Name: Infusione sottocutanea di neurotrofina 4 usando le pompe osmotiche o liniezione muscolare diretta migliora i muscoli del laringe del ratto di invecchiamento (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 50 s
Description: Scopri come somministrare Neurotrofina 4 per indurre il rimodellamento dei muscoli laringei nei ratti anziani. Questo metodo utilizza pompe osmotiche e iniezioni dirette per migliorare la funzione vocale.

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Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni dell&#39;Istituto Nazionale sulla Sordità e altri disturbi della comunicazione (R21DC010806 per CAM e JCS e R01DC011285 a CAM).

Usa i topi maschi Fischer 344-Brown Norvegia a 6 e 30 mesi di età per questo protocollo. I ratti sono stati ottenuti dall&#39;Istituto Nazionale di Colonia di Roditore di Aging. Abbiamo utilizzato i ratti per questo studio perché la struttura della laringa del ratto è simile a quella dell&#39;uomo, funzionalmente funzionale alla protezione delle vie aeree e alle vocalizzazioni specifiche per specie. Questo studio è stato eseguito in conformità con la politica PHS sulla cura umana e l&#39;uso di animali da laboratorio, La Guida NIH per la cura e l&#39;uso degli animali da laboratorio e la legge sulla protezione degli animali (7 USC et seq.); Il protocollo sull&#39;utilizzo degli animali è stato approvato dal Comitato Istituzionale per la cura e l&#39;uso degli animali (IACUC) dell&#39;Università del Kentucky. 1. Anestesia dei ratti <ol><li> Preparare l&#39;anestetico mescolando la cloridrato di ketamine (anestetico dissociativo) e cloridrato xilazine (sedativo e analgesico) in soluzione salina tamponata. Le concentrazioni di ketamina e xilazina nella soluzione finale sono 100 mg / 8 mg per kgPeso corporeo rispettivamente. </li><li> Iniettare le anestetiche nel ratto mediante somministrazione intraperitoneale usando una siringa con un ago da 25 G. </li><li> Determinare che il ratto è sufficientemente anestetizzato pinzando la punta o il piede con pinze. Se il topo non reagisce al pizzico, allora la chirurgia può iniziare. Se il topo reagisce al pizzico della punta con riflessi o contrazioni muscolari, attendere 1-2 minuti e ripetere il test di pizzicotto. Se il ratto reagisce di nuovo, sostituire il ratto con una nuova animale e ripetere la procedura a partire dal punto 1.2. </li><li> Applicare unguento oculare agli occhi del ratto, dopo che il ratto è immobile, per evitare che le cornee si asciugano. </li></ol> 2. Impianto osmotico della pompa <ol><li> Posizionare il ventrale del ratto sulla zona chirurgica asettica. Amministrare meloxicam come farmaco preanestetico. Amministrare intraperitonealmente ad un dosaggio di 1-4 mg / kg di peso corporeo usando una siringa con un ago da 25 G. </li><li> Utilizzare le taglierine per rimuovere un approssimaCon uno spessore di 1 &quot;x 1&quot; di pelliccia dalla parte posteriore del collo e circa 1 &quot;caudale di spalla tra le spalle. Rasare il più vicino possibile alla pelle. </li><li> Bagnare la schiena e il collo con l&#39;etanolo disinfettante (70%). </li><li> Dopo la rasatura, strofinare l&#39;aspetto dorsale del collo con 3 scrubs in successione di alcool iodio-alcool finitura con alcool. </li><li> Mantenere la temperatura corporea del ratto inserendola su un pannello di riscaldamento impostato a 34 ° C. </li><li> Riempire pompe osmotiche preparate asetticamente con 50 μL di NTF4 o salina per il trattamento sistemico di NTF4 ( Figura 1 ). <ol><li> Utilizzare un bisturi per realizzare un&#39;incisione orizzontale di circa 2 cm di larghezza attraverso la pelle, solo cranica nello spazio tra la scapola. Sollevare il bordo posteriore dell&#39;incisione con le pinze con una mano mentre inserisci la punta degli emostatici e spingete delicatamente alla parte posteriore all&#39;incisione. </li><li> Dopo che la punta degli hemostats è di circa 2 cm cRaniale all&#39;incisione, aprire le maniglie sugli emostatici, espandendo le punte per formare una &quot;tasca&quot; vuota sottocutanea al sito di incisione. Questo sarà il sito di posizionamento per la pompa. </li></ol></li><li> Orientare il portale di erogazione della pompa prima sull&#39;inserimento per ridurre al minimo l&#39;interazione del NTF4 e la guarigione del sito di incisione della tasca. </li><li> Consegnare 50 μL di soluzione salina NTF4 per 7-14 giorni. Il gruppo di 7 giorni ha ricevuto 6,72 mg / die di NTF4 per una dose totale di 47,04 mg. Il gruppo di 14 giorni ha ricevuto 6,72 mg / die per una dose totale di 94,08 mg di NTF4 25 . </li><li> Usare filo di sutura da 5-0 nylon, hemostati e pinze per chiudere l&#39;incisione fatta per il posizionamento della pompa. </li><li> Osservare i ratti per almeno 30 minuti mentre recuperano da anestesia. I criteri per il completamento del monitoraggio includono l&#39;animale che diventa attivo, muove in giro per la gabbia, l&#39;acqua potabile, e inizia altre attività normali come la cura. </li><li> Monitorare