Neurologico Reflex Test in neonatali Rat Pups

L'obiettivo generale di questa metodologia sui riflessi nei ratti neonati è imparare a eseguire questi compiti in modo rapido, accurato e confrontabile. Questo metodo può rispondere a domande fondamentali nel campo dei disturbi dello sviluppo nervoso, come la paralisi cerebrale. Il principale vantaggio di questa tecnica è che offre un modo per testare i riflessi dello sviluppo precoce nei cuccioli di ratto appena nati.

Come negli esseri umani, i roditori neonati presentano riflessi dello sviluppo precoce che offrono uno spunto per comprendere lo sviluppo successivo. I principianti con questo metodo potrebbero avere difficoltà, poiché i riflessi si verificano rapidamente e possono essere difficili da valutare. È fondamentale essere il più possibile coerenti.

Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla terapia e alla diagnosi della paralisi cerebrale e dei disturbi dello sviluppo. La determinazione dei comportamenti riflessi rappresenta lo standard aureo per l'individuazione e la valutazione dell'efficacia degli interventi terapeutici. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale, poiché i passaggi sono difficili da apprendere attraverso la sola descrizione scritta.

Per iniziare, abituare i ratti all'ambiente e al contatto umano come descritto nel protocollo testuale allegato. Una volta abituati, accoppiare i ratti per ottenere una nidiata di cuccioli da sottoporre a test. A partire dal terzo giorno postnatale, trasferire i cuccioli in una stanza tranquilla sempre alla stessa ora ogni giorno.

Lasciarli ambientare per almeno un'ora prima di eseguire una serie di test sui riflessi neurosviluppati. Nella stanza, posizionare una lampada riscaldante o un tappetino termico per mantenere la temperatura corporea del cucciolo a 36,5 gradi Celsius. Inoltre, registrare ogni giorno il peso del cucciolo.

Successivamente, impostare una videocamera con una velocità dell'otturatore di almeno 1/1000 di secondo per analizzare i test del riflesso quadro per quadro. Posizionare la videocamera in modo che si trovi direttamente sopra o accanto al ratto neonato e ai materiali per il test durante ciascuna prova. Per ciascuno dei seguenti test, eseguire il test ogni giorno fino a quando il ratto è in grado di svolgere il compito per due giorni consecutivi.

La data del primo riscontro è la data che deve essere registrata per la quantificazione dei dati. A partire dal terzo giorno postnatale, eseguire il test del riflesso di prensione degli arti anteriori. Per questo test, appoggiare una bacchetta smussata sul palmo di ciascuna zampa anteriore del cucciolo, una alla volta, ed esercitare manualmente una leggera pressione.

La pressione deve spostare leggermente la zampa anteriore per assicurare il contatto e consentire ai cuccioli di percepire la bacchetta. L'afferramento si manifesterà come una flessione di tutte le dita intorno alla bacchetta. L'acquisizione di questo riflesso è considerata positiva quando entrambe le zampe anteriori afferrano la bacchetta per due giorni consecutivi.

Successivamente, posizionare una bacchetta smussata contro la pianta di ciascuna zampa posteriore ed esercitare manualmente una leggera pressione per eseguire il test del riflesso di afferramento degli arti posteriori. La leggera pressione deve spostare leggermente la zampa posteriore per assicurare il contatto e consentire ai cuccioli di percepire la bacchetta. Un afferramento riuscito si manifesta con la flessione delle dita intorno alla bacchetta.

L'acquisizione di questo riflesso avviene quando entrambe le zampe posteriori afferrano la sbarra per due giorni consecutivi. A partire dal terzo giorno postnatale, eseguire anche il test del riflesso di raddrizzamento. Per questo test, tenere saldamente il cucciolo in posizione supina, in modo che tutte e quattro le zampe siano rivolte verso l'alto.

Lasciare il cucciolo e avviare immediatamente il cronometro. Il raddrizzamento si considera completato quando il cucciolo è in grado di girarsi o rotolare fino a posizionare tutte e quattro le zampe a terra, con ciascuna zampa perpendicolare al corpo. Assegnare a ogni cucciolo un tempo massimo di 15 secondi per raggiungere questo obiettivo.

A partire dal quarto giorno postnatale, eseguire il test del riflesso di posizionamento degli arti posteriori. Per questo test, tenere il cucciolo verticalmente in aria per il tronco. Accarezzare delicatamente il dorso della zampa posteriore con una superficie smussata, come il bordo di un tavolo.

