Elettroforesi capillare Separazione di anticorpo monoclonale Isoforme Utilizzando un capillare Neutral

Al giorno d'oggi, la tecnica dell'elettroforesi delle cellule capillari costituisce uno dei terreni più risolutivi e sensibili per l'analisi di biomolecole come gli anticorpi monocolonali. Tuttavia, il successo dell'implementazione di questa tecnica dipende dalle conoscenze e dalle abilità dell'analista nelle fasi critiche durante la preparazione del campione e del sistema. Questo tutorial ha lo scopo di condurre un'analisi di successo, una spiegazione veramente dettagliata della preparazione della soluzione e dei campioni, la preparazione del sistema di elettroforesi capillare, l'impostazione del metodo degli strumenti e la decisione e l'elaborazione dei dati.

Nel complesso, questo protocollo può essere utilizzato per lo sviluppo e il miglioramento delle competenze del personale coinvolto nella preparazione dei laboratori di chimica analitica. Pesare la quantità di HPMC per ottenere una concentrazione finale dello 0,05% in 100 millilitri. Poiché l'HPMC è un polimero elastico basico, come primo passo, versare il bounder in un becher di vetro e aggiungere lentamente 80 millilitri di acqua per desegregare la polvere.

Quindi, sciacquare la vaschetta bagnante con acqua per rimuovere le tracce di polvere. Aggiungere i reggenti rimanenti come di consueto e mescolare la soluzione. Regolare il valore del PH a 4,8 con il 50% di acido acido.

E lasciare che la soluzione si stabilizzi per cinque minuti. Successivamente, regolare il PH secondo necessità. Aggiungere acqua fino a ottenere il volume finale di 100 millilitri.

Filtrare la soluzione di BG preparata attraverso una membrana neutrofila e versarla in una bottiglia di vetro. Infine, etichettare la bottiglia di vetro in modo appropriato e conservarla in frigorifero. Per preparare il campione, come primo passaggio aggiungere 162 microlitri di soluzione tampone in tracce in una provetta da 1,5 millilitri.

Quindi aggiungere 18 microlitri di un campione di mappa precedentemente preparato alla concentrazione di 10 milligrammi per millilitro. Come terzo passaggio, aggiungere 20 microlitri di una soluzione di istamina all'uno per cento precedentemente preparata per ottenere un volume finale del campione di 200 microlitri. Il passaggio successivo, preparare un campione per cinque secondi.

E centrifugare per cinque secondi. Aspirare il volume totale del campione. E versare verso l'alto in una micro-fiala per evitare l'introduzione di bolle.

Infine, tappare la fiala e conservarla in frigorifero. Spegnere lo strumento CE premendo l'interruttore di alimentazione. E apri la porta d'ingresso.

Posiziona una nuova salvietta mobile sotto il blocco dell'interfaccia. Sciacquare gli elettrodi attraverso il blocco di interfaccia con acqua utilizzando un flacone di lavaggio. Lasciare che l'acqua goccioli attraverso i fori e asciugare completamente il blocco di interfaccia.

Rimuovere con cura l'acqua in eccesso dagli elettrodi utilizzando la salvietta. Fare attenzione a non essere negli elettrodi durante questa procedura. Rimuovere la salvietta dal sistema di tenuta del campione.

Pulire la superficie dei vassoi dei campioni con un nuovo panno inumidito con acqua e non in movimento. E la superficie dei vassoi tampone. Far scorrere i vassoi tampone verso l'alto, sollevare il sistema di tenuta del campione e pulirne la superficie con il panno.

Riportare i vassoi tampone in posizione. Successivamente, pulire accuratamente il blocco di interfaccia. Pulire la barra di bloccaggio e l'alloggiamento della lampada UV.

Alla fine, assicurati di provare il sistema prima dell'uso. Sciacquare le leve di apertura con acqua utilizzando un flacone di lavaggio. Pulire accuratamente la superficie con un nuovo panno non in movimento per rimuovere la polvere e i sali accumulati.

Infine, assicurati di provarli prima dell'installazione. Pulire le due estremità del cavo in fibra ottica con acqua damppanno in microfibra e confermare il pod luminoso tra le estremità. Rimuovere un nuovo capillare neutro dalla confezione.

Portare ora un'estremità del tubo protettivo del capillare al banco di lavoro. Srotolare e raddrizzare il tubo di plastica ed estrarre con cautela il capillare dal tubo. Attacca un pezzo di carta al banco da lavoro con i seguenti segni di misurazione.

Allineare la finestra capillare al punto zero ai segni di misurazione dei centimetri come segue:Successivamente, fissare le estremità dei capillari al banco di lavoro con del nastro adesivo. Segnare le estremità dei capillari due millimetri al di fuori dei segni di misurazione. Tagliare il cappuccio protettivo all'estremità del capillare più lontana dalla finestra.

E immergere l'estremità del capillare in una fiala CE riempita d'acqua per evitare danni permanenti al rivestimento interno del capillare. Rimuovere il capillare dal flaconcino e inserire con cautela questa estremità nel lato di uscita della cartuccia. Una volta che il capillare è apparso dall'altra parte, tirare quanto necessario fino a quando la finestra del capillare non è centrata rispetto alla finestra della cartuccia come segue.

Successivamente, girare la cartuccia e inserire la spina di apertura nella finestra della cartuccia, premendo per scattare in posizione. Fare attenzione a non rompere la finestra capillare durante questa procedura. Verificare che la luce passi attraverso la finestra quando esposta all'ampia fonte di luce.

