Name: Regia di differenziazione dei progenitori ematopoietici primitivi e definitivo da cellule staminali pluripotenti umane (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-01T12:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 37 s
Description: Impara a dirigere la differenziazione di cellule staminali pluripotenti umane in progenitori ematopoietici CD34+ primitivi e definitivi mediante manipolazione specifica della segnalazione WNT. Questo metodo robusto consente di studiare l'ematopoiesi umana.

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Quest'opera è stata sostenuta dal dipartimento di medicina interna, divisione di ematologia, Washington University School of Medicine. CD è stato supportato da T32HL007088 dal cuore nazionale, polmone e sangue Institute. CMS è stato supportato da una società americana di ematologia Scholar Award.

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</ol>

Gli autori dichiarano di non avere nessun concorrenti interessi finanziari.

Questo protocollo descrive un metodo rapido, privo di siero, stroma-free per la differenziazione dei progenitori ematopoietici primitivi o definitivi. Mesodermal specifica dei progenitori ematopoietici primitivi o definitivi può essere raggiunto in modo affidabile utilizzando il nostro protocollo, che sfrutta in modo univoco piccole molecole inibitrici di segnalazione WNT canonico. L'attivazione di WNT fase-specifici dall'inibitore GSK3β CHIR9902133 dà luogo a definitiva mesoderma ematopoietico, c...

