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Immunocolorazione delle sezioni biocitina-riempite e trasformati per neurochimici Marcatori
Immunocolorazione delle sezioni biocitina-riempite e trasformati per neurochimici Marcatori
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JoVE Journal Neuroscience
Immunostaining of Biocytin-filled and Processed Sections for Neurochemical Markers

Immunocolorazione delle sezioni biocitina-riempite e trasformati per neurochimici Marcatori

Full Text
24,012 Views
08:54 min
December 31, 2016

DOI: 10.3791/54880-v

Bogumila Swietek1, Akshay Gupta2, Archana Proddutur2, Vijayalakshmi Santhakumar2

1Graduate School of Biomedical Sciences,Rutgers New Jersey Medical School, 2Department of Pharmacology, Physiology and Neuroscience,Rutgers New Jersey Medical School

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Questo protocollo presenta un metodo per il recupero morfologica dei neuroni rattoppati durante le registrazioni elettrofisiologiche utilizzando riempimento biocitina e successiva postprocessing immunoistochimica. Abbiamo dimostrato che spesse sezioni biocitina-riempita che erano macchiate e coprioggetto possono essere ricolorate con un secondo giorni di anticorpi primari o mesi dopo.

L'obiettivo di questo protocollo è quello di presentare un metodo efficiente per identificare i neuroni patchati durante le registrazioni elettrofisiologiche utilizzando biocitina e immunocolorazione per il recupero della morfologia prima della ricolorazione con anticorpi specifici per determinare l'identità neurochimica. Quindi questo metodo descrive un passo importante necessario per studiare la diversità nella struttura e nella funzione neuronale. Questo è essenziale per comprendere il loro ruolo nelle reti cerebrali.

Il vantaggio principale dell'utilizzo di una tecnica di elaborazione sequenziale, è che elimina la perdita di dati a causa dell'incapacità di recuperare la morfologia. Quindi questo aiuta anche a guidare i marcatori neurochimici da testare in queste cellule. Sebbene questo metodo sia descritto per il recupero morfologico di cellule in sezioni spesse, può essere applicato anche a sezioni sottili e su campioni precedentemente colorati e montati.

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Neuroscienze Numero 118 morfologia biocitina immunoistochimica marcatore neurochimico doppia marcatura patch clamp

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