Name: Simmetrica Bihemispheric Postmortem cervello taglio per studiare sano e patologico del cervello Condizioni di esseri umani (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Impara la procedura di sezione cerebrale biemisferica simmetrica su tessuto post-mortem umano per studiare la distribuzione emisferica delle patologie. Questo metodo fornisce dati neuropatologici organizzati per correlazioni cliniche e di imaging.

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Ringraziamo le migliaia di donatori di cervello, pazienti, famiglie e neuroscienziati in tutto il mondo che, durante gli ultimi due secoli e attraverso i loro generosi doni e sforzi intellettuali, hanno contribuito a scoprire come funziona il cervello umano, a comprendere le devastanti malattie cerebrali e a sviluppare i relativi trattamenti. Ringraziamo in particolare la signora Cecilia V. Feltis per l'edizione e la revisione di questo manoscritto.

Le procedure che coinvolgono tessuti umani postmortem sono stati esaminati dal comitato di revisione istituzionale e esentato ai sensi 45 CFR (Code of Federal Regulations). NOTA: Il protocollo descrive una procedura di taglio del cervello bihemispheric simmetrica per la valutazione del cervello post-mortem finalizzato per gli studi neuropatologici negli esseri umani. saranno esclusi descrizioni dettagliate degli apparati, strumenti, materiali e rifornimenti necessari per eseguire il taglio cervello umano. Materiali e forniture per dissezioni del cervello vengono scelti a discrezione del singolo ricercatore e si basano su strumenti autopsia consentiti o approvati ad ogni istituto di ricerca. Il set minimo di strumenti e materiali necessari per questa procedura è descritta nella tabella Materiale / attrezzature. Procedure di taglio specifica e precauzioni di sospette malattie del cervello trasmissibili, come la CJD umana, sono al di fuori degli obiettivi di questo manoscritto e sono disponibili da altre fonti 7. 1. simmetrica Biemisferica taglio del cervello Nota: Assicurarsi che il cervello ha ricevuto il fissaggio del tessuto necessario (utilizzando, per esempio, neutra tamponata formalina al 10%) per un periodo di due o tre settimane, a seconda della periagonal, metaboliche (cioè, pH), e tessuti conservazione ( cioè, temperatura) condizioni. Tuttavia, per gli studi di correlazione di immagini-patologia, un periodo di fissaggio più lungo (&gt; 5,4 settimane) è stato suggerito 8. <ol><li> Posizionare il cervello su una superficie piatta rivolta sperimentatore, con i poli frontali rivolte in direzione opposta rispetto al ricercatore. </li><li> Posizionare il cervello in modo tale da consentire una visualizzazione chiara e completa di tutti gyri corticale e solchi dell&#39;intero cervello (Figura 1a). </li><li> Primo sguardo per anomalie meningee, asimmetrie emisferiche macroscopici (possibili indicatori di focale, lobare o fenomeni emisferici generalizzati di atrofia), lesioni tissutali macroscopiche (vale a dire, Tumors o ernia), malformazioni congenite, anomalie dei vasi e qualsiasi altre anomalie possibili o presentazioni inusuali della superficie cerebrale. NOTA: Per una descrizione dettagliata su come valutare un cervello umano, si riferiscono a libri di testo neuropatologia disponibili in commercio e manuali autopsia 9,10. </li></ol> 2. Il protocollo Sequenza <ol><li> Faccia poli frontali dal ricercatore, con gli aspetti superficiali della emisferi (telencefalo) di fronte al ricercatore. Prendere come molte immagini digitali, se necessario in ciascun caso particolare, per documentare eventuali macro-anomalie e per tenere conto di eventuali considerazioni clinico-neuroanatomico e post-taglio. Avere un assistente di ricerca scattare fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per catturare tutta la superficie corticale (Figura 1a - c). </li><li> Mark pre e circonvoluzioni corticali postcentrale con inchiostro o aghi colorati prima di tagliare il cervello (Figura 1b </sTrong&gt;). NOTA: Questa procedura facilita un riconoscimento più immediato del motore e somatosensoriale cortecce primarie dopo il taglio. </li><li> Ruotare il cervello di 180 gradi mantenendolo nella stessa direzione (cioè, i poli frontali rivolti verso l&#39;investigatore). Ispezionare con cura la base del cervello. Prestare particolare attenzione alle condizioni dei sistemi cerebrovascolari (ad esempio, le arterie basilari e vertebrali e il circolo di Willis) e dei nervi cranici al loro tronco livelli uscita / ingresso. Gestire i bulbi olfattivi e tratti con particolare attenzione per evitare lacerazioni tissutale, a causa della loro estrema fragilità. <ol><li> Prendere come molte immagini digitali, se necessario in ciascun caso particolare, per documentare eventuali macro-anomalie e per tenere conto di eventuali considerazioni clinico-neuroanatomico e post-taglio. Avere un assistente di ricerca scattare fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per acquisire la totalità delle superfici corticali e del tronco