Un metodo per testare l'efficacia della lavata a mano per la rimozione di nuovi patogeni infettivi

L'obiettivo generale di questo esperimento è testare l'efficacia comparativa delle opzioni di lavaggio delle mani su mani che sono state inoculate sperimentalmente con un organismo di interesse. Questo metodo può fornire informazioni su questioni chiave per aiutare a prevenire le malattie infettive. Consentendo ai ricercatori di studiare l'efficacia del lavaggio delle mani per particolari organismi di interesse.

Il vantaggio principale di questa tecnica è che è flessibile e può essere adattata per consentire lo studio di molti organismi diversi. Abbiamo avuto l'idea di questo metodo quando ci siamo resi conto che le soluzioni di cloro venivano utilizzate per lavarsi le mani in contesti di Ebola e all'epoca non c'erano prove dell'efficacia di ciò. Dopo aver reclutato i soggetti idonei e preparato le soluzioni per il lavaggio delle mani secondo il protocollo di testo, preparare i batteri strisciando un filamento non patogeno di E.Coli su piastre di agar LB e incubare le colture a 37 gradi Celsius per 24 ore per ottenere singole colonie.

Un giorno prima dell'inizio dell'esperimento, utilizzare un lubrificante sterile per prelevare una singola colonia dal piatto e inoculare 10 millilitri di brodo LB. Incubare le colture a 37 gradi Celsius, con agitazione, durante la notte. La mattina dell'esperimento, aggiungere un millilitro di coltura notturna a 20 millilitri di brodo LB fresco.

Incubare le colture per circa due ore e mezza per ottenere una densità salina superiore a 10-8 CFU per millilitro. Quindi, utilizzare uno spettrofotometro per stimare la concentrazione della coltura. Immediatamente prima del test, preparare un inoculo composto per il 68% da batteri o sospensione virale e per il 32% da cloruro di sodio o carico di terra.

Agitare o vorticare delicatamente per mescolare. Dopo aver preparato i volontari secondo il protocollo di testo, testare il pH della pelle di ciascun volontario posizionando una sonda di pH cutaneo a punta piatta nello spazio palmato tra il puntatore e il dito medio. Assicurarsi che l'elettrodo sia piatto contro la pelle e registrare la lettura del pH.

Quindi, unisci le mani della tazza del volontario. Quindi, pipettare con cura 750 microlitri di inoculo in ciascun palmo per infilzare le mani. Quando si infilzano le mani dei volontari, è importante che non venga versato alcun inoculo.

Ricorda ai volontari che questo è importante e dai loro l'opportunità di esercitarsi con l'acqua prima di iniziare la procedura. Chiedi ai volontari di strofinare delicatamente le mani fino a quando tutte le superfici della mano non sono codificate con l'inoculato, sottoponendo le mani al minor attrito possibile. Istruisci i volontari a tenere le mani ferme e lontane dal corpo per altri 30 secondi per consentire all'inoculo di asciugarsi.

Quindi lavarsi le mani utilizzando uno dei metodi descritti nel protocollo di testo. Per il lavaggio delle mani con sapone, utilizzare 10 millilitri di acqua ultrapura per bagnare le mani. Chiedi ai volontari di insaponarsi le mani e poi strofinarle per altri 20 secondi.

Sciacquare le mani del volontario versando 500 millilitri di acqua ultrapura a temperatura ambiente attraverso un imbuto a una portata di 1,5 litri al minuto in un grande sacchetto di raccolta del campione ed elaborare il campione entro due ore. Per tutte le soluzioni di cloro, versare 200 millilitri di soluzione di cloro sulle mani del volontario attraverso un imbuto a una portata di 1,5 litri al minuto e chiedere ai volontari di strofinarsi accuratamente le mani. Come altro metodo per lavarsi le mani, chiedi ai volontari di usare un disinfettante per le mani per lavarsi le mani.

È importante che tutte le superfici della mano vengano strofinate delicatamente, istruire i partecipanti a concentrarsi su ogni parte, palmi, unghie, tra le dita mentre si strofinano e quindi assicurarsi che l'intera mano sia stata risciacquata. Per il controllo A, dopo l'inoculazione, non eseguire una fase di lavaggio delle mani. Per il controllo B, utilizzare solo acqua ultrapura a temperatura ambiente per eseguire il lavaggio delle mani attraverso un imbuto con una portata nota.

