Name: Quantificare la dinamica infrarosso del potere spettrale e della frequenza cardiaca nei topi addormentati (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 56 s
Description: Scopri come analizzare la coordinazione tra attività neuronali e cardiache durante il sonno non-REM nei topi utilizzando polisonnografia standard. Questo metodo innovativo valuta la risposta comportamentale a stimoli acustici.

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Ringraziamo tutti i membri del laboratorio per il loro contributo alla scrittura e attenta lettura di questo manoscritto. Siamo grati a Paul Franken per stimolare le discussioni, il Dr. Gisèle Ferrand per i commenti utili sul protocollo chirurgico e il dottor Jean-Yves Chatton per fornire i file eseguibili Labview originale per l&#39;esposizione al rumore. Il finanziamento è stato fornito dalla Fondazione nazionale della scienza nazionale (Grants 31003A_146244 e 31003A_166318) e l&#39;Etat de Vaud.

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Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Qui mostriamo come stabilire un profilo temporale continuo di sonno non REM che integra le variabili EEG, EMG e ECG. Questo è un primo passo verso lo sviluppo di una descrizione integrativa del sonno del mouse, che può aiutare a identificare la scadenza temporale non riconosciuta in precedenza in cui sono organizzate elevate e basse resistenze al rumore durante il sonno non REM 1 . Una struttura temporale simile è stata descritta anche nel sonno non-REM umano attraverso un&#39;analisi analoga <su...