cerebrale. </li&gt; </ol></li><li> Di fronte alla base del cervello e utilizzando un bisturi, tagliare il tronco cerebrale trasversalmente a livello della parte superiore del ponte (il più vicino possibile alla base del cervello). Ispezionare con cura il SN (ad esempio, per il pallore) 11 e altre strutture vicine 12. Prendete nota, possibilmente utilizzando un dispositivo registratore audio, di qualsiasi aspetto insolito del cervello rispetto ad un cervello normale 13. </li><li> Anche in questo caso ruotare il cervello di 180 gradi e, con un coltello affilato, separare i due emisferi tagliando il corpo calloso centralmente attraverso la fessura longitudinale mediale e seguendo una direzione fronto-occipitale. Controllare ciascun lato di ciascun emisfero eventuali anomalie (ad esempio, ingrandimenti ventricolari, malformazioni, ammorbidenti dei tessuti, tumori, ecc) 13. Vedere la Figura 2a. <ol><li> Prendere come molte immagini digitali, se necessario in ciascun caso particolare, per documentare eventuali anomalie macro-eper tenere conto di eventuali considerazioni clinico-neuroanatomico e post-taglio. Avere un assistente di ricerca scattare fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per catturare tutta la superficie corticale. Prendete nota di ogni caratteristica insolita del cervello rispetto ad un cervello normale. </li></ol></li><li> Posizionare i due emisferi piatta, sdraiato sul loro aspetti mediale, con i lobi frontali rivolto verso l&#39;investigatore, come mostrato nella Figura 2b. Metterli in modo che i loro centri toccano (anche in caso di asimmetria emisferica marcato). </li><li> Con un coltello tagliente, tagliare manualmente attraverso entrambi gli emisferi cerebrali, partendo ai poli frontali e spostando verso i poli occipitali attraverso l&#39;intera lunghezza degli emisferi. Ottenere due serie di 1 cm di spessore blocchi di tessuto cerebrale (circa 18 lastre per ogni emisfero). </li><li> Collocare le lastre cerebrali in un anatomicamente organizzata (direzione fronto-occipitale) sequenza su una superficie piana separata. Utilizzare un surfa biancoCe con un righello stampato su di essa per un migliore contrasto quando si fotografa. Visualizzare le due serie di lastre cerebrali in modo anatomicamente simmetrica (direzione fronto-occipitale), facendo in modo che le loro superfici coronali sono visibili per l&#39;ispezione oculare diretto e fotografia digitale (Figura 3a). Utilizzare le superfici di taglio con griglie millimetriche stampati su entrambi i lati di localizzare strutture cerebrali, dimensioni e possibili anomalie in maniera più accurata. <ol><li> Prendere come molte immagini digitali, se necessario in ciascun caso particolare, per documentare eventuali macro-anomalie e per tenere conto di eventuali considerazioni clinico-neuroanatomico e post-taglio. Avere un assistente di ricerca scattare fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per catturare tutta la superficie corticale. Prendere appunti (eventualmente utilizzando un dispositivo registratore audio), di qualsiasi aspetto insolito del cervello rispetto ad un cervello normale. </li></ol></li><li> Usando un bisturi affilato, sezionare manualmente piccoli blocchi rettangolari ditessuto cerebrale per ciascuna regione cerebrale stabilito. Seguire lo schema regione raccolta cerebrale proposto descritto nella tabella 1. <ol><li> Mettere ogni blocco di tessuto in histocassettes etichettati separatamente. NOTA: Ogni blocco di tessuto cerebrale deve essere tagliato per adattarsi, per quanto possibile, la histocassette standard di massimo volume (30 x 20 x 4 mm 3). </li><li> Etichettare i histocassettes utilizzando un codice di de-identificazione per ogni caso e utilizzando identificatori neuroanatomiche specifici (non utilizzare lettere o numeri casuali per diversi cervelli, anzi, utilizzare sempre lo stesso regionale nomi anatomiche o numeri corrispondenti, come illustrato nella Tabella 1). Creare codici de-identificazione, per esempio, generando numeri casuali o semi-casuali per ciascun caso (cioè, BRC 130, dove B rimane per Brain, R rimane per Resource, C rimane per Center e 130 è una adesione progressiva o AD160001, dove AD sta per &quot;studio sulla malattia di Alzheimer&quot;, 16 è ilanno in cui l&#39;autopsia è stata eseguita (2016), e il 0001 un numero campione di adesione progressivo). NOTA: Questo passaggio è molto utile per i futuri ricercatori; mantenere una leggenda, e specificare l&#39;emisfero (L = emisfero sinistro, R = emisfero destro). Utilizzare due colori diversi di histocassettes, che istituisce un colore specifico per ciascun emisfero. </li><li> Prendere come molte immagini digitali, se necessario in ciascun caso particolare, per documentare eventuali macroanomalies e per tenere conto di eventuali considerazioni clinico-neuroanatomico e post-taglio. Avere un assistente di ricerca scattare fotografie digitali perpendicolarmente al cervello per catturare tutta la superficie corticale. Prendete nota di ogni caratteristica