Name: Ripetuto il prelievo di sangue dalla vena di coda dei ratti Non anestetizzati con un sistema di raccolta di sangue sotto vuoto (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 12 s
Description: Impara un metodo di campionamento del sangue dalla vena della coda in ratti non anestetizzati utilizzando un sistema di estrazione sottovuoto. Questa tecnica riduce l'esposizione diretta al sangue e consente prelievi ripetuti con minimo stress.

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Gli autori non hanno nessun ringraziamenti a fare.

Tutte le procedure sono state approvate dal Consiglio di Tongji Medical College sul animale cura Comitato di Università Huazhong di scienza e tecnologia (Wuhan, Cina). Il manoscritto è stato preparato secondo ARRIVE (Animal Research: Reporting di esperimenti In Vivo ) linee guida6.
1. allevamento
<ol><li>Utilizzare ratti Sprague-Dawley (deviazione standard) (n = 20, 10 maschi, 8 settimana-vecchio, pesa 261 a 291 g, significano = 272.85 ±9.07 g) da sperimentali animali centro di Huazhong Università della scienza e della tecnologia e mantenere ratti in conformità con la guida per l'uso e la manutenzione Pubblicato da la US National Institute of Health (NIH pubblicazione No. 85-23, riveduta 1996) gli animali da laboratorio</li>
	<li>Casa in condizioni standard con accesso gratuito per cibo e acqua potabile. Ratti in gabbie di2 cm 530 con rasatura di legno tenere biancheria da letto. Due ratti di casa in ogni gabbia. Tenere tutte le gabbie aperte all'ambiente camera (nessuna micro-isolamento o ingabbiamento ventilato)</li>
	<li>Garantire il personale coinvolto nel protocollo sperimentale gestire regolarmente i ratti.</li>
	<li>Mantenere la temperatura ambiente tra i 21 ° C e 23 ° C. Dare tariffe una normale dieta di sale (0,3% NaCl) in tutto lo studio.</li>
</ol>2. procedura di raccolta del sangue
Nota: Il sistema di raccolta di sangue sotto vuoto costituito da un doppia punta ago [22 G (0,7 mm x 25 mm)], un supporto di plastica e una serie di tubi a vuoto (2 mL) con tappo in gomma (Figura 1).
<ol><li>Posizionare il ratto un supporto in plastica restrittivo e lavare la coda con acqua calda (20-30 ° C) per rimuovere eventuali impurità visibili o feci. Mentre un assistente tiene la coda in posizione estesa, strofinare la coda con etanolo al 70% e pulire con una garza per chiarire la vena.</li>
	<li>Inserire la punta dell'ago di farfalla 22g in uno delle vene coda laterale (circa 5 mm) in una posizione di circa 2-3 cm di distanza dalla punta della coda ad angolo di circa 20 ° (Figura 2). Raccogliere il sangue nella provetta sottovuoto raccolta mediante inserendo la punta di gomma dell'ago farfalla nel tubo di raccolta di sangue sotto vuoto (Figura 3). Nota: Il volume di sangue raccolta massima è 1,2 mL7.</li>
	<li>Dopo la raccolta del sangue, rimuovere l'ago e applicare una leggera pressione al sito della puntura con una garza per 15-30 s fermare il flusso di sangue. Quindi, rilasciare il ratto dal supporto di plastica restrittivo e tornare il ratto alla sua gabbia.</li>
	<li>Utilizzare le provette contenenti EDTA come anticoagulante per raccogliere il plasma sanguigno. Capovolgere delicatamente la provetta diverse volte per mescolare anticoagulante nel sangue e posizionare i campioni su ghiaccio verticale.</li>
	<li>Centrifugare i tubi di raccolta del campione di sangue in una centrifuga refrigerata a 2.000 x g per 10 min separare il plasma o siero.</li>
	<li>Estrarre il plasma/siero, facendo attenzione a non per disturbare i livelli di globuli rossi e bianchi. Per raccogliere il sangue siero, utilizzare provette senza anticoagulante. Entrambi i tipi di campione possono essere utilizzati immediatamente, o conservati a-80 ° C fino ad un anno. Nota: Il successo del sangue è stato definito come ottenere 1,2 mL di sangue ogni volta. Foratura massima ora è stata impostata a tre prove, se il volume totale del sangue era più basso di 1,2 mL dopo la terza puntura, è stato definito come una raccolta di sangue non riuscita. La durata del campionamento inizia dalla puntura della vena della coda alla rimozione dell'ago farfalla dopo il prelievo di sangue.</li>
	<li>
Raccogliere il sangue due volte entro due settimane7.
	<ol>
<li>Per testare e verificare la fattibilità di questo metodo, è necessario addestrare due studenti di medicina (principianti) per 2 h prima di eseguire questo protocollo di raccolta di sangue. Utilizzare venti ratti e prelevare il sangue da 10 ratti da 2 esperti compagni (gruppo sperimentale) e da 10 ratti dagli studenti medici 2 (gruppo principianti).</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. elaborazione statistica
<ol><li>Esprimere i dati come un valore medio ± deviazione standard e analizzare con SPSS statistica 17. Un valore α pari a 0,05 è stato scelto, quindi p < 0,05 è stato considerato statisticamente significativo.</li>
</ol>

