Name: Sviluppo di un modello colite Antigen-driven per studiare presentazione di antigeni da cellule presentanti lantigene alle cellule T (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Scopri un modello di colite antigen-driven per studiare le interazioni tra fagociti mononucleati CX3CR1+ e cellule T CD4+ nella lamina propria intestinale. Questo metodo permette di monitorare gli eventi immunitari durante lo sviluppo della malattia.

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Come per ogni altro modello, il modello di colite antigene-driven sopra descritto può presentare alcuni problemi che il ricercatore di eseguire la tecnica deve essere a conoscenza. Quando si somministra l&#39;OT-II / cellule Rosso + CD4 + T + CD62L dei padroni di casa, l&#39;investigatore deve essere molto dolce e attento a inserire l&#39;ago nella cavità peritoneale. In caso contrario si può provocare la lacerazione della nell&#39;intestino del topo che potrebbe portare alla morte, o un...

L&#39;intestino è il più grande superficie del corpo che è esposto all&#39;ambiente esterno. array Vaste di microbi residenti colonizzano l&#39;intestino umano per formare il microbiota intestinale (o microflora). Questo è stimato a contenere fino a 100 trilioni di cellule microbiche e costituisce uno degli habitat batteriche più densamente popolate noti in biologia 1-3. Nel GIT batteri colonizzare una nicchia intestinale dove sopravvivono e si moltiplicano 4. In cambio, il microbiota dota l&#39;host con l&#39;aggiunta di caratteristiche funzionali non codificati sul suo genoma 1. Ad esempio il microbiota stimola la proliferazione delle cellule epiteliali, produce vitamine che ospita non possono produrre da soli, regola il metabolismo e protegge contro gli agenti patogeni 4-6. Dato questo rapporto vantaggioso, alcuni autori hanno suggerito che gli esseri umani sono &quot;super-organismi&quot; o &quot;holobionts&quot; che sono un mix di batteri e umane geni 7,8. Dato l&#39;impatto positivo del microbiota sull&#39;host (umana), il sistema immunitario intestinale deve tollerare microbi commensali per consentire la loro esistenza nel lume, ma anche uccidere gli agenti patogeni che invadono dal lato luminale 9-11. Il sistema immunitario intestinale ha messo a punto meccanismi per distinguere tra microbi luminali innocui e potenzialmente nocivi; tuttavia questi meccanismi non sono ancora ben compresi 12. Mantenere l&#39;integrità intestinale richiede un omeostasi immunitaria strettamente regolata per mantenere l&#39;equilibrio tra tolleranza e immunità 13. Uno squilibrio nella omeostasi immunitaria contribuisce alla induzione di malattie intestinali come la malattia infiammatoria intestinale (IBD) 3,14. Ci sono due principali tipi di IBD: malattia di Crohn (CD) e la colite ulcerosa (UC). I pazienti affetti da queste malattie in genere soffrono di sanguinamento rettale, diarrea grave e dolore addominale 15,16. La singola causa di IBD è ancorasconosciuta, ma una combinazione di fattori genetici, influenze ambientali e le risposte immunitarie sregolati potrebbe essere l&#39;evento chiave per lo sviluppo della malattia 15. Modelli animali per IBD sono stati utilizzati da oltre 50 anni. Negli ultimi decenni sono stati sviluppati nuovi sistemi modello IBD per testare le varie ipotesi riguardanti la patogenesi delle IBD 17,18. Il modello più caratterizzato di colite cronica è il modello di trasferimento di cellule T che induce rottura dell&#39;omeostasi delle cellule T 19,20. Questo modello prevede il trasferimento di cellule T naive da topi immunocompetenti in host che mancano T e cellule B (come RAG - / - e topi SCID) 16,21. Lo sviluppo della malattia in questo modello è monitorato per 3-10 settimane valutando la presenza