Simmetrica Bihemispheric Postmortem cervello taglio per studiare sano e patologico del cervello Condizioni di esseri umani

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di raccogliere e analizzare sistematicamente una serie costante di regioni cerebrali sezionate simmetricamente da entrambi gli emisferi del cervello umano al fine di valutare la gravità, la stadiazione patologica clinica e la distribuzione emisferica di varie malattie cerebrali. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della neuropatologia, fornendo una raccolta organizzata in modo sistematico di dati neuropatologici qualitativi e quantitativi per correlazioni cliniche patologiche dettagliate e per immagini. Il vantaggio principale di questa tecnica consiste nel fornire dati rilevanti relativi ai processi patologici di per sé e all'aspetto istofunzionale specializzato di ciascun emisfero cerebrale.

Dopo aver fissato il tessuto cerebrale umano post-mortem secondo il protocollo di testo, posizionare il cervello su una superficie piana con i poli frontali diretti di fronte all'investigatore. Orientare il cervello per consentire una visualizzazione completa e chiara di tutte le circonvoluzioni corticali e dei solchi dell'intero cervello. Esaminare il tessuto per anomalie meningee, asimmetrie emisferiche macroscopiche, fedeltà tissutale macroscopica, malformazioni congenite, anomalie dei vasi o qualsiasi altra anomalia o presentazione insolita della superficie cerebrale.

Con i poli frontali orientati lontano dall'investigatore e gli aspetti superficiali degli emisferi rivolti verso l'investigatore, scattare tutte le foto digitali necessarie per documentare possibili macro anomalie e per tenere conto di possibili considerazioni cliniche, neurali, anatomiche e post-taglio. Scatta foto digitali perpendicolarmente al cervello per catturare l'intera superficie corticale. Quindi, utilizzando inchiostro o aghi colorati, segnare il giro corticale pre e post centrale.

Successivamente, con i poli frontali ancora rivolti verso l'esterno, capovolgere il cervello di 180 gradi, quindi ispezionare attentamente la base del cervello prestando particolare attenzione ai sistemi cerebrovascolari e ai nervi cranici a livello di uscita e di ingresso del tronco encefalico. Gestire i bulbi olfattivi e i tratti con particolare attenzione per evitare lacerazioni dei tessuti dovute alla loro estrema fragilità. Scatta fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per catturare l'intera superficie corticale e del tronco encefalico.

Rivolto verso la base del cervello e usando un bisturi, tagliare il tronco encefalico trasversalmente nella parte superiore del ponte il più vicino possibile alla base del cervello. Ispezionare attentamente la substantia nigra per verificare la presenza di pallore e ispezionare altre strutture vicine. Utilizzando un dispositivo di registrazione audio, prendi nota di qualsiasi aspetto insolito del cervello rispetto a un cervello normale.

Qui, il bulbo olfattivo e il tratto degli emisferi sinistro e poi destro vengono sezionati. Capovolgere il cervello e, usando un coltello affilato, seguire una direzione fronto-occipitale per separare i due emisferi tagliando il corpo calloso centralmente attraverso la fessura longitudinale mediale. Ispezionare ogni lato di ciascun emisfero per individuare eventuali anomalie.

Dopo aver scattato tutte le foto necessarie, anche perpendicolarmente al cervello per catturare l'intera superficie corticale, posizionare i due emisferi in piano sdraiati sui loro aspetti mediali con i lobi frontali rivolti lontano dall'investigatore e con i loro centri che si toccano. Usando un coltello affilato, tagliare manualmente entrambi gli emisferi cerebrali partendo dai poli frontali e spostarsi verso i poli occipitali per l'intera lunghezza degli emisferi per ottenere due serie di lastre di tessuto cerebrale spesse un centimetro. Posiziona le lastre cerebrali in una sequenza anatomicamente organizzata e simmetrica su una superficie bianca piatta con un righello stampato su di essa per la fotografia.

Assicurarsi che le superfici coronali della lastra siano visibili per l'ispezione diretta degli occhi e la fotografia digitale. Utilizzare superfici di taglio con griglie millimetriche stampate su entrambi i lati per localizzare le strutture cerebrali, le dimensioni e le possibili anomalie in modo più accurato. Con le superfici coronali visibili, scatta fotografie digitali perpendicolarmente per catturare l'intera superficie corticale.

Prendi nota di qualsiasi aspetto insolito del cervello rispetto a un cervello normale. Successivamente, usando un bisturi affilato, seziona manualmente piccoli blocchi rettangolari di tessuto cerebrale per ogni regione cerebrale stabilita. Seguire lo schema di raccolta delle regioni cerebrali proposto descritto in questa tabella.

Crea i codici identificativi per etichettare le istocassette generando numeri casuali o semi-casuali per ogni caso in cui AD sta per Alzheimer's Disease Study, 16 sta per l'anno in cui è stata eseguita l'autopsia e 0001 è un numero progressivo del campione di adesione. Posizionare ogni blocco di tessuto in cassette istografiche separate. Scatta tutte le foto digitali descritte in precedenza dell'intero cervello tagliato e delle istocassette associate.

Dopo aver scattato una serie completa di foto, perforare pezzi di tessuto da due a cinque millimetri per l'estrazione del DNA e l'analisi genetica. Infine, immergere tutte le istocassette contenenti blocchi di tessuto cerebrale nello stesso tipo di soluzione fissativa utilizzata in precedenza ed elaborare il tessuto secondo il protocollo di testo. Questa tabella descrive alcuni dati semiquantitativi preliminari utilizzando una procedura di taglio del cervello biemisferico simmetrica eseguita su una serie di cervelli umani raccolti nella banca del cervello.

I dati preliminari mostrano che la maggior parte dei cervelli di controllo di soggetti più anziani erano effettivamente positivi per le placche neuritiche beta-A e i grovigli tau-neurofibrillari e che i livelli di placche neuritiche beta-A insolubili erano più alti nella corteccia entorinale sinistra e nell'ippocampo rispetto alle stesse regioni cerebrali sul lato destro. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in un'ora per i cervelli fissi e in due ore per i cervelli freschi se viene eseguita correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che seguendo lo schema di taglio proposto, raccogliere ogni regione cerebrale da entrambi gli emisferi in base a precise conoscenze anatomiche umane.

Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi come l'estrazione di DNA, RNA o proteine per rispondere a ulteriori domande, come ad esempio quali sono i livelli di attivazione di un gene specifico in una specifica regione del cervello in un emisfero specifico in una specifica malattia cerebrale. Ad ogni diffusione, questa tecnica aprirà la strada ai ricercatori nel campo della neuropatologia, della patologia clinica e della correlazione della patologia per immagini per esplorare gli aspetti patologici correlati all'emisfero di varie malattie neuropsichiatriche. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come raccogliere specifiche regioni anatomiche da entrambi gli emisferi del cervello umano per valutare la gravità della malattia, lo stadio patologico della malattia e la distribuzione emisferica dei diversi processi neuropatologici.

Non dimentichiamo che lavorare con il cervello umano è lavorare con la storia di una persona con circuiti neuroanatomici complessi e possibilmente con diverse patologie e che lame, bisturi, formalina devono essere maneggiati con estrema precauzione.