Name: Gravação de EEG em Ratos Neonatais de Movimentação Livre Usando um Novo Método (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-29T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Aprenda a gravar EEG em ratos neonatais de movimentação livre usando um novo método de eletrodos estável por mais de uma semana. Esta técnica avança a pesquisa em epilepsia neonatal e neurociência.

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Este trabalho foi apoiado pela Fundação de Ciências Naturais da China (31171355) e pela Fundação de Ciências Naturais de Guangdong (S2011010003403, 2014A030313440).

Cuidados com animais, procedimento cirúrgico e procedimentos de registro estavam de acordo com as diretrizes para o Comitê de Uso e Cuidados com Animais da Universidade Normal da China do Sul. 1. Preparação do Eléctrodo (Figura 1A-C) NOTA: O loci do pino do computador é simplesmente um contato em forma de pino como parte da interface de sinal em dispositivos de comunicação. Consiste em um conector macho que se conecta ao conector fêmea. <ol><li> Cuidadosamente separar os pinos macho e fêmea do computador loci pino ( Figura 1A ) com a ajuda de uma pinça. Conecte os pinos macho e fêmea juntos para formar um eletrodo e aplicar cianoacrilato para criar uma ligação adesiva forte ( Figura 1C ). </li><li> Coloque os eletrodos em um copo cheio de água destilada para e coloque-o para o limpador ultra-sônico por 10 min. Mude-os para um forno de secagem a 45 ° C durante 30 min. Esterilizar os eletrodos usando luz UV por 30 min. </li></ol> 2. Procedimento cirúrgico (Figura 1D-F) <ol><li> Preparar os instrumentos cirúrgicos esterilizados e aparelhos estereotáxicos. Anestesiar o filhote de rato neonatal usando anestesia com isoflurano (2,5%) com ar. Quando o filhote é profundamente anestesiado, ajustar a dose de isoflurano para 1,0%. Executar uma pinça de cauda ou dedo do pé antes da cirurgia para garantir a profundidade adequada de anestesia. </li><li> Fixar a cabeça do filhote no aparelho estereotáxico, colocando as orelhas nos canais auditivos e ligeiramente apertando-os. NOTA: Não aperte excessivamente as orelhas, pois o crânio neonatal é muito macio. </li><li> Manter o campo cirúrgico estéril por pulverização de todos os equipamentos com etanol a 70%. Faça uma incisão de 15 mm na cabeça usando um bisturi. Usando fórceps, puxe suavemente o couro cabeludo longe da linha média nos quatro cantos. Coloque um pouco de algodão embebido em solução salina abaixo da pele para manter a incisão bem aberta ( Figura 1D ). </li><li> Encontre os pontos bregma e lambda no crânioE marcá-los com um lápis. Use uma agulha de seringa (26 G) para fazer dois buracos no córtex pré-frontal (PFC) e no hipocampo. OBSERVAÇÃO: O PFC está localizado a +1,8 mm posterior ao bregma e -0,5 mm lateral à linha média, enquanto o hipocampo está localizado a -2,0 mm anterior ao bregma e ± 0,5 mm lateral à linha média ( Figura 1D e E ). A profundidade do eletrodo não deve ser mais de 2 mm abaixo da superfície cortical para minimizar os danos cerebrais. </li><li> Use pinças para segurar os eletrodos e insira os eletrodos de referência e gravação no PFC e no hipocampo, respectivamente. Aplique pomada de eritromicina ao redor do eletrodo para evitar qualquer possível infecção. Fixar o eletrodo utilizando cianoacrilato. </li><li> Prepare o cimento acrílico dental de modo que tenha uma consistência gluey e viscous. Aplique o cimento dental para cobrir os eletrodos eo resto do crânio. NOTA: Secar completamente o crânio antes de aplicar o cimento dental. </li&gt; <li> Aplique 5% de ácido pícrico nos eletrodos para protegê-los. NOTA: Todo o procedimento deve ser feito em um cofre de biossegurança para manter condições estéreis. </li><li> Remover o animal do quadro estereotáxico e injectar 300 μL de glucose a 10% por via subcutânea. Coloque-o sobre um cobertor aquecido para recuperação. Certifique-se que o animal é quente (37 ° C) e ambulatorial ( ou seja, completamente recuperado). Administrar buprenorfina intraperitonealmente (0,05 mg / kg) para dor pós-cirúrgica. NOTA: Não deixe um animal sozinho até que ele tenha recuperado consciência suficiente (ou seja, comportamento normal e movimento). </li><li> Retornar o filhote para sua gaiola casa com a sua barragem depois que ele recupera a consciência. Aguarde dois dias até que o animal esteja totalmente recuperado. </li></ol> 3. Gravação EEG <ol><li> Após a recuperação completa, conecte os eletrodos implantados no crânio do filhote de cachorro ao amplificador em sua própria gaiola. Ligue o amplificador a um cabo analógico-digitalOnverter e conecte o conversor a um computador; As linhas de ligação devem ser tratadas cuidadosamente de modo a não ficar enredadas. </li><li> Selecione pelo menos 10.000 Hz taxa de amostragem na unidade de aquisição de dados para gravação (a largura de banda do transmissor é 1-100 Hz). Certifique-se de que os dados são amostrados corretamente. </li><li> Depois de obter o registo da linha de base, injectar o filhote intraperitonealmente com ácido cainico (KA) (2 mg / kg) para induzir convulsões epilépticas. 15 min após a injecção de KA observar e registar as descargas epilépticas. Os produtos da apreensão através de KA são geralmente físicos. NOTA: A duração ictal-tónica é de cerca de 15,2 ± 0,9 s, a duração da crise é de cerca de 62 ± 5 s. As convulsões podem ser prevenidas no rato neonatal, dando uma injecção IP de hidrato de cloral (400 mg / kg). </li><li> Salve os dados digitalizados e analise-os usando pacotes de software de processamento de sinal, como spike2. Revelar o nível de potência de diferentes componentes de freqüência no sinal EEG neonatalOrming uma análise de espectro de potência. Calcule a potência em um período de tempo de 1 min, encontrando a amplitude de quadrado médio-raiz de 1 a 100 Hz (banda de EEG) 9 . </li></ol>