di diarrea, ridotta attività fisica, e perdita di peso corporeo. Questo si chiama così la sindrome da deperimento 16. Rispetto al topi sani i tessuti del colon degli eserciti trapiantati è Thicker, più corto e più pesante 16. Utilizzando il modello di trasferimento di cellule T, è possibile comprendere come differenti popolazioni di cellule T possono contribuire alla patogenesi delle IBD 22. Il modello di trasferimento di cellule T non analizza le interazioni tra APC e cellule T nel processo della malattia in modo antigene-specifica. È stato dimostrato che una interazione tra cellule mieloidi e cellule linfoidi potrebbe essere responsabile per lo sviluppo di infiammazione intestinale 23. Anche se molti aspetti della IBD sono stati chiariti, gli eventi iniziali che portano allo sviluppo della malattia devono ancora essere ben compreso. È stato dimostrato che, in assenza del trasferimento microbioti colite non può essere stabilita 24. Recentemente, diverse teorie suggeriscono che IBD potrebbe essere il risultato di una risposta immunitaria contro batteri commensali 25. Gli autori hanno anche proposto che batteri commensali sono essenziali per indurre infiammazione nell&#39;intestino distale26. In assenza di germi (GF) animali il sistema immunitario intestinale è generalmente compromessa 27,28, ma una colonizzazione di questi topi con una miscela di connessione specifici patogeni batteri risultati nello sviluppo della completamente competente sistema immunitario intestinale 29. Quindi, il microbioti sembra essere un elemento chiave nella patogenesi delle IBD, sia come meccanismo che predispone o protegge contro lo sviluppo di infiammazione intestinale 30,31. Teorie attuali suggeriscono che IBD è il risultato di uno squilibrio microbico, chiamato disbiosi, in pazienti geneticamente predisposti 32, ma non è ancora chiaro se il disbiosi è la causa o la conseguenza della malattia 12. Considerando il ruolo dei microrganismi nello sviluppo di IBD, esperimenti in vitro hanno dimostrato che le cellule T CD4 + possono essere attivati ​​da APC pulsate con batteri intestinali 33,34. Inoltre, è stato dimostrato che gli antigeni dadiverse specie batteriche commensali, come E. coli, Bacteroides, Eubacterium e Proteus, sono in grado di attivare le cellule T CD4 + 35. Ciò indica che la presentazione di antigeni batterici a cellule T è di importanza per lo sviluppo delle IBD. Per ridurre la complessità di molteplici antigeni derivati ​​dalla microflora nel processo di malattia, un ceppo di E.coli è stato creato che produce l&#39;antigene OVA. Trasferimento colite è stata indotta iniettando cellule T OVA-specifici in RAG - / - animali colonizzato con OVA esprimono E. coli. Questo modello si basa su recenti prove che suggeriscono che CX 3 CR1 + parlamentari, un importante sottoinsieme di cellule nel colon lamina propria (CLP) 36, interagiscono con le cellule T CD4 + durante il trasferimento colite 37. Parlamentari campione lume intestinale per l&#39;antigene di particelle, come i batteri, usando i loro dendriti 36, 38,39. Studi precedentidimostrato che mp può anche assumere antigeni solubili, come OVA, introdotti nel intestinale lume 40,41. Data l&#39;abbondanza di CX 3 CR1 + parlamentari nel CLP, è possibile che queste cellule possono assaggiare i batteri luminali e interagire con le cellule T CD4. Confocale di topi trapiantati con cellule specifiche per OVA T CD4 + colonizzati con E. coli CFP-OVA, dimostrano che CX 3 CR1 + mp sono in contatto con cella OT-II + T CD4 durante lo sviluppo di colite antigene-indotta. Questo modello permette lo studio del processo di presentazione dell&#39;antigene tra APC intestinali e linfociti T specifici solo per particolari batteri antigene esprimendo nel lume intestinale.

