Name: 細胞系譜マーカーの共局在とトマト信号 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 56 s
Description: 学ぶ細胞系譜追跡法と免疫蛍光を用いた軟骨細胞から骨細胞への直接変換機構。この手法はin vivoでの細胞運命と分化状態を可視化し、骨形成の理解を深める。

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この研究は、JQFに対するNIH助成金DE025014によって支援されました。

すべてのプロトコルは、歯科のテキサスA＆M大学で施設内動物管理使用委員会（IACUC）によってレビューされ、承認されました。 1.動物の繁殖<ol><li>本研究では3動物モデルを使用してください。顆形成に胚の軟骨細胞の運命を調査し、最初の使用Col10a1-Creを 15匹とのRosa26 tdTomatoでそれらを横断するには（B6; 129S6- Gtの（ROSA）26Sor TM9（CAG-tdTomato）Hze / J）マウスはCol10a1-を得るために、 CREとのRosa26 tdTomatoマウス。次に、2.3Col1a1-GFPマウス 16と、これらのマウスを渡ります。 Col10a1-Creをを使用します。 ROSA26 tdTomato; 2.3Col1a1-GFPマウスは、細胞系譜トレース実験（ 図1B）を実行します。 </li><li>出生後軟骨細胞の運命を研究するために、ステップ1.1と同様の手順に従いますが、 アグリカン-CREのERT2（ のAgg-CreをERT2を使用）17,18ラインとのAgg-CreをERT2を保ちます。 ROSA26 tdTomato; 2.3Col1a1-GFPマウスは、細胞系譜トレース実験（ 図1C）を実行します。生後14日目にタモキシフェンを注入します。 </li><li>免疫蛍光と技術をトレースする細胞系譜を結合するには、 のAgg-CreをERT2マウスとのRosa26 tdTomatoマウスを渡ります。実験で両方の遺伝子を運ぶマウスを使用し、生後3日目（ 図1D）にタモキシフェンを注入。 </li></ol> 2.材料の準備<ol><li> 10mg / mlの濃度で10％エタノールおよび90％のトウモロコシ油中タモキシフェン粉末を溶解します。注射のための投与量は75ミリグラム/ kgです。 </li><li> 7.4のpH値を調整するために2 M水酸化ナトリウムを使用して、4％の濃度にPBS中パラホルムアルデヒド（PFA）粉末を溶解します。屠殺後（下顎頭と後ろ足がここで使用されている）は、組織を固定するために、4％PFAのソリューションを使用してください。理由は、そのの毒性は、手袋、フェイスマスクとフードにPFAを扱います。 </li><li> 7.4のpH値を調整するために2 M水酸化ナトリウムを使用して、10％の濃度になるように蒸留水にEDTA粉末を溶解します。下顎頭と後肢を脱灰するために10％のEDTAを使用してください。 </li><li> 15％および30％の濃度で、PBS中のスクロース粉末を溶解します。脱灰後の組織を脱水するためにショ糖溶液を使用してください。 </li><li> 2 mg / mlで、pHが5.0の濃度でPBS中のヒアルロニダーゼの粉末を溶かします。このソリューションは、免疫抗原回復のためのものです。 </li><li> Runx2のまたはDMP1免疫蛍光染色のためにPBS中の3％ウシ血清アルブミン（BSA）、20％ヤギ血清を含有するブロッキング溶液を調製し、1.5 mlのチューブを使用します。 </li><li> Runx2のかDMP1免疫蛍光染色のために、PBS中の2％ヤギ血清が含まれている一次抗体溶液を準備するために1.5 mlチューブを使用してください。 