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DOI: 10.3791/55932-v
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Questo manoscritto descrive protocolli standard per la misurazione iperfosforilazione di tau, associazione tau ai microtubuli e la localizzazione intracellulare Tau dopo trattamenti farmacologici di misura. Questi protocolli possono essere utilizzati in modo ripetitivo per lo screening di farmaci o altri composti che ottenere tau iperfosforilazione o dei microtubuli associazione.
L'obiettivo generale di questa procedura è studiare la fosforilazione della tau, le capacità di legame dei microtubuli della tau e la localizzazione della tau, utilizzando la microscopia confocale nelle cellule tumorali del colon-retto. Questo metodo può essere efficace per la maggior parte dei campi della ricerca biologica, in particolare la ricerca sul cancro e la demenza, dove la fosforilazione e il legame con i microtubuli sono fattori importanti. Il vantaggio principale del test della fosforatasi presentato è che fornisce un modo semplice per percepire l'intera fosforilazione dei campioni proteici.
Il vantaggio principale del saggio di legame dei microtubuli è che si tratta di una procedura semplice per separare le proteine leganti i microtubuli dalle frazioni non leganti. Tuttavia, i principali vantaggi della tecnica di localizzazione della tau è che richiede una quantità relativamente piccola di anticorpi primari e secondari. Per iniziare questa procedura, preparare tutti i reagenti come indicato nel protocollo di testo.
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