Il sonno dei mammiferi è uno stato comportamentale di riposo e di resistenza agli stimoli ambientali. Nonostante questa apparente uniformità, i parametri polisomnografici e autonomi indicano che il sonno si muove tra stati nervosi e somatici qualitativamente e quantitativamente diversi su varie scale temporali e spaziali 1 . Durante i minuti a decine di minuti, si verifica il passaggio tra il sonno non REM e REM. Il sonno non REM è accompagnato da un&#39;ampia ampiezza e bassa frequenza nell&#39;EEG, con un picco spettrale intorno a ~ 0,5-4 Hz, mentre il sonno REM mostra un&#39;attività regolare di EEG nella banda theta (6-10 Hz), insieme a Muscolo atonia 2 . All&#39;interno del sonno non REM, gli esseri umani attraversano la luce (S2) e il sonno profondo dell&#39;onda lenta (SWS). Come indica la loro denominazione, queste due fasi mostrano rispettivamente soglie di aroazione inferiori e superiori 3 , 4 e differiscono in primo luogo dalla densità di bassa frequenzaEnte corticale EEG, indicata come attività a onde lente (SWA, 0,75-4 Hz). La non uniformità persiste durante i singoli attacchi di S2 e SWS dal minuto al sotto secondario, come documentato ampiamente dalla presenza variabile di SWA nel corso di un incontro 5 , 6 , ma anche da EEG e dai ritmi potenziali in campo Frequenze superiori, comprese le onde del mandrino nella banda sigma (10-15 Hz) e ritmi gamma (80-120 Hz) (per una recensione, vedi 7 , 8 , 9 , 10 ). Piuttosto che essere sottili, queste variazioni spostano lo stato corticale del sonno negli esseri umani agli estremi dello spettro. Per il sonno non REM, questi variano da una predominanza di SWA a stati che approssimano l&#39;attività sveglia perché contengono una parte sostanziale di componenti ad alta frequenza 11 <suP&gt;, 12 . Nei roditori e nei gatti, anche se il sonno non-REM non è suddiviso in fasi, emerge un breve periodo chiamato sonno intermedio (IS) prima dell&#39;insorgenza del sonno REM 13 . Durante IS, le funzioni di sonno REM, come l&#39;attività ippocampale theta e le onde ponto-geniculo-occipitali, iniziano, mentre le firme del sonno non-REM, come le onde mandrino e SWA, sono ancora presenti, indicando un mix tra i due stati di sonno 14 , 15 . Tuttavia, l&#39;IS potrebbe essere funzionalmente distinto poiché è modulata dagli antidepressivi 16 e attraverso una nuova presentazione di oggetti durante la veglia precedente 17 e contribuisce a impostare la soglia di eccitazione 18 . Inoltre, i diagrammi dello spazio statale dei parametri EEG e EMG di ratti liberamente in movimento mostrano un gruppo di punti 14 che è continuo tra il sonno non REM, il sonno REM e la veglia. Ci sono anche discontinuità sporadiche in SWA, senza entrare nella sveglia o nel sonno REM, che porta a notevoli fluttuazioni nella presenza relativa dei componenti a bassa e alta frequenza durante un incontro non letto REM non consolidato 14 , 19 e 20 . Infine, i rapporti variabili di SWA e ritmi di frequenza più alti durante il sonno non REM si verificano non solo nel tempo, ma mostrano anche differenze regionali in ampiezza e sincronizzazione tra aree corticali 19 . Il sonno non-REM del mammifero è ben lungi dall&#39;essere uniforme. Tuttavia, se tale non uniformità porta a stati che differiscono per funzioni e attributi comportamentali, non è chiaro. In diversi tipi di disturbi del sonno, il sonno continuo viene interrotto da risvegli spontanei e comportamenti motori inappropriati. Inoltre, le analisi spettrali mostrano alterazioni nella presenza relativa di frequenze più alte nell&#39;EEG 21E in parametri autonomi, come i tassi di respirazione e battito cardiaco 22 . La sequenza ordinata di stati di sonno stabili è perciò turbata e gli elementi di eccitazione corticale e / o autonomica intrudono in maniera incontrollata. Pertanto, la comprensione del continuum degli stati di sonno è di una possibile rilevanza per la malattia. Inoltre, la perturbazione del sonno da rumore ambientale negli ambienti urbani è associata a rischi sanitari generali, rendendo cruciale identificare momenti di maggiore vulnerabilità durante il sonno 23 . Gli esperimenti di arousal comportamentali nel sonno degli esseri umani indicano che è più difficile svegliarsi dal sonno non-REM dominato da SWA (fase S3), mentre il sonno non-REM leggero (fase S2) e il sonno REM mostrano soglie comparabili e inferiori di stimolazione 4 . L&#39;elaborazione corticale di stimoli sonori corti varia sensibilmente tra il sonno REM, S2 e S3 24 ,25 , indicando che i modelli di attività corticali specifici dello stato modulano le prime fasi dell&#39;elaborazione sensoriale. Per il sonno non REM nell&#39;uomo, la propensione a svegliarsi in risposta al rumore varia con la presenza di onde mandrino e ritmi alfa nell&#39;EEG 26 , 27 , 28 . La ritmicità talamocorticale durante i mandrini è accompagnata da una maggiore inibizione sinaptica sia ai livelli talamici che a quelli corticali, che si suppone contribuiscano all&#39;attenuazione dell&#39;elaborazione sensoriale 7 . Come sono i periodi di sonno resistenti ai rumori e vulnerabili organizzati nel tempo e quali sono i loro determinanti? In entrambi i topi e umani, abbiamo recentemente individuato una oscillazione infrarossa, 0,02-Hz nei ritmi neurali. A seconda della fase di questa oscillazione di 0,02-Hz, i topi hanno mostrato una reattività variabile agli stimoli esterni, sia svegliarsi o dormireIl rumore. È interessante notare, questa oscillazione è stata correlata con il tasso del battito cardiaco, indicando che il sistema nervoso autonomo partecipa nella modulazione della vulnerabilità del sonno agli stimoli esterni 1. Durante questo ritmo sono stati organizzati anche ritmi ippocampali correlati alla memoria e, in modo più sorprendente, la sua forza è correlata alla qualità del consolidamento della memoria negli esseri umani. L&#39;oscillazione di 0,02 Hz sembra quindi essere un principio organizzativo di sonno non umano REM e rodente che modula sia la sensibilità all&#39;ambiente che l&#39;elaborazione della memoria interna. Ciò sottolinea nuovamente la necessità di valutazioni multiparametriche e continue di stati di sonno per riconoscere la loro funzionalità e per individuare siti di potenziale vulnerabilità. Ecco una procedura per estrarre la forma d&#39;onda di queste dinamiche, incluso l&#39;impianto chirurgico dei topi per le misure combinate EEG / ECoG e EMG-ECG, l&#39;esposizione a stimoli sensoriali,Rutine di analisi. Questa procedura fornisce una base per la visualizzazione del sonno come uno stato di vigilanza continuamente variabile ma altamente organizzato durante il quale vengono eseguite diverse funzioni fondamentali del sonno in sequenza. Più in generale, la procedura è applicabile agli approcci che mirano ad estrarre le caratteristiche spettrali e autonome che precedono un esito comportamentale durante il sonno sia negli stati di salute che nelle malattie.

