Diagnostica di romanzo in artroplastica di Revisione: sonicazione e reazione a catena multipla della polimerasi dell'impianto

L'obiettivo generale delle procedure descritte con l'aspirazione articolare, la reazione a catena della polimerasi multiplex e la sonicazione è quello di fornire risultati microbiologici rapidi e affidabili ai chirurghi ortopedici in caso di sospetta infezione articolare periprotesica. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo diagnostico e terapeutico dell'infezione articolare periprotesica, come i risultati precoci di agenti patogeni e, quindi, un trattamento mirato precoce. Il vantaggio principale di queste tecniche è la consegna di risultati immediati.

Può accelerare la diagnostica differenziale in caso di sospetta infezione articolare periprotesica. Posizionare il paziente in posizione supina su un lettino da visita. Se il ginocchio deve essere perforato, posizionare un rullo per le ginocchia sotto il ginocchio del paziente in modo che il ginocchio poggi in una posizione leggermente flessa.

Usa le tosatrici elettriche per accorciare i peli del corpo densi o lunghi. Quindi preparare il tavolo degli strumenti e vestirsi per l'intervento chirurgico secondo il protocollo di testo. Quindi, utilizzare un disinfettante per la pelle per lavare accuratamente la pelle del paziente nel sito di puntura.

Con un telo sterile fenestrato, coprire il sito di puntura. Quindi identificare il sito di puntura attraverso il telo. Usando una lama di bisturi appuntita, praticare una piccola incisione attraverso la pelle nel sito dell'incisione.

Collegare la cannula al luer-slip della siringa. Quindi inserire la cannula attraverso l'incisione della pugnalata. Nell'incavo superiore dell'articolazione del ginocchio, puntare con un angolo di 45 gradi dorsale e mediale verso l'incavo, sotto il polo superiore della rotula, e inserire l'ago a una profondità di circa 5 cm.

Aspirare il liquido articolare estraendo il pistone della siringa. Per prevenire la formazione di ematomi, applicare una medicazione, seguita da una benda sull'incisione della pugnalata. Utilizzare un disinfettante alcolico per disinfettare la membrana di un pallone per emocoltura pediatrica.

Quindi inserire una nuova cannula sulla siringa e iniettare da 1 a 3 ml di liquido articolare aspirato nel pallone. Mescolare agitando delicatamente o ruotando. Per preparare un campione di aspirato articolare nativo, rimuovere la cannula dalla siringa.

Quindi aprire una provetta per la raccolta del sangue senza additivi e iniettare 1 mL di aspirato nella provetta per la raccolta. Riposizionare e fissare il coperchio per l'analisi PCR. Trasferire da 1 a 4 mL di aspirato articolare in una provetta per la raccolta del sangue contenente EDTA per la conta e la differenziazione cellulare.

Scongelare la provetta di miscelazione master impostandola a temperatura ambiente. Trasferire 180 mcL del campione raccolto nella provetta del campione. Chiudere la provetta con il tappo della provetta che contiene la proteina chinasi K e un gene di controllo interno per il controllo di qualità dell'intero flusso di lavoro.

Nella cabina di pilotaggio, aprire il software operativo toccando il pulsante Nuovo test nell'angolo in basso a sinistra. Utilizzare il touch screen per inserire i dati del paziente o un campione ID.To selezionare il campione dal menu a discesa, scegliere prima la cartuccia ITI, quindi l'ortopedia come modalità di applicazione e, infine, selezionare il liquido sinoviale o il fluido di sonicazione come tipo di campione. Quindi premere il pulsante Start.

Scansiona il codice a barre sul fondo della provetta del campione. Quindi inserire la provetta del campione nel Lysator. Quindi seleziona il campione sullo schermo della cabina di pilotaggio per sbloccare il tubo del campione dal Lysator.

Quindi rimuovere il tubo del campione dal Lysator e chiudere il coperchio superiore del Lysator. Trasferire la provetta nel foro della provetta della cartuccia PCR. Quindi inserire la provetta di miscelazione master scongelata nella fessura di miscelazione master della cartuccia PCR.

