Name: Preparazione di vescicole a membrana plasmatica da cellule staminali mesenchimali del midollo osseo per potenziali terapie di sostituzione del citoplasma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: Scopri come preparare vescicole a membrana plasmatica da cellule staminali mesenchimali del midollo osseo per terapie di sostituzione del citoplasma. Questo metodo permette di studiare il potenziale rigenerativo nel trattamento delle patologie legate all'invecchiamento.

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Questa ricerca è stata sostenuta dalla Fondazione Li Ka Shing, il Guangdong University High Level Project &quot;Green Technologies for Marine Industries&quot;, la Fondazione della Scienza Naturale della Cina (http://www.nsfc.gov.cn/ Grant No. 30971665, 81172894, 81370925) e il Dipartimento per l&#39;istruzione del Guangdong (http://www.gdhed.edu.cn/ Grant No.cxzd1123).

I topi BALB / c da 8 a 12 settimane sono stati acquistati da Shanghai Experimental Animal Center (Shanghai, Cina) e raccolti in una struttura specifica per gli animali patogeni e climatizzata. La cura degli animali e le procedure sperimentali sono state conformi agli orientamenti per l&#39;uso e la cura degli animali da laboratorio istituiti dall&#39;Università Shantou. 1. Montaggio dell&#39;apparecchio <ol><li> Per garantire la sterilità, accendere la luce UV di un cofano di tessuto per 30 minuti prima dell&#39;uso. </li><li> Svitare un gruppo filtrante da 25 mm e immergere il tappo e il fondo dell&#39;unità in una tazza di vetro da 200 ml riempita di etanolo al 75% per 30 minuti. L&#39;unità è in polipropilene di grado medico. </li><li> Raccogliere il tappo e il fondo dell&#39;unità utilizzando le pinze, scuotere manualmente l&#39;etanolo rimanente e lasciare asciugare le parti per 10 minuti nel cofano. </li><li> Bagnare una membrana in policarbonato da 19 mm in PBS e collocarla accuratamente sulla parte superiore della matrice di supporto del bottoM dell&#39;unità. La pellicola polimerica presenta una superficie liscia e piana e pori a tracolla 3 μm. </li><li> Riassemblare l&#39;unità avvolgendo il cappuccio strettamente contro il fondo. Assicurarsi che la membrana non sia dislodata dal centro. </li><li> Rimuovere l&#39;ago di una siringa da 1 ml di insulina e prelevare 1 ml di PBS. Fissare la siringa all&#39;unità filtrante e quindi spingere PBS attraverso l&#39;unità per bagnare l&#39;assemblaggio e verificare se c&#39;è qualche perdita. </li></ol> 2. Generazione di vescicole a membrana plasmatica (PMV) <ol><li> Stabilire una cultura BMSC, come riportato da Nemeth et al. 15 , in mezzo di coltura DMEM contenente il 15% di FBS e l&#39;1% di penicillina / streptomicina. Coltivare le cellule in un piatto a 6 pozzetti in un incubatore umidificato contenente 5% di CO 2 a 37 ° C. </li><li> Per propagare le cellule, rimuovere il mezzo di coltura e sciacquare il pozzetto con 0,5 ml di PBS privo di calcio. </li><li> Aggiungere 0,5 mL di 0,25% di trysina-EDTA e incubare le cellule a 37 ° CPer 3 min. Toccare la piastra contro il palmo della mano un paio di volte per facilitare il distacco delle cellule. Fermare la digestione aggiungendo 1 ml di terreno di coltura. </li><li> Raccogliere le cellule in un tubo conico da 15 ml e centrifugare a 200 xg per 2 min in una centrifuga a banco. Resuspendere le cellule in 4 mL di terreno di coltura e trasferire le cellule in due pozzetti di una piastra a 6 pozzetti. NOTA: Le cellule solitamente raggiungono la confluenza a circa 24 h. </li><li> Per generare PMV, raccogliere le