insolita del cervello rispetto ad un cervello normale. </li></ol></li><li> Scattare foto digitali (come molti come necessario o desiderato) di tutto il cervello taglio e le histocassettes associati. </li><li> Punch (ad esempio, Accu-punch) piccoli pezzi di tessuto per l&#39;estrazione del DNA e analisi genetiche. Usoun punzone di 2 - 5 mm di diametro. NOTA: Per il suo alto contenuto di materiale genomico, il cervelletto è la scelta preferita; Tuttavia, qualsiasi altra regione va bene. </li><li> Re-immergere tutti histocassettes contenenti blocchi di tessuto cerebrale nello stesso tipo di soluzione fissativa (ad esempio, 10% di formalina neutra tamponata) come precedentemente usato fino alla successiva fase di trattamento dei tessuti. </li><li> Seguire le procedure standard per il trattamento del tessuto fissato in formalina umano 14. </li></ol> 3. un approccio particolare: alternata congelata e Fixed taglio simmetrico Bihemispheric NOTA: Il simmetrica bihemispheric protocollo taglio cervello descritto nella sezione 2 offre la possibilità di taglio di lastre di tessuto da non fissati, cervelli freschi (ove disponibili) nello stesso modo sistematico e simmetrica. <ol><li> Inserire l&#39;intero cervello fresco capovolto (preferibilmente su una superficie di plastica ciotola-like semisferica) per 8 - 10 min in un -80 ° C freezer per indurire il tessuto cerebrale without provocando danni biochimici e per facilitare il taglio manuale. </li><li> Con un coltello affilato, tagliate entrambi gli emisferi in un supplente e maniera consecutiva, seguendo il protocollo di taglio del cervello descritto nella Sezione 2, ma congelare e risolvere ogni altra lastra (da entrambi gli emisferi e lungo una direzione anatomica fronto-occipitale). <ol><li> A questo punto, non cercare di tagliare ciascuna regione cerebrale, come descritto nella Tabella 1. Tagliare specifiche regioni cerebrali freschi solo se necessario per l&#39;RNA immediata o estrazione di proteine (ad esempio, per studi di genomica e proteomica) 15. </li></ol></li><li> Dopo il taglio, immediatamente congelare, etichetta, e il numero di ogni tessuto fresco. Scattare foto digitali di tutta la serie lastra; imballare ogni lastra in un unico sacchetto di plastica; raccogliere le lastre in un one-cervello solo contenitore separato,; e conservare il contenitore in un apposito -80 ° C freezer. NOTA: Il congelatore dovrebbe essere dedicato a un solo tessuto cerebrale umano. Solo più tardi canteràLe regioni del cervello congelato essere tagliati come richiesto per ogni esperimento specifico. </li><li> Immergere ogni altra lastra tessuto scelto per la fissazione (formalina neutra tamponata 10% o altro fissativo) in sacchetti separati contenenti un volume sufficiente di fissativo (3/1 volume di rapporto / tessuto-block fissativo). Etichettare ogni borsa numerando consecutivamente loro secondo una sequenza fronto-occipitale. Sigillare ogni sacchetto, scattare foto digitali, e memorizzarli in un contenitore di plastica. </li><li> Aprire i sacchetti fissativo contenente dopo 2 settimane di fissaggio del tessuto e tagliare ciascuna regione cerebrale come descritto nella Tabella 1. </li></ol> 4. Histostain ed immunoistochimica NOTA: L&#39;insieme delle regioni cerebrali taglio basa sullo schema proposto (Tabella 1) sono sufficienti per soddisfare i criteri patologici maggior parte, se non tutti, a base di consenso al momento stabilito per AD 16, PD 17, demenza con corpi di Lewy (DLB) 18, demenza frontotemporale (FTD / MND) <sup&gt; 19, Progressive Suprabulbar paralisi (PSP) 20, Atrofia multisistemica (MSA) 21, traumatica cronica encefalopatia (CTE) 22, ecc. <ol><li> Per ogni regione del cervello e per entrambi gli emisferi, eseguire la seguente set minimo di histostains: ematossilina e eosina (H &amp; E), violetto cresolo (CV; se studi morfometrici quantitativi sono previsti, per esempio), e la colorazione argento (se le analisi &quot;esplorativi&quot; sono necessario). </li><li> Per ogni regione del cervello e per entrambi gli emisferi, eseguire la seguente set minimo di protocolli di immunoistochimica: ß amiloide (β A), fosforilata-Tau (pTau), fosforilata α-sinucleina (pα-sin), e fosforilata-TDP43 (pTDP43) , come descritto 14. NOTA: Il numero totale di sezioni di tessuto al fine di valutare ogni cervello seguendo questo protocollo è di 46 (se sono disponibili tutte le regioni cerebrali da entrambi gli emisferi). </li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Questo metodo cervello di taglio può essere adattata alle esigenze specifiche di ogni laboratorio neuropatologia (per esempio, riducendo il numero di regioni cerebrali valutare per ogni emisfero) pur mantenendo la procedura di taglio simmetrica bihemispheric come una delle sue caratteristiche principali. Questo protocollo proposto potrebbe essere utilizzato per le procedure di routine (centri neuropatologici orientate alla ricerca) o solo quando necessario (studi specifici clinicamente orientati). Può essere utilizzato ...

