Name: Effetti dellesposizione di formaldeide per un modello del ratto della dermatite atopica indotta dal trattamento neonatale capsaicina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-27T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 47 s
Description: Scopri come indurre sintomi simili alla dermatite atopica nel ratto con trattamento neonatale di capsaicina e valutare gli effetti dell'esposizione alla formaldeide. Questo metodo aiuta a studiare la patofisiologia della dermatite atopica.

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Questa ricerca è stata sostenuta dal pubblico benessere &#38; programma di ricerca di sicurezza attraverso National Research Foundation di Corea (NRF) finanziato dal Ministero dell'istruzione, della scienza e della tecnologia (NRF-2014M3C8A5030612) e supportato da The Chung Yang, Cha Young Sole, M.D. e Jang Ciao Joo Yeu Sa Memorial Fund.

tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dalla International Animal Care e uso Committee (IACUC) della Korea University College di medicina. 6 settimane dopo la nascita, gli sperimentatori possono indurre enthansasia e raccogliere vari campioni quali la pelle ed il siero dei ratti.
 1. induzione di annuncio di trattamento neonatale di capsaicina <ol><li>per preparare 5 mg/mL soluzione di capsaicina, aggiungere 50 mg di capsaicina a 1 mL di Tween 80 e 1 mL di etanolo al 100% in una provetta conica da 15 mL.</li>
	<li>Aggiungere 8 mL di soluzione fisiologica normale tubo conico. Agitare vigorosamente il tubo fino a quando non gli strati separati sono visibili</li> <li>iniettare la soluzione di capsaicina (10 µ l/g) nel tessuto sottocutaneo, sulla linea mediana e posteriore del collo di un ratto Sprague-Dawley neonatale.
	<ol><li>Consegnare la capsaicina compresa fra 12 48 h dopo la nascita (critico). 
		Nota: Se l'iniezione è in ritardo di più di un paio di giorni, non si svilupperà dermatite o verrà mantenute solo per poche settimane. Se l'iniezione è troppo presto, distress respiratorio può verificarsi a causa di dolore severo.</li>
		<li>Per prevenire ratti neonatali da arresto respiratorio a causa dell'iniezione di capsaicina, spingere la cassa dei neonati per incoraggiare la respirazione o tenere i neonati in una camera di ossigeno fino a quando la respirazione diventa normale. quanto dolore capsaicina-indotto può scoraggiare la respirazione, l'aggiunta di anestesia generale, difficoltà di respirazione possibilmente potrebbe peggiorare. Così, gli sperimentatori non devono utilizzare anesthesics per aumentare la sopravvivenza dei ratti.</li>
	</ol></li></ol> 2. Valutazione del prurito e dermatite in un modello del ratto dell'annuncio <ol><li>misura del prurito contando comportamento spontaneo graffio <ol><li>preparare plastica chambers (20 x 30 cm x 20 cm) dotato di uno specchio per consentire per una copertura completa per la visualizzazione e fori per permettere i ratti di respirare.</li>
		<li>Set up e regolare una videocamera digitale correttamente per registrare le visite di specchio e viste frontali dei ratti simultaneamente.</li>
		<li>Ratti posto nella plastica dell'alloggiamento e coprire il soffitto della camera con un oggetto pesante per impedire l'apertura di.</li>
		<li>Registrare i comportamenti spontanei dei ratti per 1 h, riprodurre i clip video e contare il numero di comportamenti di grattarsi.</li>
	</ol></li> <li>Valutazione della lesione cutanea usando un sistema di raschiatura <ol><li>porre il ratto nella camera induzione.</li>
		<li>Girare il flussometro ossigeno a 2 L/min portata e regolare il vaporizzatore di isoflurane al 3% per l'anestesia.</li>
		<li>Identificare la portata e la gravità della dermatite nelle orecchie e altre parti di un ratto.</li>
		<li>Definire la dimensione dell'unità per la misura delle lesioni cutanee come 0,25 cm 2 e la severità delle lesioni cutanee dalla seguente tabella 1: Indice di gravità; grado di Punteggio di dermatite moltiplicando la portata e la gravità (Vedi punteggio di dermatite in < forte classe = "xfig" > Figura 1B).</li>
	</ol></li></ol> 3. Esposizione del gassoso FA agli animali <ol><li>preparazione della camera per inalazione <ol><li>preparare una scatola di vetro acrilico (55 cm x 40 cm x 35 cm) che ha due punti vendita su lati opposti.</li>
		<li>Attenzione. Per la circolazione di gas FA, posizionare la presa superiore l'ingresso e rendere la dimensione della presa più grande di quello della bocca di.</li>
		<li>Attenzione. Per la misurazione della concentrazione di gas interno, su un altro lato delle uscite, trapano tre piccoli passaggi, che possono essere chiuso.</li>
		Tubi di <li>Connetti ad entrambe le prese. Posizionare un tubo di scarico cappa di circolazione o all'esterno dell'edificio per l'emissione del gas e collegare l'altro tubo di presa a un regolatore di ossigeno medicale.</li>
		<li>Posto una gabbia per ratti convenzionali dentro la scatola di vetro acrilico.</li>
		<li>Mettere ratti nella gabbia da una settimana dopo la nascita per 5 settimane (2 ore al giorno e 5 giorni/settimana).</li>
		<li>Sigillare la scatola di vetro acrilico più strettamente possibile per evitare perdite di gas. 
		Nota: Per a tenuta ermetica, il coperchio della camera dovrebbe contenere in gomma. Applicare la pellicola trasparente per avvolgere il vano per il sigillamento stretto.</li>
	</ol></li> <li>Generazione di gassoso FA utilizzando un regolatore di ossigeno medicale <ol><li>sciogliere 5 g di FA in 1 L di acqua.</li>
