,13 per fornire l&#39;ambiente 3D e cellula-ECM e l&#39;interazione cellula-cellula, che sono essenziali per imitare nel microambiente vivo. However, queste piattaforme non possiedono un alto grado di controllo e organizzazione spaziale, portando a proprietà non uniformi attraverso l&#39;impalcatura 14. Il colloidale cristallo invertita (ICC) 14 patibolo è un&#39;impalcatura 3D altamente organizzato per coltura cellulare che è stato introdotto nei primi anni 2000. struttura unica del ponteggio può essere attribuito al semplice processo di fabbricazione utilizzando un cristallo colloidale, un reticolo ordinata di particelle colloidali di diametro variabile. In breve, per riassumere il processo, le particelle sono disposti in modo ordinato e ricotta usando il calore in modo da formare un reticolo. La lisciviazione del lattice, da un solvente organico, in polimerizzati risultati idrogel in cavità sferiche esagonale confezionati 15 con elevata area superficiale. Questa impalcatura altamente ordinato è già stato fatto con entrambi i materiali sintetici e naturali, incluso ma non limitato a poli (acrilammide) 16-21, poli (lattico-co-glicolico acido) 15,22-30, Poli (glicole etilenico) 31,32, poli (2-idrossietil metacrilato) 21,33-35, e chitosano 36-39. Impalcature ICC in materiali non sottomarina tendono a promuovere sferoidi cellulari all&#39;interno delle cavità 14,23,40. Tipi di cellule multiple hanno dimostrato di proliferare successo, differenziare e funzione all&#39;interno di questa configurazione, compresi condrociti 41, cellule stromali del midollo osseo 42, e cellule staminali 43,44. Per quanto riguarda epatociti, gli studi sono stati condotti con impalcature ICC fatte di Na 2 SiO 3 e poli (acrilammide), ma non PEG. Con semplici strategie bioconjugation (vale a dire, l&#39;accoppiamento ammina attraverso EDC / NHS), ponteggi PEG basati su ECM proteine-coniugati possono essere fabbricate, che può rivelarsi siti di legame più cellulari per essere un più vivo come l&#39;ambiente e migliorare la funzione epatica. In questo manoscritto e il video associato, dettagliamo la fabbricazione del ponteggio ICCutilizzando poli (glicole etilenico) diacrilato idrogel (PEGDA) e un reticolo di polistirolo microsfere, ottimizzato per epatocarcinoma (Huh-7.5) cultura. Dimostriamo le differenze tra i generalmente non adesivo nude ponteggi ICC PEGDA e il collagene rivestite PEGDA ICC impalcatura in termini di topologia patibolo e le prestazioni delle cellule. La vitalità cellulare e la funzione sono misurati qualitativamente e quantitativamente per valutare il comportamento delle cellule Huh-7.5.