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<li>Cuaycong, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+approach+to+the+study+of+hypoxia-ischemia-induced+clinical+and+subclinical+seizures+in+the+neonatal+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A novel approach to the study of hypoxia-ischemia-induced clinical and subclinical seizures in the neonatal rat.</a> Dev Neurosci. 33 (3-4), 241-250 (2011).</li>
</ol>

Os autores declaram não haver conflito de interesses.

Aqui, relatamos procedimentos cirúrgicos e de registro para a aquisição de EEG em filhotes de ratos neonatais movidos livremente por um método com fio ( Figura 3 ). Tem sido sugerido que o filhote de rato P7-P12 está na idade de desenvolvimento que corresponde a um recém-nascido a termo a termo 10 , 11 . É tecnicamente difícil obter dados de gravação de EEG de alta qualidade quando se trabalha com filhotes de ratos nesta faixa etária. Além disso...

Está bem estabelecido que a comunicação contínua entre os neurónios é necessária para obter a função normal do cérebro. A comunicação interneuronal ocorre principalmente nas sinapses, onde a informação de um neurônio é transportada para um segundo neurônio. Esta transmissão sináptica é mediada por dois tipos de arranjos estruturais dedicados: sinapses elétricas ou químicas 1 . A eletrofisiologia é o campo que capta o potencial elétrico produzido durante a comunicação interneuronal que controla as funções e comportamento do corpo 2 . O EEG é o método mais comumente usado entre muitas técnicas eletrofisiológicas. O EEG é uma técnica utilizada para detectar alterações nos sinais elétricos produzidos por estímulos internos ou externos. Além disso, é um teste essencial para o diagnóstico clínico e previsão de resultados de várias condições neurológicas, tais como epilepsia, Parkinson e doença de AlzheimerE, bem como os efeitos de agentes farmacológicos e toxicológicos 3 . Geralmente, um paciente epiléptico apresenta hiperexcitabilidade e comprometimento da conectividade funcional dentro do cérebro; Estes são resumidos como descargas epilépticas interictais (IEDs) e podem ser registados pelo EEG sob a forma de picos agudos e transitórios; Ondas afiadas; Complexos pico-onda; Ou polyspikes 4 . A principal característica do cérebro epilético é a ocorrência espontânea de convulsões epilépticas, que podem ser registradas tanto no couro cabeludo como no parênquima cerebral, a fim de localizar a área cerebral responsável pelas convulsões 5 . Além disso, EEG também tem implicações muito importantes em doenças neurodegenerativas como a doença de Alzheimer (DA). Pesquisas sugerem que os registros alterados de EEG e redes oscilatórias comprometidas em pacientes com DA são comuns. No entanto, nosso conhecimento sobre a fisiopatologia das oscilações de rede em doenças neurodegenerativas iÉ surpreendentemente incompleta e precisa ser mais explorada 6 . Neste protocolo, nós projetamos um eletrodo simples com o qual se pode gravar o EEG para entender a comunicação elétrica tanto no cérebro normal quanto no patológico. A implantação cirúrgica neste método é mais barata do que outros procedimentos disponíveis 7 . Além disso, este método pode ser usado para gravar sinais de EEG de alta qualidade e estáveis ​​para prazos mais longos ( isto é, 2-4 h todos os dias durante 1 semana). Além disso, usamos eletrodos mais leves (pesando aproximadamente 26 mg) que permitem aos animais se comportar mais naturalmente 8 . Este método é amplamente aplicável ao estudo de EEG em filhotes de ratos neonatais que requer o amplificador e digitalizador, comumente usado em laboratório de eletrofisiologia e não requer nenhum dispositivo adicional.

