Name: Aumento tempo di recupero e Diminuzione LPS Per studiare il nervo vago meccanismi di stimolazione in risposta infiammatoria limitati (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 43 s
Description: Scopri la stimolazione del nervo vago per studiare i meccanismi colinergici anti-infiammatori nelle risposte infiammatorie. Questo metodo chirurgico permette di analizzare le interazioni neuroimmunologiche in vivo.

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Lo studio è stato supportato dal Consiglio Svedese delle Ricerche, dall'Associazione Svedese per i Reumatismi, dalle Fondazioni dell'Istituto Karolinska, dal Consiglio della Contea di Stoccolma, dalla Fondazione Wallenberg e dalla Fondazione GV 80 Anni per la ricerca. Gli autori desiderano anche ringraziare Hannah Aucott per aver corretto le bozze del manoscritto.

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida per la cura e l&#39;uso di animali approvati dal Comitato Etico locale Karolinska Institutet, Stoccolma. Il Comitato Etico locale segue le direttive dell&#39;Unione europea in materia di cura degli animali. NOTA: I principali cambiamenti rispetto al protocollo originale sono il tempo di recupero dopo l&#39;intervento chirurgico (6 ore contro 1 ora) e il livello di LPS iniettati (2 mg / kg contro 15 mg / kg). In caso contrario, le diverse impostazioni relative alla chirurgia stessa non sono stati modificati. 1. preparazione del materiale per la stimolazione <ol><li> Accendere il computer e il sistema di acquisizione dati collegato alla stimolazione elettrodo (Figura 1A). </li><li> Inserire il Riconoscimento programma. </li><li> Preparare una soluzione stock di LPS ad una concentrazione di 5 mg / ml in PBS 1x, aliquota, e conservarlo a -20 ° C. Il giorno dell&#39;esperimento, scongelare un&#39;aliquota e preparare un adequate campione di LPS (0,5 mg / ml) per iniettare circa 100 microlitri nell&#39;animale, in base al peso. </li></ol> 2. Preparare l&#39;animale per anestesia <ol><li> Utilizzare C57BL 6 topi /. Mantenerle in condizioni climatiche controllate con un ciclo luce-12 hr / scuro, alimentarli chow roditori standard e dare loro acqua ad libitum. </li><li> Eseguire un intervento chirurgico su topi che pesano circa 25 g al giorno dell&#39;esperimento. NOTA: Quando reazioni infiammatorie sono indotti, è particolarmente importante effettuare regolari controlli e osservazioni delle reazioni cliniche negli animali. L&#39;eutanasia precoce da CO 2 inalazione è necessaria se la condizione animale non soddisfa i criteri etici. </li><li> Impostare la macchina anestetico. <ol><li> Assicurarsi che il tubo sia collegato correttamente e non sia danneggiato in alcun modo. Assicurarsi che la zona ventilata funziona correttamente. Collegare il filtro chiave per la bottiglia isoflurano e riempire il vaporizer con una quantità sufficiente di isoflurano. </li><li> Aprire l&#39;alimentazione del gas (aria e ossigeno) e fare in modo che le bottiglie contengono abbastanza gas per l&#39;esperimento. Un connettore a tre vie è quindi in grado di inviare il flusso isoflurano alla camera di induzione o la maschera. </li></ol></li><li> Ruotare il connettore a tre vie per la camera di induzione. Scegli un mouse dalla gabbia casa e inserire l&#39;animale nella camera. Regolare il regolatore di flusso di 1,0 L / min di ossigeno e 1,0 L / min di aria. Regolare la concentrazione isoflurano al 4-5%. </li><li> Quando si raggiunge il livello desiderato di anestesia, quando si raggiunge il livello desiderato di anestesia, radere l&#39;area chirurgica e spostare l&#39;animale dalla camera alla maschera. Girare il connettore a tre vie per il flusso maschera. Regolare il regolatore di flusso di 0,25 L / min ossigeno e 0,25 L / min di aria. <ol><li> Regolare la concentrazione isoflurano al 1,5-2,5%. Controllare il livello di anestesia per il controllo del riflesso e la frequenza respiratoria prima di iniziare SEGUIRE IL PROCEDIMENTO