Cellule staminali pluripotenti umane (hPSCs) sono definite nel senso che comprende sia le cellule staminali embrionali umane (hESC) e cellule staminali umane pluripotenti indotte (hiPSCs) e hanno la capacità unica di non solo in fase di auto-rinnovamento in condizioni di crescita appropriata, ma anche, la capacità di differenziarsi in tutti i tipi di cellule derivate da tre strati di germe: ectoderma, mesoderma ed endoderma1. A causa di queste abilità uniche, hPSCs tenere grande promessa per la medicina rigenerativa, la modellazione di malattia e le terapie basate sulle cellule2. Mentre più tipi di cellule sono stati differenziati con successo dai hPSCs, una sfida significativa è la specifica in vitro di esclusivamente adulto-come hPSC-derivato cellule staminali ematopoietiche (HSCs) e definitivi progenitori ematopoietici.
Un probabile ostacolo allo sviluppo di HSC umane da hPSCs è la presenza di più programmi ematopoietiche entro l' embrione umano3. Il primo programma che emerge, definito "primitivo ematopoiesi," nasce all'interno del tessuto del sacco vitellino extraembryonic e meglio è caratterizzato dalla sua produzione transitoria di progenitori dell'eritroblasto (EryP-CFC), macrofagi e megacariociti. In particolare, questo programma non dà luogo a HSCs, né dà origine ai progenitori linfoidi T e B. Tuttavia, il sacco vitellino transitoriamente dar luogo a progenitori ematopoietici definitivi con restrizioni, come il progenitore eritro-mieloide (EMP4,5,6,7,8) e degli eritrociti-carenti linfoide-innescato multipotenti progenitrici (LMPP9). Tuttavia, EMPs né LMPPs sono completamente multipotenti, o in grado di attecchimento di HSC-come nei destinatari adulti. Al contrario, più avanti in sviluppo, il programma ematopoietico "definitivo" classicamente definito è specificato nella regione dell'aorta-gonade-Mesonefro dell'embrione propriamente detto, dando vita a tutte le filiere emopoietiche adulti, tra cui l'HSC. La specifica di queste cellule ematopoietiche definitive intra-embrionali si verifica in una tacca-dipendente, tramite una transizione endoteliali--emopoietici dal hemogenic dell'endotelio (lui)3,10,11 ,12,13,14. A parte la capacità di ricostituzione, il potenziale di multilineage e tacca-dipendenza di queste cellule può essere utilizzato per distinguere questi progenitori ematopoietici definitivi da EMP e il LMPP (rivisto in riferimenti3,13 ).
Comprendere i meccanismi che disciplinano primitivo e definitiva specifica ematopoietica da hPSCs è probabilmente fondamentale per la produzione riproducibile dei progenitori ematopoietici definitivi attraverso una varietà di linee di hPSC. Fino a poco tempo, protocolli di differenziazione hPSC che potrebbero separare multipotenti progenitori ematopoietici primitivi e definitivi non esisteva15,16,17,18, 19,20,21,22,23,24,25. Molti approcci utilizzando siero bovino fetale (FBS) e/o stromale co-coltura prima delineato il potenziale ematopoietico di differenziazione hPSC, con miscele di primitivo e definitiva ematopoietiche potenziali15,16, 17,19,22,23,25. Ulteriormente, molti protocolli senza siero ematopoietiche sono descritti i requisiti di segnale per la specifica del mesoderma da hPSCs che continuano ad avere potenziale ematopoietico18,20,21, 24. Tuttavia, come questi metodi ancora ha dato luogo a miscele eterogenee di entrambi i programmi, il loro uso in applicazioni cliniche e comprensione dei meccanismi dello sviluppo può essere limitato.
Recentemente abbiamo costruito su questi studi, dopo aver delineato i requisiti del segnale di fase-specifici per ACTIVIN/NODAL e segnalazione di WNT nella specifica ematopoietico primitivo e definitiva dal mesoderma hPSC-derivato18,26 . Quest'ultimo era particolarmente unico, come il suo utilizzo di manipolazione del segnale WNT fase-specifici permette per la specifica di essere esclusivamente primitivo o di progenitori ematopoietici definitivo26esclusivamente. Durante la specifica di mesoderma, l'inibizione di segnalazione WNT canonico con l'inibitore PORCN IWP2 risultati nella specifica di CD43+ EryP-CFC e dei progenitori mieloidi, con nessun potenziale linfoide rilevabile. In netto contrasto, stimolazione della canonica WNT segnalazione con l'inibitore di GSK3β, CHIR99021, durante la stessa fase di differenziazione ha provocato la completa assenza di CD43 rilevabile+ EryP-CFC, mentre contemporaneamente conduceva per la specifica di CD34+CD43− HE. Questa popolazione ha posseduto mieloide, HBG-che esprimono degli eritrociti e potenziale T-linfoide. Successive analisi hanno identificato questo aveva come manca l'espressione di CD7327,28 CD18428e suo potenziale ematopoietico tacca-dipendente28. Più ulteriormente, unicellulare clonale analisi hanno dimostrato che queste filiere emopoietiche definitivi potrebbero essere derivati da cellule multipotenti singola28. Presi insieme, questi studi indicano che fase-specifici WNT segnalazione manipolazione possibile specificare puri primitivi progenitori ematopoietici, oppure multipotenti progenitori ematopoietici definitivi di NOTCH-dipendente.
Qui, descriviamo la nostra strategia di differenziazione che produce esclusivamente primitivi o definitivi progenitori ematopoietici, attraverso la manipolazione delle canoniche WNT segnalazione durante mesodermal patterning e loro a valle lineage ematopoietico saggi. Questo protocollo è di grande valore per i ricercatori che sono interessati nella produzione di progenitori ematopoietici primitivi o definitivi da hPSCs per applicazioni di medicina rigenerativa.