gli animali quotidianamentePer la prima settimana osservando la guarigione del sito chirurgico, il consumo normale dell&#39;alimentazione e dell&#39;acqua e il passaggio di urine / feci e qualsiasi segno abnormale comportamentale di stress, dolore o altre complicazioni postoperatorie. </li><li> Se il ratto sembra essere in dolore o disturbo, fornire al ratto una iniezione sottocutanea di carprofen da 5 mg / kg ogni 24 ore per un massimo di 5 giorni per alleviare il dolore. </li><li> Se sembra che ci sia un&#39;infezione, consultare un veterinario per far sì che la ferita si guari correttamente. </li><li> A seconda di quale gruppo sperimentale il ratto è dentro, rimuove la sutura in nylon da 5-0 7-10 giorni dopo la chirurgia per evitare irritazioni dal filo. </li></ol> 3. Anestesia di ratti per iniezione diretta <ol><li> Disattiva il cibo dai ratti la notte prima della procedura. Ciò assicura che non ci sia cibo per bloccare l&#39;endoscopio o l&#39;ago di iniezione. </li><li> Pesare i ratti e preparare acepromazina 1-2 mg / kg di peso corporeo. Iniettare in modo intramuscolare (la posizione IM è laSinistra il muscolo tiroarytenoide). </li><li> Posizionare il ratto nella scatola di induzione. Indurre l&#39;anestesia nella scatola di induzione con 5% isoflurano e 1 LO 2 . </li><li> Spostare il ratto in un cono a naso con 2% isoflurano e 600 ml O 2 . </li><li> Determinare che il ratto è sufficientemente anestetizzato pinzando la punta o il piede con pinze. Se il topo non reagisce al pizzico, il protocollo di iniezione può iniziare. Se il topo reagisce al pizzico della punta con riflessi o contrazioni muscolari, attendere 1-2 minuti e ripetere il test di pizzicotto. Se il ratto reagisce di nuovo, sostituire il ratto con una nuova animale e ripetere la procedura a partire dal punto 3.4. </li></ol> 4. Iniezione diretta e visualizzazione <ol><li> Posizionare i dosaggi di 50 μl preparati asetticamente contenenti NTF4 o saline in un bagno di H 2 O impostati a 25 ° C per 30 minuti prima dell&#39;iniezione. </li><li> Posizionare il ratto in posizione supina e reclinata su una piattaforma di plexiglass ( figura 2 ). SusPend il ratto nella posizione reclinata dai loro incisivi frontali superiore attraverso un filo di guida strinse sulla parte superiore della piattaforma. </li><li> Fissare una siringa da 50 μm, 30 gauge, da 100 μL ad un endoscopio sinusale da 1,9 mm, 30 ° ( figura 3 ). NOTA: L&#39;assieme della siringa è collegato tramite un jig che tiene saldamente la cannula alla parete esterna dell&#39;endoscopio. L&#39;endoscopio consente la visualizzazione delle pieghe vocali e la guida della siringa intraorale. La posizione della punta della cannula viene regolata prima di ogni animale per assicurare che la punta sia completamente visibile attraverso la vista endoscopica ( Figura 4 ). </li><li> Utilizzare un paio di pinze in gomma per estendere la linguetta e spostarla lateralmente. Successivamente, inserire un speculum di plastica per mantenere la penetrazione orale. Fai speculum da un barile da 5 ml di siringa in plastica tagliato a una lunghezza di 1,5 a 2 cm, con i bordi tagliati sbiaditi e lucidati lisci. </li><li> Spegnere le luci nel vanoM e collegare una sorgente di luce alogena all&#39;endoscopio. Accendere il videoregistratore per catturare la procedura. </li><li> Immergere l&#39;estremità distale dell&#39;endoscopio in acqua calda per alcuni secondi per ridurre al minimo lo sviluppo della condensa sulla punta di vetro quando viene inserito nella bocca del ratto. </li><li> Usando feedback visivo dal monitor, guidare con cura l&#39;ago nella zona della piega vocale sinistra. </li><li> Tempo l&#39;iniezione della soluzione con la fase inspiratoria del ciclo respiratorio degli animali per accedere completamente alla piega vocale. Durante la fase inspiratoria della respirazione, la piega vocale è completamente esposta. <ol><li> Una volta che la piega vocale è completamente visibile, inserire l&#39;ago nel tireoarotenoide sinistro, trovato lateralmente al bordo bianco mediale della piega vocale. Con l&#39;ago posto, trasportare l&#39;iniettore attraverso la depressione della siringa. </li></ol></li><li> Spegnere la sorgente di luce alogena sull&#39;endoscopio e sul lettore video e tornare indietro sul roLuci om. </li><li> Rimettere il ratto alla sua gabbia di casa e mettere su un tappetino di riscaldamento. </li><li> Lasciare recuperare il ratto prima di rimuovere dal tampone di riscaldamento. Sostituire il cibo e l&#39;acqua nella gabbia. </li><li> Monitorare i ratti per 7 giorni dopo l&#39;iniezione e poi eutanizzare. Rimuovere le laringe per la criocondutturazione 24 . </li></ol> 5. Eutanizzazione dei ratti <ol><li> Anestetizzare i ratti con cloridrato di ketamina e cloridrato di xilazina (100 mg / 8 mg per kg di iniezione intraperitoneale iniettabile). </li><li> Eutanizzare da exsanguination dopo una toracotomia mediale. </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno niente da rivelare.