chirurgicae. </li></ol></li><li> Fissare le gambe del mouse al banco di lavoro con nastro adesivo. Assicurarsi che il naso dell&#39;animale è ancora accuratamente posizionato nella maschera. </li></ol> 3. Chirurgia e stimolazione del nervo vago <ol><li> Disinfettare l&#39;area chirurgica con il 70% di etanolo. </li><li> Usando un bisturi, incidere con cura la pelle a livello del collo (un&#39;incisione di circa 1 a 1,5 cm). Nota: Nel protocollo, la procedura di chirurgia finisce qui per gli animali sham-operati. Infatti, è stato dimostrato che sfiora il nervo con un attrezzo metallico stimola già in una certa misura. Pertanto, per ottenere un più accurato controllo della chirurgia degli animali quando si utilizza una piccola quantità di LPS, fermare l&#39;operazione in questa fase. </li><li> Con l&#39;aiuto di un microscopio (obiettivo 12,5X), isolare il nervo vago sinistro dalla carotide utilizzando dissettore. In primo luogo individuare il muscolo sternocleidomastoideo rimuovendo pelle e grasso strati, e poi rientrare inordinare di mettere la pinza dietro sia il nervo e l&#39;arteria. Nota: Il passo successivo è molto difficile, come il nervo e arteria sono strettamente aderire l&#39;uno all&#39;altro. Pertanto, è molto facile da tagliare la nave e uccidere l&#39;animale. Tuttavia, ponendo molta attenzione la pinza tra il nervo e l&#39;arteria, che alla fine si separano, ed è possibile isolare il nervo. </li><li> Posizionare l&#39;elettrodo (Figura 1B) sotto il nervo vago. L&#39;elettrodo ad ago è piuttosto lungo, anche se il nervo muove leggermente durante la stimolazione, sarà sempre in contatto con l&#39;elettrodo. </li><li> Eseguire un intraperitoneale (ip) iniezione di LPS (2 mg / kg) con l&#39;aiuto di una siringa (per la lettura su livelli di citochine, cioè per misurare l&#39;effetto down-regulation). </li><li> Attendere 5 minuti prima di iniziare la stimolazione. </li><li> Stimolare il nervo vago per 5 minuti a 5 V e 1 Hz premendo il pulsante di avvio nel programma riconoscere. </li><li> Rispostare l&#39;elettrodo e suturare la ferita dell&#39;animale con filo di sutura chirurgica. </li><li> Spruzzare un No Sting Barriera Film (NSBF) sulla ferita al fine di migliorare la guarigione e per proteggere dalle infezioni. </li></ol> 4. Recupero del Animal <ol><li> Dopo l&#39;intervento chirurgico, spostare l&#39;animale torna alla sua gabbia casa per il risveglio e il recupero. Sotto la luce infrarossa al fine di mantenere la temperatura corporea, assicurarsi di monitorare l&#39;animale fino piena coscienza è stato ripreso. </li><li> Lasciate che l&#39;animale recuperare nella sua gabbia per 6 ore prima del sacrificio per l&#39;analisi. Nota: L&#39;effetto della stimolazione del nervo vago è molto veloce e ha anche dimostrato di essere di lunga durata (fino a 48 ore), in modo che il tempo di recupero può essere impostato dallo sperimentatore secondo le esigenze dello studio. </li></ol> 5. Il sacrificio per ulteriori analisi <ol><li> Posto l&#39;animale in una gabbia collegato a un dispositivo di somministrazione di CO 2. </li><li> Impostare il dispositivo su un 5Ciclo -min di CO 2 inalazione. </li><li> Quando l&#39;eutanasia è fatto, raccogliere gli organi di interesse e direttamente congelarli in ghiaccio secco per ulteriori analisi (ad esempio, la misurazione dei livelli di citochine negli estratti di milza usando un topo TH1 / TH2 9-Plex assay) 3. </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Fin dalla sua scoperta nei primi anni 2000, i meccanismi della PAC sono stati accuratamente studiati. Ora abbiamo una buona immagine del percorso, e in particolare, l&#39;organo bersaglio, la milza, dove NE, le cellule T memoria, Ach, e macrofagi lavorare come una squadra molto efficiente per down-regolare mediatori infiammatori 2. Abbiamo inoltre recentemente pubblicato dati sulla importanza di un sistema prostaglandine funzionale nei topi, in particolare, PGE 2, che è ovviamente un c...

