Name: Visualizzare il Tissue interrenale Steroidogenic e la sua Vascolare Microenvironment in Zebrafish (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: Scopri come rilevare le cellule steroidogeniche interrenali differenziate nello zebrafish con un saggio enzimatico whole-mount rapido e affidabile. Questo metodo facilita lo screening genetico e chimico.

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Ringraziamo il Prof. Christoph Englert e il Prof. Didier Stainier per regalare il Tg (wt1b: GFP) LI1 e Tg (kdrl: EGFP) s843 ceppi, rispettivamente, e il meccanismo di Taiwan Zebrafish Nucleo per la fornitura di Tg (kdrl: mCherry) CI5. Questo studio è stato sostenuto da sovvenzioni dal Ministero della Scienza e della Tecnologia (96-2628-B-029-002-MY3, 101-2313-B-029-001, 102-2628-B-029-002-MY3 di Taiwan, 102- 2321-B-400-018).

Etica Dichiarazione: Tutte le procedure sperimentali su zebrafish sono stati approvati dal Comitato di Cura e uso istituzionale degli animali di Tunghai University (IRB Soddisfazione NO 101-12.) E realizzato in conformità con le linee guida approvate. 1. Soluzioni azioni 3β-Hsd enzimatico attività di colorazione <ol><li> Preparare trans-dehydroandrosterone [10 mg / ml in dimetilsolfossido (DMSO)]. </li><li> Preparare β-nicotinammide adenina dinucleotide idrato (1,2 mg / ml in tampone fosfato 0,1 M, pH 7,2). </li><li> Preparare nicotinamide (vitamina B3, 50 mg / ml in H 2 O). </li><li> Preparare 4-nitro tetrazolio blu (50 mg / ml nel 70% dimetilformammide). </li><li> Aliquota tutti questi componenti in tubi microcentrifuga e conservare a -20 ° C. NOTA: Nella nostra esperienza, ripetuti di congelamento e scongelamento delle aliquote di tutte le soluzioni di cui sopra non influenzano l&#39;intensità della 3β-Hsd attività di colorazione. </li></ol> 2. Whole-mount 3β-Hsd attività di colorazione NOTA: L&#39;attività enzimatica 3β-HSD è rilevabile in embrioni di zebrafish come già 28 ore dopo la fecondazione (HPF) quando coltivate a 28,5 ° C, che è coerente con l&#39;inizio di espressione dell&#39;mRNA di hsd3b1 2,7. Il tutto il montaggio 3β-Hsd protocollo attività colorazione in questo studio si basa su un metodo precedentemente descritto 8 ed era determinato ad avere successo nel zebrafish in via di sviluppo fino a 7 giorni dopo la fecondazione 9. Per analizzare il microambiente vascolare del tessuto steroidea interrenale, tutto il montaggio 3β-Hsd attività colorazione deve essere applicato a linee transgeniche che esprimono fluorescenza specifica-endotelio, come ad esempio Tg (kdrl: EGFP) s843 14 e Tg (kdrl: mCherry) CI5 15 . Per analizzare il tessuto steroidogenica interrenale considerando lo sviluppo del rene zebrafish, 3β-Hsd attività colorazione può essere applied al Tg (wt1b: GFP) pesci LI1 16, dove si delinea la formazione del glomerulo e pronephric tubuli. <ol><li> Trattare il zebrafish sviluppo incubandoli in 0,03% phenylthiourea in acqua uovo (0,06 mg / L barriera sale in acqua deionizzata), partendo da una fase compresa tra 12 e 24 HPF, per inibire la formazione di pigmento. </li><li> Fix embrioni dechorionated o larve in (A) 4% paraformaldeide (PFA) in soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) supplementato con 0,1% Tween 20 (PFAT) per 1 ora a temperatura ambiente (RT) o (B) 2% PFAT notte a 4 ° C o per 2 ore a 4 ° C, seguita da 4 ore a RT. Attenzione: PFA è tossico per inalazione e per contatto con la pelle. E &#39;distruttivo per la pelle, le