Neuropatologi hanno il privilegio scientifica, l&#39;onore intellettuale, e l&#39;obbligo di diagnostica per valutare il cervello umano. Per molti decenni, descrizioni cliniche dettagliate delle malattie del cervello e grandi sforzi per individuare le possibili correlati neuroistologici nel cervello post-mortem umani sono stati intrapresi. Storicamente, questi sforzi hanno rappresentato la modalità più produttivo con cui le scienze mediche, e la neurologia in particolare, avanzato in epoca moderna. Grazie alle precedenti neuropatologi eminenti e la loro dedizione, determinazione, borse di studio, e la capacità sorprendente di discriminare tra normale e anormale tessuti cerebrali (spesso utilizzando strumenti molto rudimentali), possiamo ora indagare e malattie in questione come il morbo di Alzheimer-Perusini (ingiustamente solo chiamato il morbo di Alzheimer malattia; APD / AD) 1, il morbo di Parkinson (PD) 2, malattia di Creutzfeldt-Jakob (CJD) 3, il morbo di Lou Gehrig-/ Sclerosi laterale Sclerosis (ALS) 4, e Guam malattie 5, per citarne alcuni. Tecniche avanzate di neuroimaging, come ad alta definizione tomografia computerizzata (vale a dire, TAC spirale multisection; TC), la risonanza magnetica funzionale e morfologica (vale a dire, fMRI, diffusione-MRI, trattografia-MRI, ecc), Positron Emission Tomography (PET), di imaging ad ultrasuoni a base, e altri, hanno certamente modificato il nostro approccio generale su come diagnosticare e curare i pazienti neurologici e psichiatrici. Tuttavia, anche se le tecniche neuroimaging sono in grado di visualizzare cervello di una persona da vivo, non offrono la possibilità, al momento che si verificano, ad analizzare direttamente le strutture cellulari e subcellulari altamente complessi di cellule, come i neuroni; o di visualizzare, segno, e quantificare tipi specifici di lesioni intracellulari; o per indicare con precisione la loro localizzazione neuroanatomico o subregionale a circuitale e sub-livelli anatomiche circuitali. Ad esempio, le tecniche di neuroimaging non possono identificare o localizzare corpi di Lewy (LB) nei neuroni pigmentati della sostanza nera (SN), una caratteristica patologica comune associato con PD, o grovigli neurofibrillari (NFT) nella corteccia entorinale, una caratteristica classica di AD e altre patologie cerebrali. indagini neuropatologici combinati con microscopio digitale avanzato sono ancora insostituibile per le correlazioni clinico-patologici dettagliati e, quindi, per le diagnosi definitive. A causa delle proprietà peculiari anatomo-funzionale del cervello umano, e in particolare alla sua localizzazione anatomica (cioè all&#39;interno del cranio, un sistema di protezione naturale che non consente l&#39;esame diretto del suo contenuto), l&#39;introduzione di tecniche di neuroimaging in vivo avere i clinici straordinariamente aiutato e gli investigatori per trovare le risposte iniziali ad alcuni dei misteri di questo tessuto complesso. Tuttavia, non vi è alcuna clinico o neuroimagimetodologia ng che può sostituire l&#39;opportunità unica di analizzare direttamente il tessuto cerebrale durante l&#39;autopsia. Solo la raccolta organizzata, la conservazione, e la categorizzazione dei cervelli umani può permettere indagini dirette e sistematiche dei neuroni e cellule non neuronali, i loro costituenti subcellulari, intracellulare e lesioni patologiche extracellulari, e qualsiasi tipo di anomalia all&#39;interno del cervello per confermare, modificare o ridefinire le diagnosi cliniche e di scoprire nuove correlazioni clinico-patologiche. Uno dei limiti apparenti relativi alla valutazione del cervello all&#39;autopsia è