L&#39;immunità innata fornisce immediatamente prima linea di difesa contro le infezioni e malattie in una vasta gamma di organismi. Essa non solo avvia la risposta immunitaria primaria per eliminare la minaccia, ma svolge anche un ruolo fondamentale nell&#39;attivazione e educare l&#39;immunità adattativa che svolge risposte immunitarie secondarie in modo specifico agente patogeno. L&#39;infiammazione è orchestrato da una pletora di citochine e chemochine, che a loro volta hanno la capacità di attrarre altre cellule immunitarie al sito di infezione e di indurre i segni cardinali di infiammazione, come rossore, gonfiore, dolore, perdita di funzione, e la febbre . La durata e l&#39;intensità dell&#39;infiammazione dipendono da diversi fattori, ma risolvere l&#39;infiammazione e ripristinando l&#39;omeostasi è un passo fondamentale per evitare l&#39;insorgenza di malattie infiammatorie croniche. I recenti progressi nel campo delle neuroscienze e immunologia hanno svelato i meccanismi neurali specifiche con immenso potenziale terapeutico per il controllo inflinfiammazione sia nel sistema nervoso centrale e nella periferia. Uno di essi consiste nello colinergica via anti-infiammatori (PAC), noto anche come il riflesso infiammatoria, che è azionato dal sistema nervoso autonomo 4, 5. Attualmente è pensato che mediatori infiammatori attivano nervi sensoriali e inviare segnali relativi allo stato di infiammazione del sistema nervoso centrale. Una risposta riflessa viene quindi attivato attraverso il nervo vago efferente. Un ampio studio sui dettagli anatomici della PAC ha rivelato un modello parasimpatico-simpatico composto da due nervi, il nervo vago e nervo splenico, rispettivamente 6. Nella PAC, il nervo vago colinergica efferente attivato termina nel ganglio celiaco mesenterico, causando l&#39;attivazione del nervo splenico adrenergico da un meccanismo ancora da esplorare. Il nervo splenico, così attivato, si caratterizza per internovate in prossimità di cellule immunitarie nella polpa bianca, zona marginale, e polpa rossa della milza, la principale e organo obbligatorio della PAC 7, 8. Norepinefrina (NE) dalle terminazioni nervose splenici lega ai corrispondenti β 2 adrenergici espressi sui linfociti T splenici. Questo induce il rilascio colina acetil transferasi (ChAT) acetilcolina mediata (ACh), che a sua volta attiva i recettori nicotinici dell&#39;acetilcolina (a7) α7nACh sui macrofagi, limitando in tal modo la produzione di citochine e infiammazione 2. Di conseguenza, è chiaro che il sistema nervoso è in grado di regolare l&#39;infiammazione nei tessuti periferici e di ripristinare omeostasi immunitaria locale. Come il nome del percorso suggerisce, il sistema ACh è di importanza fondamentale per il funzionamento di questo percorso di regolazione neuro-immune. È interessante notare che i meccanismi coinvolti nell&#39;attivazione diPAC sembrano essere differente nella periferia e nel sistema nervoso centrale. Mentre l&#39;importanza dei recettori nicotinici (α7nAChR) nella milza è stata dimostrata in precedenza 9, recettori muscarinici (mAChR) sono obbligatorie per l&#39;attivazione centrale del percorso 10, 11. Più recentemente, la somministrazione periferica di una azione centrale M1 agonista muscarinico notevolmente soppressa fattore di necrosi tumorale siero e milza α (TNFa) durante letale endotossemia murina, un&#39;azione che richiedeva intatto nervo vago e nervo splenico segnalazione 12. Abbiamo inoltre recentemente dimostrato che topi privi prostaglandina E2 (PGE2) non erano in grado di rispondere alla stimolazione del nervo vago e non down-regolano il rilascio indotto da LPS di citochine nel siero e milza 3. Pertanto, la PAC potrebbe anche essere regolata da sistemi diversi dal principale pathw AChAy. Il nervo vago è stata indicata come tale per la sua naturalmente vagare nel corpo, innervano organi principali compreso il fegato, polmone, milza, reni, intestino e 13. Considerando questo grande innervazione e molto potente effetto immunosoppressivo del nervo vago, il potenziale terapeutico della PAC potrebbe coprire un&#39;ampia gamma di condizioni infiammatorie. Il nervo vago può essere elettricamente (o meccanicamente) attivato, con controllo della tensione e frequenza, e contrariamente al trattamento convenzionale, senza farmaci aggiunti al corpo. Le prove sono attualmente in corso in pazienti reumatici, per esempio, per testare il significato clinico di VNS nel trattamento di infiammazioni croniche 14. Complessivamente, la comunicazione e la regolazione di infiammazione neuro-immunitario sono attualmente allo studio, che fornirà un trattamento alternativo alla terapia convenzionale. Pertanto, l&#39;analisi del nervo vago stimulatioEffetto n nei diversi organi innervati, ma anche la caratterizzazione del potenziale azione terapeutica in modelli animali di infiammazione cronica, sarebbe sicuramente dare spunti e di speranza per nuovi potenziali bersagli terapeutici. La metodologia originale sviluppato da Tracey e colleghi 4 non poteva essere trasposto al nostro campo di ricerca a causa di eccesso di stimolazione della risposta infiammatoria (da una dose letale di LPS) e una troppo breve intervallo di tempo tra l&#39;attivazione della PAC e il read-out. Nel presente documento, presenteremo le modifiche apportate al protocollo originale, confrontare i due metodi diversi su livelli di citochine, ed evidenziare un nuovo fronte osservazione sull&#39;organo bersaglio (la milza).

