Name: Un modello di mouse geneticamente modificato del cancro colorettale sporadico (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Scopri come stabilire un modello di topo geneticamente modificato per il cancro colorettale mediante infezione segmentale adeno-cre. Questo metodo consente di studiare la biologia e le terapie del CRC con alta riproducibilità.

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Questo lavoro è dedicato alla memoria del professor Moritz Koch.

Gli esperimenti animali qui presentati sono stati riesaminati e approvati in maniera indipendente da un comitato istituzionale e governativo per la cura degli animali e sono stati condotti secondo le linee guida dell&#39;Associazione federale delle scienze animali animali (FELASA). Tutte le misure possibili sono state prese per ridurre al minimo la sofferenza, inclusa l&#39;anestesia e l&#39;analgesia o, se necessario, l&#39;eutanasia precoce. 1. Induzione tumorale locale attraverso l&#39; infezione da Adeno-crea chirurgica <ol><li> Preparazione degli animali per la chirurgia NOTA: Virtualmente qualsiasi mutazione condizionale (&quot;floccata&quot;) può essere indotta dal metodo qui descritto. Si raccomanda l&#39;uso di mutazioni nei geni rilevanti nel cancro del colon-retto come ad esempio Apc, Kras o Tp53. L&#39;efficienza della ricombinazione crea dipende dalla dimensione del costrutto da escludere. Le grandi sequenze floccate vengono escluse in modo meno efficiente. La ricombinazione di tutti gli alleli deve essere confermata nei tumori da parte del PCR. <ol><li> Per lo sviluppo di tumori del colon-retto, utilizzare una croce dei seguenti alleli condizionali per un modello di base di CRC (numero di database MGI tra parentesi): Apc tm2Rak (MGI: 3688435) 16 Kras tm4Tyj (MGI: 2429948) 17 Tp53 tm2Tyj (MGI: 3039263) 18 </li><li> Se è richiesto un allele reporter di fluorescenza ( ad esempio , per rilevare micrometastasi), utilizzare il seguente allele: Gt (ROSA) 26Sor tm6 (CAG-ZsGreen1) Hze (MGI: 3809522) 19 NOTA: Tutti i ceppi sopra sono disponibili tramite il repository NCI Mouse o il laboratorio di Jackson. Nessun digiuno è necessario perché tutta la materia fecale rimanente può essere svuotata prima dell&#39;infezione adenovirale. Il digiuno preoperatorio conduce a una maggiore mortalità perioperatoria e costituisce un tremendo stress per i piccoli roditori. </li><li> Utilizzare sevoflurano a 3 - 3,5 vol% per l&#39;anestesia generale. Una perdita di tIl suo toe ripiegamento pizzico indica un&#39;anestesia sufficiente. </li><li> Prima della prima incisione, iniettare 0.05 mg / kg di buprenorfina sottocutanea. </li><li> Coprire gli occhi del mouse anestetizzato con unguento oculare per evitare la desquamazione della cornea. </li><li> Posizionare il mouse in posizione supina su un piccolo tavolo. Utilizzare nastri adesivi non traumatici per trattenere il mouse. </li><li> Rasare l&#39;addome con un rasoio elettrico (crema depilatoria può essere usato alternativamente) e disinfettare con tamponi di alcol o iodio. Utilizzare il tempo di contatto raccomandato dal produttore. </li><li> Coprire il campo chirurgico con tende sterili. NOTA: l&#39;uso di antibiotici perioperatori è facoltativo e soggetto a linee guida istituzionali. </li><li> Utilizzare sterili singoli usi o strumenti sterilizzati per tutte le procedure chirurgiche. </li></ol></li><li> Laparotomia midline e esposizione del colon <ol><li> Utilizzare forbici (possono essere usati alternativamente scalpelli) per eseguire un&#39;incisione midline(~ 15 mm) della pelle sull&#39;addome inferiore. </li><li> Raccogliete la muscolatura della parete addominale con le pinze e incisi con cura con forbici, aprendo così la cavità addominale. </li><li> Identificare il colon distale, toccarla solo con pinze atraumatiche. Morsetti il ​​colon con un morsetto delicato ( ad es . Un morsetto vascolare Micro Serrefine) circa 15 mm in prossimità dell&#39;ano. NOTA: prestare particolare attenzione alla vulnerabilità del colon in ogni momento. La perforazione porta inevitabilmente alla peritonite e alla sepsi e richiede l&#39;eutanasia dell&#39;animale. </li></ol></li><li> Infezione segmentale del colon con virus Adeno-cre <ol><li> Inserire un tubo flessibile di Teflon in modo transanale e accuratamente avanzarlo fino a raggiungere l&#39;occlusione del lumen raggiunta dal morsetto precedentemente posizionato a 15 mm dall&#39;orlo