Name: Tecnica di costrizione aortico trasversale mininvasiva in topi per induzione dellipertrofia ventricolare sinistra (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Impara la tecnica di costrizione aortica trasversale mininvasiva nei topi per indurre ipertrofia ventricolare sinistra. Questo metodo semplificato elimina intubazione e ventilazione, riducendo lo stress animale.

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Questo lavoro è stato supportato da un grant (N ° 32016) della Fondazione Svizzera cardiovascolare a RT.

topi maschii C57BL/6J (10 settimane, 25-30g, n = 60) sono utilizzati nel presente protocollo. Gli animali ricevono un'assistenza umana in conformità con gli orientamenti formulati dal Ministero francese dell'agricoltura e dell'istruzione superiore e della ricerca, e tutte le procedure sono eseguite in conformità con la direttiva comunitaria del Consiglio, del 24 novembre 1986 ( 86/609/CEE) e le leggi francesi. Il protocollo è stato approvato dalla &#34; regionale Comitato etico per CREMEAS di sperimentazione animale &#34; (#2016092816207606).
 1. preparazione per la chirurgia <ol><li>mantenere i topi per una settimana dopo l'arrivo nella struttura animale su un ciclo luce/buio di 12h / 12h, in gabbie standard, con il cibo (per dettagli vedere la tabella materiali) e acqua disponibili annuncio libitum.</li>
	<li>Il giorno di apertura, luogo i topi in gabbie individuali pochi minuti prima dell'induzione dell'anestesia, al fine di evitare qualsiasi ulteriore stress per l'animale. Sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici il giorno prima dell'intervento chirurgico.</li>
	<li>Intra-peritoneally iniettare una dose singola di una miscela di ketamina (51,4 mg/kg) e xilazina (3,3 mg/kg) diluito in soluzione salina (0,9% NaCl).</li>
	<li>Assicurarsi della profondità dell'anestesia per l'assenza del riflesso toe-retreat.</li>
	<li>Radere il collo e il petto dell'animale con un rasoio commercialmente disponibile e disinfettare la zona rasata con alcool al 70%.</li>
	<li>Metti l'animale supina su un tappetino di lavoro pulito sughero e correggere le zampe con nastro adesivo.</li>
</ol> 2. Chirurgia <ol><li>tecnica chirurgica Sterile viene utilizzato durante le procedure. In un spontaneamente respirazione animale, eseguire un'incisione cervicale longitudinale della linea mediana superiore a 10 mm con un coltello di lama 11 dalla tacca sopra-sternal al Mid-petto al fine di esporre lo sterno ( Figura 1).</li>
	<li>Ritrarre la tiroide passando una sutura in polipropilene soggiorno 4/0 monofilamento con un Crile-Wood porta aghi e con nastro adesivo al lavoro pad.</li>
	<li>Separare senza mezzi termini i muscoli pre-tracheali con micro-chirurgici pinze per scoprire la trachea.</li>
	<li>Slide delicatamente la punta liscia curvo forcipe micro-chirurgica con le mascelle chiuse sopra la trachea e dietro lo sterno.</li>
	<li>Di apertura e chiusura le ganasce della pinza microsurgical curva con punta liscia controllare scrupolosamente una dissezione smussa sotto i muscoli pre-tracheali e dietro lo sterno ad allontanare la pleura.</li>
	<li>Afferrare i muscoli proprio supra-clavicular con il forcipe dritto micro-chirurgica con punta liscia e tirare delicatamente il torace dell'animale.</li>
	<li>Far scorrere la mascella inferiore della pinza dell'osso sotto lo sterno ed eseguire una sternotomia parziale superiore di 3-4 mm ( Figura 2). Dirigere la parte inferiore del mini-sternotomia leggermente verso sinistra.</li>
	<li>Passare una 7/0 soggiorno in polipropilene sutura monofilamento da dentro a fuori attraverso lo spazio intercostale secondo su ogni lato del mini-sternotomia utilizzando un porta aghi micro-chirurgica. Stare vicino a angolo costo-sternale per evitare lesioni ai vasi toracici intercostali e interni o pleura.</li>
	<li>Diffondere i bordi sternali con suture 7/0 monofilamento in polipropilene soggiorno su ogni lato e fissarle al rilievo del lavoro con nastro adesivo.</li>
	<li>Spostare delicatamente da parte i muscoli pre-tracheali, grasso mediastinico e timo con punta liscia curvo forcipe microsurgical per visualizzare l'arco aortico sotto ingrandimento di bassa potenza (2-3x) ( Figura 3). Prestare particolare attenzione di non toccare o danneggiare la pleura parietale per prevenire lo sviluppo di pneumotorace.</li>
