Name: Pluripotenti cellule staminali derivate cellule cardiache per la riparazione del miocardio (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 37 s
Description: Scopri come differenziare cellule staminali pluripotenti umane in cardiomiociti, cellule endoteliali e muscolari lisce per la riparazione del miocardio. Questo metodo migliora l'innesto cellulare con una nuova tecnica di somministrazione.

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Questo lavoro è stato supportato dalle sovvenzioni del Servizio Sanitario Pubblico degli Stati Uniti NIH RO1s HL67828, HL95077, HL114120 e UO1 HL100407-project 4 (a JZ), da una sovvenzione per lo sviluppo degli scienziati dell'American Heart Association (16SDG30410018) e da un Research Voucher Award dell'Università dell'Alabama presso il Birmingham Center for Clinical and Translational Science (a WZ).

Tutte le procedure sperimentali sono eseguite in conformità con le linee guida animali della University of Alabama a Birmingham. 1. Differenziazione hiPSCs in hiPSC-CMS <ol><li> Cappotto dei pozzetti di una piastra da 6 pozzetti con pre-raffreddata fattore di crescita ridotto miscela proteica gelatinosa a 4 ° C per tutta la notte. Aspirare miscela proteica gelatinosa prima dell&#39;uso. Seed i hiPSCs sulle piastre pre-verniciato, e la cultura nelle cellule (1 x 10 5 cellule per pozzetto) al 5% di CO 2 e 37 ° C in mTeSR1 supplemento mezzo con inibitore ROCK 10 micron. </li><li> Aggiornare la media giornaliera fino a quando le cellule raggiungono il 90% di confluenza; poi, aggiungere fattore di crescita ridotto miscela proteica gelatinosa al mezzo (miscela 0,5 mg gelatinosa proteine per 6 pozzetti, 2 ml di mezzo per pozzetto), e la cultura le cellule per 5% di CO 2 e 37 ° C altri due giorni. <ol><li> Per sostituire il mezzo, delicatamente succhiare il mezzo dalla capsula di Petri con sottovuotoout toccare le cellule, e aggiungere nuovo mezzo utilizzando una pipetta di trasferimento. </li></ol></li><li> Avviare differenziazione sostituendo il mezzo con il mezzo RPMI1640 supplementato con fattori di crescita ridotto miscela proteica gelatinosa, B27 senza insulina, e 100 ng / ml Activin A; cultura le cellule a 5% di CO 2 e 37 ° C per 24 ore. </li><li> Sostituire il mezzo con il mezzo RPMI1640 che è stato integrato con B27 senza insulina, 10 ng / ml proteina ossea morfogenetica 4 (BMP-4), e 10 Fattore ng / ml base di crescita dei fibroblasti (bFGF); cultura le cellule a 5% di CO 2 e 37 ° C per 96 ore. </li><li> Sostituire il supporto con il mezzo RPMI1640 integrato con B27 e continuare la cultura le cellule a 5% di CO 2 e 37 ° C; aggiornare il mezzo ogni 3 giorni. </li><li> Osservare gruppi di contrarre le cellule sotto il microscopio ~ 3 giorni dopo l&#39;inizio della differenziazione. Raccogliere i cluster ~ 7 giorni dopo la prima osservazione contrazioni e lavarli in Hanks soluzione salina bilanciata. <ol><li> Dissociare il cellule raggruppate nella piastra incubandoli in tampone Hanks contenente 100 U / ml di collagenasi IV per 10 min a 37 ° C con delicata agitazione; quindi, aggiungere 0,25% tripsina in acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) per 5 min. </li><li> Neutralizzare soluzione enzimatica con il 10% di siero fetale bovino in RPMI medio / B27 e risospendere le cellule in medium / B27 RPMI. </li><li> Contare il numero di cellule emocitometro. Culture cellule sui piatti 10 cm al 5% di CO 2 e 37 ° C per almeno 3 ore, che consentano alle cellule non cardiomiociti ad aderire alla superficie del piatto cultura. </li></ol></li><li> Raccogliere la sospensione cellulare, che contiene il hiPSC-CM, e mantenere le cellule (circa 1 x 10 6 cellule per 10 cm Piatto) da essi coltura su una