Saggi per caratterizzare nuovi endoteliale regolatori coinvolti nella risposta infiammatoria di screening
15 settembre 2017
Endotelio vascolare controlla strettamente reclutamento leucocitario. Diapedesi inadeguata contribuiscono a malattie infiammatorie umane. Di conseguenza, alla ricerca di nuovi elementi regolatori dell'attivazione endoteliale è necessaria ideare terapie migliori per disordini infiammatori. Qui, descriviamo una metodologia globale per caratterizzare nuovi regolatori endoteliale che possono modificare del leucocita traffico durante l'infiammazione.
L'obiettivo generale di questo test di screening è quello di caratterizzare nuovi regolatori endoteliali coinvolti nella risposta infiammatoria di interesse per la progettazione di nuove strategie terapeutiche contro i disturbi infiammatori. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della patologia, come la definizione di nuovi farmaci mirati all'endotelio in grado di attenuare le malattie correlate all'infiammazione. Il vantaggio principale di questo protocollo endoteliale è che descrive la tecnologia di dosaggio che stabilisce le basi per esplorare nuovi meccanismi coinvolti nella regolazione della risposta infiammatoria. A dimostrare questa metodologia saranno Maria Angeles Higueras, post-doc del nostro laboratorio e Sandra Herranz, un tecnico del nostro laboratorio. Per iniziare, coltivare le cellule MLEC-04 in terreno DMEM F12 completo integrato con il 10% di FBS e Pen-Strep.Incubare le cellule in un incubatore biologico a 37
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Panoramica
Questo studio si concentra sul ruolo dell'endotelio vascolare nella regolazione del reclutamento dei leucociti durante l'infiammazione. Si sottolinea l'importanza dell'identificazione di nuovi elementi regolatori al fine di migliorare le terapie per le malattie infiammatorie.
Componenti Chiave dello Studio
Area della Scienza
- Biologia vascolare
- Infiammazione
- Trasporto dei leucociti
Sfondo
- L'endotelio vascolare è cruciale per il controllo del reclutamento dei leucociti.
- Un'extravasazione inadeguata dei leucociti è associata a diverse malattie infiammatorie.
- Comprendere l'attivazione endoteliale può portare a strategie terapeutiche migliori.
- Identificare nuovi elementi regolatori è essenziale per migliorare le opzioni di trattamento.
Scopo dello studio
- Caratterizzare nuovi regolatori endoteliali.
- Studiare i loro effetti sul traffico dei leucociti durante l'infiammazione.
- Contribuire allo sviluppo di terapie migliorate per i disturbi infiammatori.
Metodi Utilizzati
- Metodologia completa per la caratterizzazione dei regolatori endoteliali.
- Approcci sperimentali per valutare il traffico dei leucociti.
- Analisi dei meccanismi di attivazione endoteliale.
- Valutazione di potenziali bersagli terapeutici.
Risultati principali
- Identificazione di nuovi elementi regolatori nelle cellule endoteliali.
- Dimostrazione del loro impatto sull'extravasazione dei leucociti.
- Conoscenze sui meccanismi di attivazione endoteliale.
- Possibili implicazioni per lo sviluppo di terapie nelle malattie infiammatorie.
Conclusioni
- Regolatori endoteliali innovativi svolgono un ruolo significativo nel traffico dei leucociti.
- Comprendere questi regolatori può orientare le strategie terapeutiche.
- Sono necessarie ulteriori ricerche per esplorarne il pieno potenziale nel trattamento dell'infiammazione.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Progetto
Caratterizzare in modo efficiente nuovi regolatori endoteliali è fondamentale per ridurre i rischi nella fase iniziale della scoperta nei portafogli di malattie infiammatorie. Saggi di screening quantitativi rivolti all'attivazione endoteliale e al reclutamento dei leucociti forniscono un'elevata affidabilità predittiva per la validazione degli obiettivi e la selezione meccanicistica. Questi approcci consentono ai team biofarmaceutici di prioritizzare bersagli vascolari con potenziale traslazionale per terapie nei disturbi infiammatori.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione del Target
- Permette l'analisi di vie endoteliali centrali nella regolazione dell'infiammazione.