<table><tbody><tr><td>Terreno di Dulbecco modificato di Iscove (IMD)</td><td>Corning</td><td>10-016</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS), ES cell rated</td><td>Gemini Bioproducts</td><td>100-500</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Hyclone</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>L-glutammina, soluzione 200 mM</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina</td><td>Life Tecnologie</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>0,25% Tripsina-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25200056</td><td></td></tr><tr><td>0,05% Tripsina-EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina, pelle suina, Tipo A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G1890</td><td></td></tr><tr><td>Alpha-MEM</td><td>Life Technologies</td><td>12000-022</td><td></td></tr><tr><td>DMEM-F12</td><td>Corning</td><td>10-092-CV</td><td></td></tr><tr><td>Siero sostitutivo knock-out</td><td>Life Technologies</td><td>10828028</td><td>"KOSR"</td></tr><tr><td>Aminoacidi non essenziali (NEAA)</td><td>Life Technologies</td><td>11140050</td><td></td></tr><tr><td>b-mercaptoetanolo, soluzione 55 mM</td><td>Life Technologies</td><td>21985023</td><td></td></tr><tr><td>Acido cloridrico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr><tr><td>Frazione V, siero bovino Albumina Fisher</td><td> Scientific</td><td>BP1605</td><td></td></tr><tr><td>Ham's F12</td><td>Corning</td><td>10-080</td><td></td></tr><tr><td>N2 integratore</td><td>Life Technologies</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>B27, senza vitamina A</td><td>Life Technologies</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Stempro-34 (SP34)</td><td>Life Technologies</td><td>10639011</td><td>"SP34</td></tr><tr><td>"Fattore di crescita ridotto Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td> <td>"MAT"</td></tr> <tr><td>Acido L-assorbente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4403</td><td></td></tr><tr><td>Siero umano transferrina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10652202001</td><td></td></tr><tr><td>Monotioglicerina (MTG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6145</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi B</td><td>Roche</td><td>11088831001</td><td></td></tr><tr><td>Collagenasi II</td><td>Life Technologies</td><td>17101015</td><td></td></tr><tr><td>DNaseI</td><td>Calbiochem</td><td>260913</td><td></td></tr><tr><td>soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Life Technologies</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>R& D Systems</td><td>233-FB</td><td></td></tr><tr><td>BMP4</td><td>R& D Systems</td><td>314-BP</td><td></td></tr><tr><td>Activin A</td><td>R& D Systems</td><td>338-AC</td><td></td></tr><tr><td>VEGF</td><td>R& D Systems</td><td>293-VE</td><td></td></tr><tr><td>SCF</td><td>R& D Systems</td><td>255-SC</td><td></td></tr><tr><td>IGF-1</td><td>R& D Systems</td><td>291-G1</td><td></td></tr><tr><td>IL-3</td><td>R& D Systems</td><td>203-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-6</td><td>R& D Systems</td><td>206-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-7</td><td>R& D Systems</td><td>207-IL</td><td></td></tr><tr><td>IL-11</td><td>R& D Systems</td><td>218-1L</td><td></td></tr><tr><td>TPO</td><td>R& D Systems</td><td>288-TP</td><td></td></tr><tr><td>EPO</td><td>Peprotech</td><td>100-64</td><td></td></tr><tr><td>Flt-3 ligando (FLT3-L)</td><td>R& D Systems</td><td>308-FK</td><td></td></tr><tr><td>CHIR99021</td><td>Tocris</td><td>4423</td><td></td></tr><tr><td>IWP2</td><td>Tocris</td><td>3533</td><td></td></tr><tr><td>Angiotensina II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9525</td><td></td></tr><tr><td>Losartan Potassio</td><td>Tocris</td><td>3798</td><td></td></tr><tr><td>CD4 PerCP Cy5.5 Clone RPA-T4</td><td>BD Biosciences</td><td>560650</td><td>Diluizione 1:100; Saggio delle cellule T</td></tr><tr><td>CD8 PE Clone RPA-T8</td><td>BD Biosciences</td><td>561950</td><td>Diluizione 1:10; Saggio delle cellule T</td></tr><tr><td>CD34 APC Clone 8G12</td><td>BD