<table><tbody><tr><td>Provetta PCR da 0,2 ml</td><td>Axygen Scientific</td><td>PCR-02D-C</td> Colla <td>Gorilla resistente all'ebollizione</td></tr><tr><td></td><td>Gorilla Glue, Inc.</td><td>Dipende dal fornitore. Questo è stato acquistato da un negozio locale.</td><td></td></tr><tr><td>Vetrini</td><td>VWR</td><td>631-1575</td><td>Dimensioni: 24&volte; 60 mm2</td></tr><tr><td>Sfere di polistirene</td><td>Fisher Scientific</td><td>TSS#4314A</td><td>Diametro = 140 &micro; m; 3x104 particelle per millilitro e distribuzione dimensionale 1,4%</td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Merck</td><td>1.00983.1011</td><td>assoluto per analisi EMSURE; Diluire al 70% con acqua Milli-Q</td></tr><tr><td>Bagno ad ultrasuoni</td><td>Elma</td><td>S10H</td><td>Forno per attrezzature</td></tr><tr><td></td><td>Nabertherm</td><td>N7/H</td><td>Attrezzatura</td></tr><tr><td>200 & micro; l puntale per pipetta</td><td>Axygen Scientific</td><td>T-210-Y-R-S</td><td></td></tr><tr><td>Agitatore oscillante</td><td>VWR</td><td>444-0142</td><td></td></tr><tr><td>Glicole polietilenico (PEG)</td><td>Merck</td><td>1.09727.0100</td><td>Mw= 4 kDa; l'acrilazione dei monomeri PEG e la purificazione del precipitato risultante producono un macromero PEGDA con Mw = 4.6&nbsp; kDa</td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td>Beckman Coulter</td><td>392932</td><td>Attrezzatura</td></tr><tr><td>acrilato-poli(glicole etilenico) - Succinimidil valerato</td><td>Laysan Bio</td><td>ACRL-PEG-SVA-3400-1g</td><td>Mw = 3,4 kDa</td></tr><tr><td>2-idrossi-4'-(2-idrossietossi)-2-metilpropiofenone</td><td>Sigma Aldrich</td><td>410896</td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>VWR</td><td>58816-123</td><td>Attrezzatura</td></tr><tr><td>Microcentrifuga</td><td>Eppendorf</td><td>5404 000.413</td><td></td></tr><tr><td>Film di paraffina</td><td>Parafilm M&nbsp;</td><td>#PM996</td><td>Mantenuto a 9" con un'intensità consentita di 10,84&nbsp; mW/cm2</td></tr><tr><td>Bluewave 200 Faretto UV</td><td>Blaze Technology&nbsp;</td><td>120008, 122300</td><td></td></tr><tr><td>Tetraidrofurano (THF)</td><td>Merck</td><td>107025</td><td></td></tr><tr><td>Agitatore orbitale</td><td>Heidolph</td><td>543-123120-00-5</td><td></td></tr><tr><td>Collagene di tipo I</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C3867-1VL</td><td>Da ratto. 1x, senza CaCl2 MgCl2; pH = 7,2</td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Gibco</td><td>20012-027</td><td>16% p/v aq. 10 x 10&nbsp; ml</td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>VWR</td><td>43368.9M Attrezzatura</td><td></td></tr><tr><td>Freezone 4.5 liofilizzatore</td><td>Labconco</td><td>7750020</td><td>Attrezzatura</td></tr><tr><td>Sputter coater</td><td>Jeol Ltd.</td><td>JFC-1600</td><td></td></tr><tr><td>Attrezzatura Microscopio elettronico a scansione</td><td>Jeol Ltd.</td><td>JSM 5310</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpi primari anti-topo contro il collagene di tipo I</td><td>Abcam</td><td>ab6308</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secondario anti-topo coniugato con Alexa Fluor 488</td><td>Life Technologies</td><td>A21121</td><td></td></tr><tr><td>Piastra, coltura tissutale 24 pozzetti, fondo piatto (Nunclon)&nbsp;</td><td>Bio-Rev PTE LTD</td><td>3820-024</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium(DMEM) 2,5 g/L Glucosio con L-Gln</td><td>Lonza</td><td>12-604F</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>A15-151</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina (P/S)</td><td>Life Tchnologies</td><td>15140-122 E</td><td></td></tr><tr><td>100 mm Piastre di coltura non trattate Corning</td><td>Sigma Aldrich</td><td>CLS430591</td><td></td></tr><tr><td>0,25% Tripsina-EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Attrezzatura; 37&nbsp; &deg; C, 5% di umidità</td></tr><tr><td>Forma Steri-Cycle CO2 Incubatori</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>371</td><td></td></tr><tr><td>Hausser Bright-Line Phase Hemacytometer</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>02-671-6</td><td></td></tr><tr><td>Kit di vitalità/citotossicità viva/morta per cellule di mammifero</td><td>Life Technologies</td><td>L3224&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CCK-8 Assay</td><td>Dojindo Laboratories</td><td>CK04-11</td><td>Reagente al sale di monosodio (MSR)</td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre Infinite 200 PRO&nbsp;</td><td>Kit</td> ELISA umano Tecan <td></td><td></td></tr><tr><td>Albumina</td><td>Abcam</td><td>ab108788</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Bio-Rad</td><td>#1610407</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153-50G</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpi primari anti-topo (contro CYP3A4, albumina)</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-53850; sc-271605</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Life Technologies</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555 marcato Falloidina</td><td>Life Technologies</td><td>A34055</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Life Technologies</td><td>15596-026</td><td></td></tr><tr><td>Cloroformio</td><td>VWR</td><td>22706.326</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanolo</td><td>Fisher Scientific</td><td>67-63-0</td><td></td></tr><tr><td>DPEC acqua</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>AM9916</td><td></td></tr><tr><td>Nanodrop Spettrofotometro 2000c</td><td>Thermofisher Scientific</td><td>ND-2000</td><td></td></tr><tr><td>iScript Trascrizione inversa Supermix&nbsp;</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>1708840</td><td></td></tr><tr><td>SYBR selezionano Master Mix per CFX</td><td>Life Technology</td><td>4472937</td><td></td></tr><tr><td>Primer (da scegliere)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CFX96 Real-Time System, C-1000 Touch Thermal Cycler</td><td>Bio Rad Laboratories</td><td>SOFT-CFX-31-PATCH&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

fabbricazione di invertito colloidale cristallo poli (glicole etilenico) scaffold: una piattaforma cell culture tridimensionale per il fegato tissue engineering

