Name: Dissezione del Pancreas del Mouse per lanalisi istologica e Profiling metabolico (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Scopri la dissezione del pancreas del mouse per analisi istologica e profilo metabolico. Questo metodo include la raccolta terminale del sangue tramite puntura cardiaca per studi completi sulle malattie pancreatiche.

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MAK riconosce il supporto per questo lavoro dai National Institutes of Health / numero - 1R15CA152985-01A1 di sovvenzione del National Cancer Institute. Questo progetto è stato supportato anche dal Miami University Undergraduate Research Award programma, le opportunità di dottorato-laurea Università di Miami per Scholarship Program e il programma di studiosi di Miami University estivo.

le procedure effettuate nel video e descritti di seguito sono state approvate da istituzionale Animal Care ed uso Committee (IACUC) presso l'Università di Miami.
 1. preparazione e Test di stimolo <ol><li>stabilire due aree distinte per la procedura chirurgica, il tavolo operatorio e la tabella post-operazione. Fase di entrambe le aree con tutti i materiali e gli utensili necessari.
	Tabella <ol><li>stage operativo sotto un cappuccio ventilato. Organizzare la tabella con l'apparecchiatura in un modo che permette il continua e senza ostacoli delle prestazioni della procedura.</li>
		<li>Stabilire una tabella di postoperatoria nella stessa stanza e vicino al tavolo principale dell'operazione. Mantenere entrambe le tabelle come ambienti sterili durante tutta la procedura.</li>
	</ol></li> <li>Posto i seguenti rifornimenti sul tavolo operatorio: un barattolo con coperchio, una provetta da 15 mL, un paio di forbici chirurgiche, una bottiglia di etanolo al 70%, due pannelli in schiuma, due pinze, due siringhe di calibro 1 mL 21, due provette da 50 mL, una provetta , un flaconcino criogenico, quattro rilievi chirurgici, dieci birilli, un dispenser di salviette sterilizzanti e un contenitore di sharps.</li>
	<li>Posto le seguenti forniture sul tavolo post-operazione: una bilancia analitica, uno 4 L dewar di azoto liquido, una vasta poco profonda bocca dewar, un rack di Conetti galleggiante, un paio di forbici chirurgiche, due pinze, quattro fiale criogeniche e un dispenser di salviette sterili.</li>
	<li>Riempire un 50 mL e un tubo da 15 mL 75% volume con formalina.</li>
	<li>Con uno spillo in ogni angolo, apporre un tampone chirurgico ad un Consiglio di schiuma approssimativo 30 x 30 cm per servire come il bordo di dissezione. Utilizzare i rimanenti quattro perni durante l'operazione. Preparare un piccolo bordo di schiuma con un tampone chirurgico per trasferire gli organi alla tabella post-op. 
	Attenzione: Isoflurano (99.9%) è una sostanza chimica tossica e deve essere utilizzato in una cappa di sfiato per garantire il massimo livello di sicurezza dall'evacuazione di gas anestetico dei rifiuti 8. Ulteriori informazioni riguardanti i rischi per i ricercatori associati all'utilizzo del metodo open-goccia con isoflurano possono essere trovate in un articolo di Taylor e Mook 8.</li>
	<li>Inserire un tampone chirurgico il vaso di vetro e bagnare con qualche goccia di isoflurane (99.9%) e posizionare un asciugamano di carta sopra la parte superiore per evitare il contatto diretto del mouse con l'isoflurano. Analogamente, utilizzare un tampone chirurgico per linea tubo restante e bagnare con qualche goccia di isoflurano e posizionare un cuscinetto supplementare sopra la parte superiore per evitare il contatto diretto tra il mouse e l'isoflurano.</li>
	<li>Pour azoto liquido in bocca ampia superficiale dewar fino alla linea di riempimento massimo è raggiunto.</li>
	<li>Posto il mouse selezionato per dissezione in anestesia da camera, cioè il vaso di vetro con un tampone imbevuto con poche gocce di isoflurane (99.9%) coperta con il coperchio, per un minimo di ~ 1 
	Nota: Questo tempo varia da mouse a mouse. Una volta che il mouse è incosciente, rimuoverlo dall'alloggiamento e posizionarlo al centro del tavolo operativo.</li>
	<li>Orientare il mouse in modo che si è sdraiato sul lato ventrale e con la testa puntato lontano dallo scienziato. Posizionare la testa all'interno del tubo interno foderato con un tampone chirurgico imbevuto con qualche goccia di isoflurane (99.9%) e un pizzico di piede per assicurare che il mouse non risponde agli stimoli per eseguire un test di stimolo.
	<ol><li>Se questo test ha esito negativo e il mouse risponde alla prova di pizzico del piede, ripetere il passaggio 1.8.</li>
	</ol></li></ol> 2. Incisione, cuore di puntura e l'eutanasia iniziale <ol><li>Pin gli arti del mouse alla scheda di schiuma chirurgica e bagnato il lato ventrale del mouse con etanolo al 70%.</li>
	<li>Pizzicare la pelle/pelliccia vicino all'apertura uretra con pinze e tirare leggermente verso l'alto. Fare un'incisione con le forbici chirurgiche attraverso la cavità addominale, a partire dall'apertura uretra, la linea mediana e termina al mento.
	<ol><li>Vicino al punto di partenza dell'incisione iniziale, afferrare un lato della pelliccia/pelle con il forcipe e fare un'altra incisione con le forbici verso il basso e in diagonale verso la zampa posteriore.</li>