anale. Non utilizzare una forza eccessiva in quanto ciò può portare alla perforazione. </li><li> Canottare il tubo con una cannula da 30G, collegare una siringa standard da 1 ml e scuotere il coloN con normale soluzione salina per evacuare la restante materia fecale. Ciò può richiedere diversi ml di soluzione salina. </li><li> Una volta che il colon distale è vuoto togliere il tubo e sostituirlo con un nuovo tubo in teflon e posizionarlo nuovamente distalmente al morsetto come sopra descritto. </li><li> Collocare il colon con un secondo morsetto distanziato di circa 3 mm dal morsetto prossimale ( cioè sopra il tubo inserito, ~ 12 mm dal bordo anale), con conseguente infezione di un segmento isolato da 3 mm. NOTA: per l&#39;occlusione distale del segmento Le clip di arterie coronarie di Fogarty si sono dimostrate più idonee in quanto sono gommate, portando ad una occlusione stretta del colon nonostante il tubo intralumino tra i rami del morsetto. </li><li> Usare una seconda siringa (standard 1 mL con una cannula da 30G) per iniettare con cura 50-80 μL di 0,25% di Trypsin-EDTA nel segmento del colon bloccato e incubare per 10 minuti. Lasciare la cannula e la siringa attaccata al tubo in teflon per evitare che il liquido venisse ripreso. <bR /&gt; NOTA: il colon deve essere gonfiato per rompere la barriera della mucosa e per raggiungere le cellule staminali della cripta, ma non troppo gonfiato per evitare la perforazione del segmento bloccato. </li><li> Primo rimuovere il morsetto distale e poi il tubo di tripsina. </li><li> Spurgare il colon distale con ~ 500 μl di soluzione salina normale per rimuovere la restante tripsina. </li><li> Inserire un nuovo tubo di Teflon, mettere il morsetto distale in posizione e gonfiare il segmento del colon con 50-80 μL di soluzione adenovirale (10 11 unità di formazione di placche (PFU) / mL in soluzione salina fosfata) e incubare per 30 min Figura 2A ). NOTA: Non versare la soluzione virale come contatto con adeno-cre può portare allo sviluppo del tumore in qualsiasi tessuto di topi condizionatamente condizionati. </li><li> Rimuovere i morsetti e il tubo. </li></ol></li><li> Chiusura dell&#39;addome e recupero postoperatorio <ol><li> Chiudere la parete addominale con 6-0 rapidamente assorbibili su su(Ad esempio , polidioxanone (PDS)). </li><li> Chiudere la pelle con le ferite chirurgiche. </li><li> Posizionare il mouse sul pannello di riscaldamento impostato a 38 ° C finché non sia completamente recuperato dall&#39;anestesia. </li><li> Amministrare un altro bollo di 0,05 mg / kg di buprenorfina ip 12 ore dopo l&#39;intervento chirurgico, seguita da bolus addizionali di buprenorfina ogni 12 ore se necessario. </li><li> Monitorare i topi almeno una volta al giorno per segni di sofferenza a causa della crescita del tumore. </li></ol></li></ol> 2. Colonscopia NOTA: A seconda delle mutazioni condizionali utilizzate, l&#39;infezione adenovirale porta a tumori endoscopicamente visibili entro 2 - 4 settimane. Pertanto eseguire la prima colonscopia postoperatoria 2 settimane dopo l&#39;induzione adenovirale e ripetere ogni 2 settimane. Si raccomanda un sistema commercialmente disponibile per la colonscopia murina. 20 <ol><li> Preparazione degli animali per colonscopia NOTA: nessun digiuno è richiestoed. La rimanente materia fecale è generalmente ben formata nel colon distale e può essere spinta al di là del tumore durante la colonscopia, rendendo così inutile il processo stressante del ripetuto digiuno. <ol><li> Utilizzare sevoflurano a 3 - 3,5 vol% per l&#39;anestesia generale. Una perdita del riflesso del pizzico del piede indica un&#39;anestesia sufficiente. </li><li> Coprire gli occhi dei topi anestetizzati con unguento oculare per evitare la desquamazione della cornea. </li><li> Restringere i topi in posizione supina su un piccolo tavolo. </li></ol></li><li> Colonscopia <ol><li> Inserire il campo d&#39;azione (diametro 1,9 mm, lunghezza 10 cm) nel tratto intestinale attraverso l&#39;ano e con aria accuratamente insufflato sotto controllo visivo per distendere il colon. Non insufflate più aria di quanto richiesto per l&#39;esame. NOTA: per l&#39;insufflazione dell&#39;aria, può essere utilizzata la pompa dell&#39;aria anti-nebbia del sistema di colonscopia. Se non è disponibile una pompa dell&#39;aria anti-nebbia, è possibile utilizzare qualsiasi altro pompa ad aria con impostazioni di pressione molto basse o preAria compressa con una delicata valvola di riduzione della pressione. L&#39;anidride carbonica (CO 2 ) porta facilmente all&#39;acidosi nei piccoli roditori e deve quindi essere evitato. </li><li> Spingere con attenzione la portata in avanti fino a individuare una lesione mucosa nel distro distale ( Figura 1A - 1D ). </li><li> Salva immagini endoscopiche per una valutazione successiva. Un sistema di punteggio endoscopico per tumori intraluminali è stato descritto in precedenza. 