<table><tbody><tr><td>Pincer</td><td></td><td></td><td></td>de computador</tr><tr><td></td><td>DELI Group Co., Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>502 super cola</td><td>DELI Group Co., Ltd.</td><td>7144</td><td></td></tr><tr><td>Forno de secagem</td><td>Boxun</td><td>GZX-9140MBE</td><td></td></tr><tr><td>Isofluorano</td><td>RWD Life Science</td><td>902-0000-522</td><td></td></tr><tr><td>Aparelho estereotáxico</td><td>RWD Life Science</td><td>900-0068-507</td><td></td></tr><tr><td>Aparelho de anestesia</td><td>RWD Life Science</td><td>902-0000-510</td><td></td></tr><tr><td>Dispositivo de aquecimento homeotérmico</td><td>Harvard Aparelho</td><td>K 024509</td><td></td></tr><tr><td>Amplificador Modelo 3000&nbsp;</td><td>A-M Systems</td><td>61558</td><td></td></tr><tr><td>Micro1401 Conversor Digital Analógico</td><td>Cambridge Electronic Design Ltd.</td><td>4383</td><td>Unidade de aquisição de dados</td></tr><tr><td>Spike2</td><td>Cambridge Electronic Design Ltd.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

gravação de eeg em ratos neonatais de movimentação livre usando um novo método

Recording EEG in Freely Moving Neonatal Rats Using a Novel Method

O EEG é um método útil para detectar a atividade elétrica no cérebro. Além disso, é uma ferramenta de diagnóstico amplamente utilizada para várias condições neurológicas, tais como epilepsia e distúrbios neurodegenerativos. No entanto, é tecnicamente difícil obter gravações EEG em recém-nascidos, uma vez que requer manuseio especializado e grande cuidado. Aqui, apresentamos um novo método para gravar EEG em filhotes de ratos neonatais (P8-P15). Nós projetamos um eletrodo simples e confiável usando loci de pinos de computador; Ele pode ser facilmente implantado no crânio de um filhote de rato para gravar sinais de EEG de alta qualidade no cérebro normal e epiléptico. Os filhotes receberam uma injecção intraperitoneal (ip) da neurotoxina ácido cainico (KA) para induzir convulsões epilépticas. A implantação cirúrgica realizada neste procedimento é menos dispendiosa do que outros procedimentos EEG para neonatos. Este método permite gravar sinais EEG de alta qualidade e estáveis ​​por mais de uma semana. Além disso, este procedimento também pode ser aplicado a adultos raSt e ratinhos para estudar a epilepsia ou outros distúrbios neurológicos.

<html> Se os procedimentos cirúrgicos acima forem conduzidos adequadamente, será realizada com êxito um registo de EEG de um rato de rato neonatal de rato. 10 min após a injeção de KA, um padrão regular de sinais comportamentais surgiu na forma de movimentos irregulares e arranhões, tremores e perda de equilíbrio. A Figura 2 mostra os vestígios brutos representativos de EEG e traços expandidos interictal, ictal-tónico e ictal-clónico. Os padrões interictais e ictais de descarga reticente ...

Aqui, nós introduzimos uma técnica nova projetada registrar o electroencephalography (EEG) em filhotes epileptic neonatal movendo-se livremente e descrever seus procedimentos, caraterísticas, e aplicações. Este método permite gravar EEG por mais de uma semana.

Gravação de EEG em Ratos Neonatais de Movimentação Livre Usando um Novo Método

EEG is a useful method to detect electrical activity in the brain. Moreover, it is a widely used diagnostic tool for various neurological conditions, such ...