Dopo il lavaggio delle mani, posizionare immediatamente la mano di ciascun volontario selezionata per il test, in una sacca per campioni contenente 75 millilitri di Leeuwin fino al polso. Tieni saldamente la parte superiore della borsa intorno al polso. Chiedi ai volontari di strofinare delicatamente la mano nella soluzione per 30 secondi, facendo attenzione a raggiungere tra le dita e sotto le unghie.

Massaggiare delicatamente la mano dall'esterno della borsa per 30 secondi per assicurarsi che l'intera mano sia accuratamente risciacquata nel Leeuwin, fino al polso. Sigillare il sacchetto e lavorarlo secondo il saggio appropriato. Prima di ripetere il processo con ogni metodo di lavaggio delle mani, chiedi ai volontari di usare sapone in acqua tiepida per lavarsi accuratamente le mani nel lavandino.

Infine, usa il 70% di etanolo per spruzzare le mani del volontario fino a quando non sono rivestite su entrambi i lati e lasciale asciugare. Per analizzare i campioni, predisporre una fiamma e un collettore di filtrazione con imbuti di filtrazione sterili e un attacco per il vuoto. Sterilizzare le pinze immergendole nell'etanolo e bruciandole.

Utilizzare le pinze per posizionare un filtro da 0,45 micron sul collettore di filtrazione con la griglia rivolta verso l'alto. Quindi utilizzare una piccola quantità di PBS sterile per bagnare il filtro. Posizionare l'imbuto sulla base e pipettare o versare il campione direttamente sul filtro.

Attivare il vuoto fino a quando l'intero campione non è passato attraverso la membrana. Quindi, utilizzare PBS sterile per sciacquare i lati dell'imbuto e riattivare l'aspirapolvere. Quindi, rimuovere l'imbuto, sterilizzare a fiamma la pinza e sollevare il filtro dalla base.

Quindi posizionare delicatamente il filtro sul fluido in una capsula di Petri con la griglia rivolta verso l'alto, assicurandosi che il filtro sia a filo con la superficie. Capovolgere le piastre e incubare a 37 gradi Celsius per 24 ore. Dopo l'incubazione, contare le colonie di E.Coli e registrare i dati.

Eseguire l'analisi dei dati secondo il protocollo di testo. Il protocollo descritto in questo video è stato completato con 18 volontari testati con E.Coli e Phi6, per E.Coli senza carico di suolo, lavaggio delle mani con HTH, NaDCC e NaOCl stabilizzato, tutti hanno portato a riduzioni di log significativamente maggiori rispetto al lavaggio delle mani con solo acqua. Con il carico del suolo, l'HTH ha portato a una riduzione significativamente maggiore dei log di E.Coli rispetto al solo lavaggio delle mani con acqua con sapone e ABHS.

Non c'era alcuna differenza significativa tra i metodi per Phi6 senza carico di suolo. Tuttavia, per il Phi6 con carico di suolo, l'acqua da sola ha comportato una maggiore riduzione del log rispetto all'ABHS o al NaOCl stabilizzato, e il lavaggio delle mani con sapone ha avuto una riduzione del log maggiore rispetto all'ABHS, al NaOCl stabilizzato e al NaOCl generato. L'HTH ha anche avuto una riduzione logaritmica maggiore rispetto all'ABHS e NaOCl e NaDCC stabilizzati hanno portato a una riduzione logaritmica maggiore rispetto a NaOCl e ABHS stabilizzati.

Come dimostrato in questi grafici, il cloro ha portato a una riduzione logaritmica significativamente maggiore di E.Coli che persiste nell'acqua di risciacquo rispetto al lavaggio delle mani con sapone. Infine, lo stesso modello è stato trovato in Phi6 senza carico di terreno con tutte le soluzioni di cloro, con conseguente riduzione significativamente maggiore di Phi6 nell'acqua di risciacquo rispetto al lavaggio delle mani con sapone. Non ci sono state diminuzioni significative dell'acqua di risciacquo con Phi6 e del carico di suolo.

Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare che i risultati di efficacia per ciascuna condizione vengono calcolati confrontando i risultati per i due controlli. Ciò significa che è molto importante eseguire i passaggi in modo coerente per ogni opzione di lavaggio delle mani.