Fabrication of Inverted Colloidal Crystal Poly(ethylene glycol) Scaffold: A Three-dimensional Cell Culture Platform for Liver Tissue Engineering

La capacità di mantenere la funzione degli epatociti in vitro, allo scopo di testare citotossicità xenobiotici &#39;, studiando virus e sviluppare farmaci mirati al fegato, richiede una piattaforma in cui le cellule ricevono adeguati segnali biochimici e meccanici. sistemi recenti ingegneria dei tessuti del fegato hanno impiegato tridimensionali (3D) impalcature composte da idrogeli sintetici o naturali, data la loro ritenzione idrica e la loro capacità di fornire gli stimoli meccanici necessari da parte delle cellule. C&#39;è stato un crescente interesse nella scaffold invertito cristallo colloidale (ICC), uno sviluppo recente, che consente un&#39;elevata organizzazione spaziale, omotipica e interazioni cellula heterotypic, così come matrice di interazione cellula-extracellulare (ECM). Qui, descriviamo un protocollo per fabbricare patibolo ICC utilizzando poli (glicole etilenico) diacrilato (PEGDA) e il metodo di lisciviazione delle particelle. Brevemente, un reticolo è costituito da particelle di microsfere, dopo di che un pre-polymesi aggiunge soluzione r, correttamente polimerizzato, e le particelle vengono poi rimosso o dilavati, utilizzando un solvente organico (ad esempio, tetraidrofurano). La dissoluzione dei risultati reticolari in un ponteggio altamente porosa con dimensione dei pori controllati e interconnectivities che permettono media per raggiungere le cellule più facilmente. Questa struttura unica permette elevata area superficiale per le cellule di aderire come pure facile comunicazione tra i pori, e la capacità di rivestire il ICC scaffold PEGDA con proteine ​​mostra anche un effetto marcato sulla prestazioni della cella. Analizziamo la morfologia del patibolo, così come la cella di epatocarcinoma comportamento (Huh-7.5) in termini di fattibilità e la funzione di esplorare l&#39;effetto della struttura ICC e rivestimenti ECM. Nel complesso, questo documento fornisce un protocollo dettagliato di una impalcatura emergente che ha ampie applicazioni in ingegneria dei tessuti, in particolare l&#39;ingegneria dei tessuti del fegato.

I risultati rappresentativi per la caratterizzazione strutturale del ponteggio CPI e il confronto di efficacia ogni ICC di condizione di ponteggio in coltura epatociti sono illustrati e spiegati di seguito. Le condizioni ICC scaffold utilizzati in questi risultati sono rivestimenti collagene 0 pg / ml (Bare), 20 mg / ml (collagene 20), 200 mg / ml (collagene 200), e 400 mg / ml (collagene 400) e l&#39;iniziale huh-7.5 numero di semina cellulare è 1x10 6. <p class="jove_con...

Questo manoscritto presenta un protocollo dettagliato per la fabbricazione di una piattaforma di coltura di epatociti tridimensionale emergente, l'impalcatura di cristalli colloidali invertiti e le tecniche concomitanti per valutare il comportamento degli epatociti. I pori controllabili in base alle dimensioni, l'interconnettività e la capacità di coniugare le proteine della matrice extracellulare all'impalcatura di poli(glicole etilenico) (PEG) migliorano le prestazioni delle cellule Huh-7.5.

Fabbricazione di invertito colloidale cristallo poli (glicole etilenico) Scaffold: una piattaforma Cell Culture tridimensionale per il fegato Tissue Engineering

The ability to maintain hepatocyte function in vitro, for the purpose of testing xenobiotics&#39; cytotoxicity, studying virus infection and developing ...