Introdurre il capillare nel tubo del refrigerante preformato con tubo preinstallato non inferonato e o-ring. Spingere il capillare attraverso il tubo finché il capillare non appare dall'altra parte. Quindi, inserire l'estremità del tubo sul lato di uscita della cartuccia e serrare i dadi del tubo.

Inserire l'estremità di ingresso del capillare nel lato di ingresso della cartuccia. Una volta che il capillare è apparso dall'altro lato, tirare se necessario. Successivamente, inserire l'estremità del tubo sul lato di ingresso della cartuccia e serrare i dadi del tubo.

Tagliare il cappuccio protettivo all'estremità del capillare più vicina alla finestra. E installare le clip di fissaggio delle celle sulle estremità dei capillari, premendo per scattare in posizione come segue. Tagliare le estremità dei capillari al di sotto delle linee di riferimento sulle placche allungate del capillare.

Assicurati di ispezionare le estremità dei capillari con una lente d'ingrandimento. Se le estremità dei capillari non sono lisce, brunirle con la pietra di cleven. Posizionare l'o-ring dell'apertura nel foro blu dell'apertura.

E inserirlo con cura utilizzando lo strumento di inserimento dell'o-ring. Infine, installare le fiale CE riempite d'acqua nella custodia della cartuccia e posizionare immediatamente la cartuccia nella custodia con le estremità capillari inserite nelle fiale e conservare in frigorifero. Regolare il volume della pipetta.

Aggiungere il volume corretto di acqua nell'ingresso del tampone nelle coordinate del vassoio A1, B1 e F6. E al vassoio di uscita del buffer le coordinate A1, B1, C1, E6 e F6. Aggiungere HCl 0,1 normale alle coordinate C1 ed E6 del vassoio di ingresso del buffer. Aggiungere inoltre BGE alle coordinate D1 ed E6 del vassoio di ingresso del buffer. E al vassoio di uscita del buffer coordinata D1. Infine, tappare tutte le fiale CE nei vassoi di ingresso e uscita del tampone. Durante la procedura, evitare di bagnare i tappi delle fiale per evitare perdite di carbonio. Aprire lo sportello anteriore dello strumento CE.

Innanzitutto, installa il rilevatore UV e fissalo ruotando la vite in senso orario. Sollevare lo sportello interno e installare le leve di apertura premendole verso l'alto nel blocco di interfaccia. Inserire il cavo in fibra ottica nel morsetto e ruotarlo in senso orario.

E collegare l'altra estremità al rilevatore. Maneggiare il cavo in fibra ottica con cura, poiché la flessione potrebbe causarne la rottura. Posizionare il vassoio del campione nel sistema di supporto del campione e farlo scattare in posizione.

Seguendo la stessa procedura, posizionare i vassoi tampone nel sistema di mantenimento del campione. Sollevare la barra di bloccaggio e posizionare la cartuccia capillare nel blocco di interfaccia. Premere il clamp barra su entrambe le estremità e serrare le manopole ruotandole in senso orario.

Chiudere lo sportello interno e chiudere lo sportello anteriore. Infine, accendere lo strumento CE premendo l'interruttore di alimentazione. Creare il metodo dello strumento di condizionamento.

Configura i parametri nel personale delle condizioni iniziali, inclusi la tensione, la cartuccia e la temperatura di conservazione del campione e le impostazioni di trigger. Selezionare duemilaquattordici come lunghezza d'onda di acquisizione. Dichiarare le azioni che devono essere eseguite dallo strumento configurando i parametri in celle programmate a tempo.

Comprese le impostazioni specifiche per ogni fase di risciacquo, iniezione e separazione. Eseguire questa procedura per creare i metodi di condizionamento, funzionamento e arresto dello strumento. Il passaggio successivo consiste nel creare una nuova sequenza.

Programmare il capillare per il condizionamento utilizzando il metodo di condizionamento. Se il capillare viene utilizzato per la prima volta, programmare quattro ripetizioni. In caso contrario, programmare due ripetizioni.

Quindi programmare i campioni da analizzare utilizzando il metodo di esecuzione. Infine, programmare il capillare per lo stoccaggio utilizzando il metodo di spegnimento. L'analisi dell'elettroforesi delle cellule capillari viene completata entro 30 minuti.

Il primo risultato corrisponde allo standard internista dell'istamina come misura delle prestazioni del sistema adeque. Questo è seguito da forme di ghiaccio basiche, principali e acide distintive dell'antiberi monoclonale ebaluadith. L'intera separazione funziona sotto una corrente costante di circa 30 micoampere.

Dopo aver eseguito l'esperimento, esportare i dati grezzi dal software grab e importarli tramite il software empower per l'elaborazione. Il contenuto percentuale di ciascuna forma di ghiaccio si ottiene dopo l'integrazione della dropline verticale del profilo dell'elettrofarogramma. Qui abbiamo rappresentato una guida dettagliata passo passo per condurre l'analisi delle attività monoclonali che sono state generate dall'elettroforesi delle cellule capillari.

Insieme a diverse raccomandazioni per mitigare potenziali problemi, il protocollo presente offre anche il vantaggio di essere facilmente personalizzato per l'analisi di altre proteine considerando brevi modifiche nei parametri di conducibilità e PH.