Transient Medio occlusione dell'arteria cerebrale Modello di Stroke neonatale nei ratti P10

L'ictus neonatale è una causa significativa di lesione cerebrale precoce che richiede un modello traslazionale con modelli di lesione focale coerenti e un'elevata riproducibilità per consentire lo studio. Questo studio descrive la procedura chirurgica dettagliata per la creazione di una lesione da ischemia-riperfusione focale unilaterale non emorragica nei roditori equivalenti a termine.

L'obiettivo generale dell'occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media nei ratti neonatali è quello di fornire un modello traslazionale di ictus nei neonati a termine. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della lesione cerebrale ischemica neonatale, comprendendo i meccanismi di lesione e riparazione nel cervello in via di sviluppo e come possiamo modificarli con diverse strategie terapeutiche. Il vantaggio principale di questa tecnica è che fornisce un modello fisiologicamente accurato dell'ictus ischemico arterioso focale nei neonati e include anche una componente di riperfusione, che è una parte importante della progressione della lesione nei neonati umani.

La dimostrazione visiva di questo modello è fondamentale, perché le fasi di questo intervento chirurgico possono essere molto difficili da imparare. Le rappresentazioni bidimensionali dell'anatomia arteriosa non sempre dimostrano adeguatamente la natura complessa della ramificazione 3D nel ratto. Inizia pesando il cucciolo per assicurarti che sia compreso tra 19 e 21 grammi.

Dopo aver anestetizzato il cucciolo utilizzando isoflurano inalato secondo i protocolli approvati, assicurarsi che non vi sia risposta a un pizzicamento del piede. Mantenere la temperatura della superficie corporea con l'uso di un termoforo sotto la fase chirurgica. Fissare l'animale in posizione supina con del nastro adesivo sulle regioni delle spalle.

Utilizzare tamponi di cotone sterili per tamponare l'area cervicale anteriore con etanolo al 70%, seguiti da un tampone di soluzione di iodio povidone. Successivamente, infiltrare localmente lo 0,25% di bupivacaina nel sito di incisione pianificato. Quindi, mentre si lavora attraverso uno stereoscopio, praticare un'incisione cervicale anteriore di cinque-sette millimetri per esporre l'arteria carotide comune.

Posizionare da due a quattro divaricatori per mantenere la cavità aperta e l'arteria esposta. Quindi, individua l'arteria carotide interna, l'arteria occipitale e l'arteria carotide esterna. Rimuovere il tessuto connettivo e il grasso dalle arterie per avere una visione chiara.

Dopo aver tagliato 1,5 centimetri di filo di sutura intrecciato di seta 6-0, slacciare la sutura, estraendo i singoli fili. Assicurati che i singoli fili siano puliti e non sfilacciati. Tenendo il filo di sutura entro una pinza di 45 gradi, spazzare la pinza in un arco sotto l'ICA in modo che le punte emergano tra l'ICA e l'OA. Quindi, afferra l'estremità del filo di sutura e tiralo in modo che l'estremità sia di facile accesso.

Rilasciare il filo dal forcipe e far uscire il forcipe da sotto l'ICA, invertendo il movimento precedente. Legare una legatura temporanea attorno all'ICA alla base più vicina al punto in cui si separa dal CCA. Ritrarre con cautela l'ICA lateralmente, quindi utilizzare una clip per fissare il filamento retrattile alla pelle in eccesso vicino alla regione ascellare sul lato opposto all'incisione.

Assicurarsi che il filo retrattile sia sufficientemente teso da interrompere il flusso sanguigno prima di procedere al passaggio successivo. L'arteria dovrebbe essere piatta e pallida. Usa una pinza a 45 gradi per afferrare un altro filo di sutura non intrecciato e avvolgilo sotto e intorno all'ICA come prima.