<table><tbody><tr><td>Colla epossidica a 2 componenti</td><td>Henkel</td><td>Loctite EA 3450</td><td></td></tr><tr><td>Fibra di sutura assorbibile (prolene)</td><td>Ethicon</td><td>5-0 FS-3</td><td></td></tr><tr><td>Pinza Adson FST</td><td></td><td>11006-12</td><td></td></tr><tr><td>Tampone antisettico</td><td>VWR</td><td>149-0332</td><td></td></tr><tr><td>Attane Isoflurano</td><td>Piramal</td><td>Isoflurano 250mL</td><td></td></tr><tr><td>Connettori 3 x 2 canali</td><td>ENA AG</td><td>2.316</td><td>Raster 2,54 x 2,54 mm; dimensioni 5 x 8 x 9 mm; pin 5 mm; commutatore http://www.ena.ch/</td></tr> <tr><td>Dragonfly</td><td>Amplificatore EMBLA</td><td>modello #SL-10</td><td></td></tr><tr><td>Amplificatore EMBLA EMBLA</td><td></td><td>A10 Forbici</td><td></td></tr><tr><td>fini</td><td>FST</td><td>14108-09</td><td></td></tr><tr><td>Vite in acciaio placcato oro a testa piatta</td><td>J.I. Morris</td><td>FF00CE125</td><td>https://jimorrisco.com/</td></tr><tr><td>Filo d'oro</td><td>CMSA</td><td>T.69 5gr</td><td>http://www.cmsa.ch/en/</td></tr> <tr><td>Spugna emostatica</td><td>Pfizer</td><td>Gelfoam</td><td></td></tr><tr><td>disinfettante a base di iodio (Betadine)</td><td>Mundipharma</td><td>soluzione standard 60mL</td><td></td></tr><tr><td>Acciaio per trapano Komet 1/005PM104</td><td>UNOR AG</td><td>22310</td><td></td></tr><tr><td>Software di analisi Matlab</td><td>MathWorks</td><td>R2016b</td><td>https://ch.mathworks.com/products/matlab.html</td></tr><tr><td>Microdrill</td><td>Fine Science Tools</td><td>96758</td><td></td></tr><tr><td>Supporto per testa per anestesia a gas di topo</td><td>Kopf Instruments</td><td>Modello 923-B</td><td>http://kopfinstruments.com/product/model-923-b-mouse-gas-anesthesia-head-holder/</td></tr> <tr><td>Unguento oftalmico</td><td>Pharmamedica</td><td>VITA-POS</td><td></td></tr><tr><td>Paladur (liquido)</td><td>UNOR AG</td><td>2260215</td><td>per cemento odontoiatrico</td></tr><tr><td>Palavit (polvere)</td><td>UNOR AG</td><td>5410929</td><td>per cemento dentale</td></tr><tr><td>Telaio stereotassico per piccoli animali</td><td>Kopf Instruments</td><td>Modello 930</td><td>http://kopfinstruments.com/product/model-930-small-animal-stereotaxic-frame-assembly/</td></tr> <tr><td>Filo per saldatura</td><td>Stannol</td><td>593072</td><td></td></tr><tr><td>Regolatore di temperatura - Mini sonda rettale</td><td>Phymep</td><td>4090502</td><td>http://www.phymep.com/produit/dc-temperature-controller/</td></tr> <tr><td>Termoregolatore- termoforo</td><td>Phymep</td><td>4090205</td><td>http://www.phymep.com/produit/dc-temperature-controller/</td></tr></tbody></table>

quantificare la dinamica infrarosso del potere spettrale e della frequenza cardiaca nei topi addormentati

Quantifying Infra-slow Dynamics of Spectral Power and Heart Rate in Sleeping Mice