		<li>Ripetere questa operazione nello stesso modo sul lato opposto. 
		Nota: La pelliccia/pelle può essere appuntata giù per creare una più ampia apertura, ma non è necessaria.</li>
	</ol></li> <li>Cuore di individuare e rimuovere il pericardio, che è la sacca intorno al cuore, per evitare l'intasamento dell'ago della siringa.
	<ol><li>Afferrare il pericardio con il forcipe e tagliare con le forbici. Eseguire la puntura di cuore inserendo con attenzione l'ago della siringa nel cuore pulsante e iniziare lentamente per ritrarre lo stantuffo.</li>
		<li>Per la raccolta del sangue ottimale, usare lo stantuffo dell'ago per imitare l'azione di pompaggio del cuore ed evitare di disegno troppo in fretta. 
		Nota: In genere circa 1 mL di sangue può essere raccolto.</li>
		<li>Dopo aver completato la raccolta di sangue, dissipare il sangue nella provetta da centrifuga e smaltire la siringa nel contenitore di sharps.</li>
		<li>Dopo la puntura di cuore viene eseguita, eseguire l'eutanasia rimuovendo gli allegati collegamento cuore. 
		Nota: L'eparina, un anticoagulante, non è stato aggiunto alla siringa in questa procedura prima della puntura cuore per permettere al sangue di coagulare per raccolta del siero in questo studio specifico. Tuttavia, se il ricercatore ha desiderato impedire la coagulazione del sangue per la raccolta del plasma, l'eparina potrebbe aggiungersi alla siringa prima della puntura di cuore.</li>
	</ol></li> <li>Se lo studio comporta la genotipizzazione del mouse, praticare una porzione dell'orecchio con le forbici e inserire in una provetta da centrifuga per una verifica di genotipo.</li></ol>
 3. pancreas estrazione <ol><li>Locate stomaco sul lato sinistro del mouse. Begin delicatamente (in modo da evitare di strappare) che separa il pancreas dallo stomaco e duodeno utilizzando due pinze. 
	Nota: Prima di scollegare il pancreas dallo stomaco e l'intestino, è molto importante che le pinze sono utilizzate delicatamente per guidare il tessuto pancreatico lontano gli organi e a non schiacciare o strappare il pancreas con il forcipe.
	<ol><li>Continuano a separare il pancreas dalle sezioni piccolo intestino digiuno e ileo e infine dall'intestino cieco dell'intestino crasso.</li>
	</ol></li> <li>In intestino cieco, riposizionare il forcipe e continuare la separazione del pancreas lungo il restante colon verso il retto. 
	Nota: A questo punto, è conveniente tagliare e rimuovere la parte dallo stomaco alla regione del colon immediatamente precedente retto.</li>
	<li>Individuare il pancreas e attaccato la milza. Far scorrere il pancreas verso il lato destro del mouse. Separare le connessioni rimanenti tra il pancreas e la cavità toracica con il forcipe per scollegare completamente il pancreas e la milza comunicanti.</li>
	<li>Rimuovere il pancreas e stenderlo per esame. Lasciare la milza associata al pancreas per scopi di identificazione.
	<ol><li>Rimuovi tutto del tessuto connettivo, il tessuto grasso e mesenterico dal pancreas. 
		Nota: Questo tessuto è più bianco nel colore e quindi può essere facilmente distinto dal tessuto del pancreas che è pinker in colore. Ciò è particolarmente importante se l'intero pancreas deve essere rimosso. Ad esempio, se il pancreas deve essere pesato e rispetto al peso corporeo o tra gruppi di animali. Nel Ptf1a cre / +; LSL-Kras G12D / + modello del topo, in particolare nei mesi precedenti, tessuto pancreatico fibroso duro potrebbe essere presente. In questo caso, la rimozione accurata del pancreas dovrà svolgersi come l'intestino potrebbe essere intrecciata nel tessuto del tumore. Nei casi avanzati, possono anche essere presenti anormale della milza e tessuto del fegato.</li>
	</ol></li> <li>Se lo si desidera, rimuovere altri organi a questo punto.</li></ol>
 4. raccolta dei dati e archiviazione <ol><li>dopo l'estrazione degli organi, spostare i campioni alla zona postoperatoria per conservazione.</li>
	<li>Pesare ogni organo e metterli nel loro rispettivo flacone criogenico. 
	Nota: lungo with la massa di ciascun campione, eventuali irregolarità devono essere registrate per riferimento futuro.</li>
	<li>Una volta che gli organi sono pesati, inserirli nell'azoto liquido per congelamento snap.</li>
	<li>Dopo lo snap di congelamento, riporre gli organi a-80 ° C per la conservazione a lungo termine.</li>
	<li>Il formalina memorizzato i campioni sulla parte superiore del banco durante la notte e la mattina successiva modificare loro soluzione da formalina in etanolo al 70%. 
	Nota: Questi campioni devono essere conservati a 4 ° C per la conservazione a lungo termine.</li>
	<li>Per immagazzinaggio a lungo termine, congelare il pugno di sangue e l'orecchio a-80 ° C.. Per la raccolta del siero dal sangue, permettere al sangue di coagulare per 30 min e poi centrifugare esso. Rimuovere la parte di siero utilizzando una pipetta e quindi conservare a -80 ° C.</li>
</ol> 5. Clean Up <ol><li>Sanitize tutti la dissezione strumenti con le salviettine sterilizzante. Tappo del tubo interno foderato con l'isoflurano imbevuto chirurgiche pad. Sostituire il tampone chirurgico sulla scheda di schiuma con un tampone chirurgico fresco. Disporre le porzioni del mouse che non sono state raccolte per l'alloggio &#39; politica di smaltimento animale s.</li>
</ol>