cellule da un pozzetto (circa 5 x 10 5 cellule) di una piastra a 6 pozzetti mediante la digestione della tripsina e monodispersa le cellule in 0,5 mi di terreno di coltura. </li><li> Caricare le cellule nella siringa dell&#39;insulina, collegarla all&#39;unità filtrante e spingere rapidamente lo stantuffo per spremere le cellule attraverso il filtro. Scartare il mezzo estruso poiché dovrebbero essere solo pochi PMV all&#39;interno di esso. </li><li> Caricare altri 0,5 ml di mezzo nella siringa e spingerlo rapidamente attraverso il filtro. Raccolto il mezzo della seconda estrusione, che contengonoI PMV di varie dimensioni. </li><li> Caricare 150 μl del mezzo raccolto in un piatto di vetro da 35 mm e lasciare che i PMV si affacciano sul fondo per circa 10 minuti. Esaminare i PMV sotto un microscopio di contrasto a fase invertito dotato di una telecamera CCD usando la lente obiettivo 20X. </li></ol> 3. Esame del contenuto all&#39;interno dei PMV utilizzando la microscopia confocale <ol><li> Per eseguire la trasfezione nei BMSCs, diluire 2 μg di DNA plasmidico supercoiled e 6 μl di reagente di transazione cationico ( ad esempio, PolyJet) in 50 μL di DMEM senza siero. Vortex per mescolare bene e spin brevemente per raccogliere tutto il liquido dai lati del tubo. </li><li> Aggiungere la soluzione diluita (dal punto 3.1) a goccia in soluzione DNA diluita, vortex forte per 1 min, spin brevemente e incubare a temperatura ambiente per 10 min. </li><li> Sostituire il vecchio mezzo sui BMSCs, che sono stati seminati a confluenza di circa il 30% durante la notte, con 2 ml di terreno di coltura fresco e aggiungere DNUna miscela di trasfezione in goccia. </li><li> Sostituire con 2 ml di mezzo fresco dopo 12 ore di trasfezione. </li><li> Per tracciare proteine ​​citoplasmaticamente localizzate, trasfettano le cellule con il plasmide contenente una cassetta di espressione EGFP (pEGFP-N1), come descritto in precedenza. Raccogliere le cellule dalla digestione della tripsina 48 h dopo la trasfezione per la produzione di PMV, come descritto in precedenza. </li><li> Per tracciare i mitocondri, macchia le cellule con colorante mitocondriale (1 μM, MitoTracker) in terreno di coltura fresco per 30 minuti a 37 ° C. </li><li> Per rilevare il potenziale di membrana dei mitocondri, macchiare le cellule con il colorante cianina JC-1 (5,5 &#39;, 6,6&#39;-tetracloro-1,1&#39;, 3,3&#39;-tetraetilbenzimidazolilcarbocyanin ioduro) (10 μg / ML) in terreno di coltura fresco per 30 minuti a 37 ° C. <ol><li> Lavare le cellule con 0,5 mL di PBS tre volte e raccogliere le cellule per la digestione della tripsina per la produzione di PMV, come descritto sopra. </li><li> Caricare 150 μL della raccolta medIn un piatto di vetro da 35 mm e lasciare che i PMV si affacciano sul fondo per circa 10 minuti. Esaminare i PMV sotto un microscopio confocale utilizzando l&#39;obiettivo obiettivo olio 100X. </li></ol></li><li> Per rilevare EGFP o il colorante mitocondriale, accendere il laser a 488 nm e raccogliere il segnale a 505-530 nm. Per rilevare JC-1, attivare i laser a 488 nm e 543 nm e raccogliere segnali a 505-530 nm e 560-615 nm. Impostare il valore del pinhole intorno a 1,4. </li></ol> 4. Preparazione di PMV concentrati mediante centrifugazione <ol><li> Raccogliere le cellule dalla digestione della tripsina e generare PMVs, come sopra descritto, in 0,5 ml di terreno di coltura. </li><li> Spin i PMV a 1.200 xg in una centrifuga a benchtop per 5 minuti a temperatura ambiente. Aspirare con cautela il surnatante e risospendere il pellet in 100 μl di terreno