		<li>Mettere la soluzione FA 0,5% in bottiglia umidificatore del regolatore ossigeno medicale.</li>
		<li>Dopo aver collegato il tubo di ingresso del regolatore di accendere il regolatore e impostare la velocità di flusso a 5 L/min.</li>
		<li>Regolare la concentrazione della soluzione e la percentuale di flusso per determinare la concentrazione di gas nell'alloggiamento.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergy+and+hypersensitivity.+Nature+versus+nurture+in+allergy+and+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Allergy and hypersensitivity. Nature versus nurture in allergy and hypersensitivity.</a> Curr Opin Immunol. 15 (6), 603-608 (2003).</li>
<li>Novak, N., Bieber, T., Leung, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+mechanisms+leading+to+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immune mechanisms leading to atopic dermatitis.</a> The J Allergy Clin Immunol. 112 (Suppl 6), S128-S139 (2003).</li>
<li>Back, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronically+relapsing+pruritic+dermatitis+in+the+rats+treated+as+neonate+with+capsaicin%3B+a+potential+rat+model+of+human+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dermatol+Sci%22%5BJournal%5D)">Chronically relapsing pruritic dermatitis in the rats treated as neonate with capsaicin; a potential rat model of human atopic dermatitis.</a> J Dermatol Sci. 67 (2), 111-119 (2012).</li>
<li>Jin, H., He, R., Oyoshi, M., Geha, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Animal models of atopic dermatitis.</a> J Invest Dermatol. 129 (1), 31-40 (2009).</li>
<li>Han, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde-Induced+Aggravation+of+Pruritus+and+Dermatitis+Is+Associated+with+the+Elevated+Expression+of+Th1+Cytokines+in+a+Rat+Model+of+Atopic+Dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde-Induced Aggravation of Pruritus and Dermatitis Is Associated with the Elevated Expression of Th1 Cytokines in a Rat Model of Atopic Dermatitis.</a> PLOS ONE. 11 (12), e0168466(2016).</li>
<li>Xu, B., Aoyama, K., Takeuchi, M., Matsushita, T., Takeuchi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+cytokine+mRNAs+in+mice+cutaneously+exposed+to+formaldehyde%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Lett%22%5BJournal%5D)">Expression of cytokine mRNAs in mice cutaneously exposed to formaldehyde.</a> Immunol Lett. 84 (1), 49-55 (2002).</li>
<li>Kim, J. Y., Jeong, M. S., Park, K. Y., Seo, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggravation+of+atopic+dermatitis-like+symptoms+by+consecutive+low+concentration+of+formaldehyde+exposure+in+NC%2FNga+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Aggravation of atopic dermatitis-like symptoms by consecutive low concentration of formaldehyde exposure in NC/Nga mice.</a> Exp Dermatol. 22 (3), 219-221 (2013).</li>
<li>Laske, N., Niggemann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Does+the+severity+of+atopic+dermatitis+correlate+with+serum+IgE+levels%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Does the severity of atopic dermatitis correlate with serum IgE levels?</a> Pediatr Allergy Immunol. 15 (1), 86-88 (2004).</li>
<li>Fujii, Y., Takeuchi, H., Sakuma, S., Sengoku, T., Takakura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+2%2C4-dinitrochlorobenzene-induced+chronic+dermatitis+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Pharmacol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of a 2,4-dinitrochlorobenzene-induced chronic dermatitis model in rats.</a> Skin Pharmacol Physiol. 22 (5), 240-247 (2009).</li>
<li>Sugimoto, T., Xiao, C., Ichikawa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neonatal+primary+neuronal+death+induced+by+capsaicin+and+axotomy+involves+an+apoptotic+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Neonatal primary neuronal death induced by capsaicin and axotomy involves an apoptotic mechanism.</a> Brain Res. 807 (1-2), 147-154 (1998).</li>
<li>Saito, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+skin+inflammation+induced+by+repeated+exposure+of+toluene%2C+xylene%2C+and+formaldehyde+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Characterization of skin inflammation induced by repeated exposure of toluene, xylene, and formaldehyde in mice.</a> Environ Toxicol. 26 (3), 224-232 (2011).</li>
<li>Jung, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formaldehyde+exposure+induces+airway+inflammation+by+increasing+eosinophil+infiltrations+through+the+regulation+of+reactive+oxygen+species+production%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toixcol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Formaldehyde exposure induces airway inflammation by increasing eosinophil infiltrations through the regulation of reactive oxygen species production.</a> Environ Toixcol Pharmacol. 24 (2), 174-182 (2007).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Il protocollo descritto qui per l'induzione dell'annuncio-come i sintomi in ratti adattabile per studiare la patofisiologia di annuncio e utilizzato come uno strumento di screening per test di droga. Lo strumento per l'esposizione del gassoso FA ai ratti capsaicina-trattati può essere applicato per valutare gli effetti dell'esposizione ai vari gas su diversi modelli animali.
Il modello di annuncio capsaicina-trattati neonatale si basa su una procedura più semplice rispetto ad altri modelli ato...