Runx2のための400および1：100 DMP1のための一次抗体の濃度が1です。 </li><li>準備するために1.5 mlチューブを使用します偽陽性の結果を回避するために、免疫蛍光染色のための対照としてのウサギIgG溶液。液をPBS中の2％ヤギ血清が含まれています。 Runx2の制御のためのウサギIgGの濃度は1：400; DMP1は、1：100。同時に実験およびコントロール染色を実行します。 </li><li> Runx2のまたはDMP1免疫蛍光染色のためにPBS中の2％ヤギ血清を含有する二次抗体溶液を調製する1.5mlチューブを使用します。 500：1の希釈で二次抗体を使用してください。 </li></ol> 3.スライドさせて共焦点顕微鏡のための準備（のみトレース細胞系統、免疫蛍光ではありませんコンビネーション） <ol><li>有利な時点でのAgg-CRE ERT2マウスではタモキシフェンを注入します。 <ol><li>まず、そのケージからマウスを削除します。その後、腹部を露出させ、マウスの背中の皮膚を取得し、それをひっくり返すために左手の親指と人差し指を使用しています。シリンジを保持するために右手を使用してください。注射のための最適なエントリー・ポイントはリットルでありますEFTや下腹部の右側に、肝臓や膀胱を回避することができます。 </li><li>マウスの後肢に注射器を平行に保ち、腹腔内に注入します。注射のための投与量は75ミリグラム/ kgです。それぞれ、18グラム - 9グラム、11 - - 13グラム、および16の2週間、3週間、および4週齢の年齢のマウスの重量は約7です。 </li></ol></li><li>キシラジン/ Ketasetの組み合わせでマウスを麻酔。 <ol><li>作業溶液を調製するには、まず、それぞれ、1mg / mlのおよび5mg / mlの濃度に蒸留水でキシラジンとKetasetを希釈します。 2比：次に、1でキシラジンとKetasetを混ぜます。注射のための投与量は30μL/ gです。 </li><li>ステップ3.1のように注入します。マウスの足首をつまんで麻酔を確認してください。それは何の反応を持っていない場合は、マウスは無意識です。 </li></ol></li><li>麻酔した後、4％PFAでマウスを灌流。 <ol><li>マウスは意識を失った後、entirelするボード上でマウスの4脚を固定しますyは腹部を露出させます。 </li><li> 70％エタノールで腹部を飽和させ、中央の線に沿って首に下腹部から切除を行います。ピンチと同時に腹膜を明らかにするために側面に皮膚を引っ張ります。縦方向の切除を行うために解剖ハサミを使用してください。 </li><li>カットオフと心臓を露出するためにフロントリブを削除します。 、22 Gシリンジで左心室から心臓に穴を開け、シリンジを保持し、同時に右心耳にスロットを切りました。 </li><li>ゆっくりと右心耳からのカットから血液をフラッシュしながら、心血管系に沿って灌流される4％PFAを、注入します。灌流のためのPFAの体積を1ml /グラムです。ハードダクト建物の排気システムにあるクラスI生物学的安全キャビネットの中で、この手順を実行します。 </li></ol></li><li>ピールマウスの皮膚を切り、4℃で一晩固定するための4％PFAの40ミリリットルが含まれている50-mlのポリプロピレン製遠心管に全身を置きます。 </li><li>慎重に身体から下顎骨と後肢を除去し、表面に筋肉や腱を除去するために、解剖ハサミと＃3、＃5鉗子を使用してください。ハードダクト建物の排気システムにあるクラスI生物学的安全キャビネットの中で、この手順を実行します。 </li><li>第三大臼歯の先端領域で、2枚に下顎をカット。同様に、脱灰を促進するために、骨髄腔を露出させるために中間シャフトに大腿骨および脛骨を切断します。顆と関節丘処理を含む部分を入れて、10％のEDTAの40ミリリットルに後ろ足と一緒に2、4℃で脱灰するために - 50-mlのポリプロピレン遠心管中で4日間。 </li><li> 50mlのポリプロピレン遠心管中で4℃で一晩顆と後肢を脱水し、15％ショ糖の50ミリリットルを使用してください。 </li><li> 50mlのポリプロピレン遠心管中で4℃で一晩顆と後肢を脱水し、30％ショ糖を使用してください。 </li><li>矢状面に沿って、で試料を埋め込みます凍結切片機で切削プレート上の10月<ol><li>水平顆またはマウント型内の後ろ足を置きます。 10月に組織を水没し、10月がフリーズするまで凍結切片機にそれを残します。 </li><li>切削プレート上で10月ブロックをマウントします。 10月は完全に凍結されていることを確実にするために切断する前に、約15分間待ちます。 </li></ol></li><li> 10-μmの切片に顆と後肢をカットします。 -20℃でスライドや店舗のセクションを収集します。 </li><li>染色の前に水を除去するために、37℃の室内でスライドをインキュベートします。 </li><li> 5分間蒸留水で2回スライドを洗浄します。 </li><li>各セクションの周りに水を拭き取り。セクションを一周し、円形にDAPIまたは非蛍光退色防止マウントソリューションを削除するには、疎水性のバリアペンを使用してください。慎重にカバースリップを置きます。 </li></ol> Runx2のとDMP1 4.免疫組織化学染色注：IgGのコン免疫組織化学染色は、偽陽性シグナルを回避するトロールが必要です。実験群および対照群についての染色を同時に行う必要があります。 <ol><li>染色の前に水を除去するために37℃のチャンバー内でスライドをインキュベートします。 </li><li>蒸留水で2回スライドを洗浄します。 </li><li>スライド上のすべてのセクションを一周する疎水性バリアペンを使用してください。この段階から、完全にセクションをカバーするために円形に調製した溶液のすべてを追加します。 </li><li> 37℃で30分間加湿チャンバー内にヒアルロニダーゼを持つセクションを扱います。 （ステップ4.5 - 4.8）溶液の体積は、セクションのサイズによって異なります。顆と長骨のために100μlのための溶液50μlを使用してください。 3回（0.1％のTween 20を含んでいるPBS）PBSTで洗浄します。 </li><li>準備し、各セクションにブロッキング溶液を塗布し、室温で1時間加湿チャンバーでそれらをインキュベートします。 </li><li>プライマリを持つセクションをインキュベート一晩4℃で抗体溶液（ウサギ抗マウスRunx2の、またはウサギ抗マウスDMP1）。 PBSで3回洗浄します。 </li><li>室温で2時間、二次抗体溶液（ヤギ抗ウサギアレクサフルオロ488）を用いて切片をインキュベートします。 PBSで3回洗浄します。 </li><li>セクションの周りに水を拭き取り、スライド上のセクションをカバーするために円形にDAPIをドロップします。慎重にカバースリップを置きます。 </li></ol> 5.共焦点顕微鏡<ol><li> 488ミクロン（緑）から561ミクロン（赤）の範囲の波長で共焦点顕微鏡を用いた蛍光細胞画像をキャプチャします。 10X、20X、および63Xレンズを使用して、19 200 Hzで、複数の積み重ねられた画像を撮影（1024×1024の寸法）。 </li></ol>