<ol><li>Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+Survival+by+Histologic+Type+of+Pancreatic+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).</li>
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<li>Auer, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+frozen+tissue+storage+conditions+on+the+integrity+of+RNA+and+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein.</a> Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).</li>
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<li>Ijichi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggressive+pancreatic+ductal+adenocarcinoma+in+mice+caused+by+pancreas-specific+blockade+of+transforming+growth+factor-%CE%B2+signaling+in+cooperation+with+active+Kras+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression.</a> Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).</li>
<li>Abiatari, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moesin-dependent+cytoskeleton+remodelling+is+associated+with+an+anaplastic+phenotype+of+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer.</a> J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).</li>
<li>Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((a+Statistical+significance+analysis+of+nuclear+magnetic+resonance-based+metabonomics+data%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+biochemistry%22%5BJournal%5D)">a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data.</a> Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).</li>
<li>Yadav, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+Tumefactive+Chronic+Pancreatitis%3A+Clinical+Profile%2C+Histology%2C+and+Natural+History+After+Resection%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection.</a> Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Significato per quanto riguarda i metodi esistenti Mentre esista altri video informale delle dissezioni del mouse, questo video articolo fornisce la prima qualità professionale, inter pares, dimostrazione visiva di tutti i passaggi dettagliati necessari per l'estrazione e la raccolta del pancreas del mouse tramite la dissezione10 . Il pancreas è un organo principale per attività metabolica e insulino produzione, la dissezione e la raccolta del pancreas permette la conservazione...