O objetivo geral deste método é registrar EEGs de filhotes de ratos neonatais em movimento livre, utilizando uma nova configuração de eletrodos que permanece estável por uma semana ou mais. Este método responderá perguntas fundamentais na área de neurociência e será benéfico para o estudo da epilepsia neonatal. Ao utilizar esta técnica, é possível registrar sinais de EEG de alta qualidade e estáveis por períodos mais longos.O que ajudará no diagnóstico de diversas desordens neuropatológicas. Geralmente, indivíduos novos neste método terão dificuldades porque ratos neonatais no período de p8 a p15 são muito difíceis de manipular e exigem grande cuidado. O eletrodo requer um contato com pontas para funcionar como interface de sinal com os dispositivos de comunicação.Um pino lo sai de computador desempenha essa função. Separe cuidadosamente os pinos macho e fêmea de um pino lo sai de computador utilizando um alicate. Em seguida, conecte os pinos macho e fêmea para formar um eletrodo e fixe a conexão com cianoacrilato.Prepare vários desses eletrodos. Depois que as ligações endurecerem, coloque os eletrodos em um béquer contendo água destilada por dez minutos. Em seguida, coloque-os em

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Neurociência

Este vídeo explica a teoria de fundo da atividade de EEG neonatal e as respostas sensoriais, seguido de uma demonstração ao vivo de seu registro na unidade de terapia intensiva neonatal.

Prematuro EEG: Protocolo A Multimodal neurofisiológico

Este vídeo demonstra um método para gravação de EEG de alta resolução em um modelo de epilepsia focal de rato. Ele descreve as etapas envolvidas na preparação do rato, conectando uma mini-cápsula de EEG multicanal ao couro cabeludo do rato e registrando o EEG para identificar eventos relacionados a convulsões característicos do modelo de epilepsia.

Registro de eletroencefalografia em um modelo de epilepsia focal em ratos

Este vídeo demonstra o registro eletroencefalográfico (EEG) de crises epilépticas em ratos induzidos por epilepsia. Um rato com eletrodos implantados no hipocampo ventral é conectado ao sistema de registro de EEG e colocado em uma câmara de plexiglass. O rato pode se mover livremente enquanto a atividade cerebral é registrada para monitorar a ocorrência de convulsões.

Registro eletroencefalográfico de crises epilépticas em ratos induzidos por epilepsia

O vídeo demonstra a gravação de sinais de eletroencefalograma (EEG) de filhotes de ratos induzidos por convulsões. Pegue um filhote em movimento livre implantado com eletrodos conectados a um sistema de aquisição de dados. Uma neurotoxina é administrada para induzir crises epilépticas e a atividade de explosão elétrica resultante é monitorada usando o sinal de EEG.

Registro de Convulsões Induzidas por Eletroencefalografia em Filhotes de Rato em Movimento Livre

Este vídeo demonstra a gravação de sinais cerebrais de um leitão que se move livremente. A cabeça do leitão é limpa e os eletrodos são conectados. Esses eletrodos são então conectados a uma unidade de telemetria. A configuração é fixada com borracha de silicone. O leitão pode aclimatar-se antes do registo dos dados.

Gravação de sinais cerebrais de leitões que se movem livremente

Aqui demonstramos o uso de uma tecnologia de habilitação sem fio para eletroencefalograma (EEG) em modelos de roedores neonatais de doenças humanas. Com a telemetria, não há conexões onerosas, permitindo assim comportamentos naturais.

Monitorização EEG contínuo a longo prazo no pequeno roedor modelos de doença humana, utilizando o Sistema Epoch transmissor sem fio

Este protocolo descreve um método simples para gravação simultânea de co localizada Eletroencefalografia (EEG) e multi-laminar local campo potencial em um rato anestesiado. Um orifício de trépano, perfurado o crânio para a inserção de um microeléctrodo é mostrado para produzir distorção negligenciável do sinal EEG.

Gravação simultânea de eletroencefalografia co localizada e potencial do campo Local em roedores

Medir a dor em pacientes não-verbal é um desafio. Neste estudo nós combinamos a gravação de EEG com estimulação usando uma sonda plana-dica para detectar atividade cerebral evocado nocivas de forma objetiva.

Eletrofisiológica medição da atividade cerebral evocados nocivas em neonatos usando uma sonda de Flat-ponta acoplada a Eletroencefalografia

Este estudo apresenta um método para a gravação simultânea dos potenciais do campo local no cérebro, eletrocardiogramas, electromyograms e respirando os sinais de um rato andando livremente. Esta técnica, o que reduz custos experimentais e simplifica a análise de dados, irá contribuir para a compreensão das interacções entre o cérebro e os órgãos periféricos.

Gravações simultâneas de potenciais de campo corticais Local, eletrocardiograma, eletromiograma e respirar o ritmo de um rato andando livremente

Aqui, apresentamos um protocolo para registro Telemétrico eletroencefalogramas um e outro (EEGs) de movimentando-se livremente leitões diretamente no chiqueiro sem o uso de um sedativo, tornando possível gravar padrões típicos de EEG durante não sono REM, como eixo de rajadas.

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Este protocolo foi desenvolvido para criar um sistema confiável e de fácil acesso para registrar EEG de roedores em movimento livre.

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