Per interrogare gli effetti di inalazione di formaldeide (FA) sulla progressione di dermatite atopica (da), abbiamo stabilito un protocollo per l'induzione di annuncio e sviluppato una camera a circolazione convenzionali per esposizione cronica della FA.
Annuncio è una malattia infiammatoria cronica della cute attribuita alle complesse interazioni tra predisposizione genetica e fattori ambientali1,2. Un modello animale adeguato è richiesto di studiare AD nello stato preclinico. Questo è più importante quando delucidamento della patogenesi dell'annuncio sotto l'influenza di fattori ambientali. Inoltre, per meglio studiare gli effetti dei fattori scatenanti ambientali sulla progressione AD, è essenziale per separare i singoli fattori ambientali e quantificare il grado di esposizione.
Abbiamo dimostrato un modello di ratto romanzo dell'annuncio indotta dal trattamento neonatale capsaicina. Questo annuncio modello3 ha alcuni meriti su altri modelli di annuncio come i modelli AD indotti da epicutaneous sensibilizzazione, i modelli di annuncio geneticamente e i modelli di mouse spontanea di annuncio4. In primo luogo, questo modello si sviluppa AD-come i sintomi all'età di 3 settimane, che corrisponde al neonato AD ed è precedente rispetto ad altri modelli del mouse spontanea dell'annuncio come il mouse di NC/Nga. In alcuni casi, a differenza dei modelli di annuncio geneticamente, i sintomi dei modelli AD abbassano e ricadono spontaneamente su un periodo di 20 settimane. Inoltre, il processo di induzione AD-come dei sintomi nel modello è più facile di quello del modello di sensibilizzazione epicutaneous, che è più simile alla dermatite di contatto allergica nella prospettiva del processo di induzione.
Abbiamo introdotto il protocollo novello per esposizione FA a un modello animale utilizzando una camera di vetro acrilico e un regolatore di ossigeno medico convenzionale5 per studiare gli effetti di inalazione FA sullo sviluppo dell'annuncio nel periodo infantile e adolescenziale. Il regolatore ha permesso di esporre gli animali a una concentrazione costante di gas attraverso la regolazione delle portate e la concentrazione della soluzione. Gli studi precedenti hanno segnalato diversi modi di esposizione della FA ai modelli animali. Xu et al ha descritto il metodo di esposizione in cui FA soluzione è stato applicato direttamente alla pelle6. Un altro recente studio affrontato il protocollo dell'esposizione di gas FA utilizzando un generatore di solventi volatili specializzati, modello 49127. Rispetto ai metodi di studi precedenti, il nuovo metodo è attrezzato più facilmente e può essere applicato per altre soluzioni oltre a FA.