Biosciences</td><td>340441</td><td>Diluizione 1:100; Saggio EHT</td></tr><tr><td>CD34 PE-Cy7 Clone 8G12</td><td>BD Biosciences</td><td>348801</td><td>Diluizione 1:100; Endotelio emogenico</td></tr><tr><td>CD43 FITC Clone 1G10</td><td>BD Biosciences</td><td>555475</td><td>Diluizione 1:10; Clone emogenico dell'endotelio</td></tr><tr><td>CD45 APC-Cy7 2D1</td><td>BD Biosciences</td><td>557833</td><td>Diluizione 1:50; Saggio sulle cellule T</td></tr><tr><td>CD45 eFluor450 Clone 2D1</td><td>BD Biosciences</td><td>642284</td><td>Diluizione 1:50; Saggio EHT,</td></tr><tr><td>CD56 APC, clone B159</td>, <td>BD, Biosciences,</td><td>555518</td><td>Diluizione 1:20; Saggio su cellule T</td></tr><tr><td>CD73 PE Clone AD2</td><td>BD Biosciences</td><td>550257</td><td>Diluizione 1:50; Clone emogenico dell'endotelio</td></tr><tr><td>CD184 APC 12G5</td><td>BD Biosciences</td><td>555976</td><td>Diluizione 1:50; Endotelio emogenico</td></tr><tr><td>4',6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI)</td><td>BD Biosciences</td><td>564907</td><td>Diluizione 1:10.000; Saggio delle cellule T</td></tr><tr><td>OP9 Cellule</td><td></td><td></td> DL4 <td>Holmes, R. e J.C. Zuniga-Pflucker. Primavera fredda Harb Protoc, 2009. 2009(2): pdb prot5156</td></tr><tr><td>MethoCult H4034</td><td>Stemcell Technologies</td><td>4034</td>"<td>MeC"</td></tr><tr><td>Milli-Q sistema di purificazione dell'acqua</td><td>EMD Incubatore</td> Millipore <td></td><td></td></tr><tr><td>5% CO2</td><td>Set a 37 C</td>Incubatore multigas Set a 37 C, 5% CO2, 5% O2 Piastra per coltura tissutale a 6 pozzetti Corning 353046 <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>piastra per coltura tissutale a 24 pozzetti</td><td>Corning</td><td>353226</td><td></td></tr><tr><td>piastra per coltura tissutale a 6 pozzetti a bassa aderenza</td><td>Corning</td><td>3471</td><td></td></tr><tr><td>piastra per coltura tissutale a 24 pozzetti</td><td>Corning</td><td>3473</td><td></td></tr><tr><td>piastre per coltura tissutale da 35 mm</td><td>Corning</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>ago smussato, calibro 16</td><td>siringhe</td><td></td> Corning 305198 <td></td></tr><tr><td>3 cc</td><td>Corning</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>provetta in polipropilene da 5 mL</td><td>Corning</td><td>352063</td><td></td></tr><tr><td>provetta in polistirene da 5 mL</td><td>Corning</td><td>352058</td><td></td></tr><tr><td>15 mL di polipropilene conico</td><td>Corning</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>50 mL di polipropilene conico</td><td>Corning</td><td>430921</td><td></td></tr><tr><td>2 mL di pipetta sierologica</td><td>Corning</td><td>357507</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica da 5 mL</td><td>Corning</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica da 10 mL</td><td>Corning</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta sierologica da 25 mL</td><td>Corning</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>Raschietti cellulari</td><td>Corning</td><td>353085</td><td></td></tr><tr><td>2,0 mL crioviali</td><td>Corning</td><td>430488</td><td></td></tr><tr><td>provetta da 5 mL con 40 &micro; Filtro cellulare M</td><td>Corning</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro; Filtro cellulare</td><td>M Corning</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga</td><td></td><td></td><td></td>per colture cellulari</tr><tr><td>Cappa</td><td></td><td></td><td></td>di biosicurezza</tr><tr><td>FACS AriaII o equivalente</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>LSRii o equivalente</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software FlowJo</td><td>TreeStar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bagnomaria</td><td></td><td></td><td>Set a 37 C</td></tr><tr><td>0,22 &micro; Sistema di filtrazione</td><td>M Autoclave</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> Corning <tr><td>Frigorifero</td><td></td><td></td><td></td> 4</tr> <tr><td>C-Congelatore</td><td></td><td></td><td></td> 20</tr> <tr><td>C-Congelatore</td><td></td><td></td><td></td> 80 C</tr></tbody></table>