20 </li><li> Rimuovere attentamente la portata e posizionare il mouse sul pannello di riscaldamento impostato a 38 ° C finché non sia completamente recuperato dall&#39;anestesia. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+statistics%2C+2016%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Cancer statistics, 2016.</a> CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).</li>
<li>Weitz, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15639298">Colorectal cancer.</a> Lancet. 365 (9454), 153-165 (2005).</li>
<li>Bork, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+relevance+of+minimal+residual+disease+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Prognostic relevance of minimal residual disease in colorectal cancer.</a> World J Gastroenterol. 20 (30), 10296-10304 (2014).</li>
<li>Steinert, G., Schölch, S., Koch, M., Weitz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+and+significance+of+circulating+and+disseminated+tumour+cells+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Biology and significance of circulating and disseminated tumour cells in colorectal cancer.</a> Langenbecks Arch Surg. 397 (4), 535-542 (2012).</li>
<li>García, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDB1+overexpression+is+a+negative+prognostic+factor+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">LDB1 overexpression is a negative prognostic factor in colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (51), 84258-84270 (2016).</li>
<li>van Noort, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Drug+Candidates+for+the+Treatment+of+Metastatic+Colorectal+Cancer+through+Global+Inverse+Gene-Expression+Profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Novel Drug Candidates for the Treatment of Metastatic Colorectal Cancer through Global Inverse Gene-Expression Profiling.</a> Cancer Res. 74 (20), 5690-5699 (2014).</li>
<li>Nanduri, L. K., García, S., Weitz, J., Schölch, S. <a target="_blank" href="https://www.omicsonline.org/peer-reviewed/mouse-models-of-colorectal-cancerderived-circulating-tumor-cells-76740.html">Mouse Models of Colorectal Cancer-Derived Circulating Tumor Cells.</a> Med Chem (Los Angeles). 6 (7), 497-499 (2016).</li>
<li>Taketo, M. M., Edelmann, W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19263594">Mouse models of colon cancer.</a> Gastroenterology. 136 (3), 780-798 (2009).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+tumor+cells+exhibit+stem+cell+characteristics+in+an+orthotopic+mouse+model+of+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Circulating tumor cells exhibit stem cell characteristics in an orthotopic mouse model of colorectal cancer.</a> Oncotarget. 7 (19), 27232-27242 (2016).</li>
<li>Schölch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiotherapy+combined+with+TLR7%2F8+activation+induces+strong+immune+responses+against+gastrointestinal+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Radiotherapy combined with TLR7/8 activation induces strong immune responses against gastrointestinal tumors.</a> Oncotarget. 6 (7), 4663-4676 (2015).</li>
<li>Corbett, T. H., Griswold, D. P., Roberts, B. J., Peckham, J. C., Schabel, F. M. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+induction+relationships+in+development+of+transplantable+cancers+of+the+colon+in+mice+for+chemotherapy+assays%2C+with+a+note+on+carcinogen+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor induction relationships in development of transplantable cancers of the colon in mice for chemotherapy assays, with a note on carcinogen structure.</a> Cancer Res. 35 (9), 2434-2439 (1975).</li>
<li>Roper, J., Hung, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priceless+GEMMs%3A+genetically+engineered+mouse+models+for+colorectal+cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol+Sci%22%5BJournal%5D)">Priceless GEMMs: genetically engineered mouse models for colorectal cancer drug development.</a> Trends Pharmacol Sci. 33 (8), 449-455 (2012).</li>