Il mouse è emersa come un importante modello animale di cancro del pancreas umano1,2. Nel Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + modello del topo, Kristen oncogene di ratto sarcoma (K-Ras) viene attivata esclusivamente nel pancreas, con conseguente apertura di lesioni precancerose del pancreas, conosciuto come neoplasia intraepiteliale pancreatica (PanINs), che il progresso per gli adenocarcinomi duttali pancreatici, comunemente come PDACs3. Questo sistema di modello del mouse fornisce uno dei migliori modelli animali disponibili per cancro del pancreas umano4,5, con l'ulteriore vantaggio che il PanINs emergono entro i primi cinque mesi di vita e frequentemente di progresso per PDAC entro un singolo anno4,5, considerando che il cancro del pancreas si verifica più frequentemente negli esseri umani 60-70 anni di età.
Estrazione del pancreas tramite la dissezione dal Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + topi alle varie età permette per un esame istologico longitudinale dello sviluppo del cancro del pancreas, che vanno dalle prime fasi PanIN attraverso la progressione a PDAC3,4 , 5. raccolta del pancreas alle età che variano da cinque a quindici mesi può essere utilizzata anche per preparare il tessuto estratti per caratterizzare i cambiamenti globali nel pancreas4 metabolismo che si verificano durante la transizione da sano al tessuto malato 6,7.
Questo articolo presenta una guida visiva completa i passaggi necessari per eseguire un'estrazione del pancreas del mouse e fornisce linee guida per la conservazione di un pancreas per ulteriori analisi. Questa guida sarà altrettanto preziosa per individui conducendo una ricerca su altre malattie del pancreas, compreso il diabete di tipo e dovrebbero essere particolarmente utili per gli studenti e gli investigatori nuovi di ricerca che coinvolge la raccolta del pancreas del mouse utilizzando dissezione per profiling metabolico o analisi istologiche.

<table><tbody><tr><td>Barattolo di vetro&nbsp;</td><td>Corning</td><td>3140-150</td><td>Il barattolo di vetro utilizzato nel video è stato interrotto. Questo è il suo sostituto.</td></tr><tr><td>Coperchio del barattolo di vetro</td><td>Corning</td><td>9985-150</td><td>Il coperchio del barattolo di vetro utilizzato nel video è stato interrotto. Questo è il suo sostituto.</td></tr><tr><td>Provette Falcon da 15 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>339650</td><td></td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche</td><td>Fisher Scientific</td><td>9201</td><td></td></tr><tr><td>Flacone da spremere&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-10DD</td><td></td></tr><tr><td>100% etanolo</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-032-103</td><td></td></tr><tr><td>Formalina</td><td>Fisher Scientific</td><td>245-684</td><td></td></tr><tr><td>Pannelli in schiuma</td><td>Therapak</td><td>562908</td><td></td></tr><tr><td>Pinze</td><td>Fisher Scientific</td><td>200205SHN</td><td></td></tr><tr><td>1 mL 21G Siringhe</td><td>BD Biosciences</td><td>309624</td><td></td></tr><tr><td>Provette Falcon da 50 mL</td><td>Fisher Scientific 339652</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Provette per microcentrifuga da 2,0 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-681-258</td><td></td></tr><tr><td>Cuscinetti chirurgici</td><td>Fisher Scientific</td><td>S67011</td><td></td></tr><tr><td>Perni a T Lunghezza:&nbsp; 2"&nbsp;</td><td>Prodotti Advance Store</td><td>X32T-05</td><td></td></tr><tr><td>Salviette sterilizzanti</td><td>Monouso professionali International Inc.</td><td>Q85084</td><td></td></tr><tr><td>Contenitore per oggetti taglienti</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-827-122</td><td></td></tr><tr><td>Bilancia analitica</td><td>Marshall Scientific</td><td>ME-AE200</td><td></td></tr><tr><td>4L Dewar</td><td>Taylor-Wharton</td><td>4LD</td><td></td></tr><tr><td>Bocca larga e poco profonda Dewar</td><td>Fisher Scientific</td><td>F3087-V</td><td></td></tr><tr><td>Rack per microprovette galleggiante</td><td>VWR</td><td>60986-100</td><td></td></tr><tr><td>Fiala criogenica 1,2 mL, sterile</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-500-25</td><td></td></tr><tr><td>Isothesia (isoflurano)&nbsp;</td><td>Henry Schein Salute degli animali</td><td>050033</td><td></td></tr><tr><td>Azoto liquido</td><td>Wright Brothers</td><td>NIT-60-XX</td><td></td></tr><tr><td>Ceppo di topo Kras</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>OO8179</td><td></td></tr><tr><td>Ceppo di topo</td><td>Cre MMRRC</td><td>OOO435-UNC</td><td></td></tr></tbody></table>

dissezione del pancreas del mouse per l'analisi istologica e profiling metabolico