mucose, gli occhi e le vie respiratorie superiori. </li><li> Lavare il embrioni 4x per 10 minuti con PBS integrato con 0,1% di Tween 20 (PBST) a temperatura ambiente. NOTA: E &#39;fondamentale per non secca i campioni, mentre la modifica delle soluzioni di lavaggio. </li><li> Appena preparare la STAsoluzione ining prima delle reazioni (Tabella 1). Preparare, vortice, e componenti per centrifughe di A e B in tubi separati. NOTA: L&#39;aggiunta di tutti i componenti direttamente in un unico tubo potrebbe causare gravi precipitazioni. </li><li> Aggiungere l&#39;intera soluzione della parte A per l&#39;intera soluzione di parte B, mescolare bene per preparare la soluzione colorante, e subito distribuire 1 ml in ogni provetta da microcentrifuga contenente embrioni fissi e lavati. </li><li> Avvolgere i tubi microcentrifuga con un foglio di alluminio per proteggerli dalla luce e luogo sia su un rotatore o di una piattaforma oscillante per gentile agitazione a temperatura ambiente. </li><li> Empiricamente determinare il tempo di reazione per il monitoraggio dei segnali cromogenici mediante microscopia. precipitazioni lievi si svilupperà nel corso del tempo; tuttavia, essi non interferiscano con il processo di reazione. NOTA: per gli embrioni fissati a 28 HPF, colorazione a 25 ° C per 4 ore genera un segnale chiaro al tessuto interrenale. </li><li> Arrestare la reazione lavando 4x per 10 min in PBST. iof è richiesta alcuna ulteriore immunoistochimica (IHC) analisi, post-correggere gli embrioni colorate con 4% PFAT per 60 minuti a temperatura ambiente. Altrimenti, memorizzare gli embrioni lavati a 4 ° C fino all&#39;utilizzo. </li><li> Per tutto il montaggio microscopia, cancellare gli embrioni macchiati, post-fisso, e lavato con il 50% glicerolo in PBS, orientarli con il lato dorsale rivolto verso l&#39;alto su una diapositiva, e osservare con un microscopio verticale sotto illuminazione in campo chiaro. NOTA: per creare un&#39;immagine ad alta risoluzione della morfologia del tessuto interrenale, analisi dell&#39;embrione 3β-Hsd attività macchiato e deyolked TV a montaggio è raccomandato. Come il tessuto steroidogenica interrenale è posizionato proprio sopra il sacco vitellino, una ventrale analisi TV a monte del tessuto interrenale permette una osservazione diretta e chiara della morfologia interrenale 17. </li></ol> 3. Analisi IHC di 3β-HSD embrioni attività macchiati NOTA: Per analizzare il microambiente vascolare del steroitessuto dogenic, gli embrioni di attività macchiati 3β-HSD con un reporter fluorescenti transgenici specifici endotelio sono sottoposti ad trasversali vibratome sezionamento e la successiva analisi IHC 12,18. <ol><li> Post-fissaggio <ol><li> Post-rimuovere gli embrioni 3β-Hsd activity-tinto e lavato con 2% PFA integrato con 1% Triton X-100 per 1 ora a 4 ° C e lavare 4x per 10 min in PBS contenente 1% Triton X-100 (PBSTx) a RT. </li></ol></li><li> Incorporare <ol><li> Preparare 4% a basso punto di fusione agarosio sciogliendo l&#39;agarosio in PBS a 95 ° C, aliquota in tubi microcentrifuga, e conservare a 4-8 ° C. </li><li> Sciogliere un&#39;aliquota del 4% bassofondente agarosio a 70 ° C per 10 minuti, e quindi mantenere il un&#39;aliquota a 47 ° C. Incorpora ogni embrione nel fuso 4% a basso punto di fusione agarosio in un berretto distaccata di una provetta da 1,5 ml microcentrifuga che funge da stampo e lasciare raffreddare fino solido. </li></ol></li><li> vibratome sezionamento <ol><li> Attaccare un pezzo di nastro di carta per la p seccalatform del vibratome. </li><li> Rimuovere il blocco di agarosio indurito dallo stampo da una lama di rasoio. Applicare colla al nastro di carta sulla piattaforma, e fissare il blocco di agarosio sul nastro di carta, con il lato anteriore del campione verso l&#39;alto. Tagliare il blocco di agarosio a una forma trapezoidale prismatica, con circa 4 mm e 8 mm per lato delle faccette superiore ed inferiore, rispettivamente. </li><li> Risciacquare blocco agarosio campioni contenenti con PBS freddo integrato con 0,5% Triton X-100 (0,5% PBSTx) utilizzando un contagocce. </li><li> Tagliare il blocco di agarosio in 100 sezioni micron secondo il manuale di istruzioni del vibratome. Costantemente lavare il blocco di agarosio per evitare l&#39;essiccazione. Come ogni fetta viene tagliata, toglierlo dal vibratome utilizzando un ago G 26 della siringa, e trasferire in un posto piatto contenente freddo 0,5% PBSTx (500 microlitri / pozzetto). </li><li> Raccogliere le sezioni di tessuto di attività-positivo 3beta-Hsd controllando al microscopio dissezione, e trasferire le sezioni da un PIpunta Pette con la sua estremità cut-off (circa 1 mm di diametro interno, in apertura) in una piastra a 96 pozzetti contenente freddo 0,5% PBSTx (150 ml / pozzetto). I campioni di tessuto di solito dissociano dal blocco agarosio dopo questo passaggio. </li></ol></li><li> Permeabilizzazione e lavaggio <ol><li> Lavare le fette 6x per 15 minuti a 0,5% PBSTx a RT, 10 min in PBS, e 4x per 10 min in PBS integrato con 1% di siero albumina bovina / 1% DMSO / 0,1% Triton X-100 (PBDTx). </li></ol></li><li> Blocco <ol><li> Incubare le fette per 1 hr a 2% di siero fetale bovino (FCS) in PBDTx a RT. </li></ol></li><li> Reazione anticorpo primario <ol><li> Incubare le fette per 1,5 giorni in PBDTx contenente un anticorpo primario (ad esempio, policlonale di coniglio anti-fibronectina umana e topo anti-umano adesione focale chinasi) a 4 ° C. </li></ol></li><li> Lavaggio <ol><li> Lavare le fette 6x per 10 min in PBDTx a temperatura ambiente. </li></ol></li><li> Blocco <ol><li> Incubare le fette per 1 ora a 2% FCS in PBDTx a temperatura ambiente. </li></ol></li><li> Reazione anticorpo secondario <ol><li> Incubare le fette per 1,5 giorni in PBDTx contenenti un anticorpo secondario (fluoroforo coniugato capra anti-coniglio o anti-topo IgG) a 4 ° C. </li></ol></li><li> Lavaggio <ol><li> Lavare le fette 6x per 10 min in PBDTx a temperatura ambiente e 4x per 10 min in PBST a temperatura ambiente. NOTA: Per l&#39;analisi al microscopio confocale, cancellare i campioni con il 50% glicerolo in PBS. </li></ol></li></ol> 4. Analisi confocale <ol><li> Osservare l&#39;intero embrione monte e la sezione con un microscopio confocale dotato di 10X / 20X e 0,5 / 0,75 lente dell&#39;obiettivo. </li><li> Per la rilevazione simultanea di fluorescenza e la colorazione 3β-Hsd, impostare la modalità multitraccia come segue: 488 nm laser argon e 505-530 nm filtro passa-banda per il rilevamento di GFP; 543 nm laser a elio-neon e 560-615 nm filtro passa-banda per il rilevamento di mCherry; e trasmessa canale di luce per la rivelazione di 3β-Hsd colorazione.La dimensione del foro stenopeico è 1 unità Airey, e la risoluzione è 1.024 x 1.024 pixel. </li><li> Montare le pile z (con 6 intervalli micron) come proiezione 3D, e unire la proiezione e il campo luminoso, utilizzando il software incorporato confocale. </li></ol>