regia di differenziazione dei progenitori ematopoietici primitivi e definitivo da cellule staminali pluripotenti umane

Directed Differentiation of Primitive and Definitive Hematopoietic Progenitors from Human Pluripotent Stem Cells

Uno degli obiettivi principali per la medicina rigenerativa è la generazione e la manutenzione di cellule staminali ematopoietiche (HSCs) derivati da cellule staminali pluripotenti umane (hPSCs). Fino a poco tempo, gli sforzi per differenziare hPSCs in HSCs hanno generato principalmente progenitori ematopoietici che mancano di potenziale HSC e invece assomigliano vitellino ematopoiesi. Questi progenitori ematopoietici risultanti potrebbero essere limitato utilità per la modellazione in vitro malattia di vari disordini ematopoietici adulti, in particolare quelli dei lignaggi linfoidi. Tuttavia, recentemente abbiamo descritto i metodi per generare progenitori ematopoietici definitivi multilineare eritro-mielo-linfoidi da hPSCs utilizzando un protocollo di differenziazione diretto fase-specifici, che descriviamo qui. Attraverso la dissociazione enzimatica di hPSCs su plasticware rivestite con matrice della membrana dello scantinato, si formano corpi embryoid (EBs). EBs si differenzino per mesoderma BMP4 ricombinante, che viene successivamente specificato al programma ematopoietico definitivo dall'inibitore GSK3β, CHIR99021. In alternativa, ematopoiesi primitivo viene specificato dall'inibitore PORCN, IWP2. Ematopoiesi è ulteriormente guidato attraverso l'aggiunta del ricombinante VEGF e citochine ematopoietiche solidale. I progenitori ematopoietici risultanti generati utilizzando il metodo hanno il potenziale per essere utilizzato per malattia e modelli inerenti allo sviluppo, in vitro.

Un disegno schematico raffigurante l'induzione di progenitori ematopoietici primitivi e definitivi da hPSCs è illustrato nella Figura 1. Mesoderma patterning di Canonica WNT segnalazione si verifica durante i giorni 2-3 di differenziazione, seguita dalla specifica di progenitori emopoietici.
L'analisi cytometric di flusso rappresentativi e saggi di metilcellulosa di culture di differenziamento emato...

Qui, presentiamo pluripotenti umane protocolli di coltura della cellula formativa (hPSC), utilizzata per differenziare hPSCs in CD34+ progenitori ematopoietici. Questo metodo utilizza la modifica di fase-specifici di Canonica WNT segnalazione per specificare le celle esclusivamente al programma ematopoietica sia definitiva o primitivo.

Regia di differenziazione dei progenitori ematopoietici primitivi e definitivo da cellule staminali pluripotenti umane

One of the major goals for regenerative medicine is the generation and maintenance of hematopoietic stem cells (HSCs) derived from human pluripotent stem ...

L'obiettivo generale di questo metodo è indirizzare la differenziazione delle cellule staminali pluripotenti umane verso il programma ematopoietico primitivo o definitivo, utilizzando un approccio basato sulla manipolazione specifica dei segnali in base alla fase. Questo metodo può rispondere a numerose domande fondamentali nel campo, come comprendere i regolatori dei segnali e della trascrizione nell'ematopoiesi definitiva umana. Il principale vantaggio di questa tecnica è che utilizza una manipolazione specifica per fase in modo immediato.Dimostra questa procedura Carissa Dege, un ricercatore post dottorato nel mio laboratorio. Per iniziare il protocollo, procurarsi linee cellulari di cellule staminali pluripotenti umane precedentemente preparate, o HPSC, coltivate su fibroblasti embrionali di topo, o MEF, fino a una confluenza del 70%-80% in un incubatore a 37 gradi Celsius con il 5 percento di CO2. Aspirare il mezzo di coltura delle HPSC e aggiungere un millilitro di tripsina EDTA 0,25% a 37 gradi Celsius per ogni pozzetto per un minuto.Dopo un minuto, aspirare la tripsina e aggiungere un millilitro di mezzo di riserva in ogni pozzetto. Utilizzando un raschietto per cellule, st

directed-differentiation-primitive-definitive-hematopoietic

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Biologia dello sviluppo

Generazione di linfociti T da staminali pluripotenti indotte (iPS), le cellule fornisce un approccio alternativo di utilizzare cellule staminali embrionali per T cell-based immunoterapia. Il metodo dimostra che utilizzando...