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著者らは、競合する金銭的利益やその他の利益相反がないことを宣言します。

技術的制限のために、 インビボでの細胞の挙動を研究することは常に困難です。しかし、細胞系譜トレース技術は、細胞生物学7-9を研究するための強力なツールであることが証明されています。本研究では、さらに、免疫蛍光法と組み合わせることにより、このプロトコールを改良します。この方法では、細胞の運命は、系統追跡の適用を拡大する、複数の関連マーカーによって定義することができます。また、免疫蛍光およびトマト信号のこの共局在は、同時に単独のトレース細胞系譜よりも多くの情報を提供し、創始細胞の子孫の数、それらの位置、およびそれらの分化状態を表示します。さらに、細胞特異的マーカーの使用は、調査を促進する、化合物のマウスの生成を単純化することができます。 Creの特異性は、系統の明確な帰属し、結果20,21の正確性が重要です。それは非常にイムです細胞の運命を検証するために、適切なのCreラインを選択するportant。 それはまた、軟骨細胞18のためのよく認識されたマーカーであるので、それは、肥大軟...

開発中に、軟骨内骨形成は、骨格の体積の80％以上を占めています。広く、それが肥大軟骨細胞のアポトーシスから始まると考えられています。続いて、下層の骨髄由来の細胞が侵入し、骨髄および骨膜由来の細胞1,2による新たな骨沈着に続いて血管新生を、開始します。肥大軟骨細胞（HCS）の細胞の運命は、しかし、数十年の3のための議論の課題となっています。最初に、のHCは、軟骨細胞分化経路の末端であるとみなされ、アポトーシスは、一般のHCの最終的な運命であると考えられました。今、一部の研究者は、少なくとも一部のHCが生き残ると軟骨内骨形成に寄与し得ることを示唆しています。彼らは成長板軟骨細胞は、超微細構造に基づいて、骨芽細胞に分化転換する能力、免疫組織化学染色を持っていたし、in vitroで 、これらの方法のいずれもが、ワット、46を研究することを提案したが、骨芽細胞系への軟骨細胞の寄与を実証するに決定的なERE。 細胞系譜トレース技術は、細胞の運命を研究するためのより厳密な方法を提供します。簡単に言えば、唯一の細胞の特定の型で表現されるリコンビナーゼ酵素は、レポーター遺伝子の発現を刺激します。このように、この細胞の種類とその子孫は永久に7のラベルが付いています 。 Cre-loxP系は、一般に系統追跡に使用されます。 CRE（リコンビナーゼ酵素）は、2つのloxP部位の間にSTOPシーケンスを切除し、特定の細胞株（ 図1A）でレポーターを活性化します。いくつかのケースでは、研究者は、Creは、エストロゲン受容体（CreをERT2）8の修正された形に融合させ、タモキシフェンなど、薬剤を使用してのCreを活性化するために有利な時点を選択することができます。蛍光レポーターは、彼らが劇的に複雑さを軽減するための実験をトレースする系統における標準となっていますそして、8,9をトレース細胞の運命の精度と効率を向上させます。それはそれは簡単に7（ 図1A）を可視化すること、明るい蛍光タンパク質と最強のエピ蛍光を有しているためtdTomatoは、蛍光レポーターの中で最良の選択となってきています。 トレースシステムのRosa26 tdTomato系統を使用することにより、当社グループおよび他の研究者は、HCSは、開発10-14の間に骨細胞へのそれらの表現型を変更することができることを示しています。これを達成するために、我々は、Rosa26遺伝子tdtomato（全ての細胞中に遍在式）/のCre（軟骨細胞に特異的な）マウスとの組み合わせを追跡する二組の開発：2.3Col1a1-GFP（骨芽細胞に特異的）および免疫蛍光（骨細胞に特異的）。データは、両方の方法は、 インビボでの細胞の運命を研究するための実行可能な方法であることを示しています。

<table><tbody><tr><td>タモキシフェン&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>T5648</td>が<td>Creイベントを有効にする&nbsp;</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>シグマ&nbsp;</td><td>P6148</td><td>は、サンプルエ</td></tr><tr><td>チレンジアミン四酢酸</td><td>Alfa Aesar</td><td>A10713</td>を固定し<td>、硬組織</td></tr>スクロースを脱灰します<tr><td>&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>ウシ精巣から組織ヒアルロニダーゼを脱水&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>H4272</td><td>免疫化学的染色用抗原取得</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>A3059</td><td>ブロッキングソリューション&nbsp;</td></tr><tr><td>Runx2の一次抗体&nbsp;</td>免疫<td>化学染色用の</td><td>細胞シグナル</td><td>D1L7F</td>一次抗体</tr><tr><td>Dr. Chunlin Qin</td><td></td>が提供する<td>DMP1用一次抗体</td> 免疫<td>化学染色</td></tr><tr><td>用抗ウサギ</td><td>IgGシグマ</td><td>18140</td>コントロール用免疫<td>化学染色</td></tr><tr><td>二次抗体&nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>免疫化学染色用セカンド抗体</td></tr><tr><td>OCT</td><td>Tissue-Tek</td><td>4583</td><td>凍結切片のサンプルを埋め込む</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP337</td><td>PBST</td></tr><tr><td>非蛍光退色防止封入剤</td><td>Life technologies</td><td>P36934</td><td>マウンティングスライド</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Life technologies</td><td>P36931</td><td>核染色</td></tr><tr><td>疎水性バリアペン</td><td>ベクターラボラトリーズ</td><td></td>は、<td>免疫化学染色のためにスライド上のセクションを丸で囲んでいます&nbsp;</td></tr><tr><td>キシラジン</td><td>AnaSed</td><td></td><td>麻酔&nbsp;</td></tr><tr><td>ケタセット&nbsp;</td><td>ゾエティス</td><td></td><td>麻酔&nbsp;</td></tr><tr><td>クライオセクショニングマシン</td><td>ライカ</td><td>CM1860 UV</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>DM6000 CFS&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