<ol><li>Brown, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+collection+from+the+tail+of+a+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Blood collection from the tail of a rat.</a> Lab Anim (NY). 35 (8), 24-25 (2006).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Staszyk, C., Bohnet, W., Gasse, H., Hackbarth, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+vessels+of+the+rat+tail%3A+a+histological+re-examination+with+respect+to+blood+vessel+puncture+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Blood vessels of the rat tail: a histological re-examination with respect to blood vessel puncture methods.</a> Lab Anim. 37 (2), 121-125 (2003).</li>
<li>Lee, G., Goosens, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sampling+blood+from+the+lateral+tail+vein+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Sampling blood from the lateral tail vein of the rat.</a> J. Vis. Exp. (99), (2015).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22WHO+Guidelines+on+Drawing+Blood%3A+Best+Practices+in+Phlebotomy+WHO+Guidelines+Approved+by+the+Guidelines+Review+Committee%22">WHO Guidelines on Drawing Blood: Best Practices in Phlebotomy WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee</a>. , (2010).</li>
<li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+bioscience+research+reporting%3A+ARRIVE-ing+at+a+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Anim. 44 (4), 377-378 (2010).</li>
<li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood%2C+including+routes+and+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).</li>
<li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+device+for+collecting+cord+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">A new device for collecting cord blood.</a> Obstet Gynecol. 86 (5), 850-852 (1995).</li>
<li>Reynolds, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+a+new+device+for+blood+sampling+in+cats+with+a+vacuum+tube+collection+system+-+plasma+biochemistry%2C+haematology+and+practical+usage+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Feline+Med+Surg%22%5BJournal%5D)">Comparison of a new device for blood sampling in cats with a vacuum tube collection system - plasma biochemistry, haematology and practical usage assessment.</a> J Feline Med Surg. 9 (5), 382-386 (2007).</li>
<li>Wiwanitkit, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+blood+specimens+from+plain+and+gel+vacuum+blood+collection+tubes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Assoc+Thai%22%5BJournal%5D)">Comparison of blood specimens from plain and gel vacuum blood collection tubes.</a> J Med Assoc Thai. 84 (5), 723-726 (2001).</li>
<li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter%5BTitle%5D)+AND+%22Acad+Emerg+Med%22%5BJournal%5D)">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Acad Emerg Med. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare

Il rapporto presente descrive un metodo di raccolta di sangue facile da imparare in ratti. I nostri risultati hanno mostrato che questo metodo è fattibile per la raccolta ripetutamente un grande volume di sangue dai ratti. Inoltre, questo metodo potrebbe essere imparato facilmente con una breve curva di apprendimento. Questa procedura può essere eseguita in ratti anestetizzati con non e solo causa di minimo stress agli animali.
Sangue può essere raccolto da ratti in varie località. La vena della coda è una posizione superiore per sangue campionamento4. Tuttavia, non è sempre facile da ottenere abbastanza volume di sangue dalla vena sangue sottile e basso flusso coda dei ratti. Il sistema di raccolta di sangue sotto vuoto viene solitamente utilizzato per la raccolta di campioni di sangue dai pazienti nella pratica clinica quotidiana. Questo sistema di raccolta di sangue sotto vuoto è stato utilizzato in pazienti e ricerca gli animali per un lungo periodo di tempo8,9,10. Questo sistema è costituito da un tubo di raccolta di sangue sotto vuoto con ago di farfalla e parete tubo interno rivestito in silicone. Essa si basava sul principio di pressione negativa di vuoto e permette il disegno di sangue senza il rischio di raccolta di sangue, che inoltre riduce il rischio di contaminazione ed emolisi11continuo. Il volume di campione di sangue nel catetere è di circa 0,3 mL. Dopo aver ritirato l'ago dalla vena della coda, il sangue bloccato nel catetere scorrerà nel tubo di aspirazione raccolta a causa del vuoto. Questo metodo è anche applicabile per la raccolta di sangue da ratti che pesano meno di 100 g con l'uso di un ago puntura più piccolo.
Questo metodo di raccolta di sangue ha diversi vantaggi. Questa procedura provoca solo lesioni minime ai ratti e raccolta del sangue può essere eseguita senza l'uso di anestetici, così si può evitare l'influenza della risposta allo stress e anestetici sul campione di sangue. Le nostre osservazioni hanno mostrato che ratti erano tranquille sul supporto in plastica restrittivo durante la procedura e non ci erano morti durante questi esperimenti. In secondo luogo, ripetuto il prelievo di sangue ogni uno o due giorni è possibile, che consente il campionamento frequente di sangue con un volume adeguato per vari scopi di ricerca. Infine, questo metodo è facile da imparare e facilmente è stato masterizzato da principianti dopo un periodo di apprendimento brevi (2 h), come indicato dai simili tassi di successo e puntura volte tra i gruppi sperimentali e principiante in questo rapporto. In una precedente relazione, Lee et al hanno dimostrato un simile metodo di campionamento di sangue dalla vena laterale della coda di ratto4. Il nostro metodo è più semplice di quello riportato da Lee et al. 4 in che inseriamo direttamente l'ago puntura in vena caudale e l'altra estremità del tubo è collegato direttamente al tubo a vuoto per la raccolta del sangue, senza l'uso di una siringa supplementare e manuale di aspirazione del sangue e senza la necessità di ' latte ING' la vena per facilitare il flusso sanguigno. Raccolta di sangue con questo sistema chiuso riduce la probabilità di contaminazione del sangue. Uso del supporto di plastica restrittivo anche riduce lo stress al ratto e facilita la fissazione della coda.
I due passaggi seguenti sono fondamentali per la riuscita applicazione di questo metodo. 1) estendere la coda ed evitare il movimento della coda; 2) delicatamente forare la vena con un angolo di 20 ° per evitare la puntura attraverso la vena e mantenere la puntura dell'ago nella vena.
In conclusione, il metodo di raccolta sangue vuoto adottato nei ratti è sicuro, fattibile e facile da praticare. Questo metodo consente frequente prelievo di sangue con un volume di sangue adeguato ottenuto da ratti non anestetizzati.