I muscoli della laringe sono vulnerabili agli effetti sfavorevoli dell&#39;invecchiamento. Studi precedenti hanno dimostrato variazioni nei muscoli linfari che prevedono cambiamenti nella dimensione della fibra, nel numero totale di fibre, nella capacità rigenerativa, nella dimensione e nella modifica della quantità di NMJ, oltre alle variazioni della funzione contrattile e dei cambi di isoenzima di miosina 4 , 11 , 27 ,</...

I muscoli laringei contratti rapidamente e costantemente e sono vulnerabili agli effetti negativi dell&#39;invecchiamento. Questa attività costante è pensata per contribuire a problemi vocali o disfagia osservati in persone di età superiore ai 65 anni 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 . Molti meccanismi molecolari e patofisiologici contribuiscono a questa disfunzione legata all&#39;età. Questi meccanismi possono includere il rimodellamento della mucosa laringea, l&#39;atrofia muscolare o la perdita, la mancanza di rigenerazione delle fibre muscolari o atrofia che provoca l&#39;arricciamento delle pieghe vocali e l&#39;incapacità della chiusura glottica 8 , 9 , 10 , 11 . Non esiste una sperimentata terapia medica in questo momento che può comPrevenire completamente o riabilitare questi cambiamenti legati all&#39;età in questi muscoli. La modulazione dell&#39;efficacia della trasmissione neuromuscolare può influenzare notevolmente la prestazione neuromotoria. La famiglia delle neurotrofine comprende il fattore di crescita del nervo (NGF), il fattore di crescita del nervo derivato dal cervello (BDNF), la neurotrofina 3 (NTF3) e la NTF4 12 , 13 . Le neurotrofine hanno dimostrato di modulare l&#39;efficacia sinaptica 1 , 4 . Il fattore di crescita dell&#39;epatocyte, il fattore di crescita trasformante beta e il fattore di crescita dei fibroblasti sono stati recentemente impiegati negli esseri umani per il trattamento delle cicatrici vocali 15 - 17 . NTF4 regola anche l&#39;efficacia della NMJ; I topi che mancano di NTF4 mostrano NMJ disassemblati 11 , 18 , 19 . Questi studi portano ad effetti promettenti dei trattamentiT dei disturbi muscolari linfatici e denervazione con fattori di crescita. Le terapie di iniezione diretta ai tessuti delle pieghe vocali non sono senza precedenti negli esseri umani. Ad esempio, le iniezioni locali della tossina botulinica sono attualmente utilizzate come un trattamento efficace per i disturbi neurologici che influenzano i muscoli della laringa, come la disfonia spasmodica e la paralisi nervosa laringe ricorrente bilaterale 20 , 21 . L&#39;idrogel acido ialuronico è un altro iniettabile, usato per trattare la scocciatura vocale e l&#39;insufficienza glottale 22 , 23 . La laringoscopia d&#39;iniezione può essere usata per trattare una serie di disturbi della comunicazione 24 . Questi metodi di iniezione diretta sono promettenti per migliorare la funzione vocale e deglutire nelle popolazioni che invecchiano.