<table><tbody><tr><td>Regolatore di ossigeno medico</td><td>Yuyao Jiahua Il produttore medico</td><td></td><td>non influenzerà i risultati</td></tr><tr><td>Il produttore del tubo</td><td></td><td></td><td>non influenzerà i risultati</td></tr><tr><td>Camera acrilica</td><td>Taejin Acryl</td><td></td><td>produttore non influirà sui risultati</td></tr><tr><td>Camera di plastica</td><td>Taejin Acryl</td><td></td><td>produttore non influirà</td></tr><tr><td>sui risultati Paraformaldeide, polvere</td><td>Sigma</td><td>158127</td><td>produttore non influenzerà i risultati</td></tr><tr><td>Wrap filme</td><td>Uniwrap</td><td></td><td>produttore non influenzerà i risultati</td></tr><tr><td>Capsaicin</td><td>Sigma</td><td>M2028</td><td>produttore non influenzerà i risultati</td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma</td><td>P4780</td><td>produttore non influenzerà i risultati</td></tr><tr><td>Videocamera digitale</td><td>Sony</td><td>HDR-CX380y</td><td>produttore non influenzare i risultati</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>JW produttore farmaceutico</td><td></td><td>non influenzerà i risultati</td></tr></tbody></table>

effetti dell'esposizione di formaldeide per un modello del ratto della dermatite atopica indotta dal trattamento neonatale capsaicina

Effects of Exposure of Formaldehyde to a Rat Model of Atopic Dermatitis Induced by Neonatal Capsaicin Treatment

La dermatite atopica è cronicamente recidivante eczema pruriginoso e prevale nel mondo soprattutto nei paesi sviluppati. Complesse interazioni tra fattori genetici ed ambientali sono noti per svolgere un ruolo importante nella fisiopatologia della dermatite atopica. Tuttavia, manca ancora un quadro dettagliato della patogenesi di questa malattia. Così, è di importanza sviluppare modelli animali appropriati per il delucidamento della progressione della dermatite atopica. Inoltre, studiando l'effetto di fattori ambientali quali inquinanti sulla dermatite atopica espande la comprensione della malattia. Qui, descriviamo un metodo per indurre dermatite atopica in ratti con trattamento neonatale capsaicina e un protocollo per l'esposizione di una costante concentrazione di formaldeide ai ratti per rivelare gli effetti sullo sviluppo della dermatite atopica infantile e adolescenziale periodi. Questi protocolli sono stati applicati con successo a diversi esperimenti e possono essere utilizzati per altre sostanze.

L'infiammazione della pelle simil-annuncio di capsaicina-trattati AD modello del ratto a 7 settimane di età è presentato in Figura 1A. Nel Video 1appare robusti graffiare i comportamenti del modello del ratto di annuncio di capsaicina-trattati. Trattamento neonatale capsaicina ha suscitato la dermatite e aggravato graffiare i comportamenti nei ratti di 3 settimane di età, e annuncio-come i sintomi hanno persistito per diverse settimane (<stro...

Descriviamo qui i metodi per il trattamento di capsaicina neonatale per indurre dermatite atopica nei ratti ed esposizione di formaldeide vaporizzato per studiare gli effetti di inalazione di formaldeide sulla dermatite atopica.

Effetti dell'esposizione di formaldeide per un modello del ratto della dermatite atopica indotta dal trattamento neonatale capsaicina

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between ...