<li>Hung, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+mouse+model+for+sporadic+and+metastatic+colon+tumors+and+its+use+in+assessing+drug+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+USA%22%5BJournal%5D)">Development of a mouse model for sporadic and metastatic colon tumors and its use in assessing drug treatment.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 107 (4), 1565-1570 (2010).</li>
<li>Sharpless, N. E., Depinho, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mighty+mouse%3A+genetically+engineered+mouse+models+in+cancer+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development.</a> Nat Rev Drug Discov. 5 (9), 741-754 (2006).</li>
<li>Shibata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+colorectal+adenoma+formation+initiated+by+conditional+targeting+of+the+Apc+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Rapid colorectal adenoma formation initiated by conditional targeting of the Apc gene.</a> Science. 278 (5335), 120-123 (1997).</li>
<li>Kuraguchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenomatous+polyposis+coli+%28APC%29+is+required+for+normal+development+of+skin+and+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Adenomatous polyposis coli (APC) is required for normal development of skin and thymus.</a> PLoS Genet. 2 (9), e146(2006).</li>
<li>Jackson, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+lung+tumor+initiation+and+progression+using+conditional+expression+of+oncogenic+K-ras%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Analysis of lung tumor initiation and progression using conditional expression of oncogenic K-ras.</a> Genes Dev. 15 (24), 3243-3248 (2001).</li>
<li>Olive, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutant+p53+gain+of+function+in+two+mouse+models+of+Li-Fraumeni+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mutant p53 gain of function in two mouse models of Li-Fraumeni syndrome.</a> Cell. 119 (6), 847-860 (2004).</li>
<li>Madisen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nature Neurosci. 13 (1), 133-140 (2010).</li>
<li>Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+resolution+colonoscopy+in+live+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">High resolution colonoscopy in live mice.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2900-2904 (2006).</li>
<li>Moser, A. R., Pitot, H. C., Dove, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dominant+mutation+that+predisposes+to+multiple+intestinal+neoplasia+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A dominant mutation that predisposes to multiple intestinal neoplasia in the mouse.</a> Science. 247 (4940), 322-324 (1990).</li>
<li>de Wind, N., Dekker, M., Berns, A., Radman, M., te Riele, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+the+mouse+Msh2+gene+results+in+mismatch+repair+deficiency%2C+methylation+tolerance%2C+hyperrecombination%2C+and+predisposition+to+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inactivation of the mouse Msh2 gene results in mismatch repair deficiency, methylation tolerance, hyperrecombination, and predisposition to cancer.</a> Cell. 82 (2), 321-330 (1995).</li>
<li>Reitmair, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+intestinal+carcinomas+and+skin+neoplasms+in+Msh2-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Spontaneous intestinal carcinomas and skin neoplasms in Msh2-deficient mice.</a> Cancer Res. 56 (16), 3842-3849 (1996).</li>
<li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).</li>
<li>Jensen, T. L., Kiersgaard, M. K., Sørensen, D. B., Mikkelsen, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fasting+of+mice%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Fasting of mice: a review.</a> Lab Anim. 47 (4), 225-240 (2013).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Mentre sono generalmente facili da generare e mantenere, i modelli classici di CRC basati sull&#39;iniezione della linea cellulare sono artificiali e non sono in grado di ricapitolare completamente la malattia umana. Di conseguenza, i GEMM sono stati sviluppati. Il primo GEMM CRC era il mouse Apc Min , che ospita una mutazione null eterozigote nel gene Apc, quindi imitando la poliposi adenomatica familiare familiare (FAP) della malattia ereditaria umana. Tuttavia, i topi Apc Min sviluppano invariab...