di coltura con delicatissimi vortici. </li><li> Caricare 50 μL di PMV in un piatto di vetro da 35 mm e lasciarli lasciarli a temperatura ambiente per circa 10 minuti. Esaminare i PMVSotto un microscopio confocale con l&#39;obiettivo obiettivo olio 40X. </li><li> Aggiungere la serie di soluzione di polietilenimino diluito (PEI) alla coltura BMSC per 1 h e verificare i segni di citotossicità. NOTA: qui, il PEI a 2 μg / mL è stato scelto in quanto nessun segno di tossicità è stato rilevato nei BMSCs. </li><li> Raccogliere le cellule dalla digestione della tripsina e aggiungere PEI a 2 μg / mL per 1 h per caricare la membrana cellulare come mezzo per prevenire l&#39;aggregazione. Generare PMVs, come sopra descritto, in 0,5 mL di terreno di coltura. Concentrare i PMV e esaminarli sotto un microscopio confocale, come sopra descritto. </li></ol> 5. Iniezione dei PMV nel muscolo Gastrocnemius <ol><li> Per macchiare la membrana aggiungere colorante CM-DiI (clorometil-di-alchil-indocarbocyanina) (10 μM) in 1 ml di terreno di coltura fresco ai BMSC per 30 min. </li><li> Raccogliere le cellule (circa 5 x 10 5 ) dalla digestione della tripsina e riposarle in 0,5 mL di terreno di coltura. Aggiungere PEI (2 μg / mL) per 1h. Generare e concentrare i PMV in 100 μl di terreno di coltura, come sopra descritto. </li><li> Anestetizza un topo BALB / c iniettando il barbital di sodio (10 mg / kg) dopo 12 ore di digiuno. </li><li> Pulire l&#39;esterno del muscolo gastrocnemius con il 75% di etanolo. Iniettare lentamente i PMV (100 μL) nel muscolo gastrocnemius usando una siringa per insulina da 30 g. </li><li> Dopo aver somministrato l&#39;anestesia, posizionare una garza bagnata sugli occhi per tutta la durata dell&#39;esperimento e riscaldare il mouse con una luce incandescente fino a quando si sveglia. Lasciate il mouse solo in una gabbia di ventilazione individuale. </li><li> Per raccogliere il muscolo gastrocnemius dopo 12 ore, uccidere il mouse dalla dislocazione cervicale. </li><li> Spruzzare il 75% di etanolo sopra il muscolo gastrocnemius, aprire la pelle con le forbici e tagliare l&#39;intero muscolo gastrocnemius a entrambe le estremità. </li><li> Sciacquare il muscolo con PBS e esaminarlo sotto un microscopio a fluorescenza usando la lente obiettivo 20X. </li><li> Tagliare il muscolo con unLama di rasoio tagliente per rimuovere le parti senza fluorescenza. Tagliare le parti con una forte fluorescenza rossa in circa 9 mm di 3 cubetti. </li><li> Incorporare ogni cubo in ottima temperatura di taglio (OCT), immergerlo in azoto liquido per 5 minuti e conservarlo in un congelatore da -20 ° C fino all&#39;uso. </li><li> Tagliare le sezioni congelate in pezzi di 20 μm utilizzando un criostato e aderire ogni sezione ad una lastra di vetro. Sciacquare la sezione una volta con PBS. </li><li> Disegnare un cerchio intorno alla sezione con una penna a cerchio e aggiungere 100 μL di DAPI (1 μg / mL). Aspirare la soluzione DAPI dopo 10 minuti di incubazione a temperatura ambiente al buio e lavare tre volte con PBS. </li><li> Far cadere l&#39;olio sopra il campione, coprirlo con una scotta di vetro e sigillare la scivola con unghie. Esaminare la sezione sotto un microscopio confocale utilizzando l&#39;obiettivo obiettivo olio 100X. </li><li> Per rilevare CM-DiI, accendere il laser a 543 nm e raccogliere il segnale a 560-615 nm. Per rilevare DAPI, accendere il 405Nm laser e raccogliere il segnale a 420-480 nm. Impostare il valore del pinhole a circa 1,4. </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno niente da rivelare.