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<li>Chiu, C. H., Chou, C. W., Takada, S., Liu, Y. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+fibronectin+signaling+requirements+of+the+zebrafish+interrenal+vessel%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development and fibronectin signaling requirements of the zebrafish interrenal vessel.</a> PLoS One. 7, e43040(2012).</li>
</ol>

Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti da dichiarare.

La forza dell&#39;attività 3β-Hsd segnale aumentato nel corso della reazione. chiari segnali di attività 3β-HSD sono stati rilevati dopo 4 ore di reazione per fasi, dalla 28 in poi HPF. Tuttavia, la durata della reazione richiede determinazione empirica, a seconda dello scopo del test. Nei casi in cui la colorazione richiede elaborazione notturna, uno sfondo leggermente bluastra tende a svilupparsi sui campioni. Questo problema può essere superato aumentando la durata di fissaggio (ad esempio, 4 ore a 4% PFAT a...

La ghiandola surrenale, una componente fondamentale dell&#39;asse ipotalamo-ipofisi-surrene, secerne gli steroidi e coordina l&#39;omeostasi di steroidi e la risposta del corpo allo stress. La ghiandola surrenale comprende la corteccia esterna, che secerne steroidi in maniera specifica per la zona, e midollo interni, che sintetizza catecolamine. La ghiandola interrenale in teleostei è la controparte della ghiandola surrenale nei mammiferi ed è composto da cellule interrenale e cromaffini steroidogenici, che sono equivalenti funzionali della corteccia surrenale e midollare, rispettivamente, 1-3. Studi condotti utilizzando il modello zebrafish hanno riferito che entrambe le linee cellulari steroidogenici e cromaffini sono formate da meccanismi molecolari e cellulari altamente simili a quelle dei mammiferi 1,2. Pertanto, il pesce zebra è un modello potenzialmente potente per lo studio di malattie genetiche, controllo neuroendocrino, e la biologia dei sistemi dell&#39;asse ipotalamo-ipofisi-surrene (interrenale). <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Nella ghiandola surrenale, 3β-Hsd catalizza la conversione del progesterone dal pregnenolone, 17α-idrossiprogesterone da 17α-hydroxypregnelolone, e androstenedione da deidroepiandrosterone 4,5. 3β-HSD è essenziale per biosynthesizing tutte le classi di steroidi ormonali, vale a dire il progesterone, glucocorticoidi, mineralcorticoidi, androgeni ed estrogeni,. I due umana 3β-Hsd isoenzimi HSD3B1 e HSD3B2 sono espressi in modo differenziale 6. HSD3B1 è espressa nella placenta e nei tessuti periferici, mentre HSD3B2 si esprime nella corteccia surrenale e gonadi. HSD3B1 umana e HSD3B2 sono co-ortologhi di hsd3b1 zebrafish, che si esprime al tessuto interrenale e gonadi adulti; hsd3b2 zebrafish è un gene maternamente espresso le cui trascrizioni scomparire prima organogenesi 7. Il protocollo di tutto il montaggio 3β-Hsd saggio di attività enzimatica per zebrafish è stato sviluppato modificando il metodo di Levy, uns descritto da Milano et al. , Su sezioni congelate di otto specie di teleostei 8. A causa della permeabilità dei tessuti e la trasparenza ottica del pesce zebra in via di sviluppo, tutto il montaggio 3β-Hsd istochimica può essere utilizzato con successo per l&#39;embrione zebrafish fisso e larve e specificamente delineare i tessuti interrenale differenziati. Questo test sensibile e rapida è stata applicata a vari mutanti e morphants dimostrano diversi tipi di dysmorphogenesis interrenale. L&#39;attività interrenale 3β-HSD è assente nell&#39;embrione se le specifiche del tessuto interrenale è interrotta attraverso una specifica atterramento del fattore di trascrizione Ff1b ed è diminuito come la differenziazione interrenale è influenzata da un atterramento del coregulator Ff1b Prox1 9,10. In particolare, l&#39;attività 3β-Hsd può essere rilevato in mutanti con gravi difetti nelle fasi iniziali, come ad esempio un occhio capocchia di spillo e strabismo, dove il 3β-Hsd istochimica delinea come la migrazione delle cellule interrenale è influenzata 11. La differenziazione del tessuto interrenale non è compromessa anche in completa assenza di sangue e vascolare. Pertanto, come forma di segnali endotelio-derivati in via di sviluppo dell&#39;organo interrenale può essere determinato 12,13. Nel complesso, questo saggio istochimico è stato utilizzato con successo per lo studio specificazione, differenziazione e migrazione delle cellule steroidogeniche nel modello zebrafish. Pertanto, dovrebbe essere un efficiente e uno strumento affidabile per eventuali schermi genetici o chimici di targeting disturbi degli organi surrenali e interrenale.

<table><tbody><tr><td>Microscopio confocale</td><td>Carl Zeiss</td><td>LSM510&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D8418&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>USB</td><td>US16374</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale di vitello Hyclone&nbsp;</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>SH30073</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamide</td><td>Sigma</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Nicotinamide adenina dinucleotide idrato</td><td>Sigma</td><td>N1636</td><td></td></tr><tr><td>4-Nitro blue tetrazolium</td><td>Promega</td><td>S380C</td><td></td></tr><tr><td>Nusieve GTG</td><td>Lonza</td><td>50081</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Feniltiourea</td><td>Sigma</td><td>P7629</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Sigma</td><td>P4417-100Tab</td><td></td></tr><tr><td>PYREX Spot Plate</td><td>Corning</td><td>7220-85</td><td></td></tr><tr><td>Sale di barriera</td><td>AZOO</td><td>AZ28001</td><td></td></tr><tr><td>trans-deidroandrosterone</td><td>Sigma</td><td>D4000</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P9416</td><td></td></tr><tr><td>Vibratomo</td><td>Leica</td><td>VT1000M</td><td></td></tr></tbody></table>

visualizzare il tissue interrenale steroidogenic e la sua vascolare microenvironment in zebrafish

