Unicellulare profili di espressione genica Utilizzando FACS e qPCR con standard interni

L'obiettivo generale di questa procedura è quantificare i livelli di mRNA nelle singole cellule utilizzando la qPCR microfluidica con standard interni. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia delle singole cellule, ad esempio se le popolazioni cellulari di cellule rispondono a uno stimolo in modi caratteristicamente diversi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che può misurare l'espressione di più geni rispetto all'RNA FISH a un costo inferiore rispetto all'RNA-Seq in singole cellule.

Abbiamo avuto l'idea di questo metodo per la prima volta quando stavamo esplorando protocolli per misurare l'espressione genica in singole cellule mediante qPCR microfluidica. Volevamo modificare i metodi esistenti per stimare in modo più accurato il numero assoluto di diversi trascritti in singole cellule. A dimostrare la procedura di smistamento cellulare sarà William Telford, il responsabile della struttura di citometria a flusso utilizzata dal mio laboratorio.