La terapia sostitutiva del citoplasma, come proposta in questo manoscritto, presenta vantaggi unici rispetto ad altri approcci riportati come la terapia genica, molecolare e cellulare. I PMV generati dalle BMSC incapsulano non solo i prodotti dei geni della staminalità, ma anche gli organelli cellulari intatti, che sono essenziali per rimediare ai fenotipi di invecchiamento associati alla senescenza. Quando il citoplasma giovane viene consegnato alle cellule senescenti, i meccanismi di malfunzionamento possono ottenere u...

<html> Una grande quantità di sforzi è stata dedicata alla creazione di approcci per terapie di sostituzione di geni, enzimi e cellule. Ciò ha portato a grandi scoperte e persino alle applicazioni cliniche 1 , 2 , 3 . Recentemente, una controversa terapia sostitutiva di mitocondri basata sulla tecnologia di trasferimento del nucleo è stata applicata alla fecondazione in vitro per le donne di età avanzata o con una mutazione letale del DNA mitocondriale 4 . I difetti riscontrati nelle malattie legate all&#39;età, tra cui l&#39;aterosclerosi, il diabete di tipo 2, la malattia di Alzheimer e il cancro, sono di solito multi-faceted. È stato documentato che l&#39;accumulo di gocce lipidiche; La deposizione di proteine ​​amiloide; La conservazione delle proteine ​​dispiegate nel reticolo endoplasmatico; E proteasomi difettosi, autofaggo e mitocondri contribuiscono allo sviluppo o all&#39;aggravamento di queste malattie&quot;Xref&quot;&gt; 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 . Attualmente, non esiste un meccanismo disponibile per la rimozione diretta del malfunzionamento nel citosolo e negli organi, che provoca senescenza e fenotipi di invecchiamento. Abbiamo già riferito sulla generazione di vescicole a membrana plasmatica (PMV) attraverso l&#39;estrusione meccanica delle cellule dei mammiferi 12 . Ad eccezione del nucleo, i componenti della membrana o del citosolo, tra cui proteine ​​e RNA, nonché gli organelli, come i mitocondri, sono stati trovati nei PMV. In sostanza, un PMV può essere considerato come una cellula enucleata in miniatura. Ancora più importante, la fusione di PMV con cellule Rho0 carenti di mitocondri ha ripristinato l&#39;attività mitotica in normali condizioni di coltura. Questa è la prima relazione su establiUn approccio potenzialmente efficiente per la terapia sostitutiva del citoplasma. Le cellule staminali mesenchimali del midollo osseo (BMSC) sono cellule progenitrici multipotenti generate genericamente dal midollo osseo e sono facilmente espandibili nella coltura. I marcatori delle cellule staminali embrionali Oct4, Nanog e SOX2 sono stati rilevati a bassi livelli nei MSC 13 . L&#39;attività della telomerasi è anche misurabile. Inoltre, l&#39;assenza di molecole coestimolanti e molecole di Classe II dell&#39;antigene delle cellule umane (HLA), nonché la bassa espressione di HLA di classe I su MSC, li rendono le cellule ideali per l&#39;uso allogeneico o &quot;off-the-shelf&quot; Sia la medicina rigenerativa che le applicazioni immunomodulatorie 14 . Qui descriviamo come preparare PMV da BMSC del mouse attraverso l&#39;estrusione attraverso una membrana di policarbonato con pori da 3 μm, determinare l&#39;esistenza di mitocondri e esaminare la manutenzione del potenziale delle membrane nei PMV utilizzando confocAl microscopio, preparare PMV concentrati ma non aggregati per centrifugazione e effettuare l&#39;iniezione in vivo di PMV nel muscolo gastrocnemico dei topi.

<table><tbody><tr><td>Membrane IsoporeTM</td><td>Millipore</td><td>TSTP04700</td><td>3 mm pore</td></tr><tr><td>Unità filtrante monouso</td><td>Xinya, Shanghai, Cina</td> Siringa da <td>insulina in polipropilene per uso medico</td><td>da 25 mm</td></tr><tr><td></td><td>BD</td><td>328446</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>pN1-EGFP</td><td>Clontech</td><td>&nbsp; 6085-1</td><td></td></tr><tr><td>Sonde molecolari</td><td>MitoTracker</td><td>M7514</td><td>Verde FM, 1 &mu; M</td></tr><tr><td>JC-1</td><td>Beyotime, Haimen, Cina</td><td>C2006</td><td>10 mg/mL</td></tr><tr><td>CM-DiI</td><td>Beyotime, Haimen, Cina</td><td>C1036</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>PEI</td><td>Sigma</td><td>P3143</td><td>Mn = 75.000</td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza</td><td>Nikon</td><td>Eclipse TE 2000</td><td>Con fotocamera CCD</td></tr><tr><td>Microscopio Confocol</td><td>Carl Zeiss</td><td>LSM 510 Meta</td><td></td></tr><tr><td>PolyJet</td><td>SigaGen</td><td>SL100688</td><td>Per la trasfezione cellulare</td></tr></tbody></table>

preparazione di vescicole a membrana plasmatica da cellule staminali mesenchimali del midollo osseo per potenziali terapie di sostituzione del citoplasma

Preparation of Plasma Membrane Vesicles from Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells for Potential Cytoplasm Replacement Therapy