<table><tbody><tr><td>Computer</td><td>Toshiba-Qualsiasi</td><td></td> <td>computer è effettivamente compatibile</td></tr><tr><td>MP-150 sistema di acquisizione dati</td><td>Biopac Systems</td><td>MP150WSW</td><td></td></tr><tr><td>Acknowledge software</td><td>Biopac Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mice C57Bl / 6</td><td>Charles River</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Macchina per anestesia</td><td>Simtec Engineering</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bombola di ossigeno medica</td><td>AGA</td><td>107563</td><td></td></tr><tr><td>Bombola d'aria medica&nbsp;</td><td>AGA</td><td>108639</td><td></td></tr><tr><td>Vetflurano (1.000 mg/g)</td><td>Virbac</td><td>137317</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L2630</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina</td><td>Merck Millipore</td><td>1024060080</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10x</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5493</td><td>Diluito 10 volte per la concentrazione utilizzata</td></tr><tr><td>Siringa (1 ml)</td><td>BD Plastipak</td><td>303172</td><td></td></tr><tr><td>Aghi 23 G</td><td>KD-FINE</td><td></td> 900284 <td>0,6 x 30 mm (blu)</td></tr><tr><td>Pinza per microdissezione (curva)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4142</td><td></td></tr><tr><td>Forbici da dissezione</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z265969</td><td></td></tr><tr><td>Sutura chirurgica 4-0</td><td>Ethicon</td><td>G667G</td><td></td></tr><tr><td>Unità di eutanasia</td><td>Euthanex Smartbox</td><td>EA-32000</td><td></td></tr><tr><td>Cavilon No Sting Barrier Film</td><td>3M Health Care</td><td>3346N</td><td></td></tr><tr><td>TH1/TH2 9-Plex assay, kit ultrasensibile</td><td>MesoScale Discovery</td><td>K15013C-1</td><td></td></tr><tr><td>Dispositivo con elettrodi stimolanti</td><td>Biopac Systems</td><td>STIMSOC</td><td></td></tr><tr><td>Aesculap Isis rasoio</td><td>Agnthos</td><td>GT420</td><td></td></tr><tr><td>R70</td><td></td><td></td><td>Dieta per roditori da Lantmannen, Stoccolma, Svezia</td></tr></tbody></table>

aumento tempo di recupero e diminuzione lps per studiare il nervo vago meccanismi di stimolazione in risposta infiammatoria limitati

Increased Recovery Time and Decreased LPS Administration to Study the Vagus Nerve Stimulation Mechanisms in Limited Inflammatory Responses