Il cancro del colon-retto (CRC) continua ad essere una delle cause principali della morte correlata ai tumori nei paesi occidentali. 1 Mentre la prognosi dei pazienti con malattia precoce è buona, molti tumori vengono diagnosticati in fasi successive in cui, nonostante numerose opzioni di trattamento, la prognosi è limitata. 2 , 3 , 4 , 5 La maggior parte dei modelli di mouse correnti del CRC si basa sull&#39;impianto di cellule tumorali derivate da linee cellulari o tumori del paziente in topi immunodeficienti. 6 , 7 , 8 Questo porta a locali e, a seconda del sito di iniezione e delle cellule tumorali utilizzate per l&#39;iniezione, a volte tumori metastatici. 9 , 10 Tuttavia, i modelli risultanti di xenograft hanno majoR limitazioni. Devono essere stabiliti in topi immunodeficienti, eliminando così l&#39;interazione complessa tra il tumore e il sistema immunitario ospitante. Inoltre, poiché lo stroma tumorale è derivato da cellule ospitanti, l&#39;interazione tra parenchima tumorale umana e stroma murina è difettosa e quindi non rappresentativa della malattia. Queste carenze possono essere evitate con l&#39;uso di linee cellulari murine per l&#39;iniezione. Tuttavia, solo alcune linee di cellule CRC murine sono disponibili e, simili alla maggior parte delle linee cellulari CRC umane disponibili, sono monoclonali e altamente anaplatiche. 11 In sintesi, la maggior parte dei modelli CRC attualmente disponibili sono altamente artificiali e non rappresentano pienamente rappresentativi della malattia umana. I modelli di topi geneticamente modificati (GEMM) di CRC possono evitare questi inconvenienti in quanto presentano tumori di mouse genuini che vengono creati attraverso l&#39;induzione di mutazioni chiave del CRC nel colon. 12 , 13 ,14 Ciò può essere ottenuto mediante l&#39;attivazione di mutazioni della germinazione condizionale (floxed) mediante la ricombinasi all&#39;interno della mucosa colorettale. Mentre in GEMM di molte altre entità del tumore si utilizza l&#39;espressione germinale (inducibile) creata da promotori specifici del tessuto, la creazione di germline cre non può essere utilizzata nel colon come questo porta ad un gran numero di adenomi in tutto il colon causando la morte per carico tumorale benigno Un&#39;età molto giovane. Pertanto, nel modello qui descritto, un virus adenovirale che esprime l&#39;espressione cre è usato per infettare un segmento corto di due punti. Ciò porta all&#39;induzione della tumorigenesi all&#39;interno di questo segmento della mucosa in un punto temporale definito dall&#39;individuo, con conseguente adenoma in ultima analisi che procede al carcinoma invasivo e metastatico. I tumori sono tumori genuini del topo, crescono in un microambiente intatto e quindi sono in grado di simulare l&#39;intero oncogenesis del colon-retto, tra cui l&#39;interazione tumor-host e la cascata metastatica. Questo modello èQuindi una piattaforma interessante per studi sulla biologia del cancro e sulle prove terapeutiche precliniche. Uno svantaggio maggiore dei modelli di topi geneticamente modificati del CRC è la loro complessità tecnica. La distribuzione locale cre crea con clistere rettale adeno-cre nei topi che trasportano alleli APc floccati è stata descritta prima; Tuttavia, l&#39;incidenza, la molteplicità e l&#39;ubicazione dei tumori intestinali possono essere molto variabili con questa tecnica. Pertanto, è stata sviluppata la tecnica di limitare l&#39;infezione da adeno-cre mediante bloccaggio chirurgico del segmento da indurre. 13 Abbiamo modificato questa procedura per migliorare il benessere degli animali, ridurre la mortalità e il numero di tumori che ne derivano. Con questo protocollo, tutti i laboratori con esperienza in piccole chirurgia di roditori dovrebbero poter riprodurre il modello e produrre tumori altamente riproducibili e facilmente accessibili alla colonscopia. A seconda del condizionale mSi possono osservare utature utilizzate per tumorigenesi, l&#39;intero spettro di adenoma, carcinoma invasivo e metastasi. Poiché i tumori si trovano nel colon distale, la valutazione endoscopica seriale è facilmente possibile in questo modello.