stato il fatto che questa procedura è una metodologia trasversale. Ci sarà sempre un ritardo tra un processo continuo neuropathological (clinicamente manifesta o meno) e la possibilità, se del caso, per definire al livello neuroistologici. Ciò è dovuto principalmente alla incapacità del cervello umano di rigenerarsi. Al momento non è possibile ottenere tessuto cerebrale in vivo senza creare pedanni rmanent. Di conseguenza, non è possibile longitudinalmente e neuropatologicamente valutare la stessa cervello / persona. Tuttavia, le procedure cervello bancari standardizzati e una maggiore consapevolezza per la donazione del cervello presso il grande pubblico potrebbe notevolmente contribuire alla risoluzione dei problemi di temporizzazione cervello autopsia dal costantemente aumentando il numero di casi per raccogliere e analizzare. In questo modo, il numero più adeguati di cervelli autoptici potrebbero essere ottenuti per definire i modelli costanti di origine patologica e progressione per ogni specifico tipo di lesione cerebrale associata a ciascuna malattia cervello umano. Ciò richiederebbe donazione e raccolta del maggior numero possibile di cervelli di pazienti affetti da qualsiasi disturbo neuropsichiatrici, nonché da soggetti sani di controllo di tutte le età. Un metodo possibile potrebbe essere raccogliendo il maggior numero di cervelli autoptici possibile da centri medici generici e specializzati come una routine standard. La necessità di donazioni del cervello è stato recentemente espressoda parte di coloro che studiano la demenza e normale invecchiamento 6. La stessa necessità dovrebbe essere espresso dal campo neuropsichiatrici nel suo complesso. Per il suddetto e per altre ragioni, un aggiornamento delle procedure di taglio cerebrale in corso è necessario. Inoltre, il cervello procedure di taglio deve essere universalmente standardizzato tra i diversi centri di ricerca neuropatologia in tutto il mondo, anche prendendo in considerazione la possibilità di ricorrere a tecniche biotecnologiche attuali e futuri per indagare meglio e, si spera, per capire definitivamente, le cause ei meccanismi delle malattie cerebrali in gli esseri umani. Qui, principalmente per scopi di ricerca, si descrive una metodologia simmetrica per il taglio del cervello post-mortem negli esseri umani. Questa procedura si propone la raccolta di regioni più cerebrale che normalmente fatto e da entrambi gli emisferi cerebrali e cerebellari. Una procedura bi-emisferica taglio cervello simmetrico si adatta molto meglio con la nostra attuale conoscenza umananeuroanatomia, neurochimica e neurofisiologia. Questo metodo consente anche la possibilità di analizzare neuropatologicamente le caratteristiche uniche del cervello umano, come la specializzazione emisferica e lateralizzazione che sono associati con alte funzioni cognitive e non cognitive tipicamente o esclusivamente presenti nella nostra specie. Se ci sono particolari rapporti patogenetici tra emisferica specializzazione / lateralizzazione e specifici tipi di lesioni cerebrali, o se un evento patogenetico neuropsichiatrica peculiare è inizialmente, prevalentemente, o esclusivamente associati con un emisfero specifica e la funzione non è attualmente noto. Descrivendo questa procedura di taglio del cervello simmetrica, il nostro obiettivo è quello di proporre un metodo aggiornato di dissezione del cervello umano che potrebbero aiutare a comprendere meglio le condizioni normali e patologiche in un tessuto altamente specializzato, il cervello. Questo metodo prende in considerazione anche quegli aspetti emisferiche morfo-funzionali che esistono solo negli esseri umani.