Differenziazione Regia di cellule staminali pluripotenti indotte verso Linfociti T

Noi, sulla base delle conoscenze della biologia dello sviluppo e della ricerca pubblicata, abbiamo sviluppato un protocollo ottimizzato per generare in modo efficiente neuroni dopaminergici del mesencefalo A9 sia da cellule staminali embrionali umane che da cellule staminali pluripotenti indotte umane, che sarebbero utili per la modellazione della malattia e la terapia di sostituzione cellulare per il morbo di Parkinson.

Regia neuroni dopaminergici differenziazione da cellule staminali pluripotenti umane

Questo protocollo descrive l'efficiente induzione dell'endotelio emogenico e dei progenitori ematopoietici multipotenziali da cellule staminali pluripotenti umane attraverso l'espressione forzata di fattori di trascrizione.

Induzione diretta di Hemogenic endotelio e Sangue da sovraespressione di fattori di trascrizione in cellule staminali pluripotenti umane

Il protocollo qui descritto descrive in dettaglio l'induzione di un programma emogenico nei fibroblasti embrionali di topo attraverso la sovraespressione di un insieme minimo di fattori di trascrizione. Questa tecnologia può essere tradotta nel sistema umano per fornire piattaforme per studi futuri sull'emopoiesi, la malattia ematologica e il trapianto di cellule staminali ematopoietiche.

Riprogrammazione fibroblasti embrionali di topo con fattori di trascrizione per indurre un programma Hemogenic

Qui, presentiamo un protocollo per formare con precisione l'endotelio emogenico dalle cellule staminali pluripotenti umane in una condizione senza alimentatore e xeno. Questo metodo avrà ampie applicazioni nella modellazione della malattia e nello screening per i composti terapeutici.

Differenziazione dell'endotelio endogenico dalle cellule staminali pluripotenti umane in una condizione definita senza alimentatore e Xeno

Qui, presentiamo un protocollo per la caratterizzazione immunofenotipica e la differenziazione citochina indotta del sangue cordonale derivato CD34- cellule staminali ematopoietiche e progenitrici ai quattro lignaggi mieloidi. Le applicazioni di questo protocollo includono indagini sull'effetto delle mutazioni della malattia mieloide o di piccole molecole sulla differenziazione mieloide del CD34- cellule.

Differenziazione pan-mieloide del sangue di cordone umano Derivato CD34- Cellule staminali eseminazioni e progenitrici

Questo protocollo dimostra l'induzione di un programma emogenico nei fibroblasti dermici umani mediante l'espressione forzata dei fattori di trascrizione GATA2, GFI1B e FOS per generare cellule staminali e progenitrici ematopoietiche.

Riprogrammazione emogenica dei fibroblasti umani mediante l'espressione forzata dei fattori di trascrizione

L'obiettivo di questo articolo è quello di fornire un approccio standardizzato per indurre la differenziazione del progenitore epatico umano dalle cellule staminali pluripotenti. Lo sviluppo di questa procedura con formulazioni di media pronti all'uso offre all'utente un sistema facile per generare cellule epatiche umane per la ricerca e la traduzione biomedica.

Specifica del progenitore epatico da cellule staminali pluripotenti utilizzando un sistema di differenziazione definito

Presentato qui è un semplice protocollo per la differenziazione diretta delle cellule endoteliali emogeniche da cellule staminali pluripotenti umane in circa 1 settimana.

Differenziazione diretta di cellule endoteliali emogeniche da cellule staminali pluripotenti umane

Questo protocollo presenta il differenziamento degli osteoclasti umani dalle cellule staminali pluripotenti indotte (iPSC) e descrive i metodi per la caratterizzazione degli osteoclasti e dei precursori degli osteoclasti.

Differenziamento e caratterizzazione di osteoclasti da cellule staminali pluripotenti indotte umane

Impara a dirigere la differenziazione di cellule staminali pluripotenti umane in progenitori ematopoietici CD34+ primitivi e definitivi mediante manipolazione specifica della segnalazione WNT. Questo metodo robusto consente di studiare l'ematopoiesi umana.

Regia di differenziazione dei progenitori ematopoietici primitivi e definitivo da cellule staminali pluripotenti umane

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