28 giugno 2016
Questo articolo descrive un protocollo semplice e riproducibile per manipolare le condizioni di ossigeno disciolto in un ambiente di laboratorio per gli studi di comportamento animale. Questo protocollo può essere utilizzato in entrambe le impostazioni di insegnamento e laboratorio di ricerca per valutare la risposta organismal di macroinvertebrati, pesci, anfibi o alle variazioni di concentrazione di ossigeno disciolto.
L'obiettivo generale di questo metodo è quello di manipolare in modo efficace e incrementale l'ossigeno disciolto o le condizioni di ossigeno disciolto in un ambiente di laboratorio. Consentire l'osservazione delle risposte comportamentali degli animali acquatici. La cosa bella di questo metodo è che può avere applicazione per una serie di esperimenti sul comportamento animale.
Sia per vertebrati che per invertebrati. Il vantaggio principale di questa tecnica è che può essere implementata sia per l'insegnamento in classe che per scopi di ricerca. In un sito sul campo selezionato, entro un'ora di transito dal laboratorio, sono state utilizzate le procedure di rete a pedale stander per raccogliere almeno 35 mosche di pietra.
Dal ruscello, raccogli quattro litri di acqua del ruscello per acquario. Più altri tre litri per esperimento. Oltre a diverse rocce con un diametro massimo di due centimetri.
Tornati in laboratorio, distribuisci le rocce in acquari posti in frigorifero, imposta la temperatura del sito del torrente. E aggiungi quattro litri di acqua di ruscello a ciascun acquario. Quindi, aggiungi da 20 a 30 stoneflies a ciascun acquario.
E posiziona una pietra gorgogliante attaccata a un gorgogliatore per acquari, in ogni vasca per aggiungere continuamente aria ambiente all'acqua. Dopo due giorni, collegare un tubo a vuoto a parete standard al braccio laterale di un pallone laterale da due litri. E riempi il pallone con un punto nove litri di acqua di ruscello a 12 gradi Celsius.
Posizionare il pallone e il tubo su un vassoio abbastanza grande da contenere un bagno di ghiaccio senza oscurare la vista dell'interno del pallone a braccio laterale. E riempi la teglia con ghiaccio. Inserire una sonda di OD in un foro da tre millimetri di un tappo di gomma preparato su misura.
E un tubo di rame di due millimetri di diametro dotato di un accoppiatore maschio da tre millimetri attraverso un altro foro da tre millimetri. Fino a quando la lunghezza del tubo dal fondo del tappo è entro 10 centimetri dal fondo del pallone. Collegare all'accoppiatore un tubo del gas di tre millimetri di diametro in polietilene a parete sottile virgola zero.
Verificare che la tenuta sia ben salda tra il tappo e il pallone, nonché che si adatti perfettamente tra il tubo e il filo della sonda all'interno del tappo. È fondamentale che i tappi e i tubi siano ben sigillati per mantenere un ambiente di pressione uguale nel recipiente durante l'esperimento e per evitare perdite di azoto dal recipiente. Metti il tubo di polietilene in un pallone da un litro contenente zero virgola quattro litri di acqua di rubinetto e fissa il tubo con del nastro adesivo per mantenere le estremità sommerse durante l'esperimento.
Quindi, collegare la linea del gas di tre millimetri di diametro dal pallone sottovuoto a un gorgogliatore d'aria per la stanza dell'acquario. E accendi il gorgogliatore per ossigenare l'acqua nel pallone da due litri con l'ossigeno ambientale. Utilizzare la sonda DO per monitorare la temperatura dell'acqua e la concentrazione di DO per circa cinque minuti.
Fino a quando non viene stabilito un equilibrio del DO all'interno della camera. Prima di aggiungere le stoneflies, posiziona tre o quattro rocce nel pallone da due litri in modo che gli insetti abbiano un rettilineo sub favorevole alle flessioni. Quindi iniziò una manipolazione di prova del DO scollegando il tubo del gas dal gorgogliatore e collegandolo alla linea del gas azoto.
Inizia a far gorgogliare l'azoto a 20 piedi cubi all'ora per circa 40-60 secondi. Interrompere il flusso di azoto immediatamente dopo aver raggiunto la concentrazione target. Utilizzare il gorgogliatore d'aria della stanza dell'acquario per tornare alla concentrazione target se il DOD si piega al di sotto del target.
Se il DO è instabile durante il test, controllare che il volume dell'acqua sia ancora in un punto di nove litri e che non sia fuoriuscita acqua. La temperatura dell'acqua è stabile e le guarnizioni di tutti i raccordi sono chiuse ermeticamente. Dopo aver riequilibrato l'allestimento, aggiungere alla fiaschetta un numero uguale di mosche di pietra come osservatori.
E richiudere il pallone con un tappo di gomma. Far bollire l'acqua come appena dimostrato fino a raggiungere una concentrazione target di 10 milligrammi per litro. Quindi, registrare la temperatura dell'acqua di avviamento.
E lascia che i pannoci si attacchino al sottomarino di roccia direttamente nel pallone. Ogni osservatore conterà e registrerà quindi il numero di flessioni mostrate da una singola mosca di pietra nell'arco di tre minuti. Quindi, manipolare il DO al livello sperimentale successivo e ripetere l'osservazione di tre minuti.
In questa figura, il numero medio di flessioni eseguite all'interno di un livello di DO e all'interno di ciascuna delle sei prove è stato estratto per tracciare le flessioni rispetto al livello di DO. Per questi esperimenti, solo la concentrazione di DO ha influenzato significativamente il numero di flessioni eseguite dai pippoci. Senza altre variabili o interazioni, dimostrando un predicatore significativo del numero di push up.
Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere riprodotta per soddisfare gli obiettivi specifici stabiliti dal ricercatore. Durante il tentativo di questa procedura, è importante evitare variazioni di temperatura, in quanto ciò potrebbe comportare cambiamenti nella DO. Con questa procedura, altri metodi, come quelli che cambierebbero il PH, possono essere utilizzati per rispondere a domande aggiuntive sui cambiamenti di PH e DO sugli organismi acquatici. Dopo aver visto questo video, dovresti avere la capacità di eseguire la manipolazione dell'ossigeno disciolto in un ambiente di laboratorio per una serie di esperimenti sul comportamento animale.
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Questo articolo descrive un protocollo semplice e riproducibile per manipolare le condizioni di ossigeno disciolto in un ambiente di laboratorio per studi sul comportamento animale. Questo metodo consente l'osservazione delle risposte comportamentali di animali acquatici sia in contesti didattici che di ricerca.
Questo protocollo consente una manipolazione controllata dell'ossigeno disciolto per studiare le risposte comportamentali in organismi acquatici, supportando la validazione di bersagli in neurofarmacologia e tossicologia ambientale. Fornendo un metodo riproducibile per indurre condizioni ipossiche o anossiche, esso contribuisce alla riduzione del rischio meccanicistica di composti che influenzano le vie di rilevamento dell'ossigeno. L'approccio è scalabile da laboratori didattici a schermature ad alto rendimento, offrendo un valore predittivo per fenotipi comportamentali associati alla disponibilità di ossigeno.
Il metodo si inserisce nel percorso di scoperta che va dal test dell'ipotesi sul bersaglio all'identificazione del composto attivo, in particolare per composti che agiscono su meccanismi di rilevamento dell'ossigeno.