Neurologico Reflex Test in neonatali Rat Pups

L'obiettivo generale di questa metodologia del riflesso del ratto neonatale è imparare a eseguire questi compiti in modo rapido, accurato e comparabile. Questo metodo può rispondere a domande chiave nel campo delle disabilità dello sviluppo nervoso come la paralisi cerebrale. Il vantaggio principale di questa tecnica è che offre un modo per testare i riflessi di sviluppo precoce nei cuccioli di ratto appena nati.

Come gli esseri umani, i roditori appena nati hanno riflessi di sviluppo precoci che offrono una finestra sullo sviluppo successivo. Gli individui che non conoscono questo metodo avranno difficoltà poiché i riflessi si verificano rapidamente e possono essere difficili da segnare. È importante essere il più coerenti possibile.

Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla terapia e alla diagnosi della paralisi cerebrale e delle disabilità dello sviluppo. La determinazione dei comportamenti riflessi è il gold standard per l'accertamento e l'efficacia degli interventi terapeutici. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto i passaggi sono difficili da apprendere attraverso le parole scritte.

Per iniziare, abituare i ratti all'ambiente e alla manipolazione umana come descritto nel protocollo di testo allegato. Una volta acclimatati, accoppia i ratti per produrre una cucciolata di cuccioli da testare. A partire dal terzo giorno post-parto, trasferisci i cuccioli in una stanza tranquilla a un'ora costante ogni giorno.

Lasciali acclimatare per almeno un'ora prima di eseguire una serie di test dei riflessi dello sviluppo neurologico. Nella stanza, installa una lampada riscaldante o un termoforo per mantenere la temperatura corporea del cucciolo a 36,5 gradi Celsius. Inoltre, registra il peso del cucciolo ogni giorno.

Successivamente, imposta una videocamera con una velocità dell'otturatore di almeno 1/1000 di secondo per analizzare i test reflex fotogramma per fotogramma. Posizionare la telecamera in modo che sia direttamente sopra o accanto al cucciolo di ratto e ai materiali di test durante ogni test. Per ciascuno dei seguenti test, esegui il test ogni giorno fino a quando il cucciolo non è in grado di eseguire l'attività per due giorni consecutivi.

La data della prima occorrenza è la data che deve essere registrata per la quantificazione dei dati. A partire dal terzo giorno postnatale, eseguire il test del riflesso di presa dell'arto anteriore. Per questo test, posiziona un'asta smussata contro il palmo di ciascuna delle zampe anteriori del cucciolo, una alla volta, e applica manualmente una leggera pressione.

La pressione dovrebbe spostare leggermente la zampa anteriore per garantire che il contatto avvenga e che i cuccioli possano sentire l'asta. La presa apparirà come la flessione di tutte le dita attorno all'asta. L'acquisizione di questo riflesso si verifica quando entrambe le zampe anteriori afferrano l'asta per due giorni di fila.

Quindi, posiziona un'asta smussata contro la suola di ciascuna zampa posteriore e applica manualmente una leggera pressione per condurre il test del riflesso di presa degli arti posteriori. La leggera pressione dovrebbe spostare leggermente la zampa posteriore per garantire che il contatto avvenga e che i cuccioli possano sentire l'asta. La presa riuscita dell'asta appare come la flessione delle dita attorno all'asta.

L'acquisizione di questo riflesso si verifica quando entrambe le zampe posteriori afferrano l'asta per due giorni di fila. Sempre a partire dal terzo giorno postnatale, condurre il test del riflesso raddrizzante. Per questo test, tieni saldamente il cucciolo in posizione supina, in modo che tutte e quattro le zampe siano in posizione verticale.

Lascia andare il cucciolo e avvia immediatamente il timer. Il raddrizzamento si ottiene quando il cucciolo è in grado di capovolgersi o rotolare su tutte e quattro le zampe e ogni zampa è perpendicolare al corpo. Dai a ogni cucciolo un massimo di 15 secondi per raggiungere questo obiettivo.

A partire dal quarto giorno postnatale, eseguire il test del riflesso di posizionamento degli arti posteriori. Per questo test, tieni il cucciolo verticalmente in aria per il busto. Accarezza delicatamente il dorso della zampa posteriore con una superficie smussata, come il bordo di un tavolo.