<table><tbody><tr><td>Copia del consenso informato firmato che consente l'autopsia e la donazione di cervello per uso di ricerca.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anamnesi clinica dettagliata del soggetto che dovrebbe includere una descrizione dettagliata di eventuali sintomi e segni neurologici e psichiatrici.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Video-registrazioni mediche o non mediche quando disponibili (particolarmente utili nel campo dei disturbi del movimento). Parente prossimo è richiesto il consenso di S.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neuroimaging, neurofisiologia, neuropsichiatria e valutazione o scale clinicometriche.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dati genetici e genealogici. I rapporti genetici esaminano, se sono state diagnosticate malattie neurogenetiche.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Contenitore per istologia</td><td>MICROSCOPIA ELETTRONICA SCIENCES</td><td>64233-24</td><td></td></tr><tr><td>Cassette per istologia</td><td>VWR</td><td>18000-142 (arancione)</td><td></td></tr><tr><td>Cassette per istologia</td><td>VWR</td><td>18000-132 (navy)</td><td></td></tr><tr><td>Manici di coltelli e lame monouso</td><td>MICROSCOPIA ELETTRONICA SCIENCES</td><td>62560-04</td><td></td></tr><tr><td>Lame lunghe</td><td>MICROSCOPIA ELETTRONICA SCIENCES</td><td>62561-20</td><td></td></tr><tr><td>Manico per coltello a lama usa e getta</td><td>MICROSCOPIA ELETTRONICA SCIENCES</td><td>72040-08</td><td></td></tr><tr><td>Lame per bisturi</td><td>MICROSCOPIA ELETTRONICA SCIENCES</td><td>72049-22</td><td></td></tr><tr><td>Accu-Punch 2 mm</td><td>MICROSCOPIA ELETTRONICA SCIENCES</td><td>69038-02&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Contenitori in polistirolo &ndash; Scheda di</td> dissezione sterile <td>ELECTRONIC MICROSCOPY SCIENCES</td><td>64240-12</td><td></td></tr><tr><td></td><td>ELECTRONIC MICROSCOPY SCIENCES</td><td>63307-30</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di formalina, tampone neutro, 10%</td> Soluzione di ematossilina <td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128 SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>, Gill n. 2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS280&nbsp; Soluzione SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y, acquosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT1102128&nbsp; SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>anti-beta-amiloide</td><td>Covance, Princeton, NJ</td><td>SIG-39220</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-tau</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MN1020</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-alfa-sinucleina</td><td>Abcam</td><td>ab27766</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-fosfo-TDP43</td><td>Cosmo Bio Co.</td><td>TIP-PTD-P02</td><td>1:2000</td></tr><tr><td></td><td>Macchina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sigillatrice A Impulsi A Teste&nbsp;</td><td>Grainger</td><td>5ZZ35</td><td></td></tr></tbody></table>