細胞系譜マーカーの共局在とトマト信号

Co-localization of Cell Lineage Markers and the Tomato Signal

細胞系統追跡システムは、発生生物学研究に主に使用されてきました。 Creリコンビナーゼの使用は、特定の細胞株およびすべての子孫におけるレポーターの活性化を可能にします。ここでは、軟骨細胞は、直接のCre、Col10a1-のCreおよびアグリカン-CreをERT2（ のAgg-CreをERT2）の2種類を使用して、長い骨と下顎頭の開発中に骨芽細胞および骨細胞に変身することを実証するための技術をトレースする細胞系譜を使用し、Rosa26遺伝子と交配tdTomato。 Col10とアグリカンの両方が軟骨細胞のためのマーカーをよく認識しています。 これに基づき、我々は、蛍光免疫組織化学-する特定の細胞マーカーの発現を分析することによって、細胞の運命を定義すると併せてトレース新しい方法細胞系統を開発しました。 Runx2の（早期骨形成細胞のマーカー）および象牙質マトリックスprotein1（DMP1;後期骨形成細胞のマーカー）しました。軟骨細胞由来の骨細胞およびそれらの分化状態を識別するために使用されます。この組み合わせは、細胞系統のトレースの適用を広げるだけでなく、化合物をマウスの生成を簡素化するだけでなく。さらに重要なことは、親細胞の子孫の数、位置、および分化の状態だけではトレース細胞系統よりも多くの情報を提供し、同時に表示されます。結論として、細胞系譜トレース技術および免疫蛍光の同時適用は、in vivoで細胞生物学を研究するための強力なツールです。

軟骨細胞は直接下顎頭と長骨における骨細胞（骨芽細胞および骨細胞）に変換します。 アグリカン 、軟骨形成のための重要な遺伝子は、主に早期に成熟した軟骨細胞18で表されます。その結果、 のAgg-CreをERT2年齢の2週間でのタモキシフェンの注射; ROSA26 tdTomatoマウスはすべて軟骨細胞とその娘細胞に赤トマトレポーターを活性化しました。 2.3Col1a1-GFPラインは、コラーゲン1発現骨細胞、特に骨芽細胞および前骨細胞における緑色蛍光発光色を生じました。黄色（緑と組み合わせた赤）は、コラーゲン1遺伝子を発現する軟骨細胞由来の骨細胞の存在を示しました。 図2Aでは、軟骨下の顆プロセスにおける骨細胞のほとんどは赤やy...

2.3Col1a1-GFP（骨芽細胞に特異的）で1と（骨細胞に特異的）免疫蛍光との1：私たちは（特に軟骨細胞で発現さ）/のCreマウス（遍在すべての細胞で発現）Rosa26遺伝子tdtomatoのトレースの組み合わせの2セットを開発しました。データは、骨細胞への軟骨細胞の直接形質転換を実証します。

The cell lineage tracing system has been used predominantly in developmental biology studies. The use of Cre recombinase allows for the activation of the ...

この細胞系譜追跡技術とその後の免疫蛍光法の全体的な目標は、in vivoでの細胞生物学と細胞運命を調査することです。この方法は、軟骨内形成中に骨を形成する細胞の起源に関する細胞生物学および組織発生分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、創始細胞の子孫の数、位置、および分化状態を同時に表示し、系統追跡の適用を広げることです。この方法は、正常な発生中の軟骨細胞から骨形成細胞への形質転換に関する洞察を提供しますが、腫瘍の細胞形質転換などの他の組織や疾患モデルにも適用できます。一般に、この方法に不慣れな人は、凍結切片化が難しく、染色中に切片が剥がれやすいため、苦労します。この手法のアイデアを思いついたのは、海綿骨のchrondocytesから形質転換した骨形成細胞の分化状態を実証しようと考えたときでした。マウスの肥厚性chrondocytesの系統をたどるためには、まず、添付のテキストプロトコルに記載されているように動物を繁殖させます。これにより、細胞系譜のトレースと蛍光免疫組織化学を併用して、クローンサイトの運命を定義することができます。目的のマウスが繁殖したら、ケージから取り出します。次に、左手の親指と人差し指を使用してマウスの背面の皮膚をつかみ、腹部を露出させて裏返します。右手で、28.5ゲージの針が装備され、タモキシフェンが装填された0.5ミリリットルの注射器を手に取ります。シリンジを後ろ足と平行に置き、マウスの腹膜に挿入します。肝臓と膀胱を避けて下腹部の側面に溶液を注入して、好ましい時点でCreシステムを活性化します。.2週間後、マウスを適切に麻酔し、マウスのペダル反射を確認して、マウスを固定する準備をします。次に、テープを使用してマウスの4本の脚をボードに固定し、腹部を露出させます。次に、マウスの腹部を70%エタノールで飽和させてその領域を滅菌し、次に中央の線に沿って下腹部から首まで切開を行います。次に、皮膚をつまむと同時に側面に引っ張って腹膜を露出させ、解剖はさみを使用して縦方向の切除を行います。フロントリブを切り取って取り除き、心臓を露出させます。次に、クラスIのバイオセーフティキャビネットで、4%パラホルムアルデヒドを充填し、22ゲージの針を装備した注射器を使用して心臓の壁に穴を開け、左心室に入ります。シリンジを持ったまま、右耳介に溝を開けます。次に、血液が右耳介からの切り口から洗い流される間、心血管系を灌流するために、溶液を左心室にゆっくりと注入します。マウスの皮膚と臓器を切除した後、40ミリリットルの4%パラホルムアルデヒドを含む50ミリリットルのポリプロピレン遠心チューブに全身を入れ、動物を摂氏4度で一晩固定します。翌日、マウスをクラスIバイオセーフティのペトリ皿に移します。解剖ハサミと3番と5番の鉗子を使用して、下顎骨