<table><tbody><tr><td><forte>Reagenti / materiali di consumo</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>14190169</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%, Phenol-Red)</td><td>Life Technologies GmbH</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina normale 0,9% (E154)</td><td>Serumwerk Bernburg AG</td><td>10013</td><td></td></tr><tr><td>Aqua ad injectabilia</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>235144</td><td></td></tr><tr><td>Ad5CMV-Cre (adenovirus, c = 2E+11 PFU/mL)</td><td>Gene Transfer Vector Core University of Iowa</td><td></td><td></td></tr><tr><td>15 mL, 50 mL provette per centrifuga</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>188271/227270</td><td></td></tr><tr><td>Provette Eppendorf 1,5 mL/ 2 mL</td><td>Sarstedt AG & Co.</td><td>72.695.400</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di Petri PS 100/15 mm (sterile, Nuclon)</td><td>Fisher Scientific GmbH</td><td>10508921/ NUNC150350</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da 1 mL (senza volume morto) - Injekt-F SOLO Braun</td><td>/neoLab</td><td>194291661</td><td></td></tr><tr><td>30G ago per iniezione</td><td>BECTON DICKINSON</td><td>304000</td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Azienda</td><td>Numero di catalogo</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Analgesia / anestesia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sevoflurane (Sevoflurane AbbVie)</td><td>AbbVie Germany GmbH & Co. KG-Ossigeno</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>medico</td><td>Air Liquide Medical</td><td></td> GmbH-Buprenorfina <td></td></tr><tr><td>(Temgesic)</td><td>Indivior Eu Ltd.</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Bepanthen - unguento oftalmico</td><td>Bayer Vital GmbH</td><td>10047757</td><td></td></tr><tr><td>Macchina per anestesia da tavolo x / O2 Flush con vaporizzatore di sevoflurano</td><td>Parkland Scientific</td><td>V3000PS / PK</td><td></td></tr><<tr><td>strong> Nome</td><td> Azienda</td> <td> Numero di catalogo</td><td> Comments</td></tr><tr><td>Attrezzature chirurgiche</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tamponi di cellulosa</td><td>Lohmann & Rauscher Deutschland</td><td>13356</td><td></td></tr><tr><td>Siringa da insulina EMG 1 mL (con cannula da 30 G)</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>9161627S</td><td></td></tr><tr><td>Tubo a foro fine (alesaggio: 0,28 mm/ diametro: 0,61 mm)</td><td>Smiths Medical Deutschland</td><td>800/100/100</td><td></td></tr><tr><td>Forcipe Micro-Adson</td><td>Strumenti per la scienza fine</td><td>11018-12</td><td></td></tr><tr><td>Forbice per iride - Strumenti per</td> la <td>scienza fine</td> ToughCut <td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Olsen-Hegar Portaaghi</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>AutoClip</td><td>Kit Fine Science Tools</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>PDS Z1012H 6/0 C1 (sutura chirurgica)</td><td>Johnson & Johnson Medical GmbH</td><td>Z1012H</td><td></td></tr><tr><td>Morsetto vascolare curvo Micro Serrefine</td><td>Fine Science Tools</td><td>18055-05</td><td></td></tr><tr><td>Clip a molla Fogarty Edwards</td><td>CDSAFE 6</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piastra riscaldante 062</td><td>Labotect</td><td>13854</td><td></td></tr><tr><td>Isis - Rasoio per capelli</td><td>Aesculap - Braun</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>Nome</td><td>Azienda</td><td>Numero di catalogo</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Colonscopia</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fontana a luce fredda XENON 175 SCB</td><td>Karl Storz</td><td>20132101-1</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>Cavo a fibra ottica</td><td>Karl Storz</td><td>69495NL</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>TRICAM Testa telecamera a tre chip</td><td>Karl Storz</td><td>20221030</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>TRICAM SLII Unità di controllo telecamera</td><td>Karl Storz</td><td>20223011-1</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>Monitor a schermo piatto da 15" EndoVue</td><td>Karl Storz</td><td>9415NN</td><td>Karl Storz Coloview System Mainz</td></tr><tr><td>Telescopio dritto HOPKINS diametro 1,9 mm; lunghezza 10 cm autoclavabile trasmissione della luce in fibra ottica incorporata</td><td>Karl Storz</td><td>64301AA</td><td></td></tr><tr><td>Guaina di protezione e visita</td><td>Karl Storz</td><td>61029C</td><td></td></tr></tbody></table>