Tre stati di vigilanza dominano la vita dei mammiferi: la veglia, il sonno non rapido (non REM) e il sonno REM. Poiché sono stati identificati più correlati neurali del comportamento negli animali in libertà di movimento, questa suddivisione a tre livelli diventa troppo simile. Durante la veglia, gli esempi delle attività corticali globali e locali, insieme ai parametri periferici come il diametro pupillare e l&#39;equilibrio simpatico, definiscono diversi gradi di eccitazione. Rimane ancora chiaro la misura in cui il sonno forma anche un continuum di stati cerebrali, all&#39;interno del quale il grado di resilienza agli stimoli sensoriali e l&#39;arousabilità, e forse altre funzioni del sonno, variano gradualmente, e come gli stati fisiologici periferici co-variano. La ricerca che avanza i metodi per monitorare più parametri durante il sonno, nonché attribuire alle costellazioni di questi attributi funzionali, è fondamentale per raffinare la nostra comprensione del sonno come un processo multifunzionale durante il quale molti effetti benefici devono essere exeseguita sempre. L&#39;individuazione di nuovi parametri che caratterizzano gli stati di sonno aprirà opportunità per nuovi percorsi diagnostici nei disturbi del sonno. Presentiamo una procedura per descrivere le variazioni dinamiche degli stati di sonno non-REM del mouse attraverso il monitoraggio e l&#39;analisi combinati di elettroencefalogrammi (EEG) / electrocorticogram (ECoG), elettromiogramma (EMG) e segnali elettrocardiogrammi (ECG) usando tecniche standard di registrazione polisomnografiche. Utilizzando questo approccio, abbiamo scoperto che il mouse non-REM sonno è organizzato in cicli di oscillazioni neurali e cardiache coordinate che generano intervalli di 25 secondi di alta e bassa fragilità agli stimoli esterni. Pertanto, i sistemi nervosi centrali e autonomi sono coordinati per formare stati di sonno comportamentali distinti durante il sonno non consolidato REM. Presentiamo manipolazioni chirurgiche per il monitoraggio polisomnografico ( cioè EEG / EMG combinato con ECG) per monitorare questi cicli nel mouse liberamente addormentato, l&#39;analisi a quantiFy la loro dinamica e i protocolli di stimolazione acustica per valutare il loro ruolo nella probabilità di svegliarsi. Il nostro approccio è stato già esteso al sonno umano e promette di svelare i principi comuni di organizzazione di stati di sonno non-REM nei mammiferi.

La figura 2 A (pannello superiore) mostra 100 min di tratti spontanei di sonno-sveglia, registrati mediante elettrodi polisomnografi impiantati come descritto (vedi Figura 1 ). Gli aumenti e le diminuzioni dell&#39;ampiezza di EEG e EMG all&#39;insorgenza del sonno non-REM sono chiaramente visibili. Il sonno intermittente REM è segnato da una diminuzione dell&#39;ampiezza di EEG e da una ulteriore diminuzione de...

Qui presentiamo procedure sperimentali e analitiche per descrivere le dinamiche temporali delle variabili neurali e cardiache del sonno non REM nei topi, che modulano la risposta al sonno agli stimoli acustici.

Quantificare la dinamica infrarosso del potere spettrale e della frequenza cardiaca nei topi addormentati