Abbiamo già riferito sulla generazione di vescicole a membrana plasmatica (PMV) attraverso l&#39;estrusione meccanica delle cellule dei mammiferi. La fusione di PMV con cellule Rho0 carenti di mitocondriali ha ripristinato l&#39;attività mitotica in condizioni normali di coltura. L&#39;aterosclerosi, il diabete di tipo 2, la malattia di Alzheimer e il cancro sono malattie legate all&#39;età che sono state riportate per essere associate a più difetti meccanici e funzionali nel citosolo e negli organelli di una varietà di tipi di cellule. Le cellule staminali mesenchimali del midollo osseo (BMSC) rappresentano una popolazione cellulare unica dal midollo osseo che possiede capacità di auto-rinnovamento pur mantenendo la loro multipotenza. L&#39;integrazione di cellule di senescenza con giovane citoplasma da BMSC autologhe attraverso la fusione di PMV fornisce un approccio promettente per migliorare o addirittura invertire i fenotipi associati all&#39;età. Questo protocollo descrive come preparare PMV da BMSC tramite estrusione attraverso una membrana policarbonato con 3Determinare l&#39;esistenza di mitocondri e esaminare la conservazione del potenziale delle membrane all&#39;interno di PMV usando un microscopio confocale, concentrare PMV mediante centrifugazione e effettuare l&#39;iniezione in vivo di PMV nel muscolo gastrocnemico dei topi.

La chiave per una buona preparazione dei PMV dipende fortemente dal corretto montaggio dell&#39;unità filtrante ( Figura 1 ), che può essere testato spingendo 1 mL di PBS attraverso la membrana. Se si verifica una perdita, riassemblare l&#39;unità filtrante e provare nuovamente. Tuttavia, la perdita può essere verificata solo in modo affidabile quando le cellule vengono spinte attraverso la membrana. Se solo pochi PMV vengono rilevati sotto un normale microscopio utilizz...

Le malattie legate all&#39;età sono associate a più difetti nei componenti del citoplasma. Qui presentiamo un protocollo per preparare vescicole a membrana plasmatica dalle cellule staminali mesenchimali del midollo osseo. Questa tecnica potrebbe essere potenzialmente utilizzata come mezzo di terapia sostitutiva per citoplasma per migliorare o addirittura invertire i fenotipi associati all&#39;età.

Preparazione di vescicole a membrana plasmatica da cellule staminali mesenchimali del midollo osseo per potenziali terapie di sostituzione del citoplasma

We have previously reported on the generation of plasma membrane vesicles (PMVs) through the mechanical extrusion of mammalian cells. The fusion of PMVs ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di somministrare una nuova terapia di sostituzione del citoplasma al muscolo gastrocnemio di topi utilizzando vescicole della membrana plasmatica, o PMV, derivate da cellule staminali mesenchimali del midollo osseo murino o BMSC. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande riguardo al fatto che il rifornimento di cellule con citoplasma giovane proveniente da altre BMSC tramite fusione di PMV possa migliorare o addirittura invertire i fenotipi associati all'invecchiamento. Il vantaggio principale di questa tecnica è che l'incapsulamento del citosol delle BMSC da parte delle PMV può essere indotto istantaneamente mediante estrusione meccanica.Quando si dimostra questo metodo, è fondamentale, poiché le fasi di estrusione e costruzione sono difficili da apprendere semplicemente provando, arrivare effettivamente a padroneggiarlo. Per generare le PMV, coltivare innanzitutto le cellule BMSC di topo in mezzo di coltura DMEM completo in un pozzetto di una piastra a sei pozzetti, in un incubatore umidificato a 37 gradi Celsius e 5% di anidride carbonica. Quando le cellule hanno raggiunto una confluenza del 90%, risciacquare il pozzet

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Una tecnica sperimentale per il trattamento dei difetti osteocondrali nel ginocchio del coniglio è descritto. L'impianto di cellule staminali mesenchimali allogeniche in difetti osteocondrali fornisce una promettente sviluppo nel campo dell'ingegneria dei tessuti. La preparazione di...

Il trattamento dei difetti osteocondrali del ginocchio congiunta del Coniglio con impianto di cellule staminali mesenchimali allogeniche in coaguli di fibrina

Questo video mostra un metodo per generare vescicole di membrana plasmatica da cellule staminali del midollo osseo facendole passare rapidamente attraverso un filtro a membrana. Questi PMV mostrano un potenziale per la terapia sostitutiva del citoplasma.

Generazione di vescicole della membrana plasmatica da cellule staminali del midollo osseo

Le cellule staminali mesenchimali sono solitamente ottenute dal midollo osseo e richiedono una coltura di espansione. Quando i campioni coagulano prima dell'elaborazione, è possibile applicare un protocollo che utilizza il farmaco trombolitico (enzimatico) urochinasi per degradare il coagulo. In questo modo, le cellule vengono rilasciate e disponibili per la coltura di espansione. Questo protocollo fornisce un'alternativa rapida ed economica al ricampionamento.