Prelievo di sangue da ratti è necessario per un'ampia varietà di studi sperimentali. Tecniche per la raccolta del sangue dal ratto includono puntura del cuore, plesso retro-orbitale, vena giugulare, vena safena, vasi sanguigni coda, dell'arteria carotica, aorta addominale e della vena cava. La maggior parte delle tecniche (ad eccezione della vena safena e puntura del vaso sanguigno di coda) richiedono anestesia1,2. Le vene della coda del ratto sono ordinariamente forate per il prelievo di sangue e iniezione vascolare. Dopo aver trattato la coda con acqua calda, i vasi sanguigni sono ben dilatata e adatto per la manipolazione, anche quando i ratti sono anestetizzati3.
Nonostante lo sviluppo di tecniche nuove e migliorate per ottenere campioni di sangue nel piccolo laboratorio animali2, non è sempre facile ottenere abbastanza sangue durante il campionamento da piccoli animali. La vena della coda dei ratti è una posizione superiore per sangue campionamento4. Tuttavia, la vena caudale è sottile, così a volte è difficile da forare e richiederebbe un tempo lungo per ottenere abbastanza sangue a causa del suo flusso di sangue basso. Raccolta del sangue tramite un sistema di tubo di aspirazione è un metodo tipico nella pratica clinica quotidiana. Questo sistema chiuso per la raccolta del sangue riduce il rischio di esposizione diretta al sangue e ha reso più facile prendere campioni multipli da un singolo prelievo venoso5. Il rapporto presente descrive un metodo di prelievo di sangue della vena della coda semplice in ratti anestetizzati con non utilizzando il sistema di tubo di aspirazione. Questo metodo è facile da padroneggiare e può essere utilizzato per ottenere un grande volume di sangue ripetutamente in ratti.

<table><tbody><tr><td>un ago a doppia punta</td><td>Shanghai Kang Nong strumento medico co., LTD, Cina</td><td>22G&nbsp;</td><td>(0,7 volte; 25mm)</td></tr> <tr><td>tubi a vuoto</td><td>Wuhan Zhi Yuan, scienza medica e tecnologia co., LTD, Cina</td><td>2 ml</td><td></td></tr><tr><td>ratto che trattiene il supporto&nbsp;</td><td>Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, Cina</td><td>250g rat hoder modello</td><td></td></tr> dieta <tr><td>normale di sale per ratti I ratti</td><td></td><td></td><td>hanno ricevuto una dieta salata normale (0,3% NaCl) durante lo studio</td></tr><tr><td>Software SPSS per l'analisi statistica</td><td>SPSS Inc, &nbsp; Chicago; Stati Uniti&nbsp;</td><td>Versione 17.0.&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

ripetuto il prelievo di sangue dalla vena di coda dei ratti non anestetizzati con un sistema di raccolta di sangue sotto vuoto

Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System

Sangue può essere raccolto da ratti in un certo numero di punti di campionamento. Per esempio, la vena di coda è una posizione superiore per il prelievo di sangue. Tuttavia, vena caudale è sottile in modo che a volte è difficile perforare. Inoltre, vena caudale ha flusso sanguigno basso e richiede un tempo di campionamento lungo per ottenere sangue sufficiente. Il rapporto presente descrive un metodo di campionamento del sangue semplice, il metodo di raccolta di sangue sotto vuoto, che viene solitamente utilizzato per ottenere campioni di sangue dai pazienti, qui usati per ratti anestetizzati con non. La punta dell'ago di farfalla 22 G è stata inserita in una delle vene coda laterale circa 2-3 cm dalla punta della coda con un angolo di circa 20° e il sangue è stato raccolto nel tubo sottovuoto raccolta inserendo alla fine di gomma dell'ago farfalla il va tubo di raccolta sangue di aspirazione. I presenti risultati sperimentali mostrano che il tasso di successo era 95% nel gruppo sperimentale e il 90% nel gruppo di principianti. Il tasso di successo e puntura volte erano simili tra i due gruppi. La durata del campionamento era significativamente più breve nel gruppo sperimentale rispetto al gruppo di principianti. In conclusione, questo metodo di raccolta del sangue di vuoto per il campionamento sequenziale sangue dalla vena caudale del non - ratti anestetizzati è fattibile e facile da imparare, che potrebbe servire come un'alternativa affidabile agli altri convenzionalmente usato tecniche di campionamento di sangue per ratti.

