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DOI: 10.3791/54880-v
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Questo protocollo presenta un metodo per il recupero morfologica dei neuroni rattoppati durante le registrazioni elettrofisiologiche utilizzando riempimento biocitina e successiva postprocessing immunoistochimica. Abbiamo dimostrato che spesse sezioni biocitina-riempita che erano macchiate e coprioggetto possono essere ricolorate con un secondo giorni di anticorpi primari o mesi dopo.
L'obiettivo di questo protocollo è quello di presentare un metodo efficiente per identificare i neuroni patchati durante le registrazioni elettrofisiologiche utilizzando biocitina e immunocolorazione per il recupero della morfologia prima della ricolorazione con anticorpi specifici per determinare l'identità neurochimica. Quindi questo metodo descrive un passo importante necessario per studiare la diversità nella struttura e nella funzione neuronale. Questo è essenziale per comprendere il loro ruolo nelle reti cerebrali.
Il vantaggio principale dell'utilizzo di una tecnica di elaborazione sequenziale, è che elimina la perdita di dati a causa dell'incapacità di recuperare la morfologia. Quindi questo aiuta anche a guidare i marcatori neurochimici da testare in queste cellule. Sebbene questo metodo sia descritto per il recupero morfologico di cellule in sezioni spesse, può essere applicato anche a sezioni sottili e su campioni precedentemente colorati e montati.
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