Un modello di rimodellamento cardiaco Attraverso Costrizione del Aorta addominale in Rats

L'obiettivo generale della procedura chirurgica è fornire una piattaforma semplice per lo studio dell'ipertrofia, del rimodellamento e della disfunzione miocardica. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave in campo cardiovascolare, come la segnalazione che coinvolge l'ipertrofia cardio e il rimodellamento. Così come la scoperta di nuovi bersagli terapeutici nella cardiopatia ipertensiva.

Il vantaggio principale di questa tecnica è che si tratta di un metodo minimamente invasivo che richiede tecniche chirurgiche molto semplici e tuttavia i risultati sono altamente riproducibili. Le implicazioni di queste tecniche si estendono alla nostra terapia della cardiopatia ipertensiva. Poiché la costrizione dell'aorta addominale induce un sovraccarico di pressione e alla fine porta a ipertrofia cardio, rimodellamento e insufficienza cardiaca.

Per iniziare, prepara un ago per siringa calibro 22 usando una pietra per levigare per smussare la punta. Quindi, usando una pinza, piegare l'ago ad angolo retto. Preparare i materiali chirurgici necessari, compresa la gabbia di recupero e l'autoclave degli strumenti chirurgici.

Mantieni i ratti intorno ai 200 grammi e tienili sotto cicli luce-buio di 12 ore a temperatura controllata con libero accesso a cibo e acqua. Posiziona il ratto in posizione supina su una piattaforma chirurgica con un termoforo per mantenere la temperatura corporea. Radere completamente l'area chirurgica per evitare la contaminazione della ferita attraverso il contatto con il pelo.

Quindi, con betadina o un altro reagente lenitivo, strofinare l'addome ben rasato. Successivamente, usando un bisturi, praticare un'incisione di due centimetri lungo la linea mediana dell'addome. Quindi, utilizzando una soluzione fisiologica, inumidire gli organi addominali e mantenere gli organi umidi durante l'intervento chirurgico.

Usando batuffoli di cotone, sposta con cura gli organi digestivi di lato per esporre la vena cava inferiore e la regione peritoneale posteriore. Quindi identificare l'aorta addominale che si trova giustapposta e di solito a sinistra della vena cava inferiore. Ora, con una pinza, perforare il peritoneo per scoprire i vasi sottostanti.

Isolare delicatamente l'aorta addominale adiacente alle arterie renali e passare una sutura di seta 4/0 lunga otto centimetri sotto il vaso tra le origini delle arterie renali destra e sinistra. Fai un doppio nodo sciolto con la sutura e lascia un anello di tre millimetri di diametro. Quindi posizionare l'ago calibro 22 smussato e piegato all'interno dell'anello.

Stringere il nodo attorno all'aorta e all'ago, quindi rimuovere immediatamente l'ago per ottenere una costrizione di 0,7 millimetri di diametro. Con punti di sutura 6/0 chiudere la cavità addominale. Quindi utilizzare semplici suture interrotte per chiudere le incisioni muscolari e cutanee.

Usa la tintura di iodio per strofinare il sito chirurgico per prevenire l'infezione. Per prevenire il dolore post-chirurgico, trattare l'animale con paracetamolo e osservare attentamente l'animale fino a quando non riacquista sufficiente coscienza, come indicato dal movimento libero e dall'assunzione di cibo, e mantiene la decubito sternale. A 10 settimane dall'intervento pesare il topo.

Dopo aver anestetizzato l'animale e confermato la profondità dell'anestesia, posizionare il ratto su un vassoio di metallo. Ora fai un'incisione di cinque centimetri nella regione toracica attorno alla linea mediana del processo xifoideo. Usando una pinza affilata perforare il diaframma.

Quindi, con le forbici, tagliare e rimuovere la gabbia toracica lungo le linee medioclavicolari su entrambi i lati per esporre il cuore. Asportare con cura il cuore lungo i bordi cardiaci e vascolari. Quindi rimuovere delicatamente il cuore senza afferrare il fazzoletto.

Montare il cuore su un apparato di perfusione di Langendorff modificato legando il tronco aortico all'ago di perfusione. Quindi utilizzare il tampone Krebs per perfondere il cuore e lavare via il sangue. Pesa il cuore e calcola il rapporto tra peso cardiaco e peso corporeo.

Quindi, indossando una maschera, posizionare l'organo in paraformaldeide al 4% e fissarlo sul ghiaccio per una notte. Dopo aver fissato il tessuto cardiaco, posizionarlo su un dispositivo di sezionamento dei tessuti, tagliarlo a fette spesse due millimetri e posizionare le sezioni in una cassetta di inclusione. Dopo l'inclusione della paraffina e il sezionamento aggiuntivo secondo il protocollo di testo, deparaffinare i vetrini mettendoli in un serbatoio con xilene per 30 minuti.

Quindi reidratare il tessuto in una serie di alcol diluito in sequenza seguita da acqua distillata. Successivamente, utilizzare un'adeguata soluzione di rosso picrosirius per coprire completamente le sezioni di tessuto e incubare per un'ora. Quindi utilizzare una soluzione di acido acetico allo 0,5% per sciacquare i vetrini due volte.

E sciacquare i campioni due volte in alcool assoluto. Asciugare i campioni all'aria e montarli in resina sintetica con un vetrino coprioggetti. Quindi utilizzare la luce visibile al microscopio con un ingrandimento di 200X per visualizzare i vetrini.

Infine, calcolare la percentuale di zona positiva al rosso picrosirio sull'area totale che indica l'estensione della fibrosi. Come mostrato qui, il volume cardiaco è aumentato dopo l'intervento chirurgico di costrizione dell'aorta addominale. Come dimostrato da un rapporto peso cardiaco/peso corporeo più elevato che è un indicatore di ipertrofia cardiaca.

Utilizzando la colorazione rossa picrosirius, il miocardio fibrotico con un aumento del contenuto di collagene può essere distinto dalle aree normali. Come dimostrato in questi campioni colorati, la fibrosi cardiaca è risultata aumentata dopo l'intervento chirurgico di costrizione dell'aorta addominale rispetto ai controlli. Una volta padroneggiato, l'intervento chirurgico può essere eseguito in 30 minuti se eseguito correttamente.

Dopo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi come l'ecocardiografia per rispondere a ulteriori domande sulla funzione cardiaca. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della cardiopatia ipertensiva per esplorare i meccanismi che coinvolgono la cardioipertrofia, il rimodellamento e il fallimento. Dopo aver visto questo video dovresti avere una buona comprensione di come eseguire la costrizione dell'aorta addominale per indurre la cardioipertrofia e il rimodellamento miocardico nei ratti.