Test di riconoscimento di oggetto romanzo per l'indagine di apprendimento e memoria in topi

L'obiettivo generale di questo test comportamentale è testare vari aspetti dell'apprendimento e della memoria nei topi. Questo metodo può aiutare a rispondere a numerose domande nell'area della cognizione dei roditori, dalle basi dello sviluppo di una comprensione più profonda, per alcuni aspetti dell'apprendimento della memoria e dei topi, nonché a questioni più complesse, come il deterioramento cognitivo, compresi i modelli di malattia, come il morbo di Alzheimer, all'esplorazione del potenziale miglioramento cognitivo. Il vantaggio principale dell'ORT è la sua semplicità, efficienza e flessibilità e lo studio dell'apprendimento e della memoria nei topi.

A dimostrare questa procedura sarà Andrei Jeltyi, un tecnico di laboratorio del nostro laboratorio. Inizia selezionando oggetti delle dimensioni di un neo che possono essere facilmente discriminati dall'animale ma hanno un grado simile di complessità nelle caratteristiche, come la consistenza, la forma o la luminosità, per ridurre al minimo qualsiasi potenziale preferenza di oggetto indotta che potrebbe influenzare i risultati. Inoltre, per ridurre ulteriormente le preferenze indotte, assicurarsi che i topi siano in grado di arrampicarsi su entrambi gli oggetti o su nessuno dei due oggetti.

La capacità di arrampicarsi su un oggetto può aumentare l'interesse per l'esplorazione. Quindi, per ridurre al minimo lo stress dell'illuminazione intensa, utilizzare un'illuminazione bassa e disinnescata con il centro del labirinto illuminato a circa 20 fortuna. Acclimata i topi in qualsiasi nuova stanza di prova per almeno un'ora prima dell'uso ogni giorno e mantieni la temperatura e l'umidità simili alle normali condizioni di stabulazione.

Si noti che i topi devono essere maneggiati una o due volte al giorno per almeno un minuto, nel corso di una o due settimane prima del test. Infine, per l'arena principale, usa una camera quadrata realizzata in plastica non porosa bianca o nera in contrasto con il colore del topo. Inizia rimuovendo il topo dalla sua gabbia domestica e posizionandolo al centro dell'arena vuota aperta.

Consenti l'esplorazione gratuita dell'arena per cinque minuti. Una volta che la gabbia domestica è vuota, conservala per usarla come gabbia di contenimento il giorno successivo. Al termine dei cinque minuti, rimuovere il mouse e metterlo in una gabbia di contenimento.

Non riportare il mouse nella sua gabbia di casa originale, o ciò potrebbe influire sul comportamento dei restanti topi da testare. Quindi pulire accuratamente l'apparato tra i topi, utilizzando il 70% di volume per volume di etanolo. Successivamente, inizia la fase di addestramento o T1, posizionando due oggetti identici in squadroni opposti dell'arena.

Ad esempio, uno nell'angolo nord-ovest e uno nell'angolo sud-est. Fissare gli oggetti troppo leggeri al pavimento con lo stucco di montaggio per la rimozione. Controbilancia l'uso di ogni set di oggetti e la posizione del nuovo oggetto in ciascuno dei quattro angoli dell'arena.

Assicurati di sapere, quale diagonale viene utilizzata per quale animale, in modo che l'uso diagonale il giorno dell'addestramento sia la forma come quella utilizzata il giorno del test per ogni topo. 24 ore dopo l'assuefazione, rimuovere il topo dalla sua gabbia di casa e posizionarlo al centro dell'arena, equidistante dai due oggetti identici per iniziare l'allenamento. Consentire l'esplorazione libera per un minimo di cinque minuti, se si fonde un ceppo di topi noti per avere una bassa attività locomotoria o di esplorazione, estendere la prova a 10 minuti per tutti i topi nelle coorti.

Al termine della prova di allenamento, rimuovere il mouse e posizionarlo nella gabbia di tenuta. Una volta che la gabbia domestica è vuota, conservarla per utilizzarla come gabbia di contenimento il giorno del test. Assicurati di pulire l'apparecchio e gli oggetti tra i topi.

Successivamente, inizia la fase di test o T2, posizionando l'oggetto familiare utilizzato durante l'addestramento e un nuovo oggetto nei squadroni opposti dell'arena. Utilizzare le stesse posizioni utilizzate durante l'allenamento per ciascun mouse. All'intervallo di scelta da T1 a T2, rimuovi il topo dalla sua gabbia di casa e posizionalo nell'arena centrale, equidistante dall'oggetto familiare e dall'oggetto nuovo.

Consenti l'esplorazione libera per 10 minuti. Infine, al termine della prova di test, rimuovere il topo e posizionarlo nella gabbia di contenimento. Per l'analisi, l'esplorazione è definita come il muso diretto verso l'oggetto entro due o tre centimetri con una vibrazione attiva.

Tuttavia, il mouse seduto sull'oggetto non viene conteggiato per il tempo di esplorazione. Sia per T1 che per T2, assegna un punteggio ai primi cinque minuti e calcola il tempo totale di esplorazione per entrambi gli oggetti per ogni sessione. Se il mouse non raggiunge il tempo minimo di esplorazione di 20 secondi per entrambi gli oggetti, continuare a segnare oltre i cinque minuti fino a quando l'esplorazione totale non supera i 20 secondi.

Estendere il tempo di T1 e T2 a 10 minuti per i ceppi di topi che hanno una bassa esplorazione e non soddisfano questo criterio minimo di cinque minuti, come osservato durante i test pilota. Infine, se i topi non raggiungono un minimo di 20 secondi di esplorazione per entrambi gli oggetti per T1 o T2 a 10 minuti, escluderli dall'analisi in quanto non si può confermare che l'animale abbia trascorso abbastanza tempo ad esplorare per imparare e discriminare. Il compito di riconoscimento degli oggetti è un metodo efficiente e flessibile per studiare l'apprendimento e la memoria nei topi, in cui è stato dimostrato che gli inibitori della fosfodiesterasi 2 migliorano durante questo compito.

Rispetto al veicolo, la somministrazione degli inibitori della PDE2 60-7550 o ND7001 ha migliorato significativamente la memoria in modo dose-dipendente, se somministrata 30 minuti prima dell'allenamento. Quando somministrato in momenti diversi, rispetto all'allenamento e ai test, l'inibitore della PDE2 60-7550 ha migliorato significativamente la sua memoria quando somministrato 30 minuti prima dell'allenamento, così come immediatamente dopo l'allenamento e 30 minuti prima del richiamo. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere completata in due o tre giorni se eseguita correttamente.

Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di eseguire studi pilota e scegliere attentamente l'intervallo da T1 a T2, poiché la scelta di un intervallo errato può causare un effetto errato. Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi come il labirinto del fienile per rispondere a domande aggiuntive come le differenze nell'apprendimento, che non possono essere completamente affrontate utilizzando i test di riconoscimento degli oggetti. Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo dell'apprendimento e della memoria per esplorare i meccanismi biologici di base della memoria, nonché per esplorare i potenziali meccanismi di vari deficit cognitivi nei roditori.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come impostare e progettare un esperimento appropriato utilizzando il test di riconoscimento degli oggetti, inclusa l'esecuzione di studi pilota, la scelta degli oggetti e la selezione dell'intervallo da T1 a T2 appropriato. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i tuoi esperimenti.