Murino discendente anteriore sinistra (LAD) Coronary legatura dell'arteria: una migliore e semplificata del modello di infarto miocardico

L'obiettivo generale di questa procedura è indurre un infarto del miocardio in un topo legando l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave in campo cardiovascolare, come ad esempio se la sovraespressione o l'eliminazione di alcuni geni possono influenzare il recupero del cuore dopo l'infarto del miocardio. Il vantaggio principale di questa tecnica è che la procedura è meno invasiva rispetto a vari altri modelli di infarto miocardico speculare e si traduce in un tempo di recupero rapido con meno complicanze.

In generale, le persone che non conoscono questo metodo avranno difficoltà perché l'intubazione endotracheale e l'identificazione dell'arteria LAD richiedono pratica con un istruttore qualificato. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale per identificare e valutare il LAD è difficile da imparare senza alcuna esperienza o formazione. Prima di sedare l'animale, iniziare a riscaldare lo sterilizzatore a microsfere a 250 gradi Celsius, che può richiedere fino a 20 minuti.

Verificare che il mouse sia fortemente sedato. La frequenza respiratoria sarà di circa 32 respiri al minuto. Quindi posizionare il topo sedato supino su una tavola di polistirolo.

Posiziona il mouse all'altezza degli occhi per una più facile visualizzazione dell'orofaringe. Prima di procedere, confermare la sedazione con un pizzico di dita. Quindi, utilizzando un elastico, tenere la bocca aperta fissando gli incisivi superiori in posizione aperta.

Quindi, posizionare un illuminatore ad alta intensità sopra il mouse in modo che l'orofaringe sia transilluminata. Indossa anelli chirurgici per notare le piccole strutture dell'orofaringe. Ora, usando una pinza curva, apri la mascella.

Con un altro paio di pinze, sposta la lingua e poi osserva l'apertura e la chiusura delle corde vocali. Quando è aperto, inserire un catetere endovenoso da 20 gauge da un pollice con un introduttore ad ago a punta smussata. Utilizzare l'ago per guidare il catetere verso l'apertura tracheale, ma evitare di inserire l'ago nella parete tracheale.

Quindi trasferire il mouse intubato su una superficie operativa dotata di un dispositivo di riscaldamento e, lì, collegare il mouse a un piccolo ventilatore per roditori. Prima di procedere, verificare il piano di anestesia del topo utilizzando un pizzico per le dita dei piedi. Quindi fissare il tubo di intubazione con nastro adesivo nel sito di collegamento tra il ventilatore e il catetere endovenoso.

Seguire fissando con nastro adesivo tutte le estremità e lubrificando gli occhi. Ora, taglia la pelliccia dal lato ventrale sinistro del torace. Quindi applicare un piccolo strato di crema depilatoria sulla pelle esposta e lasciarla penetrare per 30-45 secondi.

Nel frattempo, immergere i tamponi di cotone sterili in tre provette da 1,5 millilitri riempite con betadina. Quindi, utilizzando acqua distillata, rimuovere delicatamente la panna e il pelo. Successivamente pulendo il campo chirurgico tre volte con betadina e isopropanolo al 70%.

Ora, drappeggia il topo con un foro di un quarto di dimensione sul campo chirurgico. Prima di eseguire la prima incisione, inserire gli strumenti chirurgici autoclavati nello sterilizzatore a microsfere calde preriscaldato a 250 gradi Celsius per circa 20 secondi. Ora, usa una pinza a punta fine per sollevare delicatamente la pelle in un punto a circa cinque millimetri a sinistra della cartilagine xifoidea prominente.

Quindi utilizzare un bisturi numero 10 per creare un'incisione verticale verso l'alto fino al livello del manubrio. Quindi, separare delicatamente gli strati dermici con una pinza curva. Per tenere aperto lo strato muscolare, passare due suture in polipropilene cinque zero attraverso entrambi i lati dell'incisione e fissarle con dei morsetti.