Un metodo enzimatico per salvare cellule staminali mesenchimali da coagulata midollo osseo da analizzare

Qui descriviamo un protocollo ottimizzato e altamente riproducibile per isolare le cellule progenitrici mesodermiche (MPC) dal midollo osseo umano (hBM). Le MPC sono state caratterizzate mediante citometria a flusso ed espressione di nestina. Hanno dimostrato la capacità di dare origine a colture cellulari simili alle MSC in crescita esponenziale, pur mantenendo il loro potenziale angiogenico.

Isolare le cellule progenitrici Mesangiogenic (PPM) da midollo osseo umano

Coltura umane cellule mesenchimali stromali (hMSCs) con siero autologo, riduce i rischi di rigetto di materiale xenogenico e altri effetti negativi. Esso permette inoltre il recupero di un sottoinsieme di progenitori mesodermici, che può trasportare hMSCs freschi. Incorporare hMSCs in un coagulo di fibrina autologa consente una facile maneggevolezza ed efficace impianto chirurgico.

Mesenchimali stromali coltura cellulare e la consegna in autologhi Condizioni: un approccio intelligente per applicazioni ortopediche

Vi proponiamo un protocollo di espansione delle cellule su microcarriers macroporosa e loro uso come sistema di consegna in un bioreattore di perfusione per inizializzare una matrice di tessuto decellularizzati. Abbiamo anche diverse tecniche per determinare la proliferazione delle cellule e l'attuabilità delle cellule coltivate su microcarriers. Inoltre, dimostriamo la funzionalità delle cellule dopo le culture di bioreattore.

Ricombinante collagene Peptide Microcarriers per l'espansione delle cellule e loro potenziale utilizzo come sistema di consegna di cella in un bioreattore modello

Il presente protocollo descrive la centrifugazione differenziale per isolare e caratterizzare EV rappresentative (esosomi e microvescicole) da MSC umane in coltura. Ulteriori applicazioni di questi veicoli elettrici sono spiegate anche in questo articolo.

Isolamento, caratterizzazione e applicazione terapeutica di vescicole extracellulari da cellule staminali mesenchimali umane in coltura

Il presente protocollo descrive un metodo economico per purificare, espandere e caratterizzare cellule staminali mesenchimali (BMSC) altamente omogenee del midollo osseo dai topi. Questo approccio facilita l'acquisizione di grandi quantità di BMSC con un elevato potenziale di proliferazione e differenziazione, supportando i modelli murini e facendo progredire la ricerca preclinica.

Fenotipizzazione basata sulla purificazione, espansione e citometria a flusso di cellule staminali mesenchimali del midollo osseo derivate dal topo

Questo protocollo mira a introdurre un metodo per produrre e purificare biomimetici extracellulari derivati dalle vescicole staminali mesenchimali (MSC) per la terapia genica. La nanovescicola è confinata da bilayer lipidici derivati dalla MSC e racchiude gli AAV ricombinanti che portano il gene di interesse nel lume. Questa nanovescicola offre un vettore potenziato per la trasmissione in vivo dei geni.

Sviluppo di nanovescicole mesenchimali avvolte nella membrana delle cellule staminali per un migliorato apporto genico

Le cellule staminali mesenchimali (MSC) hanno un potenziale di differenziazione verso la linea osteoblastica quando vengono stimolate con fattori solubili o biomateriali specifici. Questo lavoro presenta una nuova opzione per la somministrazione di MSC dalla membrana amniotica umana (AM-hMSCs) che impiega la matrice ossea bovina Nukbone (NKB) come scaffold.

Isolamento di cellule staminali mesenchimali umane e la loro coltivazione in poroso Bone Matrix

Scopri come preparare vescicole a membrana plasmatica da cellule staminali mesenchimali del midollo osseo per terapie di sostituzione del citoplasma. Questo metodo permette di studiare il potenziale rigenerativo nel trattamento delle patologie legate all'invecchiamento.

Preparazione di vescicole a membrana plasmatica da cellule staminali mesenchimali del midollo osseo per potenziali terapie di sostituzione del citoplasma (Video) | JoVE Journal

Preparazione di vescicole a membrana plasmatica da cellule staminali mesenchimali del midollo osseo per potenziali terapie di sostituzione del citoplasma

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