superficie Rivestiti miscela proteica gelatinosa. </li></ol> 2. Differenziare hiPSCs in hiPSC-EC <ol><li> Dissociare la popolazione hiPSC in singole cellule incubando °em con chelanti agente al 5% di CO 2 e 37 ° C per 5 min. Trasferire le cellule in una provetta da centrifuga da 15 ml contenente mezzo mTeSR1 fresco. </li><li> Centrifugare le cellule a 200 xg per 5 min. Risospendere le cellule in terreno mTeSR1 integrato con inibitore ROCK 10 micron. Determinare la densità cellulare con un emocitometro. </li><li> Aggiungere 250 ml di 20 unità NIH / ml soluzione di trombina ad un pozzetto di una piastra da 24 pozzetti. </li><li> Aggiungere 1 x 10 6 hiPSCs a 250 microlitri di una / soluzione di fibrinogeno ml 12,5 mg. E aggiungere i 250 ml di soluzione di fibrinogeno cella contenente la trombina-caricato bene. Osservare la miscela solidificare per formare una impalcatura di fibrina hiPSC contenenti all&#39;interno di min. </li><li> Trasferire i, ponteggi cellule contenenti solidificati nei pozzetti di una piastra da 6 pozzetti con la pinza di vetro di copertura, e avviare la differenziazione coltivando i ponteggi in 2 ml di mezzo EBM2 integrato con il 2% B27 senza insulina, activin-A (50 ng / ml), e BMP-4 (25 ng / ml) per 24 ore a 5% CO <sub&gt; 2 e 37 ° C. <ol><li> Sostituire il mezzo attraverso delicatamente succhiando il mezzo di vecchia via del vuoto senza toccare le cellule. Aggiungere nuovo mezzo EBM2 integrato con B27 senza insulina, fattore di crescita vascolare endoteliale (VEGF, 50 ng / ml), eritropoietina (EPO, 100 ng / ml), e trasformando β1 fattore di crescita (TGFβ1, 10 ng / ml), e la cultura ponteggi a 5% di CO 2 e 37 ° C per 48 ore. </li><li> Aggiornare medio e coltura scaffold al 5% di CO 2 e 37 ° C per altre 48 ore; quindi, rilasciare le cellule dal scaffold aggiungendo 200 U collagenasi IV (100 U / ml) al mezzo. </li><li> Spin giù le cellule dopo che sono stati rilasciati. Sostituire il mezzo con 2 ml di mezzo EGM2-MV supplementato con 2% di B27, VEGF-A (50 ng / ml), e SB-431.542 (10 mM); aggiornare il mezzo ogni due giorni. </li><li> Circa 10 giorni dopo (cioè, il ~ 14 ° giorno dopo la differenziazione stato avviato), dissociare le cellule con 100 U / ml di collagenasi IV, isolare hiPSC-EC dalla popolazione di cellule differenziate tramite citometria a flusso analizza per l&#39;espressione di EC-specifiche proteine marker (ad esempio, CD31, CD144) 3. </li><li> Espandere l&#39;isolato hiPSC-EC tramite un protocollo stabilito 3. </li></ol></li></ol> 3. Differenziare hiPSCs in hiPSC-SMC <ol><li> Seed i hiPSCs su piatti che sono stati rivestiti con miscela proteica gelatinosa, e la cultura nelle cellule in terreno mTeSR1 al 5% di CO 2 e 37 ° C, con variazioni medie giornaliere, fino confluenti (~ 2 giorni). </li><li> Avviare differenziazione in cellule mesodermal lineage-coltivando le cellule con CHIR99021 (5 mM) e BMP-4 (10 ng / ml) in terreno RPMI1640 e 2% B27 più insulina per 3 giorni. </li><li> Per produrre hiPSC-SMC con un fenotipo prevalentemente sintetico: <ol><li> Cultura le cellule con VEGF-A (25 ng / ml), fattore di crescita dei fibroblasti (β FGFβ, 5 ng / ml) in RPMI1640 me<html> dium e 2% B27 meno insulina al 5% di CO 2 e 37 ° C per 4 giorni. </li><li> Cultura le cellule in VEGF-A (25 ng / ml), FGFβ (5 ng / ml) in terreno RPMI1640 e 2% B27 più insulina al 5% di CO 2 e 37 ° C per 2 giorni. </li><li> Cultura le cellule β fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGFβ, 10 ng / ml), TGFβ (3 ng / ml) in RPMI1640 e 2% B27 più insulina al 5% di CO 2 e 37 ° C per 4 giorni. </li></ol></li><li> Per produrre hiPSC-SMC con un fenotipo prevalentemente contrattile: <ol><li> Cultura le cellule per 4 giorni con VEGF-A (25 ng / ml) e FGFβ (5 ng / ml) in RPMI1640 e 2% B27 meno insulina. </li><li> Cultura le cellule per 7 giorni con PDGFβ (5 ng / ml) e TGFβ (2,5 ng / ml) in RPMI1640 e 2% B27 più insulina. </li></ol></li><li> Purificare le popolazioni finali hiPSC-SMC coltivando le cellule in lattato (4 mm) contenente RPMI1640 medio metabolica per ~ 6 giorni. </li></ol>jove_title &quot;&gt; 4. Creare le microsfere IGF contenenti <ol><li> olive calore olio a 45 ° C in un bagno d&#39;acqua. </li><li> Calore 5 ml di soluzione di gelatina al 10% a 50 ° C. </li><li> Aggiungere la gelatina per l&#39;olio d&#39;oliva, mescolare, e poi rapidamente raffreddare a 5 ° C aggiungendo ghiaccio bagnomaria. </li><li> Venticinque minuti dopo, aggiungere refrigerata (4 ° C) acetone per l&#39;olio di indurre la formazione microsfere. </li><li> Mantenere la temperatura a 5 ° C per 1 ora; poi, raccogliere le microsfere, lavarli 5 volte con acetone pre-raffreddata a rimuovere l&#39;olio d&#39;oliva, e lasciarli asciugare a 4 ° C. </li><li> Risospendere le microsfere in una soluzione di etanolo al 70% e lo 0,25% glutaraldeide notte a 4 ° C per indurre reticolazione e quindi neutralizzare la miscela con 100 mM glicina. </li><li> Carico IGF nelle microsfere miscelando 5 mg microsfere con 15 microlitri distillata H 2 O contenente 5 mg IGF e lo 0,1% di albumina sierica bovina per 30 min. </li></ol> 5. Creare la patch sul sito di lesione e l&#39;iniezione delle Cellule <ol><li> Sospendere il hiPSC di derivazione CM (2 milioni), SMC (1 milione), e ECS (1 milione) insieme in 1 ml Minimum Essential Medium (MEM). </li><li> Sospendere 5 mg di microsfere in 1 ml di soluzione di fibrinogeno (25 mg / ml). </li><li> Riempire una siringa con la soluzione di cellule contenente, un&#39;altra siringa con la soluzione di fibrinogeno / microsfere, e una terza siringa con 1 ml di soluzione di trombina (80 unità NIH / ml, integrati con 2 microlitri 400 mM CaCl 2 e 200 mM ε-aminocaproic acido). </li><li> Chirurgicamente indurre infarto del miocardio nel cuore suina tramite legatura delle discendente anteriore dell&#39;arteria coronaria come descritto in precedenza 2. NOTA: In breve, femmina Yorkshire suina (~ 13 kg, 45 giorni di età) sono sedati con l&#39;iniezione intramuscolare di Telazol / xylazina (4,4 mg / kg), e intubati in anestesia generale con isoflurano (0,5-5%). Un 4 ° interctoracotomia ostal viene eseguito e lasciato coronaria discendente anteriore è esposto. L&#39;arteria coronarica è occlusa da una legatura per 60 minuti e poi la legatura viene rimosso. defibrillazione elettrica Immediatamente viene eseguita in caso di fibrillazione ventricolare. </li><li> Posizionare un anello di plastica sterile (~ 2,5 centimetri) sul epicardio della regione infartuata di cuori suini, e poi iniettare contemporaneamente le soluzioni microsfere / fibrinogeno e trombina sul ring. </li><li> Lasciare la miscela a solidificare (~ 30 sec), e quindi inserire l&#39;ago della siringa cella contenente attraverso la miscela solidificata nel miocardio infartuato e iniettare le cellule. Chiudere gli strati muscolari, il tessuto sottocutaneo, e la parete toracica con 3-0 o 2-0 monocryl sutura a seconda delle dimensioni degli animali. Buprenorfina 0,01-0,02 mg kg iniezione / intramuscolare ogni 8 ore sarà utilizzato per controllare il dolore per i primi 3 giorni dopo l&#39;intervento. </li><li> Valutare la funzione cardiaca utilizzando una risonanza magnetica cardiacaImaging (MRI) prima della procedura chirurgica, una settimana e quattro settimane dopo la procedura chirurgica 2, 3, 4. Dopo gli studi di risonanza magnetica finali, sacrificare l&#39;animale ed elaborare i loro cuori per istologia e analisi molecolare 2, 3, 4. </li></ol>