Durata di campionamento, la massa del corpo e volume di raccolta di sangue dei due gruppi Sangue è stato raccolto da 10 ratti (5 maschi) due volte nell'arco di due settimane in ogni gruppo. La massa corporea medio in entrambi i gruppi era simile (272,00 ±9.66 g e g 273.70 ±8.87). Durata di campionamento era significativamente più breve nel gruppo sperimentale rispetto al gruppo di principianti (2,77 ±0.53 min vs 3,28 ±0.83 min, p < 0,05) (tabella 1).
Successo valuta e volte di due gruppi di foratura Il tasso di successo era 95% (19/20) nel gruppo sperimentale e il 90% (18/20) nel gruppo di principianti (p > 0.05). Puntura volte non erano significativamente differenti fra i due gruppi (1.50 ±0.61 min vs 1,85 ±0.75 min, p > 0,05) (tabella 2). Questi risultati indicano questo metodo è facile da imparare, e la tecnica potrebbe essere masterizzata dopo l'allenamento per 2 h.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig1.jpg"> Figura 1 : 2 mL vuoto provetta da prelievo (a sinistra); ago a farfalla G 22 (centro); il supporto di plastica restrittivo (a destra). <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig2.jpg"> Figura 2 : La punta dell'ago è stata inserita nella vena caudale laterale (circa 5 mm) in corrispondenza della posizione circa 2-3 cm di distanza dalla punta della coda ad angolo di circa 20 °. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55852/55852fig3.jpg"> Figura 3 : Successo venipuntura. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55852/55852fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td colspan="5">Gruppo sperimentale</td>
			<td></td>
			<td colspan="5">Gruppo di principianti</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Genere</td>
			<td>Peso corporeo (g)</td>
			<td>Volume di sangue prelevato (mL)</td>
			<td>durata di campionamento (min)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Genere</td>
			<td>Peso corporeo (g)</td>
			<td>Volume di sangue prelevato (mL)</td>
			<td>durata di campionamento (min)</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
			<td></td>
			<td>B1-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E1-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>291</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B1-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>282</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.18</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.3</td>
			<td></td>
			<td>B2-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,73</td>
		</tr>
<tr>
<td>E2-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>276</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.37</td>
			<td></td>
			<td>B2-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>264</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2,47</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>267</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.73</td>
			<td></td>
			<td>B3-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,52</td>
		</tr>
<tr>
<td>E3-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>267</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3,88</td>
			<td></td>
			<td>B3-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.41</td>
			<td></td>
			<td>B4-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>E4-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>263</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B4-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>289</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.62</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,61</td>
			<td></td>
			<td>B5-1</td>
			<td>uomo</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,48</td>
		</tr>
<tr>
<td>E5-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>265</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B5-2</td>
			<td>uomo</td>
			<td>277</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>18V</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.33</td>
			<td></td>
			<td>B6-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>274</td>