<table><tbody><tr><td>LB Brodo, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>Frullato Rotante</td><td>Reiss Laborbedarf e. K.</td><td>Modello 3020 GFL</td><td></td></tr><tr><td>2 mm gap couvette&nbsp;</td><td>Peqlab Biotechnologie GmbH</td><td>71-2020</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gene Pulser Xcell system&nbsp;</td><td>BioRad Laboratories GmbH</td><td>1652660</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244510</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393-5G</td><td></td></tr><tr><td>SOC Medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1797-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Kit di isolamento di plasmidi ad alta purezza</td><td>Roche</td><td>11754777001</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Carl Roth GmbH & Co</td><td>3810.1</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884-100G</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5941</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico glaciale</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Camera del gel&nbsp;</td><td>PEQLAB Biotechnology GmbH</td><td>40-0708</td><td></td></tr><tr><td>Caricamento del colorante</td><td>Thermo Fisher</td><td>R0611</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler 1 kb Scala del DNA&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>SM0312</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di bromuro di etidio</td><td>Carl Roth GmbH & Co. KG</td><td>2218.3</td><td></td></tr><tr><td>Sistema di documentazione fotografica&nbsp;</td><td>Decon Science Tech GmbH</td><td>DeVision G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sequenziamento del DNA&nbsp;</td><td>MWG-Biotech GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Biochrom</td><td>L182-50</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>HBO 100</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra System</td><td>Bio-Rad Laboratories GmbH</td><td>1658005</td><td></td></tr><tr><td>PageRuler Scala di proteine prestate&nbsp;</td><td>Fermentas, St. Leon-Rot, Germania</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IstanBlue Solution</td><td>Expedeon, Cambridgeshire, Regno Unito</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Membrana in nitrocellulosa</td><td>Macherey-Nagel GmbH & Co. KG</td><td>741280</td><td></td></tr><tr><td>Electro blotter&nbsp;</td><td>Biometra GmbH</td><td>846-015-600</td><td></td></tr><tr><td>Albumine sieriche bovine (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6003-25G</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-ovoalbumina&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab181688</td><td></td></tr><tr><td>IgG anti-coniglio HRP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0545&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pierce ECL Plus Western Blotting Substrato Pierce</td><td>Biotechnology, Thermo Fischer Scientific Inc</td><td>32132</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott</td><td>2594.00.00</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10500-064</td><td></td></tr><tr><td>Filtri cellulari Falcon</td><td>Fischer Scientific&nbsp;</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di ammonio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>254134-5G</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10708976001</td><td></td></tr><tr><td>CD4+ CD62 L+ Kit di isolamento T&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-227&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Colonne MACS LS&nbsp;</td><td>Colonne Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MS&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Separatore MidiMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>Separatore MiniMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Ago di alimentazione 20G</td><td>SouthPointe Surgical Supply, Inc</td><td>FN-7903</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di formalina, neutra tamponato, 10%</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Paraffina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1496904</td><td></td></tr><tr><td>Ematossilina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9627</td><td></td></tr><tr><td>Eosina Y</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>230251&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotreitolo</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi di tipo VIII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-2139</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) medium</td><td>AppliChem</td><td>A2044, 9050</td><td></td></tr><tr><td>Sodio azide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>438456</td><td></td></tr><tr><td>Topo BD Fc Block</td><td>BD Pharmingen</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>legame mAb coniugato con FITC V&szlig; 5.1, 5.2&nbsp;</td><td>BD Pharmingen</td><td>553189</td><td></td></tr><tr><td>CD4 GK1.5 legante l'anticorpo monoclonale coniugato con APC&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>17-0041-83</td><td></td></tr><tr><td>FACS Calibur</td><td>BD Biosciences</td> FCS Express V3 software DeNovo Microscopio confocale <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td> a scansione Meta&nbsp;<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Zeiss</td><td>LSM 710&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Workstation</td><td>Zeiss</td><td>LSM 7</td><td></td></tr><tr><td>Software Zeiss ZEM&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>v4.2.0.121</td><td></td></tr><tr><td>Piastre immunoimetriche Maxisorp&nbsp;</td><td>NUNC, Roskilde</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>Fosfatasi alcalina coniugata con streptavidina</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>016-050-084</td><td></td></tr><tr><td>Substrato di fosfatasi alcalina 4-nitrofenil fosfato sale disodico esaidrato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71768-5G</td><td></td></tr><tr><td>mAb R4-6A2</td><td>BD Biosciences</td><td>551216</td><td></td></tr><tr><td>mAb XMG1.2&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>554410</td><td></td></tr><tr><td>Lettore ELISA per micropiastre TECAN</td><td>Software Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasyWin</td><td>4536282001</td> ricombinante Tecan <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>DNase I</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sviluppo di un modello colite antigen-driven per studiare presentazione di antigeni da cellule presentanti l&#39;antigene alle cellule t

