Uso di Immunolabeling per analizzare i microtubuli stabili, dinamici e nascenti nell'embrione di pesce zebra

L'obiettivo generale di queste procedure di marcatura è quello di visualizzare e quantificare i microtubuli stabili, dinamici e nascenti nell'embrione di zebrafish in via di sviluppo. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della neurobiologia dello sviluppo, come ad esempio il modo in cui i microtubuli contribuiscono all'instaurazione della polarità cellulare. Il vantaggio principale di questa tecnica è che ottimizza il rilevamento e la quantificazione di popolazioni distinte di microtubuli in situ.

In generale, gli individui che non conoscono questo metodo avranno difficoltà a causa delle difficoltà nel mantenere l'integrità dei microtubuli. Dopo aver declorato gli embrioni di zebrafish in stadi secondo il protocollo di testo, trasferirli in provette da centrifuga da 1,5 millilitri, rimuovendo quanto più terreno possibile. Aggiungere un millilitro di PFA al 4% nel tampone di assemblaggio dei microtubuli o MAB, per fissare gli embrioni a 28,5 gradi Celsius per cinque minuti.