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Stiamo indagando il fattore di trascrizione specifico del pancreas, 1a cre-ricombinasi; ratto di salmone affumicato-fermata-salmone affumicato-Kristen sarcoma, glicina, l'acido aspartico pone al codone 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) ceppo il mouse come un modello di cancro del pancreas umano. L'obiettivo dei nostri studi attuale consiste nell'identificare nuovi biomarcatori metabolici della progressione del cancro del pancreas. Abbiamo eseguito il profilo metabolico di urina, feci, sangue ed estratti di tessuto del pancreas, come pure le analisi istologiche del pancreas per mettere in scena la progressione del cancro. Il pancreas del mouse non è un organo solido ben definito come negli esseri umani, ma piuttosto è un tessuto molle diffusamente distribuito che non è facilmente identificabile da parte di persone non hanno familiarità con l'anatomia interna del mouse o da individui che hanno poca o nessuna esperienza di prestazione dissezioni di organo del mouse. Lo scopo di questo articolo è quello di fornire una dettagliata graduale dimostrazione visiva per guidare i novizi nella rimozione del pancreas del mouse tramite la dissezione. Questo articolo dovrebbe essere particolarmente utile per gli studenti e gli investigatori di nuovo alla ricerca che richiede la raccolta del pancreas del mouse tramite la dissezione per profiling metabolico o analisi istologiche.

La figura 1 Mostra una panoramica dell'area ambiente operativa e la figura 2 Mostra l'area di operazione post. Mentre questa impostazione fornisce la quantità minima di attrezzature e messa in scena, gli individui possono scegliere di modificare questo per meglio soddisfare le esigenze individuali. Il protocollo dovrebbe essere ottimizzato secondo le specifiche esigenze dell'esperimento. Questa procedura è condotta in modo che te...

Questo video articolo fornisce una dimostrazione dettagliata delle procedure necessarie per rimuovere con successo il pancreas da un mouse tramite la dissezione per l'analisi istologica e profiling metabolico.

Dissezione del Pancreas del Mouse per l'analisi istologica e Profiling metabolico

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

L'obiettivo principale di questo articolo video è fornire istruzioni visive dettagliate per l'esecuzione della dissezione del pancreas di un topo. Le istruzioni si riveleranno utili per i ricercatori che studiano modelli murini di malattie pancreatiche umane e che necessitano di prelevare il pancreas del topo mediante dissezione per analisi istologiche o profili metabolici. L'articolo video fornisce inoltre istruzioni dettagliate per effettuare un prelievo terminale di sangue mediante procedura di puntura cardiaca.Viene mostrato un tavolo operatorio con le forniture necessarie. Queste includono un barattolo di vetro con coperchio, un tubo falcon da 15 mL, un paio di forbici chirurgiche, un contenitore a spruzzo di etanolo al 70%, due tavolette di polistirolo, due pinze, due siringhe da 1 mL con ago 21 gauge, due tubi falcon da 50 mL, un tubo da centrifuga, un criotubo, quattro pad chirurgici, dieci spilli, un dispenser di salviette sterilizzanti e un contenitore per materiale tagliente. Viene mostrato il tavolo post-operatorio con le forniture necessarie.Questi includono una bilancia analitica, un Dewar da quattro litri di azoto liquido, un Dewar basso e a bocca larga, una rack gal

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Medicina

Il protocollo seguente delinea il processo di dissezione del pancreas per l'imaging fetta virtuale, e la successiva quantificazione di tutte le GFP-tagged beta-cellule del pancreas intero.