<table><tbody><tr><td>Neurotrofina 4</td><td>Pepro Tech</td><td>450-04</td><td>200 ng in 50 &mu; L</td></tr><tr><td>Pompa osmotica Alzet</td><td>DURECT Corporation</td><td>2001D</td><td></td></tr><tr><td>30 gradi endoscopio</td><td>Stoltz</td><td>61029D</td><td></td></tr><tr><td>50 mm 30 calibro 100-&mu; L siringa</td><td>Hamilton</td><td>84850 e soluzione salina 201812</td><td></td></tr><tr><td>(soluzione di cloruro di sodio)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td>ketamina cloridrato</td><td>Henry Schein</td><td>56344</td><td></td></tr><tr><td>xilazina cloridrato</td><td>Henry Schein</td><td>33198</td><td></td></tr><tr><td>25 G 5/8 ago</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305901</td><td></td></tr><tr><td>1 mL siringa</td><td>Becton-Dickinson</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>unguento oftalmico</td><td>Henry Schein</td><td>8897</td><td></td></tr><tr><td>tosatrici</td><td>Oster</td><td>44-018</td><td></td></tr><tr><td>etanolo</td><td>Decon</td><td>2716</td><td></td></tr><tr><td>iodio (Betadine)</td><td>Purdue Pharma LP</td><td></td><td></td>606404</tr><tr><td>termoforo</td><td>Sunbeam</td><td>731-5</td><td></td></tr><tr><td>5-0 filo di sutura in nylon</td><td>AD Surgical</td><td>PMN-518R6</td><td></td></tr><tr><td>crile emostatico</td><td>Fine Science Tools</td><td>13005-14</td><td></td></tr><tr><td>delicata pinza per legatura di sutura</td><td>Fine Science Tools</td><td>11063-07</td><td></td></tr><tr><td>meloxicam</td><td>Henry Schein</td><td>49756</td><td></td></tr><tr><td>carprofene</td><td>Merritt Veterinary Supplies</td><td>148700</td><td></td></tr><tr><td>unguento antibiotico</td><td>Henry Schein</td><td>57110</td><td></td></tr><tr><td>acepromizina Aceproject</td><td>Henry Schein</td><td>3845</td><td></td></tr><tr><td>isoflurano Isothesia</td><td>Henry Schein</td><td>50033</td><td></td></tr><tr><td>scatola di induzione (scatola di anestesia)</td><td>Harvard Apparatus</td><td>50-0116</td><td></td></tr><tr><td>serbatoio di ossigeno compresso</td><td>Scott Gross</td><td>Piattaforma in plexiglas UN1072</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Small Parts Inc (Amazon)</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>pinze con punta in gomma</td><td>Gomma per strumenti di scienza fine</td><td>11075-00</td><td></td></tr><tr><td>gomma liquida per pinze sopra</td> la spectula in plastica <td>42518</td><td></td>di <td>Lowe</td></tr><tr><td>(siringa BD tagliata a misura)</td> Sorgente <td></td> luminosa alogena <td>Becton-Dickinson</td> 309659 <td></td></tr><tr><td>rino-laringea stroboscopio</td><td>Kay-Pentax</td><td>RLS 9100 B</td><td></td></tr><tr><td>videoregistratore</td><td>Kay-Pentax</td><td></td><td></td></tr><tr><td>saccarosio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389-500G</td><td></td></tr><tr><td>soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417-100TAB</td><td></td></tr><tr><td>criostato Mictotom HM525</td><td>Thermo Scientific</td><td>HM 525</td><td></td></tr><tr><td>Gill 1 ematossilina</td><td>VWR</td><td>10143-142</td><td></td></tr><tr><td>Shandon eosin-Y alcolico</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>6766007</td><td></td></tr><tr><td>anti-canale del sodio Nav1.5 anticorpo prodotto nel coniglio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0819</td><td></td></tr><tr><td>Texas red-X falloidina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7471</td><td></td></tr><tr><td>alfa-bungarotossina alexa fluor 488 coniugato</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B-13422</td><td></td></tr><tr><td>Anestesia per piccoli animali macchina</td><td>Smiths Medical</td><td>CDS 9000</td><td></td></tr></tbody></table>