Three vigilance states dominate mammalian life: wakefulness, non-rapid eye movement (non-REM) sleep, and REM sleep. As more neural correlates of behavior ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di descrivere come le attività neurali e cardiache sono coordinate durante il sonno non REM del topo. Attraverso il monitoraggio e l'analisi di segnali elettroencefalografici, elettromiografici ed elettrocardiografici. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo del sonno.Come ad esempio il modo in cui il sonno concilia due bisogni essenziali ed evolutivamente conservati. Che devono essere sia continui che fragili. Il vantaggio principale di questa tecnica è che utilizza la polisonnografia standard per valutare il sonno non REM in un modo nuovo che si basa sulle risposte comportamentali variabili agli stimoli esterni.Abbiamo avuto l'idea di questo metodo quando abbiamo osservato che i topi addormentati mostravano risposte variabili al rumore come svegliarsi e dormire fino al sonno. Generalmente le persone che non conoscono questo metodo avranno difficoltà perché combina abilità chirurgiche, sperimentazione minima e analisi avanzata. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto diversi passaggi essenziali sono nuovi per il campo.In particolare per quanto riguarda la progettazione comportamentale e l'analisi dei dati. Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla diagnosi dei disturbi del sonno nell'uomo. Perché identifica i momenti di sonno che sono altamente fragili.Per iniziare la procedura, prepararsi agli ecogeoletti EEG utilizzando pezzi di filo d'oro lunghi 0,5 centimetri, ciascuno saldato sopra una vite in acciaio placcato oro. Quindi pulirli in etanolo al 70%. Quindi preparare due elettrodi EMG-ECG con fili d'oro lunghi tre o quattro centimetri.Piega i fili con un angolo di 90 gradi a un centimetro da un'estremità e prepara una bobina all'altra estremità. Tra le due estremità piegare il filo per creare una piccola curvatura che corrisponde al profilo superficiale dell'osso tra il cervelletto e la lambda. Dopodiché preparare un connettore di testa femmina-maschio a sei canali coprendo il connettore di entrambi i pin femmina e maschio alla base con del nastro adesivo.Quindi aggiungere ai perni agli angoli un po' di stagno per facilitare il processo di saldatura. In questa fase, posizionare un animale anestetizzato sull'apparato stereotassico posizionando la bocca. Questo riparerà la testa del mouse.Quindi fissa la testa posizionando le barre auricolari sul cranio con le loro estremità smussate all'indietro. Successivamente sollevare la pelle al centro del cranio e tagliare delicatamente la parte sollevata della pelle lungo la linea mediana dalla parte superiore del collo fino al livello degli occhi. Quindi rimuovere il cuoio capelluto.Assicurati che la finestra sia abbastanza grande da vedere chiaramente le fessure del cranio della bregma e della lambda. Fissare la pelle su entrambi i lati con serafini bulldog per garantire l'accesso all'osso. Quindi, rimuovere con cura il tessuto congiuntivo con un bisturi.Pulire l'area con un disinfettante a base di iodio e asciugare il cranio con un tampone antisettico. Quindi, utilizzando una lama di bisturi affilata, grattare il cranio per ottenere una superficie ossea pulita e opacizzata. Usando solo la punta del bisturi, graffia una griglia simile a una rete di scanalature con una distanza di uno o due millimetri tra le scanalature.Successivamente, esegui quattro craniotomie nel cranio in punti specifici con un microtrapano. Durante la perforazione, soffiare via la polvere ossea con una pipetta pasteur e pulire l'eventuale sanguinamento con tamponi antisettici. Se si verifica un'emorragia, assicurarsi che sia completamente interrotta prima di riprendere il processo.Usa una spugna emostatica per accelerare l'emostasi. Fissare la vite in un morsetto emostatico. Nell'emisfero sinistro, avvitare due viti placcate in oro attraverso le craniotomie.Tenere il morsetto verticalmente sopra la craniotomia e ruotare la vite senza deviare dalla posizione verticale. Aprire delicatamente l'emostatico clamp per rilasciare la vite. Nell'emisfero destro avvitare gli elettrodi precedentemente preparati attraverso le craniotomie.Aggiungere una goccia di colla sulla parte centrale del cranio per garantire una stretta adesione dell'EMG-ECG sinistro. Sollevare con cautela il bordo della pelle dai muscoli del collo con una pinza e inserire i fili EMG-ECG con le estremità a spirale nei muscoli. Per rilevare i segnali ECG cardiaci durante il sonno, assicurarsi che il filo EMG-ECG sia inserito nel muscolo a una profondità di circa 0,8-un centimetro.Posizionare l'EMG-ECG sinistro accanto alla vite di ancoraggio