Posizionare questo filo lateralmente al filo di retrazione. Quindi tagliare un'arteriotomia di 0,2 millimetri a metà strada tra le legature legate e quelle slegate, errando più vicino alla legatura legata. Ora, utilizzando un righello metrico, misura 10 millimetri di sutura in nylon rivestita di silicone come sutura occlusiva.

Tagliare la sutura con una tolleranza extra di due o tre millimetri per la rimozione durante la riperfusione. Tenere la sutura occlusiva con una pinza a 45 gradi e utilizzare una pinza diritta per creare una curva, segnando il punto di arresto dell'avanzamento. Inserire la sutura occlusiva nell'arteriotomia, puntandola parallelamente all'ECA e verso la testa.

Far avanzare dolcemente la sutura fino a raggiungere la curva. Quindi utilizzare il filo posizionato lateralmente al filamento di retrazione per legare una legatura temporanea per fissare la sutura dell'occlusione. Rimuovere la clip del divaricatore, quindi tagliare i fili di entrambe le legature temporanee, lasciando il filo che verrà utilizzato per rimuovere il nodo più lungo del filo utilizzato per stringerlo.

Rimuovere i divaricatori e chiudere la cavità utilizzando seta intrecciata 6-0 per creare tre o quattro suture interrotte. Togli il cucciolo dall'anestesia e posizionalo su un termoforo all'aria ambiente. Monitorare il cucciolo fino a quando non ha riacquistato sufficiente coscienza per mantenere la decubito sternale e assicurarsi che si sia completamente ripreso prima di riportarlo alla madre.

Durante l'occlusione, la risonanza magnetica pesata in diffusione può essere utilizzata per verificare l'induzione appropriata della lesione. Queste immagini mostrano una lesione ischemica in corso, indicata dalla freccia, rilevata dalla DW-MRI durante la MCAO transitoria. Circa due ore e 50 minuti dopo l'occlusione dell'MCA, preparare i materiali chirurgici, quindi iniziare la procedura di riperfusione anestetizzando come prima.

Rimuovere le suture interrotte e individuare la giunzione, che è contrassegnata dalle due legature e dall'estremità della coda della sutura occludente. Sciogliere con cura il nodo più laterale della legatura temporanea tirando il filo più lungo e rimuovere il filo di sutura dalla cavità. Esattamente tre ore dopo l'occlusione MCA, far uscire lentamente la sutura occlusiva dall'arteria.

Non ci dovrebbe essere resistenza. Usa una pinza per applicare pressione all'arteriotomia, quindi sciogli con cura il nodo mediale per ripristinare il flusso sanguigno. Dopo aver rimosso il filo di sutura dal corpo, applicare un agente emostatico sull'arteriotomia per fermare l'emorragia.

Il ritorno della forma originale dell'arteria e del colore rosso conferma che il flusso sanguigno dell'ICA è stato ripristinato. Rimuovere i divaricatori e chiudere la cavità utilizzando seta intrecciata 6-0 per creare tre o quattro suture interrotte. Togliete il cucciolo dall'anestesia e lasciatelo riprendere, monitorandolo come prima, prima di rimetterlo nella gabbia di casa.

Ispeziona i cuccioli ogni giorno per cinque giorni. Registra i loro pesi e ispeziona attentamente i siti di incisione per una guarigione appropriata. Queste sezioni cerebrali coronali colorate di viola cresyl-posterior-anterior, da 50 micron, raccolte da animali P-38, dimostrano lesioni piuttosto gravi dopo un TMCAO di tre ore a P-10.

La freccia indica la formazione di cisti omolaterali e la riduzione del volume corticale e striatale. Il foro rotondo sul lato sinistro rappresenta un identificatore dell'emisfero controlaterale. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che, sebbene questa procedura sia concettualmente semplice, il successo e la padronanza possono richiedere ore di ottimizzazione e pratica.

Una volta padroneggiata, l'occlusione può essere completata in meno di 10 minuti, mentre la riperfusione può essere completata in meno di cinque minuti.