infusione sottocutanea di neurotrofina 4 usando le pompe osmotiche o l&#39;iniezione muscolare diretta migliora i muscoli del laringe del ratto di invecchiamento

Subcutaneous Neurotrophin 4 Infusion Using Osmotic Pumps or Direct Muscular Injection Enhances Aging Rat Laryngeal Muscles

La disfunzione della laringe negli anziani è una delle principali cause di disabilità, dai disturbi vocali alla disfagia e dalla perdita di riflessi protettivi delle vie aeree. Pochi, se esistono, esistono terapie che mirano a disfunzione muscolare laringea legata all&#39;età. Le neurotrofine sono coinvolte nell&#39;innervazione muscolare e nella differenziazione delle giunzioni neuromuscolari (NMJs). Si pensa che le neurotrofine aumentino la trasmissione neuromuscolare aumentando il rilascio del neurotrasmettitore. Le giunzioni neuromuscolari (NMJ) diventano più piccole e meno abbondanti nei muscoli laringei del ratto di invecchiamento, con prove di denervazione funzionale. Abbiamo esplorato gli effetti di NTF4 per l&#39;uso clinico futuro come terapeutico per migliorare la funzione nei muscoli laringei umani di invecchiamento. Qui forniamo il protocollo dettagliato per l&#39;applicazione sistemica e l&#39;iniezione diretta di NTF4 per esaminare la capacità del muscolo laringeo ratto di invecchiare di rimodellare in risposta all&#39;applicazione NTF4. In questo metodo, i ratti ricevevano NTF4 sistematicamente via oPompa smotica o mediante iniezione diretta attraverso le pieghe vocali. I muscoli della laringe furono poi disseccati e utilizzati per l&#39;esame istologico della morfologia e della denervazione legata all&#39;età.

I ratti sono stati eutanizzati dopo 2 settimane di infusione osmotica o una settimana dopo l&#39;iniezione diretta di NTF4. Le laringe sono state raccolte, poste in cryoprotectant (30% saccarosio e 70% saline fosfato tamponato) e poi sezionate in serie in larghezza 10 μm con un criostato. L&#39;invecchiamento dei muscoli laringei è influenzato dalla somministrazione di NTF4 25 . Oltre al ratto giovane e vecchio, abbiamo confrontato il lato iniettato e non iniettat...

Qui presentiamo un protocollo per descrivere sistemicamente e direttamente l&#39;uso della neurotrofina 4 (NTF4) per rimodellare i muscoli laringei dell&#39;invecchiamento del ratto.

Infusione sottocutanea di neurotrofina 4 usando le pompe osmotiche o l&#39;iniezione muscolare diretta migliora i muscoli del laringe del ratto di invecchiamento

Laryngeal dysfunction in the elderly is a major cause of disability, from voice disorders to dysphagia and loss of airway protective reflexes. Few, if ...