Visualizing the Interrenal Steroidogenic Tissue and Its Vascular Microenvironment in Zebrafish

Questo protocollo introduce come rilevare cellule steroidogeniche interrenali differenziate attraverso un semplice saggio di attività enzimatica a montaggio intero. L'identificazione di tessuti steroidogenici differenziati attraverso la colorazione istochimica cromogenica di cellule positive all'attività della 3-β-idrossisteroide deidrogenasi /Δ5-4 isomerasi (3β-Hsd) è fondamentale per il monitoraggio della morfologia e della differenziazione dei tessuti corticosurrenali e interrenali rispettivamente nei mammiferi e nei teleostei. Nel modello di zebrafish, la trasparenza ottica e la permeabilità tissutale degli embrioni e delle larve in via di sviluppo consentono la colorazione dell'attività di 3β-Hsd su tutta la montatura. Questo protocollo di colorazione, eseguito su linee reporter fluorescenti transgeniche che marcano le cellule pronefriche ed endoteliali in via di sviluppo, consente la rilevazione del tessuto interrenale steroidogenico oltre al rene e alla vascolarizzazione limitrofa. In combinazione con il sezionamento del vibratomo, l'immunoistochimica e la microscopia confocale, possiamo visualizzare e saggiare il microambiente vascolare dei tessuti steroidogenici interrenali. Il saggio dell'attività 3β-Hsd è essenziale per studiare la biologia cellulare della ghiandola interrenale del pesce zebra perché ad oggi non è disponibile alcun anticorpo adatto per marcare le cellule steroidogeniche del pesce zebra. Inoltre, questo test è rapido e semplice, fornendo così un potente strumento per gli screening mutanti mirati alle malattie genetiche surrenali (interrenali) e per determinare gli effetti di interruzione delle sostanze chimiche sulla steroidogenesi in studi farmaceutici o tossicologici.

Per determinare come i codevelops steroidogenici tessuto interrenale con il glomerulo renale pronephric e la sua vascolarizzazione nascente, il saggio di attività enzimatica 3β-HSD è stato eseguito sul doppio transgenici Tg (wt1b: GFP) LI1; Tg (kdrl: mCherry) CI5 embrione a 34 HPF (Figura 1). In questa fase, il tessuto steroidogenico activity-positive 3β-Hsd si trova alla linea mediana e caudale immediatamente glomeruli renali pronephric, m...

La ghiandola interrenale in zebrafish è la controparte teleostei della ghiandola surrenale mammiferi. Questo protocollo introduce come eseguire la deidrogenasi 3-β-idrossisteroide (Δ 5-4 isomerasi; 3β-HSD) saggio di attività enzimatica, che rileva le cellule differenziate steroidogeniche nel zebrafish in via di sviluppo.

Visualizzare il Tissue interrenale Steroidogenic e la sua Vascolare Microenvironment in Zebrafish

This protocol introduces how to detect differentiated interrenal steroidogenic cells through a simple whole-mount enzymatic activity assay. Identifying ...

L'obiettivo generale di questa procedura è rilevare le cellule steroidegeniche interrenali differenziate nel pesce zebra in via di sviluppo mediante un semplice saggio enzimatico su preparato intero. Questa procedura di colorazione può contribuire a rispondere a domande fondamentali sui meccanismi molecolari e cellulari alla base della formazione e malformazione della ghiandola interrenale. Il principale vantaggio di questo saggio di colorazione è la sua rapidità, semplicità e affidabilità, che lo rendono uno strumento potente per schermate genetiche o chimiche nel pesce zebra.Questa procedura può essere eseguita su linee transgeniche con reporter fluorescenti, che contrassegnano il rene e i vasi sanguigni, consentendo l'analisi di più tessuti nello stesso embrione. In combinazione con la sezionatura al vibratomo, l'immunohistochimica e la microscopia confocale, è inoltre possibile visualizzare il microambiente vascolare del tessuto interrenale. Dopo aver preparato le soluzioni stock per la colorazione dell'attività della beta-Hsd seguendo il protocollo descritto, posizionare embrioni di zebrafish in via di sviluppo in acqua per uova contenente PTU 0,03% per inibire la formazione d

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Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Qui vi mostriamo come fare retro-orbitale iniezione in zebrafish adulti.