Un riflesso di posizionamento corretto si verifica quando il ratto neonato ritrae l'arto posteriore stimolato, seguito dal posizionamento dell'arto posteriore sulla superficie. A partire anche dal quarto giorno postnatale, eseguire il test di evitamento del dirupo. Per questo test, posizionare il ratto neonato al bordo di una superficie piana, in modo che le zampe anteriori e il muso del ratto siano oltre il bordo.

L'esito corretto è una risposta protettiva in cui il ratto neonato si allontana dal bordo del dirupo. Iniziare la valutazione della deambulazione al sesto giorno postnatale. Per questo test, posizionare i rattoni al centro di un cerchio di 15 centimetri di diametro e consentire al ratto di uscire dal cerchio entro 30 secondi.

Una camminata di successo viene eseguita quando il ratto neonato è in grado di spostare entrambe le zampe anteriori all'esterno del cerchio in meno di 30 secondi. Iniziare l'analisi dello startle uditivo al decimo giorno postnatale. In questo caso, è necessario qualcosa, come un campanello, in grado di produrre un rumore forte.

Posizionare il campanello direttamente sopra il cucciolo. Suonare il campanello, quindi valutare la presenza o l'assenza di una risposta di startle. Una risposta di startle positiva viene osservata quando il cucciolo mostra un movimento brusco di allontanamento dal suono.

A partire dal giorno postnatale 12, posizionare i cuccioli su una superficie aperta non scivolosa e osservare la postura del cucciolo durante il movimento. Una postura immatura si manifesta con il trascinamento dell'addome durante lo spostamento e con gli artigli anteriori e posteriori orientati perpendicolarmente rispetto al corpo. Una postura matura viene raggiunta quando il cucciolo è in grado di sollevare l'addome dalla superficie e gli artigli anteriori e posteriori sono orientati in modo dritto o parallelo al corpo durante il movimento.

Iniziare anche il giorno 12 postnatale a osservare le palpebre del cucciolo. Registrare il giorno in cui entrambe le palpebre si aprono. Al giorno 14 postnatale, iniziare il test accelerato del raddrizzamento.

Per questo test, posizionare il cucciolo in posizione supina a 30,48 centimetri sopra un tappetino di atterraggio in schiuma. Lasciare cadere il cucciolo e osservarne la capacità di raddrizzarsi. Il raddrizzamento corretto si verifica quando il cucciolo riesce a girarsi in posizione prona e atterrare sulle zampe.

I cuccioli neonati esposti a un'infiammazione in utero erano significativamente più piccoli rispetto ai controlli. La supplementazione alimentare con germogli di broccoli è stata in grado di aumentare il peso alla nascita di questi cuccioli. Oltre al peso alla nascita, il test dei riflessi neurosviluppali rappresenta un indicatore predittivo di uno sviluppo e una maturazione corticali anomali, il che potrebbe essere rilevante in condizioni in cui non è evidente una neuropatologia conclamata.

Dopo la nascita, l'esame del riflesso neonatale di posizionamento degli arti posteriori in questi gruppi ha mostrato un ritardo significativo nell'acquisizione di questo riflesso nei cuccioli esposti a infiammazione in utero rispetto ai controlli. La supplementazione dietetica con germogli di broccoli ha prevenuto tale ritardo. I risultati del test neonatale di evitamento del dirupo hanno rivelato che i cuccioli esposti a infiammazione in utero presentano un ritardo significativo nell'acquisire una risposta protettiva.

Anche in questo caso, il consumo di germogli di broccoli ha impedito un ritardo significativo. Lo stesso risultato è stato osservato esaminando la deambulazione riflessa neonatale. Durante questa procedura, possono essere eseguiti altri metodi, come la registrazione giornaliera del peso, al fine di rispondere ad ulteriori domande riguardanti la velocità di crescita giornaliera, la crescita di recupero, la gravità della lesione e l'effetto della restrizione della crescita.

Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo delle neuroscienze per esplorare i test dei riflessi dello sviluppo nei roditori neonati. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come eseguire test precoci dei riflessi dello sviluppo nei cuccioli di ratto appena nati. Inoltre, si dovrebbe comprendere il significato dei riflessi comportamentali precoci, poiché forniscono un biomarcatore precoce di lesioni e dell'effetto di interventi terapeutici.