Minimamente invasiva trasversale aortica costrizione nei topi

L'obiettivo generale di questa procedura è indurre l'ipertrofia ventricolare sinistra restringendo l'arco aortico trasverso con una semplice procedura chirurgica che non richiede ventilazione artificiale. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della cardiologia sul rimodellamento miocardico, l'ipertrofia cardiaca, l'apoptosi e la fibrosi e le condizioni di sovraccarico di pressione ventricolare sinistra. Il vantaggio principale di questa tecnica è che conserva gli elementi essenziali della costrizione aortica trasversa regolare, eliminando la necessità di un ventilatore e dell'intubazione tracheale.

Prima di iniziare la procedura, utilizzare un portaaghi per curvare le punte di due o quattro aghi calibro 30 e montare gli aghi sui singoli applicatori di cotone. Quindi, smussare un ago calibro 27 e utilizzare il supporto dell'ago per piegare la punta di 90 gradi. Quindi, levigare la punta su una superficie dura per realizzare un distanziatore da 0,4 millimetri.

Dopo aver confermato il livello appropriato di sedazione in caso di mancanza di risposta al pizzicamento delle dita, applicare un unguento sugli occhi dell'animale e posizionare il mouse su un termoforo riscaldato a 37 gradi Celsius in posizione supina. Fissare gli arti al termoforo con nastro chirurgico. Quindi, disinfettare la pelle con tre salviette consecutive di alcol e soluzione di iodio povidone e posizionare un telo sterile con un campo operatorio esposto sopra l'animale.

Per iniziare la procedura di legatura, utilizzare un bisturi sterile per aprire la pelle nella posizione della linea mediana del collo e del torace. Successivamente, sotto un microscopio da dissezione, usa le forbici smussate per separare delicatamente i tessuti connettivi e tirare la ghiandola tiroidea verso la testa. Usando gli aghi curvi, separa lo strato muscolare sulla trachea sulla linea mediana, verso entrambi i lati dell'animale e usa le forbici smussate per tagliare lo sterno di circa cinque millimetri fino alla seconda costola.

Aprire l'incisione con una pinza curva e utilizzare un ago curvo per separare i lobi del timo e la parete toracica inferiore. L'arco aortico trasverso e due arterie carotidi saranno chiaramente visibili a questo punto. Posiziona l'ago curvo sotto l'arco e usa la punta per praticare una perforazione tra la parete del vaso e il tessuto connettivo sull'altro lato.

Utilizzare l'ago per posizionare una sutura monofilamento 6-0 sotto l'arco aortico e posizionare il distanziatore precedentemente preparato nell'ansa. Fissare la sutura in posizione con un doppio nodo e rimuovere delicatamente il distanziatore. Dopo aver confermato la riuscita costrizione del nodo, tagliare le estremità della sutura e utilizzare una sutura di seta 6-0 per chiudere la parete toracica con un semplice modello di sutura interrotto, seguito dalla chiusura della pelle con una sutura monofilamento 6-0 in un modello di sutura continua.

Quindi, applicare la soluzione di iodio povidone sul sito di sutura e posizionare l'animale in una gabbia preriscaldata per il recupero e il monitoraggio post-operatorio. Dopo una settimana, applicare il gel per elettrodi sulle zampe dell'animale da esperimento e fissarle con nastro adesivo su un termoforo riscaldato a 37 gradi Celsius con elettrodi. Quindi, applica il gel per ultrasuoni sul torace del mouse e seleziona la modalità B su un sistema a ultrasuoni ad alta frequenza.

Utilizzando una sonda MS550D da 40 megahertz, individuare il ventricolo sinistro. Quindi, in modalità M, misurare lo spessore della parete sistolica e diastolica. Tornare alla modalità B per localizzare l'arteria carotide comune sinistra prima del punto di ramificazione e utilizzare l'onda pulsata e il color doppler per valutare il flusso, memorizzando le immagini per un'analisi successiva, se necessario.

Inclinare la piattaforma di movimentazione degli animali all'estrema sinistra in modo che il mouse sia nella posizione di decubito a sinistra e posizionare la sonda a uno scostamento di 30 gradi da una posizione parallela alla testa in posizione parasternale. Manipola le coppie x e y per trovare l'arco aortico e localizzare la costrizione utilizzando la modalità color doppler per rendere più visibile il sito della costrizione. Utilizzando l'onda pulsata e il color doppler, misurare la velocità di picco del flusso nel punto in cui il sangue scorre tra le due arterie carotidi che si diramano dall'arco aortico.

Quindi, lasciare che l'animale si riprenda su un termoforo in posizione prona con monitoraggio fino a quando non si è completamente ripreso. La costrizione aortica trasversa minimamente invasiva, o MTAC, produce in modo affidabile un sovraccarico di pressione ventricolare sinistra nei topi legati con un'aorta trasversa ristretta chiaramente visibile e una maggiore velocità di flusso di picco attraverso il sito di costrizione. In confronto, l'animale azionato da sham non dimostra alcuna costrizione apparente con una normale velocità di flusso di picco.

Come conseguenza della legatura, la velocità del flusso è significativamente aumentata nell'arteria carotide destra e la pressione può accumularsi nell'aorta ascendente e nel cuore, per produrre ipertrofia ventricolare sinistra, riducendo significativamente il flusso nell'arteria carotide comune sinistra. Tuttavia, un flusso sanguigno quasi identico si osserva nelle arterie carotidi destra e sinistra nel topo operato con sham. I parametri correlati all'ipertrofia risultanti sono prontamente osservabili nei cuori significativamente ingranditi e deformati di topi legati con MTAC e nella loro ridotta sopravvivenza globale.

Questi cambiamenti sono ulteriormente osservati a livello cellulare, tra cui un aumento delle dimensioni delle cellule muscolari cardiache e la fibrosi nei topi MTAC, rispetto agli animali non legati. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in cinque-dieci minuti, se eseguita correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di fare attenzione a non danneggiare i vasi.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come indurre l'ipertrofia ventricolare sinistra attraverso la costrizione dell'arco aortico trasversale, utilizzando una semplice procedura chirurgica che non richiede ventilazione artificiale.