Novel RNA-Proteine ​​leganti isolamento dalla rapida Metodologia

L'obiettivo generale di questa procedura è isolare in modo efficiente l'RNA specifico con le proteine associate all'RNA in vivo. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave sul metabolismo e la regolazione dell'RNA, come ad esempio cosa sia un insieme distinto di fau-bee-pees legato a un particolare trascritto. Il vantaggio principale di questa tecnica è l'elevata efficienza dell'isolamento, che consente l'identificazione di follow-up di proteine associate all'mRNA nobile.

La metodologia rapida utilizza un ceppo di lievito che co-esprime l'MRNA marcato con MS2 e una proteina di fusione di una proteina legante MS2 e di una proteina legante la streptavadina. Coltiva 500 millilitri di cellule di lievito a 30 gradi Celsius in destrosio sintetico o terreno selettivo SD fino a un OD600 da 0,8 a 1,0. Quando le celle sono pronte, centrifugare a 3000 volte G per 4 minuti a temperatura ambiente ed eliminare il surnatante.