- Consente la validazione funzionale di regolatori candidati coinvolti nel reclutamento dei leucociti.
- Facilita la riduzione del rischio meccanicistico quantificando l'espressione di citochine, chemochine e molecole di adesione.
- Fornisce dati per una valutazione predittiva affidabile nella selezione e nel triage dei bersagli.
Sviluppo di screening e saggi
- Stabilisce saggi standardizzati e quantitativi mediante RT-qPCR, western blot, citometria a flusso e saggi di adesione.
- Fornisce letture riproducibili dell'attivazione endoteliale e dell'adesione dei leucociti.
- Permette lo screening su larga scala di nuovi modulatori che influenzano il segnale infiammatorio.
- Prepara sistemi biologici validati per la valutazione di composti successivi.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Allinea l'attivazione endoteliale in vitro con meccanismi infiammatori rilevanti per la malattia.
- Supporta la continuità dalla scoperta alla validazione preclinica di bersagli vascolari.
- Fornisce indicazioni per decisioni di avanzamento ponderate sul rischio relative a strategie antinfiammatorie.
- Offre approfondimenti meccanicistici per lo sviluppo di biomarcatori traslazionali.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Questi saggi di screening collocano la caratterizzazione dei regolatori endoteliali all'interfaccia tra la fase iniziale della scoperta e la ricerca preclinica, favorendo l'identificazione di composti promettenti e la continuità traslazionale nei percorsi di ricerca sulle malattie infiammatorie.
- Biologia della scoperta: Quantifica la risposta endoteliale a stimoli infiammatori, chiarificando il coinvolgimento delle vie e la riduzione del rischio biologico.
- Screening: Fornisce saggi standardizzati e riproducibili per valutare regolatori candidati e composti.
- Analisi: Genera output quantitativi per l'espressione di citochine, chemochine e molecole di adesione al fine di confrontare condizioni sperimentali.
- Ricerca traslazionale: Collega i risultati ottenuti in vitro a meccanismi rilevanti per le malattie e strategie di biomarcatori.
- Riutilizzo aziendale: Offre una piattaforma riutilizzabile per sforzi continui di scoperta e validazione di bersagli vascolari.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Aumenta la fiducia predittiva e riduce l'ambiguità meccanicistica nella validazione del target.
- Valore operativo: Fornisce flussi di lavoro standardizzati, scalabili e riproducibili per lo screening endoteliale.
- Valore strategico: Migliora le decisioni di avanzamento o interruzione e l'efficienza del capitale concentrandosi su target vascolari validati.
- Impatto sul portafoglio: Consente una priorizzazione e un avanzamento dei candidati anti-infiammatori adeguati al rischio.
Considerazioni sull'implementazione
- Richiede competenze specifiche in biologia endoteliale e nelle vie di segnalazione infiammatoria.
- Necessita dell'accesso a infrastrutture per RT-qPCR, western blot, citometria a flusso e saggi di adesione cellulare.
- Richiede una standardizzazione tra gruppi di lavoro per garantire la riproducibilità dei saggi e la confrontabilità dei dati.
- Potrebbe richiedere adattamenti per diversi modelli di cellule endoteliali o contesti infiammatori.
- Dipende da un'analisi quantitativa rigorosa per un'interpretazione affidabile dei risultati dello screening.
Domande frequenti sul biopharma
Chapters in this video
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Title
0:58
Endothelial Cell Culture and Tissue Culture Conditions
11:52
Conclusion
9:59
Results: Activation Parameters of LPS-stimulated Endothelial Cells and Influence on Leukocyte Behavior
2:42
Evaluate Endothelial Factor Released on Leukocyte Activation by Adhesion Assays
4:12
Leukocyte Adhesion Assay
7:42
Test Endothelial Activation by Leukocyte Endothelium Co-adhesion Assay