L'infiammazione è una risposta locale all'infezione e al danno tissutale mediata da macrofagi attivati, monociti e altre cellule immunitarie che rilasciano citochine e altri mediatori dell'infiammazione. Per molto tempo, i meccanismi umorali e cellulari sono stati studiati per il loro ruolo nella regolazione della risposta immunitaria, ma i recenti progressi nel campo dell'immunologia e delle neuroscienze hanno anche svelato specifici meccanismi neurali con interessanti potenzialità terapeutiche. È stato descritto che la cosiddetta via antinfiammatoria colinergica (CAP) controlla le risposte immunitarie innate e l'infiammazione in modo molto potente. All'inizio degli anni 2000, Tracey e collaboratori hanno sviluppato una tecnica che stimola il nervo vago e imita l'effetto del percorso. La metodologia si basa sulla stimolazione elettrica del nervo vago a basso voltaggio e frequenza, al fine di evitare eventuali effetti collaterali di sovrastimolazione, come la deregolazione della variabilità della frequenza cardiaca. Sono ora disponibili dispositivi elettrici per la stimolazione, che facilitano l'impostazione della metodologia in laboratorio. L'obiettivo di questa ricerca è stato quello di indagare il potenziale coinvolgimento delle prostaglandine nella CAP. Sfortunatamente, sulla base di precedenti tentativi, non siamo riusciti a utilizzare il protocollo originale, poiché la risposta infiammatoria indotta era troppo elevata o non era adatta alle proprietà del metabolismo enzimatico. Le diverse impostazioni del protocollo chirurgico originale sono rimaste per lo più invariate, ma le condizioni relative all'induzione infiammatoria e il punto temporale prima del sacrificio sono state migliorate per adattarsi ai nostri scopi (ad esempio, indagare il coinvolgimento della CAP in risposte infiammatorie più limitate). 
La versione modificata del protocollo originale, presentata qui, include un intervallo di tempo più lungo tra la stimolazione del nervo vago e l'analisi, che è associato a una minore induzione di risposte infiammatorie. Inoltre, mentre diminuivamo il livello di lipopolisaccaridi (LPS) da iniettare, ci siamo anche imbattuti in nuove osservazioni riguardanti le proprietà meccanicistiche nella milza.

Livello di TNFa e interleuchina-1β (IL-1β) dopo aver aumentato il Time Lapse dopo l'intervento e ridurre la dose di LPS Come mostrato in precedenza, utilizzando il protocollo originale, VNS diminuzione dei livelli di TNFa (169,3 ± 24,9 pg / mg in SHAM contro 39,7 ± 10,8 pg / mg in VNS, p &lt;0.001) e IL-1β (360.0 ± 40.21 pg / mg SHAM contro 191,7 ± 27,2 pg / mg in VNS, p &lt;0,01) nella milza dopo l'iniezione intraperitoneale di ...

La stimolazione del nervo vago ha dimostrato di avere una forte efficacia per ridurre l'infiammazione periferica. Qui, presentiamo un protocollo di stimolazione del nervo vago modificato che consente ulteriori esami dei meccanismi antinfiammatori colinergici in risposte infiammatorie limitate.

Aumento tempo di recupero e Diminuzione LPS Per studiare il nervo vago meccanismi di stimolazione in risposta infiammatoria limitati

Inflammation is a local response to infection and tissue damage mediated by activated macrophages, monocytes, and other immune cells that release ...