Development of an Antigen-driven Colitis Model to Study Presentation of Antigens by Antigen Presenting Cells to T Cells

La malattia infiammatoria intestinale (IBD) è un'infiammazione cronica che colpisce il tratto gastrointestinale (GIT). Uno dei modi migliori per studiare i meccanismi immunologici coinvolti durante la malattia è il modello di trasferimento delle cellule T della colite. In questo modello, i topi immunodeficienti (riceventi di RAG-/-) vengono ricostituiti con cellule T CD4+ naive provenienti da ospiti sani di tipo selvatico.
Questo modello consente l'esame dei primi eventi immunologici che portano a malattie e infiammazioni croniche, quando l'infiammazione intestinale si perpetua ma non dipende da un antigene definito. Per studiare il potenziale ruolo delle cellule presentanti l'antigene (APC) nel processo patologico, è utile disporre di un modello di malattia guidato dall'antigene, in cui un antigene derivato dal commensale definito porta alla colite. È stato quindi sviluppato un modello di colite guidata dall'antigene. In questo modello le cellule T CD4+ OT-II, in grado di riconoscere solo epitopi specifici nella proteina OVA, vengono trasferite in ospiti RAG-/- sfidati con E. coli che esprime CFP-OVA. Questo modello consente l'esame delle interazioni tra APC e cellule T nella lamina propria.

Per stabilire un modello di colite antigene-driven di E. coli è stato costruito che contiene un plasmide in cui il gene per la PCP è fusa alla sequenza codificante per la proteina di pollo ovalbumina e il costrutto di fusione è espresso sotto il controllo del promotore forte costitutivo P iper (Figura 1A). Microscopia fluorescente dimostra che il ricombinante E. coli PCFP-OVA, ma non il parentale E. coli DH10B, es...

In questo modello di colite guidata dall'antigene, le cellule T CD4+ OT-II che esprimono una proteina fluorescente rossa sono state trasferite adottivamente in topi RAG-/- che esprimono una proteina fluorescente verde nei fagociti mononucleati (MP). Gli ospiti sono stati sfidati con Escherichia coli (E.coli) che esprime la proteina dell'ovoalbumina (OVA) fusa con una proteina fluorescente ciano (CFP).

Sviluppo di un modello colite Antigen-driven per studiare presentazione di antigeni da cellule presentanti l&#39;antigene alle cellule T

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological ...