			<td>0.9</td>
			<td>4.87</td>
		</tr>
<tr>
<td>E6-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>18V</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,03</td>
			<td></td>
			<td>B6-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>274</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.37</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.82</td>
			<td></td>
			<td>B7-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>268</td>
			<td>1.0</td>
			<td>3,93</td>
		</tr>
<tr>
<td>E7-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>271</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.42</td>
			<td></td>
			<td>B7-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.82</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.93</td>
			<td></td>
			<td>B8-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.07</td>
		</tr>
<tr>
<td>E8-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>268</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,05</td>
			<td></td>
			<td>B8-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>262</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3,67</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.52</td>
			<td></td>
			<td>B9-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4,38</td>
		</tr>
<tr>
<td>E9-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>273</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.17</td>
			<td></td>
			<td>B9-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>281</td>
			<td>1.2</td>
			<td>4,57</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>1.82</td>
			<td></td>
			<td>B10-1</td>
			<td>donna</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.53</td>
		</tr>
<tr>
<td>E10-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>261</td>
			<td>1.2</td>
			<td>3.25</td>
			<td></td>
			<td>B10-2</td>
			<td>donna</td>
			<td>275</td>
			<td>1.2</td>
			<td>2.28</td>
		</tr>
<tr>
<td>Media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>2,77</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>3.28</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">It-1: numero di serie dei ratti nel gruppo sperimentale per la prima raccolta di sangue.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">It-2: numero di serie dei ratti nel gruppo sperimentale per la seconda raccolta di sangue.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-1: numero di serie dei ratti nel gruppo di principianti per la prima raccolta di sangue.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="11">BN-2: numero di serie dei ratti nel gruppo di principianti per la seconda raccolta di sangue.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabella 1: Risultati del sangue raccolti nel gruppo sperimentale e il gruppo di principianti.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Tempi di raccolta del sangue</td>
			<td>Media puntura volte</td>
			<td>Una sola puntura tempo</td>
			<td>Puntura di due volte</td>
			<td>Puntura di tre volte</td>
			<td>Non riuscita</td>
			<td>Tasso di successo</td>
		</tr>
<tr>
<td>Gruppo sperimentale</td>
			<td>20</td>
			<td>1.50 ±0.61</td>
			<td>11</td>
			<td>8</td>
			<td>0</td>
			<td>1</td>
			<td>95%</td>
		</tr>
<tr>
<td>Gruppo di principianti</td>
			<td>20</td>
			<td>±0.75 1.85</td>
			<td>7</td>
			<td>9</td>
			<td>2</td>
			<td>2</td>
			<td>90%</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Una sola puntura tempo: numero di ratti con successo del sangue dopo la prima puntura</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Due volte la puntura: numero di ratti con successo del sangue dopo la puntura secondo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">Tre volte la puntura: numero di ratti con successo del sangue dopo la terza puntura</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">Non riuscita: numero di ratti con errore prelievo di sangue dopo la terza puntura</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabella 2: Confronto dei tempi di puntura e tassi di successo del gruppo sperimentale e il gruppo di principianti.

