Imaging cellulare dal vivo e analisi 3D del recettore dell'angiotensina di tipo 1a tratta degli transfettati embrionali umane cellule renali Utilizzando Microscopia confocale

L'obiettivo generale di questo esperimento è quello di ottenere prove quantitative, spaziali e temporali della colocalizzazione del lisosoma del recettore dell'angiotensina di tipo uno dopo il trattamento con angiotensina due. Questo metodo è stato ideato per rilevare le differenze nell'elaborazione subcellulare dei recettori di tipo Y rispetto ai recettori mutanti, come durante il processo di internalizzazione, che emette in risposta alla simulazione del ligando. I vantaggi di questa tecnica sono che l'imaging delle cellule vitali elimina gli artefatti dalle cellule fisse e permeabilizzate dai detergenti e che i cambiamenti dinamici nella localizzazione dei recettori possono essere valutati in tempo reale.

Inizia selezionando un obiettivo con apertura numerica 1,4 appropriato e centrando l'obiettivo sul tavolino del microscopio. Aggiungere una goccia di olio da immersione ad alta viscosità e bassa auto-florescenza sull'obiettivo e trasferire la camera con le cellule trasfettate al tavolino del microscopio. Sollevare delicatamente l'obiettivo fino a quando l'olio non tocca appena il fondo del primo vetrino e individuare le celle fioche.