Un riflesso di posizionamento corretto è quando il cucciolo di ratto ritira l'arto posteriore stimolato, seguito dal posizionamento dell'arto posteriore su quella superficie. Sempre a partire dal quarto giorno postnatale, conduci il test di evitamento della scogliera. Per questo test, posiziona il cucciolo di ratto sul bordo di una superficie piana, in modo che le zampe anteriori e il muso del cucciolo siano oltre il bordo.

Il risultato corretto è una risposta protettiva in cui il cucciolo di ratto si allontana dal bordo della scogliera. Inizia la valutazione dell'andatura il sesto giorno postnatale. Per questo test, posiziona i cuccioli al centro di un cerchio di 15 centimetri di diametro e lascia che il cucciolo si allontani dal cerchio per 30 secondi.

Un'andatura di successo viene eseguita quando il cucciolo di ratto è in grado di muovere entrambe le zampe anteriori fuori dal cerchio in meno di 30 secondi. Inizia l'analisi dello spavento uditivo il giorno 10 postnatale. In questo caso, è necessario qualcosa, come una campana, che sia in grado di produrre un forte rumore.

Posiziona il campanello direttamente sopra il cucciolo. Suona il campanello e poi valuta se è presente o meno una risposta di sorpresa. Una risposta di sorpresa positiva si osserva quando il cucciolo mostra un movimento a scatti lontano dal suono.

A partire dal 12° giorno postnatale, posiziona i cuccioli su una superficie aperta non scivolosa e osserva la postura che il cucciolo ha quando si muove. Una postura immatura si riflette nel trascinamento dell'addome durante il movimento e nel puntamento perpendicolare di entrambe le zampe anteriori e posteriori rispetto al corpo. Una postura matura si acquisisce quando il cucciolo può sollevare l'addome dalla superficie e sia le zampe anteriori che quelle posteriori sono puntate dritte o parallele al corpo quando si muovono.

Inoltre, a partire dal 12° giorno postnatale, inizia a osservare le palpebre del cucciolo. Registra il giorno in cui entrambe le palpebre si aprono. Il 14° giorno postnatale, iniziare il test di raddrizzamento accelerato.

Per questo test, posiziona il cucciolo in posizione supina a 30,48 centimetri sopra una piattaforma di atterraggio in schiuma. Lascia cadere il cucciolo e osserva la sua capacità di raddrizzarsi. Il corretto raddrizzamento si riferisce a quando il cucciolo è in grado di girarsi in posizione prona e atterrare sulle zampe.

I cuccioli appena nati esposti all'infiammazione in utero sono nati significativamente più piccoli dei controlli. L'integrazione alimentare con germogli di broccoli è stata in grado di aumentare il peso alla nascita di questi cuccioli. Insieme al peso alla nascita, il test dei riflessi dello sviluppo neurologico è una misura predittiva dello sviluppo e della maturazione corticale anormali, che può essere significativa in circostanze in cui la neuropatologia conclamata non è evidente.

Dopo la nascita, l'esame del riflesso neonatale degli arti posteriori in questi gruppi ha mostrato un ritardo significativo nell'acquisizione di questo riflesso per i cuccioli esposti all'infiammazione in utero rispetto ai controlli. L'integrazione alimentare con germogli di broccoli ha evitato il ritardo. I risultati del test neonatale di evitamento della scogliera riflessa hanno rivelato che i cuccioli esposti all'infiammazione in utero sono significativamente ritardati nell'acquisire una risposta protettiva.

Ancora una volta, il consumo di germogli di broccoli ha evitato ritardi significativi. Questo stesso risultato è stato osservato in seguito all'esame dell'andatura riflessa neonatale. Durante questa procedura, è possibile eseguire altri metodi come la registrazione giornaliera del peso per rispondere a domande aggiuntive come il tasso di crescita giornaliero, la crescita di recupero, la gravità della lesione e l'effetto della restrizione della crescita.

Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo delle neuroscienze per esplorare i test dei riflessi dello sviluppo nei roditori neonatali. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire il test dei riflessi di sviluppo precoce nei cuccioli di ratto appena nati. Inoltre, dovresti comprendere il significato dei riflessi comportamentali precoci in quanto forniscono un biomarcatore precoce di lesione e l'effetto dell'intervento terapeutico.