posteriore sinistra. Ripetere la procedura per inserire l'EMG-ECG corretto. Posizionare l'EMG-ECG destro accanto alla vite di ancoraggio anteriore sinistra.Assicurarsi che le estremità dell'anello siano posizionate il più lontano possibile l'una dall'altra. È importante che i fili EMG-ECG siano inseriti abbastanza in profondità nel muscolo in modo che la frequenza cardiaca possa essere rilevata in modo affidabile. Usando una spatola, applica la colla epossidica bicomponente sul cranio tra e intorno alle viti.Lascialo asciugare alla luce ma proteggi gli occhi dell'animale da un'illuminazione eccessiva. Cerca di posizionare i pin del connettore il più vicino possibile per ridurre al minimo l'altezza dell'impianto utilizzando una piccola lampada a coccodrillo. Saldare i quattro pin all'angolo del connettore ai quattro fili.Ridurre al minimo il tempo di contatto con la punta di saldatura in quanto riscalda rapidamente le viti. Quindi, riempi lo spazio tra la colla e il connettore con cemento dentale e copri le parti saldate. Crea una superficie liscia ed evita spigoli vivi che potrebbero ferire l'animale.Inoltre, evita di toccare la pelle in quanto ciò provoca prurito. Ora togliete i serafini del bulldog. Disinfettare la ferita con un disinfettante a base di iodio.Se necessario, chiudere la ferita con punti di sutura davanti e dietro il connettore. Successivamente, monitora l'animale ogni giorno per una settimana e cerca perdita di peso, attività ridotta o anormale e segni di infezione. Cinque o sei giorni dopo l'intervento, collegare il cavo di registrazione al connettore della testa dell'animale, lasciandolo nella sua gabbia domestica.Attendere altri quattro o cinque giorni prima dell'inizio della registrazione in modo che l'animale si abitui alla condizione e dorma naturalmente. Con un software polisonnografico commerciale, è possibile registrare i dati EEG ed EMG-ECG nell'arco di 48 ore utilizzando impostazioni tipiche come un guadagno di 2000 x, una frequenza di campionamento di 2000 hertz all'acquisizione, sottocampionata a 200 hertz dopo l'acquisizione. Applicare un filtro passa-alto da 0,7 hertz per tutti i tracciati EEG e un filtro passa-alto da 10 hertz per tutti i tracciati EMG-ECG.In questa dimostrazione, il mouse ha dormito per più di 40 secondi. Ecco i caratteristici segnali a bassa frequenza, ad alta ampiezza nell'EEG e il basso tono muscolare nelle tracce EMG. È importante che il mouse dorma stabilmente per almeno 40 secondi prima che il rumore venga riprodotto per garantire una lunga linea di base per l'analisi del sonno, prima di svegliarsi o dormire.Ora verrà erogato uno stimolo acustico, qui un rumore bianco. In questo caso, il mouse si riattiva entro 10 secondi. Si noti che l'EEG si desincronizza quando il mouse si sveglia.In un altro caso, il mouse non si riattiva, anche se il rumore è stato emesso per più di 20 secondi. Si noti che l'EEG non si desincronizza. Qui sono mostrate le tracce grezze dell'EEG in nero e i corrispondenti segnali EMG-ECG in grigio, per 40 secondi prima dell'inizio del rumore e durante i 20 secondi di rumore.Si tratta di un evento di sonno continuo. E questo è un esempio dell'evento di risveglio. I dati analizzati corrispondenti per la dinamica di potenza sigma nella finestra di 40 secondi prima dell'insorgenza del rumore sono mostrati qui per il sonno e il risveglio.Il risultato chiave di questa analisi è che la potenza sigma è al suo minimo prima dell'inizio del rumore per un evento di sonno e al suo picco per un evento di risveglio. A differenza degli eventi di risveglio e sonno presentati in precedenza, abbiamo scartato gli eventi con una transizione precoce al sonno REM. E abbiamo anche scartato gli eventi con una sveglia anticipata prima dell'inizio del rumore.Durante il tentativo di questa procedura, è importante assicurarsi che il segnale EMG rilevi la frequenza cardiaca durante il sonno non REM. Inoltre, si ricorda che la procedura di analisi deve essere compresa e implementata in uno script software per estrarre l'oscillazione infra-lenta. Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi, come registrazioni elettrofisiologiche locali o approcci di imaging per seguire i modelli di attività in aree cerebrali definite.Dopo la riqualificazione, questa tecnica apre la strada ai ricercatori nel campo del sonno umano per esplorare come le attività neurali e cardiache sono organizzate nelle diverse fasi del sonno nei dormienti sani e nei pazienti con disturbi del sonno. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come valutare e analizzare retrospettivamente il sonno non REM in base alla reattività comportamentale del topo addormentato a uno stimolo acustico.

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