L'obiettivo generale di questo protocollo è somministrare la neurotrofina 4 per indurre il rimodellamento del muscolo laringeo di ratti anziani. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali relative alla funzione del muscolo laringeo. Ad esempio, è possibile invertire l'atrofia muscolare legata all'età per migliorare la funzione vocale?Il principale vantaggio di questa tecnica è che può essere facilmente traslato in modelli umani di invecchiamento vocale. Possiamo utilizzare metodi di iniezione comunemente impiegati dagli otorinolaringoiatri negli esseri umani per somministrare le soluzioni necessarie a migliorare la funzione vocale. In generale, le persone alle prime armi con questo metodo incontreranno difficoltà a causa della delicatezza delle procedure di impianto e di iniezione.La procedura sarà dimostrata da Tanya Seward, tecnico del dipartimento di fisiologia, e da Richard Andreatta, professore associato di scienze e disturbi della comunicazione, entrambi dell'Università del Kentucky. Per impiantare la pompa, posizionare innanzitutto il ratto in posizione ventrale in un'area chirurgica asettica. Inumidire dorso e collo con iodio.Quindi strofinare la superficie dorsale del collo con etanolo al 70%. Successivamente, posizionare l'animale su un tappetino riscaldante a 34 gradi Celsius e somministrare il farmaco pre-anestetico. Riempire le pompe osmotiche preparate in modo asettico con 50 microlitri di Neurotrophin 4.E utilizzare un bisturi per praticare un'incisione orizzontale larga due centimetri attraverso la cute appena posteriore allo spazio tra le scapole. Sollevare il margine posteriore dell'incisione con una pinza ed inserire delicatamente le punte dell'emostatico al di sotto della cute, appena posteriori all'incisione. Quando la punta si trova circa due centimetri posteriormente all'incisione, aprire le manopole dell'emostatico per creare una tasca sottocutanea in corrispondenza del sito d'incisione.Inserire la pompa nella tasca, orientando l'estremità del portale di somministrazione in modo da ridurre al minimo qualsiasi interazione tra il trattamento e la guarigione del sito dell'incisione della tasca. Successivamente, utilizzare un filo di sutura in nylon 5-0, una pinza emostatica e una pinzetta per chiudere l'incisione per il posizionamento della pompa e monitorare l'animale fino a quando non sarà completamente sveglio e in grado di deambulare. 30 minuti prima dell'iniezione, riscaldare in un bagno d'acqua a 25 gradi Celsius dosi da 50 microlitri di neurotrofina o soluzione salina preparate in modo asettico.Quando i trattamenti sono pronti, posizionare un ratto anestetizzato in posizione supina su una piattaforma in plexiglass e utilizzare il filo guida per sospendere l'animale attraverso gli incisivi frontali superiori. Successivamente, fissare una siringa da 30 gauge, 50 millimetri, da 100 microlitri a un endoscopio sinusale da 1,9 millimetri con angolo di 30 gradi. Quindi, fissare l'insieme della siringa a un supporto sulla parete esterna dell'endoscopio.Una volta che la siringa è ben fissata, caricare il trattamento e collegare l'assiembo dell'endoscopio alla telecamera. Quindi, utilizzare pinze con punta di gomma per spostare la lingua lateralmente ed inserire un espansore in plastica per mantenere la pervietà orale. Accendere quindi la sorgente luminosa alogena per l'endoscopio.Con il videoregistratore acceso, immergere l'estremità distale dell'endoscopio in acqua calda per alcuni secondi per ridurre al minimo la formazione di condensa sulla punta di vetro. Inserire quindi con attenzione l'ago nell'area della piega vocale sinistra, utilizzando come guida il riscontro visivo proveniente dal monitor. Quando la piega vocale è completamente visibile, iniettare l'ago nel tiroido aritenoidale sinistro, lateralmente al bordo mediale bianco della piega vocale.E premere lo stantuffo per somministrare il trattamento. Se l'epiglottide è bloccata in posizione chiusa, impedendo una visione chiara della laringe, utilizzare un movimento ascendente con la punta della siringa per staccare delicatamente il tessuto. Successivamente, rimuovere l'ago e posizionare l'animale nella sua gabbia di mantenimento su un tappetino riscaldante fino al completo recupero della posizione decubito.Generalmente, si osserva un cambiamento nella dimensione delle fibre con l'età negli animali trattati con Neurotrophin 4. Negli animali anziani trattati con Neurotrophin si osserva anche un ridotto livello di fibrosi e rigenerazione delle fibre. Mentre la quantità di giunzioni neuromuscolari aumenta.Una volta padroneggiati, l'impianto della pompa osmotica e la procedura di iniezione possono essere entrambi completati in un'ora, se eseguiti correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di utilizzare l'ago in modo lento e delicato per evitare graffi e lesioni nella zona laringea. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sui meccanismi della funzione delle corde vocali durante il processo di invecchiamento, può essere applicato anche ad altri sistemi, come il faringe e i disturbi correlati alla deglutizione.