un modello di mouse geneticamente modificato del cancro colorettale sporadico

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Nonostante i vantaggi di una facile applicabilità e di un rapporto costo-efficacia, i modelli del topo tumorale colorato a base di iniezione di cellule tumorali hanno gravi limitazioni e non simulano accuratamente la biologia tumorale e la diffusione delle cellule tumorali. I modelli del mouse geneticamente modificati sono stati introdotti per superare questi limiti; Tuttavia, tali modelli sono tecnicamente impegnativi, specialmente in grandi organi come il colon in cui è desiderato un solo tumore. Di conseguenza, è stato sviluppato un modello di topo immunocompetente, geneticamente modificato del cancro del colon-retto, che sviluppa tumori altamente uniformi e può essere utilizzato per studi di biologia tumorale, nonché studi terapeutici. Lo sviluppo del tumore è iniziato dall&#39;infezione chirurgica, segmentale del colon distale con virus adeno-cre in topi condizionati condizionatamente mutanti. I tumori possono essere facilmente rilevati e monitorati tramite colonscopia. Qui descriviamo la tecnica chirurgica dell&#39;infezione segmentale di adeno-creIl colon, la sorveglianza del tumore mediante colonscopia ad alta risoluzione e presentare i tumori colorettali risultanti.

Se eseguita adeguatamente,&gt; 85% degli animali sviluppa tumori. La mortalità della procedura chirurgica qui presentata è &lt;5%, la mortalità della colonoscopia è praticamente inesistente. Nella maggior parte dei topi è stata individuata una singola lesione; In circa il 30% possono essere rilevati 2 - 3 piccoli adenomi che si fondono di solito in un unico tumore entro 2-3 settimane dall&#39;insorgenza del tumore. Il fenotipo...

Viene presentato un protocollo per la creazione di un modello di topi geneticamente modificato del cancro del colon-retto mediante infezione adenocarica segmentale e la sua sorveglianza mediante colonscopia ad alta risoluzione.

Un modello di mouse geneticamente modificato del cancro colorettale sporadico

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

L'obiettivo generale di questa procedura è ottenere un'infezione adeno-cre segmentale del colon in un modello murino geneticamente modificato. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo del cancro colorettale, o CRC, poiché fornisce un eccellente modello per lo studio della biologia e del trattamento del CRC. Il principale vantaggio di questa tecnica è che qualsiasi laboratorio con esperienza in chirurgia di piccoli roditori può utilizzare questo modello per produrre tumori localizzati nel colon altamente riproducibili e facilmente accessibili.Posizionare innanzitutto un topo anestetizzato in posizione supina e applicare un unguento sugli occhi dell'animale. Fissare il topo in una posizione sicura e quindi verificare il livello appropriato di sedazione pizzicando l'alluce. Praticare un'incisione mediana di circa 15 millimetri a livello della cute dell'addome inferiore.Quindi, utilizzare una pinza per afferrare la muscolatura della parete addominale e praticare con cura un'incisione nel muscolo con le forbici per aprire la cavità addominale. Dopo aver identificato il colon distale, stringere delicatamente il tessuto con una pinza fine approssimativam

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Ricerca

JoVE Journal

Cancer Research

Ricerca sul cancro

Due tecniche possono essere usate per stabilire questo modello: l'iniezione di una sospensione di cellule tumorali nella parete del cieco o il trapianto di un pezzo di tumore sottocutaneo sul cieco. Questo modello è utile per studiare la naturale progressione del tumore del colon-retto e test nuovi agenti terapeutici contro il cancro del colon-retto.