simmetrica bihemispheric postmortem cervello taglio per studiare sano e patologico del cervello condizioni di esseri umani

Symmetric Bihemispheric Postmortem Brain Cutting to Study Healthy and Pathological Brain Conditions in Humans

Neuropatologi, a volte, si sentono intimiditi dalla quantità di conoscenze necessarie per generare diagnosi definitive per fenomeni neuropsichiatrici complessi descritti in quei pazienti per i quali è stato richiesto un autopsia del cervello. Anche se i progressi delle scienze biomediche e di neuroimaging hanno rivoluzionato il campo neuropsichiatrico, ma hanno anche generato l&#39;idea fuorviante che le autopsie del cervello hanno solo un valore di conferma. Questa falsa idea creata una drastica riduzione dei tassi autopsia e, conseguentemente, una ridotta possibilità di eseguire indagini neuropatologiche più dettagliati ed estesi, che sono necessari per comprendere numerosi aspetti normali e patologici ancora sconosciute del cervello umano. Il metodo tradizionale inferenziale di correlazione tra i fenomeni osservati neuropsichiatrici e corrispondente localizzazione / caratterizzazione dei loro possibili correlati neuroistologici continua ad avere un valore innegabile. Nel contesto di neuropsychimalattie atric, il metodo clinico-tradizionale è ancora la migliore metodologia possibile (e spesso l&#39;unica disponibile) per collegare le caratteristiche neuropsichiatriche uniche per i loro corrispondenti substrati neuropatologici, dato che si basa in particolare sulla valutazione fisica diretta dei tessuti cerebrali. La valutazione del cervello post-mortem si basa su procedure che variano tra i diversi centri di neuropatologia taglio del cervello. talee cerebrali vengono eseguite in modo relativamente ampia e sistematica basata sulle varie contingenze cliniche e accademiche presenti in ogni istituzione. Una metodologia di taglio cervello bi-emisferico più anatomicamente inclusiva e simmetrica dovrebbe almeno essere utilizzato per scopi di ricerca in neuropatologia umana per indagare in modo coerente, in profondità, condizioni normali e patologiche, con le peculiarità del cervello umano (cioè, specializzazione emisferica e lateralizzazione per specifiche funzioni). Tale metodo fornirebbe un colle più completoction di cervelli neuropatologicamente ben caratterizzati disponibili per tecniche biotecnologiche e di neuroimaging attuali e future. Descriviamo una procedura simmetrica bi-emisferica taglio del cervello per la ricerca delle differenze emisferiche nelle patologie del cervello umano e per l&#39;uso con la corrente così come le future tecniche biomolecolari / neuroimaging.