Retro-orbitale iniezione in Zebrafish adulti

Il rene zebrafish è la patria di entrambi renale ematopoietiche adulte e cellule staminali / progenitrici, e rappresenta una straordinaria opportunità per studiare questi tipi di cellule e la loro progenie in un organismo modello vertebrato. Qui, dimostriamo una procedura dettagliata dissezione che consente al ricercatore di identificare e rimuovere chirurgicamente il rene adulto pesce zebra, che può essere utilizzata per applicazioni quali l'isolamento delle cellule, il trapianto, e studi di...

Dissezione del rene Zebrafish adulti

Imaging di sviluppo cerebrovascolare in zebrafish larvale è descritto. Sono forniti anche tecniche per facilitare l'imaging 3D e modificare lo sviluppo cerebrale con trattamenti chimici.

Imaging 3D e ricostruzione di strutture cerebrovascolari in Zebrafish embrionali

L'embrione zebrafish è un ottimo modello per la ricerca biologia dello sviluppo. Durante l'embriogenesi, zebrafish sviluppare con una massa tuorlo, che presenta sfide tridimensionali per l'osservazione e l'analisi del campione. Questo protocollo descrive come creare bidimensionali montaggio preparazioni semplici di tutto il monte in situ (WISH) colorati esemplari embrioni di zebrafish.

Preparazione di montaggio schermo per l&#39;osservazione e l&#39;analisi di zebrafish campioni macchiato da Whole Monte<em&gt; In situ</em&gt; Ibridazione

Il metodo descritto qui permette l'analisi time-lapse di sviluppo degli organi in embrioni di zebrafish utilizzando un microscopio a fluorescenza dissezione in grado di eseguire sezionamento ottico e semplici strategie di riadattamento per correggere la deriva focale e planare.

Analisi dello sviluppo del rene Zebrafish con time-lapse imaging Utilizzando una dissezione microscopio dotato di sezionamento ottico

Questo protocollo dimostra un metodo basato su fluorescenza per visualizzare la vascolarizzazione e per quantificare la sua complessità in Xenopus tropicalis . I vasi sanguigni possono essere immagazzinati minuti dopo l'iniezione di un colorante fluorescente nel cuore battente di un embrione dopo manipolazioni genetiche e / o farmacologiche per studiare lo sviluppo cardiovascolare in vivo .

Visualizzazione e analisi quantitativa di angiogenesi embrionale in<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Sviluppo di ciglia è vitale per l'organogenesi corretto. Questo protocollo descrive un metodo ottimizzato per etichettare e visualizzare le cellule ciliate di zebrafish.

Visualizzazione di cellule Multiciliated in Zebrafish attraverso un protocollo combinato di tutta Monte fluorescente ibridazione In Situ e immunofluorescenza

Discutiamo qui, un protocollo di metodo che vi permetterà una facile analisi del vasculature retinico adulto tg(fli:EGFP) zebrafish come una lettura veloce nelle impostazioni delle patologie vascolari a lungo termine legate alla neoangiogenesi e cambiamenti strutturali.

Lo studio diabete Through the Eyes of un pesce: Microdissection, visualizzazione e analisi della tg(fli:EGFP) adulto Vasculature retinico Zebrafish

Qui, descriviamo 3 modelli di lesione di zebrafish adulto e loro uso combinato con il trattamento di droga immunosopressiva. Siamo fornire indicazioni su formazione immagine di rigenerare i tessuti e il rilevamento di mineralizzazione dell'osso in esso.

Modelli di lesione di Zebrafish adulto per studiare gli effetti del Prednisolone nella rigenerazione di tessuto osseo

Qui dimostriamo un metodo per quantificare le dimensioni del fegato nel pesce zebra larvale, fornendo un modo per valutare gli effetti delle manipolazioni genetiche e farmacologiche sulla crescita e lo sviluppo del fegato.

Quantificare le dimensioni del fegato nel pesce zebra Larval utilizzando la microscopia Brightfield

Scopri come rilevare le cellule steroidogeniche interrenali differenziate nello zebrafish con un saggio enzimatico whole-mount rapido e affidabile. Questo metodo facilita lo screening genetico e chimico.

Visualizzare il Tissue interrenale Steroidogenic e la sua Vascolare Microenvironment in Zebrafish

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