Topo Modello ortotopico di cancro colorettale

Dimostriamo un protocollo in cui somministrazione del azoxymethane agente genotossico (AOM) seguito da tre cicli di pro-infiammatoria agente destrano solfato di sodio (DSS) rapidamente e genera costantemente tumori del colon in topi con somiglianze morfologiche e molecolari a quelli osservati negli colite umana cancro-associata.

Modellazione Colite-Associated Cancro con azoxymethane (OMA) e sodio solfato destrano (DSS)

Questo video descrive il protocollo per la generazione di un modello murino di cancro colorettale xenotrapianto ortotopico derivato da paziente per studiare la progressione delle cellule tumorali del colon-retto in topi diabetici/immunodeficienza combinata grave (NOD/SCID) non obesi. Questo modello murino aiuta a comprendere la crescita del tumore primario e il modello di metastasi.

Generazione di un modello murino PDOX del cancro del colon-retto: studio della progressione del cancro del colon-retto in un modello murino

Questo video descrive il protocollo per stabilire un modello murino di metastasi spontanee di xenotrapianti derivati da pazienti con cancro del colon-retto o PDX. Questi modelli di xenotrapianto imitano parzialmente le caratteristiche dei carcinomi umani e comprendono gli aspetti critici delle neoplasie maligne umane, tra cui l'invasione e le metastasi.

Modelli murini di metastasi spontanee: una piattaforma per studiare il potenziale metastatico delle cellule di cancro colorettale iniettate ortotopicamente

Questo video descrive la generazione di un modello murino colorettale mediante infezione segmentale da adeno-cre. Il segmento del colon infetto porta alla tumorigenesi all'interno di questo segmento della mucosa, con conseguente progressione degli adenomi in carcinoma invasivo e metastatico. Questo modello è una piattaforma interessante per studi di biologia del cancro e studi terapeutici preclinici.

Infezione segmentaria da adeno-cre: una tecnica per generare un cancro del colon-retto isolato utilizzando modelli murini geneticamente modificati

Descriviamo la creazione di tumori colorettali ortotopici attraverso l'iniezione di cellule tumorali o organoidi nel cecum dei topi e il successivo isolamento di cellule tumorali circolanti (CTC) da questo modello.

Isolamento delle cellule tumorali circolanti in un modello di topo ortotopico del tumore del colon-retto

L'obiettivo di questo manoscritto è quello di descrivere il modello murino KitV558Δ/+ e le tecniche per la dissezione e l'elaborazione di campioni di topo.

Tecniche molecolari e immunologiche in un modello murino geneticamente modificato di tumore stromale gastrointestinale

Questo protocollo descrive l'impianto ortotopico di cellule tumorali derivate dal paziente nella parete cieca di topi immunodeficienti. Il modello ricapitola la malattia metastatica del carcinoma colorettale avanzato e consente la valutazione di nuovi farmaci terapeutici in uno scenario clinicamente rilevante di metastasi polmonari ed epatiche.

L'impianto ortotopico di cellule tumorali derivate dal paziente nei topi ricapitola il cancro colorettale avanzato

Questo studio si concentra sull'induzione sottocutanea in vivo di cellule tumorali colorettali luminescenti in un modello murino e sulla successiva misurazione della luminescenza utilizzando un sistema di imaging. La procedura mira a stabilire un modello di crescita tumorale riproducibile per il monitoraggio in tempo reale e la valutazione terapeutica.

Iniezione sottocutanea di cellule tumorali del colon-retto umano in topi nudi atimici per valutare l'efficacia antitumorale

Qui viene presentata una procedura per impiantare cellule tumorali pancreatiche che esprimono proteine fluorescenti verdi (PANC-1 GFP) ortotopicamente nel pancreas di topi Balb-c Ola Hsd-Fox1nu per valutare la progressione del tumore e le metastasi.

Fluorescente ortotopico modello murino di cancro al pancreas

Scopri come stabilire un modello di topo geneticamente modificato per il cancro colorettale mediante infezione segmentale adeno-cre. Questo metodo consente di studiare la biologia e le terapie del CRC con alta riproducibilità.

Un modello di mouse geneticamente modificato del cancro colorettale sporadico

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