Qui, descriviamo un metodo di prelievo di sangue della vena della coda semplice in ratti anestetizzati con non utilizzando un sistema di tubo di aspirazione. Questo metodo riduce il rischio di esposizione diretta al sangue e semplifica prendendo campioni multipli da un singolo prelievo venoso.

Ripetuto il prelievo di sangue dalla vena di coda dei ratti Non anestetizzati con un sistema di raccolta di sangue sotto vuoto

Blood can be collected from rats in a number of sampling locations. For instance, the tail vein is a superior location for blood sampling. However, the ...

Il presente rapporto descrive il metodo di prelievo ematico dalla singola vena della coda in ratti non anestetizzati, mediante sistema di estrazione sotto vuoto. Questo viene eseguito dapprima limitando il movimento del ratto, pulendo la coda e passandola con etanolo al 70%. Successivamente, la punta di un ago a farfalla viene inserita in una delle vene laterali della coda dilatate e il sangue viene raccolto nel tubo da prelievo sotto vuoto collegato all'estremità di gomma dell'ago a farfalla.Infine l'ago viene rimosso e la fuoriuscita di sangue dalla puntura viene arrestata. Il punto forte di questa tecnica di campionamento è l'utilizzo del sistema di prelievo sotto vuoto. Questo può ridurre il rischio di esposizione diretta al sangue e rendere più semplice l'ottenimento di più campioni da una singola venipuntura.La procedura sarà dimostrata da due membri del nostro laboratorio, Yanyang Cheng e Zhong Peng. Per iniziare, preparare un supporto in plastica, provette con tappo di gomma e un ago biforcuto. Posizionare questi materiali su una superficie sterile.Successivamente, posizionare il ratto nel supporto di contenimento in plastica, avendo cura che le zampe anteriori e posteriori siano in una posizione comoda e che la respirazione non sia ostacolata. Poi, appoggiare il supporto su una superficie di lavoro solida. Lasciare la coda penzolare oltre il bordo del piano, estendendola completamente.Per ottenere il campione di sangue, lavare la coda con acqua tiepida a una temperatura compresa tra 20 e 30 °C per rimuovere eventuali impurità visibili. Asciugare con etanolo al 70% per dilatare i vasi sanguigni della coda. Successivamente, individuare le vene laterali della coda, destra o sinistra, poste lateralmente rispetto all'arteria, per il prelievo ematico.Prelevare un campione della vena nella parte inferiore della coda. Afferrare delicatamente ma saldamente la coda vicino alla punta per mantenerla dritta durante il prelievo del campione. Inserire ora la punta dell'ago a farfalla da 22g in una delle vene laterali della coda, intorno a cinque millimetri, in una posizione distante circa due-tre centimetri dalla punta della coda, con un angolo di circa 20 gradi.Quando la vena viene penetrata, il sangue fluisce nell'ago. A questo punto, inserire rapidamente l'estremità di gomma dell'ago a farfalla nel tubo da prelievo sotto vuoto. Il sangue fluisce lentamente nel tubo da prelievo sotto vuoto.Il volume di sangue previsto è di un punto due millilitri ogni volta. Quando è stato raccolto un volume adeguato di campione, rimuovere l'ago dalla vena e applicare brevemente pressione sul sito di inserzione per arrestare l'emorragia. Per raccogliere il plasma sanguigno, utilizzare provette contenenti EDTA come anticoagulante.Rovesciare delicatamente il tubo diverse volte per mescolare e decoagulare il sangue. Posizionare quindi i campioni in verticale sul ghiaccio. Centrifugare i tubi per la raccolta del campione di sangue intero in una centrifuga refrigerata per dieci minuti al fine di separare il plasma e il siero.Eluisci il plasma, avendo cura di non disturbare gli strati di globuli rossi e bianchi. Per raccogliere il siero ematico, utilizza provette senza anticoagulante. Entrambi i tipi di campioni possono essere utilizzati immediatamente o conservati a meno di 80 gradi Celsius per un periodo massimo di un anno.Per testare e verificare la fattibilità di questo metodo, due studenti di medicina sono stati addestrati per due ore prima di eseguire il protocollo di prelievo del sangue come gruppo principiante. Due esperti con esperienza hanno invece formato il gruppo sperimentale. I risultati hanno mostrato che il tasso di successo è stato del 95% nel gruppo sperimentale e del 90% nel gruppo principiante.Il tasso di successo e i tempi di puntura sono stati simili tra i due gruppi. La durata del campionamento è risultata significativamente più breve nel gruppo sperimentale rispetto al gruppo dei principianti. Questa tecnica di campionamento è semplice ed efficiente per il prelievo ripetuto di sangue nei ratti e consente di ottenere ogni volta un volume ematico sufficiente.Inoltre, questo metodo è facile da apprendere e può essere eseguito su ratti non anestetizzati, causando un minimo stress agli animali. Quando si adotta un metodo di prelievo del sangue a vuoto, il vuoto e la pressione permettono un prelievo continuo del sangue senza il rischio di contatto con il sangue, riducendo così anche la possibilità di contaminazione ed emolisi.

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Prelievo di sangue dalla vena della coda laterale del Topo

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Raccolta del sangue modificate dalle vene di coda dei topi Non anestetizzati con un sistema di raccolta di sangue sotto vuoto e la lente di ingrandimento per occhiali

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