L'obiettivo generale di questo modello di colite indotta da antigene è determinare se i fagociti mononucleari positivi per CX3CR1 interagiscono con e attivano linfociti T CD4 positivi durante la colite specifica per antigene e se questa espansione dei linfociti T effettrici dipendente dai fagociti mononucleari avviene all'interno della lamina propria intestinale. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo delle malattie infiammatorie intestinali, come ad esempio quali tipi di interazione avvengano tra le cellule presentanti l'antigene e i linfociti T effettrici nella lamina propria del colon. Il principale vantaggio di questa tecnica è che consente lo studio delle interazioni tra cellule immunitarie e dei fattori che portano alla patogenicità delle malattie infiammatorie intestinali.Questo metodo utilizza il modello di colite mediante trasferimento di cellule T, in cui cellule T naive CD4 specifiche per l'antigene, fluorescenti rosse, vengono trasferite in un ospite immunodeficiente che esprime la proteina fluorescente verde nelle cellule mononucleate. Successivamente al trasferimento cellulare, si somministra per via orale, mediante sondino, batteri esprimenti un antigene fluorescente blu. Gli eventi immunitari che si verificano nella lamina propria intestinale degli ospiti possono essere monitorati in diverse fasi dello sviluppo della malattia.Utilizzare forbici da dissezione per aprire longitudinalmente il colon e lavare il tessuto in una piastra di Petri contenente 25 millilitri di PBS per rimuovere eventuali detriti e muco. Tagliare il colon in pezzi di cinque-otto millimetri e posizionare i frammenti risultanti in 20 millilitri di DPBS fresco senza calcio e magnesio, integrato con 10 millimoli di HEPES e 5 millimoli di EDTA. Vortexare il tubo con il campione per 30 secondi alla velocità massima.Quindi, incubare a 37 gradi Celsius per dieci minuti con agitazione delicata per rimuovere l'epitelio. Al termine dell'incubazione, vortexare nuovamente per 30 secondi. Successivamente, eliminare il soprannatante contenente le cellule epiteliali.Trasferire i pezzi di tessuto in un nuovo tubo contenente 20 millilitri di PBS fresco, tampone HEPES ed EDTA ed eseguire nuovamente l'incubazione con i passaggi di vortexaggio prima e dopo. Dopo la terza ripetizione, tutte le cellule epiteliali sono state rimosse e il soprannatante risulta limpido. Lavare delicatamente i frammenti di tessuto in PBS per rimuovere eventuali cellule epiteliali residue.Tagliare i frammenti di tessuto in pezzi di due per due millimetri e trasferirli per la digestione in dieci millimetri di mezzo RPI, integrato con 0,5 milligrammi per millilitro di collaghenasi di tipo otto e dieci unità per millilitro di DNAasi uno. Vortexare i campioni per 30 secondi. Successivamente, incubare i pezzi di tessuto a 37 gradi Celsius con agitazione per 30-35 minuti, vortexando il tubo ogni cinque minuti durante l'incubazione.Una volta che il tessuto è stato digerito, filtrare la sospensione risultante attraverso un filtro cellulare da 70 micron in un tubo conico da 50 millilitri. Lavare il filtro cellulare una volta e centrifugare per ottenere il pellet della sospensione di cellule singole. Infine, lavare le cellule una volta in PBS e centrifugare.Quindi, determinare il numero di cellule vitali mediante esclusione del blu di tripano. La proteina della ovalbumina fluorescente ciano prodotta da e. coli attiva la produzione di interferone gamma nelle cellule OT-II in vitro, a differenza di e.coli che esprimono solo CFP. L'imaging confocale 3D ex vivo del tessuto colonico di topi transgenici che esprimono la proteina fluorescente verde, alimentati con uova di e. coli PCFP, dimostra la presenza di batteri che esprimono la proteina fluorescente all'interno delle cripte coliche vicino alle cellule epiteliali intestinali e co-localizzati con i fagociti intestinali dell'ospite.In animali OT-II rossi, le cellule T positive per CD4 sono caratterizzate dalla loro co-espressione di proteina fluorescente rossa e V beta cinque punto uno. Quando vengono sfidati con e. coli PCFP ova, topi transgenici deficienti di linfociti BNT che esprimono proteina fluorescente verde e che sono stati sottoposti a trapianto adottivo di cellule T positive per CD4 OT-II rosse e positive per CD62 ligando perdono rapidamente peso corporeo e sviluppano segni clinici di colite.Sette giorni dopo il trasferimento delle cellule, solo pochi fagociti dell'ospite hanno campionato le uova di e. coli PCFP e le cellule OT-II positive al rosso non vengono rilevate. Quattordici giorni dopo il trasferimento cellulare, i fagociti dell'ospite che hanno campionato l'e.le uova di e. coli PCFP si trovano in prossimità delle cellule OT-II di colore rosso trasferite in modo adottivo. A 21 giorni dal trasferimento cellulare, un elevato numero di cellule dell'ospite ha riconosciuto le uova di e. coli PCFP e le cellule OT-II di colore rosso del donatore, che si riscontrano diffuse nell'intera lamina propria del colon, sono in contatto stretto con i fagociti intestinali dell'ospite.Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in quattro ore se eseguita correttamente. Dopo questo procedimento, altri metodi come la colorazione dei linfociti intestinali e l'analisi delle citochine sieriche possono essere effettuati per rispondere ad ulteriori domande riguardo lo stato di attivazione delle cellule T CD4 e per confermare la gravità della colite. Dopo ogni sviluppo, questa tecnica apre la strada alla ricerca nel campo dell'immunologia per esplorare i piccoli eventi che portano alla malattia infiammatoria intestinale nel modello murino.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come isolare le cellule immunitarie della lamina propria del colon per l'analisi ex vivo successiva.

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Qui, dettaglio una metodologia per l'isolamento rapido delle cellule dendritiche di topo intestinali (DCS) e macrofagi. Caratterizzazione fenotipica di DC intestinali e macrofagi viene eseguita utilizzando multi-color analisi citometrica mentre magnetica arricchimento tallone seguita dalla selezione cellulare viene utilizzato per produrre le popolazioni di elevata purezza per gli studi funzionali.

Isolamento e caratterizzazione di cellule dendritiche ei macrofagi dall&#39;intestino mouse

Questo video dimostra una tecnica per generare un modello murino di colite indotta da sostanze chimiche, una malattia infiammatoria intestinale. Al topo è consentito consumare una soluzione di destrano solfato di sodio (DSS) per una durata adeguata. Dopo il consumo, il DSS danneggia il muco e la barriera dello strato epiteliale nel colon, consentendo ai microbi intestinali di entrare nel tessuto sottostante, dove vengono percepiti dalle cellule immunitarie residenti per mediare una risposta...