Ora, fai un'incisione nel terzo spazio intercostale seguendo l'angolo naturale della gabbia toracica. Quindi, rimuovi il nastro dalle estremità sinistre del mouse. Quindi fissare insieme i piedini posteriori.

Quindi riposizionare il piede anteriore in modo che sia leggermente rialzato. Assicurarsi di pulire i guanti chirurgici dopo ogni manipolazione del mouse. Procedere utilizzando un divaricatore per allargare delicatamente la terza e la quarta costola.

Quindi immergere un piccolo pezzo di garza in soluzione salina sterile allo 0,9% e strizzare la soluzione salina in eccesso. Usando una pinza, inserire delicatamente la garza bagnata contro il polmone sinistro per evitare danni accidentali ai polmoni. Quindi, rimuovere delicatamente il pericardio sottile con una pinza.

Quindi, usa un batuffolo di cotone imbevuto di soluzione salina per pulire la superficie del cuore e rendere osservabili le arterie. Spingi delicatamente l'oracolo sinistro verso l'alto e individua le arterie coronarie sottostanti. Ora, passa una sutura di nylon otto zero sotto il LAD e completa due lanci per fissare la legatura.

Se ha successo, il ventricolo sinistro distillato dalla legatura sbianca. Quindi, rimuovere la garza e il divaricatore. Successivamente, attraverso l'apertura della toracotomia inserire un tubo flessibile da sei pollici calibro 25, collegato a un ago da 25 gauge.

Inseriscilo di uno o due pollici nella cavità toracica sopra il polmone sinistro. Quindi riportare il mouse in posizione supina e pulire i guanti chirurgici. Ora, continua a utilizzare cinque suture in polipropilene zero in uno schema interrotto per chiudere la gabbia toracica, mantenendo il tubo toracico in posizione.

Quindi rimuovere le due suture che tengono aperto lo strato muscolare e chiudere lo strato muscolare utilizzando cinque suture in polipropilene zero in un semplice schema continuo. Quindi, collegare una siringa da un millilitro all'ago sul tubo toracico. Tirare indietro lo stantuffo per estrarre aria e sangue.

Se la siringa si riempie, staccarla, svuotarla e riattaccarla. Ora, estrai il tubo toracico e assicurati che il torace sia ben sigillato. Procedere con la somministrazione di analgesici e di un bolo sottocutaneo di soluzione fisiologica.

Dopo cinque minuti rimuovere il mouse dal tubo di intubazione. Se il torace non si solleva bilateralmente, l'aria viene intrappolata nella cavità toracica. Introdurre un ago calibro 25 con una siringa da un millilitro tra la terza e la quarta costola, nella cavità toracica.

Quindi aspira delicatamente l'aria intrappolata e il torace inizierà a muoversi normalmente. I topi vengono soppressi 28 giorni dopo l'intervento chirurgico descritto utilizzando cloruro di potassio. I loro cuori venivano arrestati in diastole e poi fissati con paraformaldeide.

Questa immagine mostra la mancanza di blu di Evans nel ventricolo sinistro ischemico. I cuori colorati con colorante tricromo mostrano che c'era un aumento del collagene nella regione infartuata, indicando la fibrosi. I cuori di controllo hanno mostrato ora prove di aumento del collagene.

Dopo aver visto questo video dovresti avere una buona comprensione di come indurre un infarto del miocardio utilizzando un modello murino. Utilizzando le tecniche di intubazione endotracheale, un approccio toracostomico sinistro alla legatura LAD e sintesi totale senza alcuna incisione aggiuntiva nella parete toracica. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in 30 minuti, se eseguita in modo appropriato.

Durante il tentativo di questa procedura è importante ricordare di fornire ai gestori questo intorno al sistema vascolare mediante legatura dell'arteria LAD. Dopo questa procedura può essere eseguito un ecocardiogramma per rispondere a ulteriori domande come l'entità della perdita funzionale o il recupero del cuore dopo un periodo postoperatorio predeterminato. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della chirurgia cardiovascolare per esplorare gli effetti di farmaci e geni specifici sull'infarto del miocardio nei topi.