L'obiettivo generale di questa procedura è fabbricare impalcature a cristallo colloide invertito a base di PEG con una matrice extracellulare codificata per applicazioni nell'ingegneria tissutale del fegato. L'ingegneria tissutale del fegato rappresenta un settore promettente nell'ambito dell'ingegneria tissutale e della medicina rigenerativa. Stiamo creando impalcature tridimensionali ingegnerizzate che permettono alle cellule epatiche di mantenere la loro funzionalità per un lungo periodo.Le implicazioni di questa tecnica si estendono al test farmacologico, poiché le cellule epatiche coltivate con questo sistema potrebbero mantenere la loro funzionalità più a lungo e rispondere meglio ai farmaci. Sebbene questo metodo possa fornire spunti importanti per l'ingegneria tissutale, può essere applicato anche ad altri sistemi, come quelli che utilizzano cellule staminali. A dimostrare la procedura sarà Hitomi, una studentessa laureata del mio laboratorio.Per preparare gli stampi in microperline, tagliare innanzitutto le punte di provette microcentrifughe resistenti all'ebollizione da 0,2 millilitri al livello di 40 microlitri. Utilizzare una colla impermeabile per fissare le parti superiori delle provette tagliate su coprioggetti di vetro per microscopio e quindi applicare colla intorno agli stampi. Successivamente, sostituire l'acqua in un flaconcino di microsfere di polistirene con etanolo al 70%.Collocare la soluzione di sfere in un bagno ad ultrasuoni e sottoporre il composto a sonificazione a 30 watt per tre minuti per disperdere le sfere aggregate. Una volta preparate le microsfere, pipettare 100 microlitri di etanolo in ciascuno degli stampi. Quindi, tagliare quattro millimetri dalla parte superiore di una punta per pipetta da 200 microlitri e utilizzarla per pipettare 25 microlitri di microsfere di polistirene nello stampo due volte.Posizionare gli stampi su un agitatore rotante e impostarlo a 120 giri al minuto. Lasciare i campioni sull'agitatore per tutta la notte. Il giorno successivo, posizionare gli stampi sotto un microscopio e verificare che le sfere siano disposte in modo esagonale. Lasciare evaporare l'etanolo a temperatura ambiente per due notti. A questo punto, posizionare con attenzione il complesso stampo e perline in un forno a 130 gradi Celsius per sei ore per ricotturare le perline di polistirene e formare la controforma dello scaffold 3D. Per prima cosa, sintetizzare i macromeri di diacrilato di polietilene glicole utilizzando protocolli consolidati, come descritto in queste due referenze.Successivamente, preparare una soluzione al 50% di PEGDA in acqua deionizzata e centrifugare il miscuglio fino a quando non è completamente disciolto. Per gli scaffold coniugati con matrice extracellulare, aggiungere un ulteriore 10% di olio di krill PEG NHS alla soluzione di PEGDA al 50%. Quindi, preparare una soluzione madre al 20% dell'iniziatore fotochimico in etanolo al 70%.Aggiungere 50 microlitri di soluzione del foto-iniziatore per ogni millilitro della miscela di PEGDA. Successivamente, vortexare la miscela per un minuto. Poi, rimuovere con cura gli stampi dalle lamelle di vetro, espellere delicatamente i reticoli utilizzando una spatola e posizionarli in tubi centrifuga separati da 1,5 millilitri.Introdurre con una pipetta 300 microlitri della soluzione di PEGDA in ogni provetta, quindi centrifugare le provette per permettere alla soluzione di PEGDA di infiltrarsi nel reticolo di polistirene. Successivamente, rimuovere il reticolo dalla provetta utilizzando pinzette ed asciugare delicatamente l'eccesso di soluzione di PEGDA dalla superficie. Posizionare il reticolo su un vetrino coperto di pellicola di paraffina, con la superficie piatta e circolare rivolta verso l'alto.Quindi, esporre l'impalcatura alla luce ultravioletta di 365 nanometri per cinque minuti utilizzando una lampada UV a spot. Posizionare circa dieci reticoli cristallini polimerizzati di PEGDA in un nuovo vial e aggiungere 20 millilitri di THF. Agitare i vial su un agitatore orbitale a 300 giri al minuto per sei ore.Rimuovere la provetta ogni una o due ore e sostituire il solvente contenente il polimero con THF fresco. Dopo l'ultimo risciacquo, aggiungere acqua alla soluzione di THF usata per verificare se le sferette di PS si sono completamente disciolte. Se la soluzione appare bianca, eseguire ulteriori risciacqui finché la soluzione non diventa trasparente.Per sterilizzare gli scaffold, preparare un tubo da microcentrifuga da 50 millilitri con due millilitri di etanolo al 70% per ogni scaffold e inserire gli scaffold nel tubo utilizzando una spatola. Lasciare in ammollo gli scaffold nell'etanolo per un'ora. Trascorsa un'ora, versare con attenzione l'etanolo e sostituirlo con un volume equivalente di PBS sterile.Quindi, centrifugare gli scaffold per rimuovere eventuali bolle d'aria. Conservare gli scaffold centrifugati a quattro gradi Celsius e rimuoverli ogni una o due ore per sostituire la soluzione con PBS fresco. Dopo alcune sostituzioni con PBS, rimuovere gli scaffold da rivestire con collagene e posizionarli in un tubo contenente un millilitro di collagene di tipo uno per ogni scaffold da rivestire.Successivamente, centrifugare il tubo come in precedenza, quindi agitare gli scaffold a 400 giri al minuto su un agitatore orbitale per 30 minuti. Conservare gli scaffold durante la notte a quattro gradi Celsius. Coltivare cellule di epatocarcinoma in piatti per coltura cellulare da 100 millimetri con 10 millilitri di mezzo di coltura.Cambiare il mezzo ogni tre giorni fino a quando la densità cellulare raggiunge il 75-80% della superficie di coltura. Quando le cellule sono pronte, posizionare con attenzione i supporti con la superficie piatta rivolta verso l'alto in una piastra a 24 pozzetti. Successivamente, lavare ogni supporto con due millilitri di PBS.Aspirare il PBS e aggiungere due millilitri di mezzo di crescita ai supporti. Dopo 30 minuti, rimuovere il mezzo e lasciare asciugare il supporto per un'ora. Successivamente, raccogliere le cellule di epatocarcinoma utilizzando il metodo di digestione con tripsina.Dopo aver centrifugato le cellule, rimuovere il soprannatante e risospendere il pellet in modo da ottenere un milione di cellule per 25 microlitri. Pipettare lentamente 25 microlitri della sospensione cellulare direttamente sopra ciascun scaffold. Quindi, coprire la piastra e collocarla nell'incubatrice per tutta la notte.Successivamente, trasferire con attenzione gli scaffold in una nuova piastra a 24 pozzetti e pipettare due millilitri di mezzo in ciascun pozzetto prima di rimettere la piastra nell'incubatore. Qui viene mostrato un microscopio elettronico a scansione dello scaffold. È costituito da un impacchettamento esagonale compatto di pori con un diametro medio compreso tra 100 e 105 micron, che forma interconnessioni con i pori adiacenti, prevalentemente con diametro compreso tra 35 e 40 micron.Quando seminati con cellule di epatocarcinoma, le cellule si sviluppano e proliferano sui supporti precedentemente rivestiti con collagene di tipo uno, ma non si espandono in numero sui supporti nudi. Inoltre, le cellule di epatocarcinoma sui supporti rivestiti con collagene hanno mostrato una maggiore funzionalità cellulare in modo dipendente dalla concentrazione. Al giorno 14, le cellule di epatocarcinoma coltivate sui supporti ICC rivestiti con 400 microgrammi per millilitro hanno secreto più del triplo della quantità di albumina rispetto a quelle coltivate sul supporto nudo.Nel tentativo di eseguire questa procedura, è importante ricordare di verificare che le sfere di polistirene nel reticolo siano disposte correttamente. Una disposizione inadeguata porterà a una scarsa interconnettività, che può influenzare negativamente l'attività cellulare. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come fabbricare impalcature a base di PEG con cristalli colloidali invertiti e rivestimento.Ricordare che lavorare con tetraidrofurano può essere pericoloso e che è sempre necessario adottare precauzioni come operare in una cappa aspirante e indossare guanti e occhiali protettivi durante l'esecuzione di questa procedura.