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Migliorata la resa / purezza di hiPSC-CMS protocolli convenzionali per differenziare le cellule staminali umane in CM sono spesso limitati da una bassa resa e la purezza; per esempio, solo 35-66% di hESC-CM ottenuto tramite Percoll separazione e la formazione del corpo cardiaco espresso lento catena pesante della miosina o cTnT 6. La purezza delle popolazioni hiPSC-CM differenziate può essere sostanzialmente aumentata selezionando per l&#39;espressione di un gene reporte...

cellule staminali pluripotenti umane indotta (hiPSCs) sono tra gli agenti più promettenti per la terapia cellulare rigenerativa perché possono essere differenziati in una gamma potenzialmente illimitato e quantità di cellule che non sono rifiutato dal sistema immunitario del paziente. Tuttavia, la loro capacità di auto-replicazione e differenziazione può anche portare alla formazione di tumori e, di conseguenza, hiPSCs bisogno di essere completamente differenziate in tipi cellulari specifici, come i cardiomiociti (CMS), cellule endoteliali (ECS), e le cellule muscolari lisce (SMC ), prima della somministrazione. Uno dei metodi più semplici e più comuni di somministrazione delle cellule è iniezione intramiocardico diretta, ma il numero di cellule trapiantate che sono innestato dal tessuto miocardico nativo è eccezionalmente bassa. Gran parte di questo attrito può essere attribuito per l&#39;ambiente citotossico del tessuto ischemico; tuttavia, quando le cellule staminali embrionali murine (CES) sono state iniettate direttamente nel miocardio di cuori illesi, oolo ~ 40% dei 5 milioni di cellule consegnati sono stati conservati per 3-5 ore 1, il che suggerisce che una parte sostanziale delle cellule somministrate usciti dal sito di somministrazione, forse perché sono stati espulsi attraverso il percorso dell&#39;ago dalle alte pressioni prodotte durante contrazione del miocardio. Qui, vi presentiamo nuovi metodi e sostanzialmente più efficienti per la generazione di cardiomiociti hiPSC-derivati (hiPSC-CMS) 2, le cellule endoteliali (hiPSC-ECS) 3, e cellule muscolari lisce (SMC) 4. In particolare, questo protocollo hiPSC-SMC è il primo a simulare la vasta gamma di caratteristiche morfologiche e funzionali osservate in somatica SMCs 5 indirizzando le cellule verso un fenotipo prevalentemente sintetico o contrattile SMC. Forniamo anche un metodo di consegna cellula che migliora il tasso di attecchimento di cellule iniettate creando una citochina contenente fibrina pATCH sul sito di iniezione. Il cerotto sembra migliorare sia la ritenzione cellulare, sigillando la traccia dell&#39;ago per evitare che le cellule dalla esistente miocardio, e la sopravvivenza cellulare, rilasciando fattore di crescita insulino-simile (IGF) per un periodo di almeno tre giorni.