protocollo Lunghezza Il tempo trascorso per una procedura unica di taglio simmetrico bihemispheric fisso cervello è stimato a 1 h (escluso il tempo trascorso l&#39;istituzione del tavolo di dissezione, strumenti, e il taglio delle superfici, l&#39;etichettatura,., Ecc). Il tempo necessario per un unico alternato bi-emisferica simmetrica congelato e fissa cervello procedura di taglio è stimata a prendere 2 ore. Si può pre...

procedure di taglio del cervello organizzati sono necessarie per correlare fenomeni neuropsichiatrici specifici con diagnosi neuropathologic definitive. talee cervello vengono eseguiti in modo diverso in base a varie contingenze clinico-accademico. Questo protocollo descrive una procedura simmetrica bihemispheric taglio del cervello per indagare le differenze emisferiche nelle patologie del cervello umano e per massimizzare le tecniche biomolecolari / neuroimaging attuali e future.

Simmetrica Bihemispheric Postmortem cervello taglio per studiare sano e patologico del cervello Condizioni di esseri umani

Neuropathologists, at times, feel intimidated by the amount of knowledge needed to generate definitive diagnoses for complex neuropsychiatric phenomena ...

L'obiettivo generale di questa procedura è raccogliere e analizzare sistematicamente una serie costante di regioni cerebrali dissezionate simmetricamente da entrambi gli emisferi del cervello umano, al fine di valutare la gravità, lo stadio clinico-patologico e la distribuzione emisferica di diverse malattie cerebrali. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo della neuropatologia, fornendo una raccolta sistematicamente organizzata di dati neuropatologici qualitativi e quantitativi per correlazioni dettagliate tra aspetti clinico-patologici e di imaging-patologia. Il principale vantaggio di questa tecnica consiste nella produzione di dati rilevanti relativi ai processi patologici in sé, nonché all'aspetto istofunzionale specializzato di ciascun emisfero cerebrale.Dopo aver fissato il tessuto cerebrale umano post-mortem secondo il protocollo descritto nel testo, posizionare il cervello su una superficie piana con i poli frontali rivolti in direzione opposta rispetto all'operatore. Orientare il cervello in modo da permettere una visualizzazione completa e chiara di tutti i giri e solchi corticali di tutto il telencefalo. Esaminare il tessuto alla ric

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La sclerosi multipla è una malattia demielinante infiammatoria senza cura. L'analisi del tessuto cerebrale fornisce importanti indizi per comprendere la patogenesi della malattia. Qui discutiamo la metodologia e l'analisi a valle del tessuto cerebrale MS raccolti attraverso un programma di autopsia rapida unico in funzione presso la Cleveland Clinic.

Programma completo di autopsia per persone con sclerosi multipla

Questo protocollo descrive un metodo per monitorare le singole traiettorie di invecchiamento cerebrale attraverso un programma di donazione di cervello e la corretta caratterizzazione del cervello. I donatori di cervello sono coinvolti in uno studio longitudinale a lungo termine che include valutazioni multidimensionali seriali. Il protocollo contiene una descrizione dettagliata dell'elaborazione del cervello e una metodologia diagnostica accurata.

Abbiategrasso Brain Bank Protocol per la raccolta, l'elaborazione e la caratterizzazione dei cervelli di invecchiamento

Presentiamo un protocollo pratico, passo-passo, rapido per la rimozione del cervello del topo e la dissezione di regioni discrete dal tessuto cerebrale fresco. Ottenere regioni cerebrali per l'analisi molecolare è diventato routine in molti laboratori di neuroscienze. Queste regioni cerebrali vengono immediatamente congelate per ottenere dati trascrittomici di alta qualità per l'analisi a livello di sistema.

Microdissezione del cervello di topo in regioni funzionalmente e anatomicamente diverse

Impara la procedura di sezione cerebrale biemisferica simmetrica su tessuto post-mortem umano per studiare la distribuzione emisferica delle patologie. Questo metodo fornisce dati neuropatologici organizzati per correlazioni cliniche e di imaging.

Simmetrica Bihemispheric Postmortem cervello taglio per studiare sano e patologico del cervello Condizioni di esseri umani

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