Seguire le istruzioni sul monitor della cabina di pilotaggio per scansionare la cartuccia PCR con la miscela master e la provetta del campione. Inserire la cartuccia PCR nell'apposito slot dell'analizzatore. Sul touch screen della cabina di pilotaggio nell'angolo in basso a sinistra, scegli Test attivi, quindi scegli l'ID campione corretto per visualizzare i risultati del test.

Salvare i risultati nella memoria della macchina e stamparli o esportarli per ulteriori riferimenti. Parla con il tuo microbiologo e informalo sui dettagli del caso, in modo che sia pronto ad analizzare prontamente i campioni. Sotto un banco di lavoro a flusso d'aria laminare, aprire il contenitore di plastica, trattenendo la protesi espiantata dalla sala operatoria e aggiungere una soluzione sterile di cloruro di sodio allo 0,9% fino a coprire il corpo estraneo espiantato almeno all'80%Chiudere il contenitore di plastica.

Quindi agitare accuratamente o agitare il contenitore di plastica per 30 secondi. Trasferire il contenitore di plastica nel bagno di sonicazione. Quindi controllare il livello del liquido nella vasca da bagno.

Sonicare il campione per cinque minuti, con una frequenza di 40 più o meno 2 kilohertz e una densità di potenza di 0,22 più o meno 0,04 watt per centimetro quadrato. Quindi agitare o agitare accuratamente il campione per 30 secondi. All'interno del banco a flusso laminare, raccogliere 50 mL di fluido di sonicazione e trasferirlo in una provetta sterile prima di sigillare ermeticamente la provetta.

Per creare un fluido di sonicazione concentrato, centrifugare la provetta a 4200 volte G per 10 minuti, lasciando un volume residuo di 10 mL, utilizzare la pipetta per scartare il surnatante rimanente. Risospendere il pellet mediante pipettaggio e vortex. Inoculare in ogni pallone di terreno di coltura adatto 0,5 mL di liquido di sonicazione concentrato.

Inoculare il pallone di emocoltura pediatrica con 2 ml di liquido sonicante concentrato, come dimostrato in precedenza in questo video. Quindi trasferire 1 mL di liquido di sonicazione concentrato in una provetta sterile senza additivi per l'analisi PCR. Trasferire il terreno di coltura inoculato nell'incubatore.

Incubare le colture per 14 giorni e controllare la crescita ogni giorno. La presenza di un'infezione articolare periprotesica è stata considerata dimostrata quando erano presenti uno dei criteri principali o almeno tre dei cinque criteri minori. I criteri principali includono la presenza di una fistola o il rilevamento di un agente patogeno in due campioni microbiologici separati.

I criteri minori includono la conta cellulare positiva o la differenziazione cellulare positiva nell'aspirato articolare, la CRP e la velocità di sedimentazione positive nei campioni di sangue, l'istologia positiva nei campioni di tessuto o il rilevamento di un agente patogeno in un solo campione microbiologico. I risultati qui hanno mostrato una sensibilità moderata per la diagnostica PCR del fluido di sonicazione e dell'aspirato articolare, ma una specificità molto forte del 100%Ogni volta che la PCR mostrava un risultato positivo nell'aspirato articolare o nel fluido di sonicazione, lo stesso agente patogeno veniva rilevato successivamente in una delle colture microbiologiche convenzionali. La PCR dei diversi campioni di casi non infettivi non ha mostrato risultati falsi positivi.

Sei dei 16 veri agenti patogeni nei campioni di fluido di sonicazione e cinque dei 13 agenti patogeni della coltura del fluido articolare sono stati persi dal rilevamento PCR. La diagnostica PCR combinata di entrambi i materiali, aspirato articolare e fluido sonico, ha identificato correttamente 12 casi di infezione su 18. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come migliorare il tuo percorso diagnostico nell'infezione articolare periprotesica.

Puoi vedere come i microbiologi e i chirurghi ortopedici devono lavorare a stretto contatto per migliorare al meglio la diagnostica differenziale. Se eseguita correttamente, si otterranno risultati clinicamente validi dalla PCR multiplex basata su cartuccia entro cinque ore dall'aspirazione articolare. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di lavorare in modo sterile durante l'intero processo.

Non dimenticare che lavorare con campioni di tessuto umano o microbiologici può essere estremamente pericoloso. Durante l'esecuzione di questa procedura è necessario adottare sempre tutte le precauzioni, come i dispositivi di protezione individuale.