<table><tbody><tr><td>Protocol Sezione 1</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>mTeSR1 medie</td><td>Tecnologie delle cellule staminali</td><td>5850</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning a ridotto fattore di</td> crescita <td>lifescience 356231</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Tecnologie delle cellule staminali</td><td>72304</td><td></td></tr><tr><td>Integratore B27, senza siero</td><td>Fisher Scientific</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>RPMI1640</td><td>Fisher Scientific</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>Activina A</td><td>R& D</td><td>338-AC-010</td><td></td></tr><tr><td>BMP-4</td><td>R& D</td><td>314-BP-010</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>R& D</td><td>232-FA-025</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi IV</td><td>Fisher Scientific NC0217889</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hanks Soluzione salina bilanciata (destrosio, KCl, KH2PO4, NaHCO3, NaCl, Na2HPO4 anidro)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14175079</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino</td><td>Fisher Scientific</td><td>10438018</td><td></td></tr><tr><td>piastra a 6 pozzetti</td><td>Corning Lifescience</td><td>356721</td><td></td></tr><tr><td>piastra da 10 cm</td><td>Corning Lifescience</td><td>354732</td><td></td></tr><tr><td>Incubatore cellulare</td><td>Panasonic</td><td>MCO-18AC</td><td></td></tr><<tr><td>strong>Protocol Sezione 2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Versene</td><td>Fisher Scientific</td><td>15040066</td><td></td></tr><tr><td>Fibrinogeno</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8630-5G</td><td></td></tr><tr><td>Trombina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7009-1KU</td><td></td></tr><tr><td>EMB2 medio</td><td>Lonza</td><td>CC-3156</td><td></td></tr><tr><td>VEGF</td><td>ProSpec-Tany</td><td>CYT-241</td><td></td></tr><tr><td>EPO</td><td>Life Technologies</td><td>PHC9431</td><td></td></tr><tr><td>TGF-&#946;</td><td>Peprotech</td><td>100-21C</td><td></td></tr><tr><td>EGM2-MV medio</td><td>Lonza</td><td>CC-4147</td><td></td></tr><tr><td>SB-431542</td><td>Selleckchem</td><td>S1067</td><td></td></tr><tr><td>CD31</td><td>BD Bioscience</td><td>BDB555445</td><td></td></tr><tr><td>CD144</td><td>BD Bioscience</td><td>560411</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga da 15 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>12565269</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorff Centrifuga</td><td>Eppendorf</td><td>5702R</td><td></td></tr><tr><td>Protocol Sezione 3</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Tecnologie delle cellule staminali</td><td>720542</td><td></td></tr><tr><td>PDGF-&#946;</td><td>Prospec</td><td>CYT-501-10ug</td><td></td></tr><tr><td>Protocollo Sezione 4</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Olio d'oliva</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O1514</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9391</td><td></td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>179124</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2818100</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldeide</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5882</td><td></td></tr><tr><td>Glicina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8898</td><td></td></tr><tr><td>IGF</td><td>R& D</td><td>291-G1-01M</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina</td><td>Fisher Scientific</td><td>15561020</td><td></td></tr><tr><td>Piastra riscaldante</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP88850200</td><td></td></tr><tr><td>Bagnomaria</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-462-10Q</td><td></td></tr><tr><td>Protocol Sezione 5</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223506</td><td></td></tr><tr><td>&#949;-acido aminocaproico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0420000</td><td></td></tr><tr><td>MEM medium</td><td>Fisher Scientific</td><td>12561-056</td><td></td></tr><tr><td>Siringa</td><td>Fisher Scientific</td><td>1482748</td><td></td></tr><tr><td>Ventilatore per anestesia</td><td>Datex-Ohmeda</td><td>47810</td><td></td></tr><tr><td>Ventilatore per anestesia</td><td>Ohio Medical</td><td>V5A</td><td></td></tr><tr><td>Defibrillatore</td><td>Physiol Control</td><td>LIFEPAK 15</td><td></td></tr><tr><td>1.5 T MRI</td><td>General</td><td>Electric Signa Horizon LX</td><td></td></tr><tr><td>7 T MRI</td><td>Siemens</td><td>10018532</td><td></td></tr><tr><td>Gadolinio Mezzo di contrasto (Magnevist)</td><td>Berlex</td><td>50419-188-02</td><td></td></tr><tr><td>2-0 sutura di seta</td><td>Ethilon</td><td>685H</td><td></td></tr><tr><td>3-0 sutura di seta</td><td>Ethilon</td><td>622H</td><td></td></tr><tr><td>sutura monofilamento 3-0</td><td>Ethilon</td><td>627H</td><td></td></tr></tbody></table>

pluripotenti cellule staminali derivate cellule cardiache per la riparazione del miocardio

