Tomografia a coerenza ottica: Imaging Mouse ganglionari cellule In Vivo

L'obiettivo generale di questo esperimento è quello di utilizzare la tomografia a coerenza ottica o OCT per ottenere rapidamente una valutazione accurata dello spessore della retina. L'OCT può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo dell'oftalmologia come la neuropatia ottica. Il vantaggio principale di questa tecnica è che si tratta di un metodo non invasivo per rilevare i cambiamenti strutturali nelle cellule gangliari retiniche del topo.

Questa tecnica è davvero interessante perché è un metodo non invasivo, sicuro e affidabile per testare l'effetto del trattamento nella neuropatia ottica. Per iniziare, regolare prima le impostazioni del braccio di riferimento appropriate per l'obiettivo. Quindi, accendi l'alimentatore e il computer.

Quando il computer è pronto, avviare il programma di imaging. Crea un nuovo studio clinico e aggiungi i protocolli desiderati. Vai alla sezione dell'esame del paziente e imposta le impostazioni predefinite dell'esame.

Fare clic su Aggiungi paziente nella sezione dell'esame del paziente per aggiungere un nuovo paziente e inserire le informazioni pertinenti sul paziente. Quindi fare clic su Aggiungi esame, Avvia esame e Aggiungi scansioni preimpostate dall'elenco per selezionare il protocollo desiderato a partire dall'occhio che verrà misurato per primo. Almeno 15 minuti prima dell'acquisizione dei dati, instillare gocce di fenilefrina al 10% a temperatura ambiente in ciascun occhio di tutti i topi che verranno testati.

Quindi rimuovere il reagente in eccesso e instillare gocce di tropicamide allo 0,5% a temperatura ambiente. Circa cinque minuti prima dell'acquisizione, indurre l'anestesia generale. Subito dopo, somministrare ossibuprocaina cloridrato allo 0,4% su ciascun occhio, lasciando la soluzione in posizione per tre secondi per anestetizzare e immobilizzare gli occhi.

Quindi, rimuovere le gocce e ripetere l'installazione al 10% di fenilefrina e allo 0,5% di tropicamide. Quando gli occhi sono sufficientemente dilatati per l'imaging, lubrificare gli occhi con colliri a base di glicole viscoso per fornire idratazione corneale e avvolgere il topo in un foglio di garza chirurgica per mantenerlo caldo. Utilizzando una spugna o uno stoppino di cotone, applicare uno strato sottile di gel oftalmico integrato con lo 0,3% di ipromellosa su ciascun occhio.

Nel farlo, metti da parte le ciglia e i baffi. Posizionare il mouse nella cassetta con la testa dritta e rivolta in avanti e posizionare con cura la barra del morso in bocca. Metti un rotolo di cotone sotto il lato dell'animale per l'occhio che viene esaminato.

Quindi, mantenendo la clip sulla punta di puntamento sull'obiettivo specifico del mouse, ruotare la vite del traslatore z in senso antiorario per portare l'obiettivo verso l'occhio. Preimpostare la posizione del mouse ruotando e ruotando la cassetta e ruotando la barra del morso e le viti x-traslatori fino a quando l'occhio sperimentale non è posizionato per guardare direttamente nell'obiettivo. Quando l'asse ottico degli occhi e la lente sono allineati, selezionare la prima scansione dell'esame.

Fare clic su Inizia a mirare e utilizzare la vite Z-Translator per spostare la retina verticalmente nel pannello di sinistra e orizzontalmente nel pannello di destra. Ruotando la cassetta, spostare la testa del nervo ottico verso l'alto o verso il basso per portarla al centro del pannello destro. Utilizzare la vite della barra del morso per raddrizzare la retina all'interno del pannello destro e ruotare la cassetta per posizionare la testa del nervo ottico al centro del pannello sinistro.

Quindi utilizzare la vite x-traslatrice per livellare la retina all'interno del pannello sinistro e, tenendo presente la funzione principale di ciascun modulatore, regolare ulteriormente la posizione della retina per la perfetta centralizzazione sulla testa del nervo ottico. Quando la retina è in posizione, fare clic su Avvia istantanea per iniziare la scansione della tomografia a coerenza ottica del dominio spettrale. Non dimenticare di salvare la scansione e il referto.

Se necessario, regolare la centralizzazione. Al termine della scansione, ritrarre la lente e posizionare il secondo occhio come appena dimostrato. Dopo che il secondo occhio è stato scansionato, rimuovere il mouse dalla cassetta, applicare il gel oftalmico con ipromellosa allo 0,3% su ciascun occhio e posizionare il mouse su una piastra riscaldante con monitoraggio fino al completo recupero.

Per concentrarsi sulle cellule gangliari retiniche, utilizzare la macro dello strumento retina MRI creata per l'immagine J.Aprire lo strumento retina MRI e modificare lo strumento di selezione del poligono e caricare l'immagine di interesse. Fare clic su M per iniziare la misurazione, quindi fare clic su E per regolare la posizione orizzontale. Selezionare la prima cassetta nella finestra di gestione della regione di interesse appena aperta.

Fare clic sul poligono blu e fare clic sui bordi del livello misurato nell'immagine per regolare la posizione della prima cassetta. Selezionare la seconda cassetta nella finestra di gestione della regione di interesse e regolare la seconda cassetta. Quindi fare clic su R per rimisurare la retina e visualizzare i risultati nella finestra delle misurazioni.

Anche se la qualità di una scansione OCT nel dominio spettrale non è buona come quella di un'immagine di una sezione trasversale retinica, l'OCT consente di visualizzare più strati. Gli strati della retina sono facilmente misurabili in una scansione OCT e comprendono la fibra nervosa retinica negli strati delle cellule ganglionari, lo strato nucleare interno, lo strato plessiforme esterno, lo strato nucleare esterno, gli strati del segmento interno ed esterno, l'epitelio pigmentato della retina e la coroide, consentendo uno studio complesso dell'intera retina. La misurazione OCT dello spessore retinico è appena dimostrata, indica che i topi femmina OPA1 geneticamente mutanti con disabilità visiva mostrano un progressivo ispessimento del complesso delle cellule gangliari e degli strati delle fibre nervose della retina peripapillare.

Un confronto della fibra nervosa della retina nello spessore dello strato di cellule gangliari utilizzando calibri standard e fatti in casa, dimostra che i calibri standard misurano uno spessore significativamente inferiore rispetto ai calibri fatti in casa, poiché i calibri standard sono molto più spessi e più difficili da posizionare su un bordo di strato sottile. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in 15 minuti se eseguita correttamente. Dopo il suo sviluppo, l'OCT ha aperto la strada ai ricercatori nel campo dell'oftalmologia per analizzare i cambiamenti strutturali nella retina del topo.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire e analizzare l'imaging OCT per le cellule gangliari della retina nei topi.