Analisi di supercomplexes della catena di trasporto elettronico mitocondriale con elettroforesi nativa, analisi in-gel e elettroelution

L'obiettivo generale dell'elettroforesi nativa in combinazione con saggi in-gel, immunoblotting ed elettroeluizione nativa è quello di preservare e analizzare l'assemblaggio dei supercomplessi mitocondriali. Questo metodo può aiutare a rispondere a come i complessi proteici della catena di trasporto degli elettroni mitocondriali si assemblano in supercomplessi a seconda di molti fattori, tra cui le esigenze bioenergetiche e le condizioni fisiologiche e patologiche. Il vantaggio principale di questa tecnica è che, se eseguita correttamente, l'integrità fisiologica e la funzionalità dei supercomplessi mitocondriali vengono preservate durante il lungo processo di isolamento.

Questo metodo può essere applicato anche per studiare la dinamica dell'assemblaggio dei supercomplessi e per analizzare i complessi proteici nella membrana plasmatica, così come in altre membrane intracellulari. Quando ci si prepara per i saggi in gel, è assolutamente fondamentale che tutte le parti utilizzate per l'elettroforesi nativa non siano contaminate da detergenti, in quanto contribuiranno alla disintegrazione dei supercomplessi mitocondriali. Taglia una o più corsie da un gel nativo trasparente e trasferiscile in un contenitore etichettato.