L'obiettivo generale di questo intervento chirurgico è osservare l'effetto della stimolazione del nervo vago in condizioni infiammatorie. Analizzare e comprendere i diversi meccanismi e le cellule coinvolte nella cosiddetta via antinfiammatoria colinergica. Questo metodo è stato sviluppato nel laboratorio Kevin Tracey del Feinstein Institute.Il metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della neuroimmunologia. I recenti progressi stabiliscono uno stretto legame tra il sistema nervoso e quello immunitario. Il vantaggio principale di questa tecnica è che può essere facilmente installata in laboratorio.Ma è necessario seguire regole importanti per quanto riguarda la cura degli animali e il protocollo chirurgico. Il decorso errante del nervo vago in tutto il corpo e la sua capacità di regolare le informazioni in vari modelli animali implica che la sua stimolazione potrebbe essere utile nel trattamento di molte malattie infiammatorie. Di solito gli individui che non conoscono questa tecnica faranno fatica a identificare e isolare il nervo vago dall'arteria carotide sotto osservazione microscopica.Tuttavia, anche se all'inizio è complicato, diventa più facile con il tempo e la pratica. Iniziare accendendo il computer e il sistema di acquisizione dati collegato all'elettrodo stimolante. Avvia il software di acquisizione e analisi dei dati.Quindi seguire un'aliquota di 5 milligrammi per millilitro di lipopolisaccaride o LPS e diluirla a zero virgola cinque milligrammi per millilitro con soluzione fisiologica. Anestetizzare un topo di 25 grammi in una camera di induzione. Quando viene raggiunto il livello di anestesia desiderato, spostare l'animale dalla camera alla maschera.Ruotare il connettore a tre vie per alimentare la maschera e regolare il regolatore di flusso. Prima di iniziare la procedura chirurgica, verificare la presenza di un piano chirurgico di anestesia mediante perdita del riflesso di raddrizzamento e una frequenza respiratoria regolare di circa 100 respiri al minuto. Una volta che il mouse è adeguatamente anestetizzato, fissare le gambe del mouse al banco di lavoro con del nastro adesivo.Assicurati che il naso dell'animale sia ancora posizionato con cura nella maschera. Disinfettare adeguatamente l'area chirurgica secondo le procedure approvate. Quindi, dopo aver praticato un'incisione di cinque centimetri nella pelle a livello del collo, posizionare uno stereomicroscopio con un obiettivo a 12 punti cinque x per visualizzare l'area chirurgica.Localizzare il muscolo sternocleidomastoideo rimuovendo gli strati di pelle e grasso con una pinza. Ritrarre il muscolo sternocleidomastoideo e muovere la pinza dietro sia il nervo vago sinistro che l'arteria carotide. Isolare il nervo dall'arteria posizionando la pinza con molta attenzione tra il nervo e l'arteria.Questo è un passaggio fondamentale della procedura, poiché il nervo e l'arteria sono vicini l'uno all'altro, è molto facile tagliare i vasi e uccidere gli animali. Tuttavia, posizionando con molta attenzione la pinza tra il nervo e l'arteria, alla fine si separano ed è possibile isolare il nervo vago. Ora, posiziona l'elettrodo sotto il nervo vago.Poiché l'elettrodo dell'ago è piuttosto lungo, il nervo sarà sempre a contatto con l'elettrodo anche se si muove leggermente. Successivamente, eseguire un'iniezione intraperitoneale di LPS e attendere cinque minuti prima di iniziare la stimolazione. Dopo cinque minuti, stimolare il nervo vago per cinque minuti a cinque volt e un hertz premendo il pulsante di avvio nel software di acquisizione.Al termine del periodo di stimolazione, rimuovere l'elettrodo e quindi cucire la ferita dell'animale con filo di sutura chirurgica. Spruzzare un film barriera no-sting sulla ferita per migliorare la guarigione e proteggere dalle infezioni. Infine, sposta l'animale in una gabbia pulita e monitora mentre riprende piena coscienza.Le immagini seguenti dimostrano l'effetto della ridotta concentrazione di LPS e dell'aumento della latenza al sacrificio sui livelli di TNF alfa e IL uno beta dopo la stimolazione del nervo vago. Qui, si può vedere che il paradigma originale riduce significativamente sia il TNF alfa che l'IL uno beta rispetto ai controlli operati da sham. Il protocollo dimostrato in questo video riduce significativamente i livelli di TNF alfa ma non di IL uno beta.Come si vede qui, un recupero di sei ore senza iniezione di LPS non influisce sui livelli di TNF alfa o IL uno beta. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in circa 20 minuti se eseguita correttamente. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della neuroimmunologia.Studiare la connessione tra il sistema nervoso centrale e il sistema immunitario. E studia anche l'innervazione del nervo vago di nuovi organi e l'effetto della via antinfiammatoria colinergica nelle malattie infiammatorie croniche. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come localizzare, isolare e stimolare il nervo vago.E tieni anche presente che il livello di infiammazione indotta e il tempo di recupero dell'animale potrebbero essere questioni importanti da tenere in considerazione.

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