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Biologia dello sviluppo

Questo articolo viene illustrato due metodi molto diversi di iniezione: 1) nel cervello (intracerebroventricolare) e 2) sistemica (endovenosa) per introdurre gli agenti terapeutici nel sistema nervoso centrale di topi neonati.

Consegna di agenti terapeutici attraverso intracerebroventricolare (ICV) e per via endovenosa (ev) nei topi

Si descrivono le modalità di somministrazione ripetuta di inibitori di segnalazione muscarinici a lungo del muscolo elevatore dell'ano Auris (LAL), muscolo di topi adulti giovani e per immunocolorazione successive delle sue giunzioni neuromuscolari (NMJs) in wholemounts. Il muscolo LAL ha vantaggi unici per...

Somministrazione sottocutanea di antagonisti muscarinici e Triple-immunocolorazione del lungo muscolo elevatore Auris in topi

Fonte: Andreatta, R. D. et. al., L'infusione sottocutanea di neurotrofina 4 utilizzando pompe osmotiche o iniezione muscolare diretta migliora l'invecchiamento dei muscoli laringei di ratto. J. Vis. Exp. (2017)Questo video mostra l'infusione di neurotrofina 4 (NTF4) in un modello di ratto anziano per ripristinare la funzione muscolare laringea interessata dalla denervazione correlata all'invecchiamento e dalla riduzione delle giunzioni neuromuscolari. NTF4 innesca la rigenerazione nervosa e...

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Nervo stimolatore-guida iniezione di cellule staminali autologhe vicino il nervo laringeo ricorrente di sinistra equina

Presentato qui è un protocollo per la produzione di un sistema impiantabile per la registrazione cronologica in vivo di potenziali elettromiografici evocati e spontanei. Il sistema viene applicato allo studio della reinnervazione dei muscoli lariangici in seguito a lesioni nervose.

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Qui, presentiamo un protocollo che combina l'elettroporazione e la denervazione in vivo del muscolo elevatore cranico auris longus (LAL). Questa procedura consente lo studio del potenziale ruolo delle proteine di derivazione muscolare nella rigenerazione della sinapsi neuromuscolare.

Elettroporazione combinata in vivo e reinnervazione a breve termine del muscolo scheletrico elevatore cranico Auris Longus

Presentiamo un protocollo per l'iniezione diretta del nervo vago nei ratti, che consente la somministrazione del farmaco direttamente nel nervo senza complicazioni post-iniezione. Questo metodo si applica agli studi neurologici preclinici che coinvolgono la manipolazione del sistema nervoso autonomo. Può essere utilizzato per l'iniezione diretta di nervi per altri nervi nei ratti e in altre specie, con le modifiche necessarie.

Protocollo di iniezione diretta del nervo vago per i ratti

Scopri come somministrare Neurotrofina 4 per indurre il rimodellamento dei muscoli laringei nei ratti anziani. Questo metodo utilizza pompe osmotiche e iniezioni dirette per migliorare la funzione vocale.

Infusione sottocutanea di neurotrofina 4 usando le pompe osmotiche o liniezione muscolare diretta migliora i muscoli del laringe del ratto di invecchiamento (Video) | JoVE Journal

Infusione sottocutanea di neurotrofina 4 usando le pompe osmotiche o l'iniezione muscolare diretta migliora i muscoli del laringe del ratto di invecchiamento

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