Quantificazione in situ di cellule beta pancreatiche Messa in topi

Questo video descrive la tecnica di differenziazione delle cellule acinose pancreatiche in cellule duttali in coltura 3D ex vivo. Questo aiuta a comprendere i meccanismi che regolano la metaplasia acinar-duttale (ADM), un processo chiave nello sviluppo precoce del cancro del pancreas.

Induzione della metaplasia acina-duttale: un metodo per studiare la differenziazione da cellula acinara a cellula duttale in coltura 3D ex vivo

Saggio funzione in vitro β-cellulare utilizzando isolate del mouse isole di Langerhans è una componente importante nello studio della fisiopatologia del diabete e terapeutica. Mentre molte applicazioni a valle sono disponibili, questo protocollo descrive specificamente la misurazione di intracellulare adenosina monofosfato ciclico (cAMP) come parametro essenziale determinare la funzione β-cellulare.

Un metodo per l&#39;isolamento del mouse isole pancreatiche e intracellulare cAMP Determinazione

Presentiamo qui un protocollo per l'isolamento delle isole dal modello murino di diabete di tipo 2, Leprdb e i dettagli di un test su cellule vive per la misurazione della secrezione di insulina da isole intatte che utilizza la microscopia a 2 fotoni.

LEPR<sup&gt; Db</sup&gt; Mouse Modello di diabete di tipo 2: pancreas isolamento Islet e live-cella 2-Photon Imaging di isolotti Intact

Qui, descriviamo un metodo per l'isolamento di cellule nel microambiente del pancreas da tessuto embrionale, neonatale e adulto di topo, concentrandosi sull'isolamento di cellule mesenchimali. Questo metodo consente la profilazione dell'espressione genica cellulare e della secrezione proteica al fine di chiarire i segnali estrinseci che regolano lo sviluppo, la funzione e la tumorigenesi del pancreas.

Isolare e analisi cellule del pancreas Mesenchima mediante citometria di flusso

Descriviamo un metodo per l'isolamento di cellule endocrine da pancreas embrionale, neonatale e postnatale, seguite dal sequenziamento di RNA di cella singola. Questo metodo consente analisi dello sviluppo del pancreas endocrino lignaggio, eterogeneità e trascrittomica dinamiche di cella.

Analisi trascrittomica unicellulare delle cellule Endocrine del pancreas del Mouse

Isolamento primario delle cellule acinose, modulazione di espressione o attività di proteina, cultura e applicazioni a valle sono abbondantemente utili nell'ex vivo uno studio del metaplasia acinoso--duttale (ADM), un evento iniziale nello sviluppo del cancro del pancreas.

Che imita e manipolare Metaplasia acinoso--Ductal pancreatico nella coltura cellulare 3-dimensionale

La pancreatite cronica (CP) è una malattia caratterizzata da infiammazione e fibrosi del pancreas, spesso associata a dolori addominali intrattabili. Questo articolo si concentra sul perfezionamento della tecnica per generare un modello murino di CP tramite infusione del dotto biliare con acido 2,4,6 -trinitrobenzene solfonico (TNBS).

Un modello murino per la pancreatite cronica tramite infusione di TNBS del dotto biliare

Questo studio presenta l'applicazione di fette di tessuto pancreatico vivo allo studio della fisiologia delle isole e delle interazioni isolotto-cellula immunitaria.

Osservare la funzione delle isole e le interazioni isolo-cellule immunitarie nelle fette di tessuto pancreatico vivo

Le cellule metaplastiche pancreatiche sono precursori di cellule maligne che danno origine ai tumori pancreatici. Tuttavia, isolare le cellule pancreatiche vitali intatte è difficile. Qui presentiamo un metodo efficiente per la dissociazione del tessuto pancreatico. Le cellule possono quindi essere utilizzate per il sequenziamento di RNA a singola cellula (scRNA-seq) o per la co-coltura bi- o tridimensionale.

Dissezione del tessuto pancreatico per isolare singole cellule vitali

Questo protocollo descrive l'isolamento di cellule endoteliali di topo dall'intero pancreas.

Isolamento delle cellule endoteliali pancreatiche di topo

Scopri la dissezione del pancreas del mouse per analisi istologica e profilo metabolico. Questo metodo include la raccolta terminale del sangue tramite puntura cardiaca per studi completi sulle malattie pancreatiche.

Dissezione del Pancreas del Mouse per l'analisi istologica e Profiling metabolico

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