L'obiettivo generale di questo procedimento è indurre sintomi simili alla dermatite atopica mediante trattamento neonatale con capsaicina e misurare l'effetto del formaldeide sui sintomi di tipo dermatite atopica. Questo metodo può contribuire a rispondere a una domanda fondamentale relativa alla patofisiologia della dermatite atopica nel campo dermatologico.I principali vantaggi di questa tecnica sono l'induzione di sintomi simili alla dermatite atopica e la creazione di un importante sistema di esposizione con incrementi. Per preparare una soluzione di capsaicina a cinque milligrammi per millilitro, aggiungere un millilitro di Tween 80, un millilitro di etanolo al 100% e 50 milligrammi di capsaicina in un tubo conico da 15 millilitri. Successivamente, aggiungere otto millilitri di soluzione salina normale al tubo conico.Chiudere il tubo e agitare energicamente fino a quando non sono visibili strati separati. È fondamentale somministrare la capsaicina tra 12 e 48 ore dopo la nascita. Iniettare la soluzione di capsaicina nel tessuto sottocutaneo lungo la linea mediana e nella parte posteriore del collo di un ratto neonato Sprague Dawley.Per prevenire l'arresto respiratorio causato dall'iniezione di capsaicina, posizionare i neonati in una camera a ossigeno fino a quando la respirazione non torna normale. Se necessario, premere il torace dei neonati per favorire la respirazione. Iniziare preparando camere di plastica dotate di uno specchio per consentire una visione completa e fori per permettere ai ratti di respirare.Posizionare i ratti nella camera di plastica e coprire il soffitto della camera con un oggetto pesante per impedire che il coperchio si apra. Quindi impostare una videocamera digitale per registrare contemporaneamente le viste riflettenti e le viste frontali dei ratti. Successivamente, registrare i comportamenti spontanei dei ratti per un'ora.Riprodurre i filmati e contare il numero di comportamenti legati al grattamento, come quelli mostrati dal ratto a destra e dal ratto al centro. Per valutare le lesioni, identificare l'estensione e la gravità della dermatite nelle orecchie e in altre parti del ratto anestetizzato.Definire la dimensione dell'unità per l'estensione delle lesioni cutanee come 0,25 centimetri quadrati. E la gravità delle lesioni cutanee utilizzando questa tabella. Preparare una scatola in vetro acrilico che abbia due connettori su lati opposti.Per la circolazione del gas formaldeide, l'uscita di sfiato deve essere posizionata più in alto rispetto all'ingresso del gas. Collegare i tubi a entrambi i connettori. Indirizzare il tubo dell'uscita di sfiato verso la cappa di circolazione o all'esterno dell'edificio per l'emissione del gas.Collegare l'altro tubo di ingresso a un regolatore di ossigeno medico. Posizionare una gabbia per ratti convenzionale all'interno della scatola in vetro acrilico. Mettere dei ratti di una settimana di vita all'interno della gabbia e quindi sigillare la scatola in vetro acrilico nel modo più ermetico possibile per prevenire perdite di gas.Applicare della pellicola trasparente per avvolgere la camera e chiudere la camera con un coperchio gommoso per una chiusura ermetica. Aggiungere una soluzione di formaldeide allo 0,5% nella bottiglia dell'umidificatore collegata al regolatore di ossigeno medicale. Non dimenticare che lavorare con la formaldeide può essere estremamente pericoloso.E devono sempre essere adottate precauzioni come l'uso di maschere e guanti durante l'esecuzione di questa procedura. Successivamente, accendere il regolatore e impostare la portata a cinque litri al minuto. Esporre i ratti al gas di formaldeide per un periodo di due ore.Qui sono mostrate fotografie rappresentative dell'infiammazione cutanea nel ratto trattato con capsaicina. Lo sviluppo cronologico della dermatite nei ratti trattati con capsaicina è mostrato in questa immagine. L'immagine illustra lo sviluppo cronologico dei comportamenti di graffiamento nei ratti trattati con capsaicina.Questa è un'immagine rappresentativa di lesioni cutanee ricorrenti in ratti trattati con capsaicina di 16 settimane di età. I livelli sierici di IgE sono significativamente aumentati negli animali trattati con capsaicina. Si osserva inoltre un significativo aumento dell'espressione di mRNA di IL-4 negli animali trattati con capsaicina.Qui viene mostrato un significativo aumento dell'espressione di mRNA di IL-13 negli animali trattati con capsaicina. Queste fotografie rappresentative mostrano la dermatite atopica alla quinta settimana di trattamento utilizzando 1,2 parti per milione e 0,8 parti per milione di formaldeide, rispetto al trattamento di controllo con aria.L'esposizione a 1,2 parti per milione di formaldeide, ma non a 0,8 parti per milione di formaldeide, ha aggravato in modo significativo il prurito nel modello di dermatite atopica trattato con capsaicina. Risultati simili sono stati osservati quando è stata valutata la dermatite. Sono stati osservati livelli aumentati di IgE sierica nel modello di ratto con dermatite atopica trattato con capsaicina e sottoposto a esposizione a 1,2 parti per milione di formaldeide.Seguendo questa procedura, altri materiali come soluzioni di glicole possono essere utilizzati per rispondere ad ulteriori domande relative agli effetti di sostanze specifiche sulla dermatite atopica. Dopo questi sviluppi, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo della dermatologia per esplorare il ruolo dei fattori ambientali nella patogenesi della dermatite atopica.

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Effetti dellesposizione di formaldeide per un modello del ratto della dermatite atopica indotta dal trattamento neonatale capsaicina (Video) | JoVE Journal

Effetti dell'esposizione di formaldeide per un modello del ratto della dermatite atopica indotta dal trattamento neonatale capsaicina

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