Pluripotent Stem Cell Derived Cardiac Cells for Myocardial Repair

Le cellule staminali umane pluripotenti indotte (hiPSCs) devono essere completamente in tipi cellulari specifici prima della somministrazione, ma i protocolli convenzionali per differenziare hiPSCs in cardiomiociti (hiPSC-CMS), cellule endoteliali (hiPSC-ECS), e cellule muscolari lisce (SMC) sono spesso limitata dalla bassa resa, la purezza, e / o di scarsa stabilità fenotipica. Qui, presentiamo protocolli innovativi per generare hiPSC-CM, -ECs e -SMCs sostanzialmente più efficiente rispetto ai metodi convenzionali, come pure un metodo per combinare iniezione di cellule con una patch citochina contenente creato sul sito di somministrazione. La patch migliora sia la conservazione delle cellule iniettate, sigillando la traccia dell&#39;ago per evitare che le cellule vengano spremuto fuori del miocardio, e la sopravvivenza cellulare, rilasciando fattore di crescita insulino-simile (IGF) per un periodo prolungato. In un modello suino di infarto del danno da ischemia-riperfusione, il tasso di attecchimento è stato più di due volte maggiore quando lacellule sono state somministrate con la patch citochina contenente confronto alle cellule senza patch, e il trattamento con entrambe le celle e la patch, ma non solo con le cellule, è stato associato a miglioramenti significativi nella funzione cardiaca e dimensioni dell&#39;infarto.

Caratterizzazione di differenziata hiPSC-CM, -ECs, e -SMCs La capacità differenziale hiPSCs stati valutati 2, 3, 4. Flusso analizza citometria di T (cTnT) espressione troponina cardiaca suggeriscono che la purezza della popolazione finale hiPSC-CM può superare il 90% (Figura 1A, 1B, pannello B1). Quasi t...

Presentiamo tre protocolli nuovi e più efficienti per la differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte umane in cardiomiociti, cellule endoteliali e cellule muscolari lisce e un metodo di consegna che migliora l&#39;attecchimento delle cellule trapiantate, combinando l&#39;iniezione di cellule con la consegna citochine patch-mediata.

Pluripotenti cellule staminali derivate cellule cardiache per la riparazione del miocardio

Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) must be fully differentiated into specific cell types before administration, but conventional protocols for ...

L'obiettivo generale di questo video è presentare una tecnica per differenziare cellule staminali pluripotenti umane in cardiomiociti e dimostrare l'utilizzo di queste cellule nello studio della riparazione miocardica dopo un danno da ischemia-riperfusione. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali sull'ingegnerizzazione del tessuto cardiaco utilizzando cellule iPS umane derivate da cellule cardiache per la riparazione miocardica. Il vantaggio principale di questa procedura è che consente agli scienziati di ottenere cardiomiociti, cellule muscolari lisce ed endoteliali purificati e di generare tessuto cardiaco mediante queste cellule progenitrici.Ling Gao è un ricercatore post-dottorato nel laboratorio del Dottor Zhang presso l'UAB e Greg Walcott è un cardiologo presso l'ospedale dell'UAB. Trina è una specialista in risonanza magnetica presso l'ospedale dell'UAB. Per indurre le cellule staminali pluripotenti a differenziarsi in cardiomiociti, rivestire innanzitutto le pozzette di una piastra a sei pozzetti con una miscela proteica gelatinosa a cui è stato ridotto il fattore di crescita, raffreddata a 4 gradi Celsius.Quindi, conservare la piastra in frigorife

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JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Abbiamo stabilito un protocollo per l'induzione della cardioblasts pluripotenti direttamente da cellule staminali embrionali umane conservati in condizioni definite con piccole molecole, che permette la derivazione di una grande quantità di risorse umane progenitori cardiaci e funzionale cardiomiociti per la riparazione cardiovascolare.