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

植物の転写産物の正確な位置のためのin situハイブリダイゼーション

の細胞特異的な分析<em&gt;シロイヌナズナ</em&gt;蛍光活性化細胞選別を使用した葉

ここでは、異なるマウス組織内のIL-22産生細胞を可視化するためのトランスジェニックレポーターマウスモデルについて説明します。この方法は、マウス内の他のサイトカインまたは分泌タンパク質の位置を追跡するために使用できます。...

レポーターマウスを用いたIL-22を発現するリンパ球の可視化

ここで、我々は、2つの異なる色で共通の前駆細胞由来の神経細胞の可視化を可能にモザイク標識技術のためのプロトコルを提示します。これは、出生付き合っ個々のニューロンを、異なる個体の同じ神経細胞に遺伝子機能を研究する能力を持つ神経系統解析を容易にします。...

ツインスポットMARCMを使用して細胞系譜の解析と遺伝子機能研究

植物の細胞間の接続、原形質 (Pd)、生理学と植物ウイルスの相互作用工場で中心的な役割を果たしてください。Pd 輸送に重要なは、Pd にタンパク質を直接信号を並べ替えています。しかし、これらのシーケンスに関する知識はまだ始まったばかりで。Pd Pd...

タンパク質Planta Plasmodesmal ローカリゼーション シーケンスの同定

別の植物種から茎頂の共焦点のライブ イメージング

形態学的変化は、活性化後の免疫応答性線維芽細胞で起こり、細胞募集の変化を促進する。遺伝子組み換え線維芽細胞特異的タンパク質1(FSP1)-creと組み合わせて2光子イメージングを利用する。tdTomatoフロキセドストップフロキシング(TB/TB)マウスラインと緑色蛍光タグ付きリポ多糖-FITCは、真皮線維芽細胞におけるリポ多糖類の非常に特異的な取り込みおよび生体内の形態変化を示すことができる。...

皮膚における遺伝的にタグ付けされたレポーター細胞の生体内2色2光子イメージング

この原稿では、tdTomatoおよびeGFPを発現する双方向レポータープラスミドをトランスフェクトしたHEK293T細胞を用いてBK-ポリオマウイルス転写活性のFACSベースの測定を行うプロトコルが提示される。この方法はさらに、ウイルス転写に対する新規化合物の影響を定量的に決定することを可能にする。...

フローサイトメトリーによるBKポリオマウイルス非コード制御領域駆動転写活性の測定

二重マーカー(MADM)を用いたモザイク解析を用いて、単一細胞レベルで候補遺伝子の系統トレースと機能遺伝子解析を行うプロトコルを紹介する。MADMクローン解析は、個々の前駆細胞とその娘細胞の増殖行動、細胞出力、および系統関係を測定するための定量的枠組みを提供します。...

二重マーカーを用いたモザイク解析を用いた大脳皮質の開発における系統トレースとクローン解析(MADM)

誘導性トランスジェニック系統トレースマウス系統を用いて幹細胞およびその子孫を蛍光色素で恒久的にマーキングする能力は、...

成体マウス脳における誘導性蛍光標識幹細胞の系統追跡

このプロトコルは、ウイルス-プラスモデスマタ相互作用またはプラスモデマーム輸送中にプラスモデスマタを標的とするタンパク質の共焦点顕微鏡法に基づく分析のための最適なプラスモデスママーカーの選択を説明しています。...

Nicotiana benthamianaにおけるPlasmodesmataへのタンパク質ソーティングの共焦点顕微鏡分析

学ぶ細胞系譜追跡法と免疫蛍光を用いた軟骨細胞から骨細胞への直接変換機構。この手法はin vivoでの細胞運命と分化状態を可視化し、骨形成の理解を深める。

細胞系譜マーカーの共局在とトマト信号

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