Una tecnica per generare un modello murino di colite indotta da destrano solfato di sodio

DNBS / TNBS colite indotta offre un metodo alternativo e poco costoso per studiare la pathobiology delle malattie infiammatorie intestinali. Il protocollo descritto in questo documento delinea l'applicazione di successo di DNBS per indurre colite in topi e ratti e permette di studiare a fondo le risposte intestinale ospite-mediata.

DNBS / TNBS Colite Modelli: Fornire Insights Into malattia infiammatoria intestinale e gli effetti di grassi

Qui, presentiamo un protocollo per indurre l'infiammazione del colon nei topi mediante trasferimento adottivo di cellule T singeniche CD4+CD45RBin riceventi carenti di cellule T e B. Le caratteristiche cliniche e istopatologiche imitano le malattie infiammatorie intestinali umane. Questo metodo consente lo studio dell'inizio dell'infiammazione del colon e della progressione della malattia.

Induzione di Murine infiammazione intestinale per trasferimento adottivo di Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Alto</sup&gt; T Cells in topi immunodeficienti

Esistono sottogruppi distinti di cellule dendritiche come popolazioni rare negli organi linfoidi, e quindi sono difficili da isolare in numero e purezza sufficienti per esperimenti immunologici. Qui descriviamo un metodo ad alta efficienza e ad alta resa per l'isolamento di tutti i principali sottogruppi attualmente noti di cellule dendritiche spleniche di topo.

Un metodo del rendimento efficiente e di alta per l&#39;isolamento di mouse dendritiche sottopopolazioni cellulari

Descriviamo qui un modello di topo reporter transgenico per visualizzare le cellule produttrici di IL-22 all'interno di diversi tessuti di topo. Questo metodo può essere utilizzato per tracciare la posizione di altre citochine o proteine secretarie nel topo.

Visualizzazione di IL-22 che esprimono Linfociti Utilizzando topi Reporter

Murino colostomia distale fornisce un modello murino per colite di diversione umana, una colite linfocitaria prevalentemente nel segmento del colon escluso dal flusso fecale.

Murino colostomia distale, un nuovo modello di colite di diversione in topi C57BL/6

Il protocollo presenta un modello murino completo convalidato dalla TNBS della malattia di Crohn e metodi per la visualizzazione dei recettori estrogeni mediante immunosofochimica utilizzando l'immunofluorescenza delle sezioni del colon fissato in formalina incorporate nella paraffina.

Visualizzazione dei recettori degli estrogeni nei coloni dei topi con la malattia di Crohn indotta da TNBS utilizzando l'immunofluorescenza

In questo protocollo, viene descritto un modello di colite di trasferimento adottivo delle cellule T antigene-antigene specifico per l'intestino. Le cellule T CD4+ sono isolate da topi transgenici CBir1 TCR. Questi sono specifici per un antigene del microbiota intestinale immunodominante CBir1 flagellina, che viene trasferito nei topi Rag1-/- riceventi, portando all'infiammazione intestinale.

Induzione dell'infiammazione intestinale mediante trasferimento adottivo di cellule T CBir1 TCR transgeniche CD4 + a topi immunodeficienti

Un nuovo metodo DC indipendente per l'induzione e l'espansione di antigene-specifica delle cellule T è descritta. HLA-A2 Ig Cellule artificiali basati Antigen Presenting (aAPC) vengono caricati con HLA-A2 peptidi limitato ad ampliare in modo efficace CTL di specificità antigenica diversi. Questa tecnologia ha un grande potenziale per CTL-immunoterapia adottiva.

HLA-Ig celle in base Antigen Presenting artificiale per Efficiente Ex vivo Estensione dei diritti dell&#39;uomo e CTL

Scopri un modello di colite antigen-driven per studiare le interazioni tra fagociti mononucleati CX3CR1+ e cellule T CD4+ nella lamina propria intestinale. Questo metodo permette di monitorare gli eventi immunitari durante lo sviluppo della malattia.

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Sviluppo di un modello colite Antigen-driven per studiare presentazione di antigeni da cellule presentanti l'antigene alle cellule T

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