Derivazione efficiente dei diritti dell&#39;uomo e precursori cardiaci e cardiomiociti pluripotenti da cellule staminali embrionali umane con induzione piccole molecole

La generazione di allineato tessuto miocardico è un requisito fondamentale per adattare i recenti progressi nel campo della biologia delle cellule staminali a fini clinicamente utili. Qui si descrive un metodo di stampa per microcontatto il controllo preciso di forma e funzione cellulare. Utilizzo di popolazioni altamente purificate di cellule staminali embrionali derivate progenitori cardiaci, abbiamo quindi generare anisotropo tessuto funzionale del miocardio.

Generazione di Allineati tessuto funzionale del miocardio attraverso la stampa microcontatto

Consegna cellula intramiocardico in modelli murini di malattie cardiovascolari, come ipertensione o infarto del miocardio, è ampiamente utilizzato per testare il potenziale terapeutico di diversi tipi di cellule in studi rigenerativi. Pertanto, una descrizione dettagliata e una chiara visualizzazione di questa procedura chirurgica contribuiranno a definire i limiti ei vantaggi di cellule cardiovascolari analisi terapeutici in piccoli roditori.

Intramiocardico cellulare di consegna: Osservazioni in murini Hearts

In questo protocollo, verrà illustrata la derivazione di cellule progenitrici cardiache da cellule staminali embrionali sia di topo che umane. Una delle principali strategie di questo protocollo consiste nell'arricchire le cellule progenitrici cardiache con la citometria a flusso utilizzando reporter fluorescenti ingegnerizzati nelle linee di cellule staminali embrionali.

Derivazione di cellule cardiache progenitrici di cellule staminali embrionali

Qui, presentiamo un metodo per sfruttare in modo efficiente il potenziale di differenziazione cardiache di giovane fonti di cellule staminali mesenchimali umane al fine di generare cellule funzionali, contraenti, del cardiomyocyte-come in vitro.

In Vitro Differenziazione delle cellule staminali mesenchimali umane in funzionale del Cardiomyocyte-come le cellule

Qui presentiamo un metodo affidabile per riprogrammare i fibroblasti embrionali primari in cardiomiociti funzionali tramite sovraespressione di GATA4, Hand2, Mef2c, Tbx5, miR-1 e miR-133 (GHMT2m) al fianco di inibizione di segnalazione di TGF-β. Il nostro protocollo genera pestaggio cardiomyocytes fin dal post-traduzionali di 7 giorni con fino a 60% efficienza.

Soppressione della segnalazione Pro-fibrotici rafforza fattore-mediata riprogrammazione di fibroblasti embrionali di topo in cardiomiociti indotti

Questo protocollo descrive una tecnica di differenziazione endoteliale di cellule progenitrici cardiache. Si concentra in particolare su come la concentrazione nel siero e la densità di semina delle cellule influenzano il potenziale di differenziazione endoteliale.

Induzione di differenziazione endoteliale in cellule progenitrici cardiache in condizioni di basso del siero

Qui, forniamo una descrizione dettagliata di un apparato sperimentale per un'analisi della valutazione dell'integrità del DNA nelle cellule staminali prima del trapianto di cellule.

Valutazione dell'integrità del DNA di cellule staminali per la terapia cellulare cardiaca

L'attuale protocollo genera tessuti cardiaci ingegnerizzati a forma di maglia contenenti cellule cardiovascolari derivate da cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo per consentire lo studio della terapia dell'impianto cellulare per le malattie cardiache.

Preparazione di tessuti cardiaci ingegnerizzati a forma di mesh derivati da cellule iPS umane per la riparazione miocardia in Vivo

Qui, presentiamo un protocollo per generare ed espandere in modo robusto i cardiomiociti umani dalle cellule mononucleate del sangue periferico del paziente.

Generazione ed espansione di cardiomiociti umani da cellule mononucleate del sangue periferico del paziente

La somministrazione cellulare guidata da ultrasuoni intorno al sito di infarto miocardico nei topi è un modo sicuro, efficace e conveniente di trapianto cellulare.

Impianto di cardiomiociti derivati da cellule staminali pluripotenti indotte ecoguidate in topi infartuati miocardici

Scopri come differenziare cellule staminali pluripotenti umane in cardiomiociti, cellule endoteliali e muscolari lisce per la riparazione del miocardio. Questo metodo migliora l'innesto cellulare con una nuova tecnica di somministrazione.

Pluripotenti cellule staminali derivate cellule cardiache per la riparazione del miocardio

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