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DOI: 10.3791/56041-v
Seungil Kim1, Jan Prochazka2, Jeffrey O. Bush1
1Department of Cell and Tissue Biology, Program in Craniofacial Biology and Institute for Human Genetics,University of California San Francisco, 2Laboratory of Transgenic Models Diseases,Czech Centre for Phenogenomics, Institute of Molecular Genetics of the Czech Academy of Sciences
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a protocol for live imaging of mouse secondary palate fusion using confocal microscopy. The method allows for direct observation of cellular processes during craniofacial development and can be adapted for other developmental systems.
Qui presentiamo un protocollo per l'imaging in diretta di fusione secondaria del palato del mouse usando la microscopia confocale. Questo protocollo può essere utilizzato in combinazione con una varietà di linee fluorescenti del mouse del reporter, e con inibitori del percorso per l'intuizione meccanica. Questo protocollo può essere adattato all'immagine dal vivo in altri sistemi di sviluppo.
L'obiettivo generale di questo metodo di imaging confocale dal vivo è osservare direttamente i processi cellulari, la fusione secondaria del palato dell'unità durante lo sviluppo craniale facciale. Inizia separando la testa dal corpo dell'embrione al microscopio da dissezione in una capsula di Petri contenente PBS fresco a temperatura ambiente. Afferra la testa con un paio di pinze sottili numero cinque e usa un secondo paio di pinze per rimuovere la parte superiore del cervello, tagliando via il tessuto in eccesso al di fuori dei ripiani palatali con un secondo paio di pinze.
Rimuovere la mandibola con cautela senza danneggiare i ripiani palatali. Quando la mandibola è stata staccata, rimuovere con cautela la lingua e confermare la presenza di un robusto segnale reporter nella cucitura dell'epitelio della linea mediana. È importante non danneggiarlo, ha spiegato il palato durante la dissezione, per mantenere intatta la cucitura dell'epitelio della linea mediana.
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