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Descriviamo un chip basato su piattaforma per il tridimensionale coltura di cellule in micro-bioreattori. Un chip in grado di ospitare fino a 10 milioni. cellule che possono essere coltivate in condizioni ben definite in relazione al flusso del fluido, tensione ecc ossigeno in una sterile, la circolazione ad anello chiuso.

Basato su chip tridimensionale coltura cellulare in perfuso Micro-bioreattori

I progressi nelle tecnologie dei biomateriali consentono lo sviluppo di costrutti tridimensionali di tipo multicellulare. Abbiamo sviluppato protocolli di elettrofilatura per produrre tre scaffold individuali per coltivare le principali cellule strutturali delle vie aeree per fornire un modello 3D in vitro della parete dei bronchioli delle vie aeree.

Adattamento del processo Electrospinning per fornire tre ambienti unici per un Tri-livello<em&gt; In Vitro</em&gt; Modello della parete delle vie aeree

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Un modello biomimetico per il cancro al fegato per studiare le interazioni tumore-stroma in un ambiente 3D con proprietà bio-fisiche tonnibili

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Scopri la fabbricazione di scaffold a cristallo colloidale invertito in PEG per l'ingegneria tissutale epatica. Questo metodo tridimensionale migliora la funzionalità delle cellule Huh-7.5 per test farmacologici avanzati.

Fabbricazione di invertito colloidale cristallo poli (glicole etilenico) Scaffold: una piattaforma Cell Culture tridimensionale per il fegato Tissue Engineering (Video) | JoVE Journal

Fabbricazione di invertito colloidale cristallo poli (glicole etilenico) Scaffold: una piattaforma Cell Culture tridimensionale per il fegato Tissue Engineering

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