	<li>Esporre il tessuto molle sotto l'arco aortico legando forcipe ( Figura 4 A) e diffondere delicatamente le mascelle. Preparare un tunnel nel tessuto molle sotto l'arco aortico con secondo legatura forcipe delicatamente aprendo e chiudendo le ganasce nei tessuti molli.</li>
	<li>Passare un segmento della legatura seta 6/0 threaded attraverso l'occhio di un aiuto di legatura ( Figura 4 B) tenuto nella mano sinistra sotto l'arco aortico e recuperarla legando forcipe tenuto nella mano destra tra l'origine di la destra innominate e sinistra arterie carotiche comuni ( Figura 5).</li>
	<li>Tagliare un ago calibro 27 ad una lunghezza di 5 mm e smussato entrambe le estremità da li premendo con un porta-aghi Crile. Posizionare l'ago calibro 27 blunted accanto all'arco aortico ( Figura 6) con il forcipe dritto micro-chirurgica con punta liscia e legare la sutura attorno l'ago e l'aorta tra la carotide comune destra innominate e sinistra arterie utilizzando le due pinze di legature ( Figura 7). Per legare saldamente la sutura, eseguire un doppio nodo iniziale seguito da quattro nodi aggiuntivi. Assicurarsi che tutti i nodi siano piani.</li>
	<li>Dopo la legatura, rimuovere velocemente ma delicatamente l'ago per raggiungere un restringimento del diametro di 0,4 mm e un restringimento aortico riproducibile trasversale 65-70%.</li>
	<li>Verifica per accertare l'emostasi dei tessuti molli attorno all'arco aortico, dei bordi sternali e muscoli pre-tracheali. Mettere garza emostatico riassorbibile dove lo stillicidio dell'anima è osservato. Rimuovi il polipropilene monofilamento 7/0 soggiornare suture usate per spalmare i bordi sternali.</li>
	<li>Passare una semplice sutura in polipropilene monofilamento 6/0 con un porta-aghi micro-chirurgica da fuori a dentro lo spazio secondo intercostale sinistro e poi da dentro a fuori dello spazio intercostale di destra secondo. Stare vicino a angolo costo-sternale per evitare lesioni ai vasi toracici intercostali e interni o pleura.</li>
	<li>Portare insieme i bordi dello sterno legando il filo di sutura in polipropilene monofilamento 6/0 con un Crile-Wood porta aghi.</li>
	<li>Chiudere la pelle con un polipropilene 5/0 monofilamento sutura in esecuzione in un unico strato con un Crile-Wood porta aghi.</li>
	<li>Eseguire la procedura sham identica per l'operazione di costrizione, ma senza vincolare una sutura intorno all'aorta.</li>
</ol> 3. Recupero post-operatorio <ol><li>monitorare molto da vicino gli animali. trasferire il mouse a una gabbia individuale e collocarlo in posizione prona.</li>
	<li>Consenti il mouse per recuperare sotto una luce riscaldamento fino a quando completamente svegli (meno di 1 h dopo l'induzione di anestesia).</li>
	<li>Per l'analgesia post-operatoria, iniettare 0,1 mg/kg di buprenorfina intraperitonealmente. Ripetere le iniezioni sottocutanee di 0,1 mg/kg di buprenorfina ogni 8 h per i primi tre giorni, come indicato.</li>
	<li>Posto i topi azionati in gabbie standard (massimi 3 topi per gabbia) e minimi 2 topi per gabbia.</li>
</ol> 4. Vendemmia del cuore <ol><li>il giorno delle analisi, eutanasia il mouse con una soluzione di ketamina 300 mg/kg e xilazina 20 mg/kg in soluzione salina tramite l'iniezione intraperitoneale.</li>
	<li>Prima della raccolta del sangue dalla vena cava inferiore e poi attraverso la stessa linea iniettare 5 mL di soluzione di 2,6 mM EDTA in soluzione salina.</li>
	<li>Il cuore della raccolta, rimuovere gli atrii e peso del cuore (ventricoli destro e sinistro senza atria).</li>
	<li>Separare sinistra dal giusto ventrICLE con setto restanti per la parte del ventricolo sinistro. Pesare entrambi campioni di tessuto e congelarli in azoto liquido.</li>
</ol>

<ol><li>Molinari, F., Malara, N., Mollace, V., Rosano, G., Ferraro, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+cardiac+cachexia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Animal models of cardiac cachexia.</a> Int. J. Cardiol. 219 (15), 105-110 (2016).</li>
<li>Tarnavski, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+surgical+models+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse surgical models in cardiovascular research.</a> Methods. Mol. Biol. 573, 115-137 (2009).</li>
<li>Verma, S. K., Krishnamurthy, P., Kishore, R., et al. Transverse aortic constriction: a model to study heart failure in small animals. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVerma%2C+SK+%22Manual+of+Research+Techniques+in+Cardiovascular+Medicine%22">Manual of Research Techniques in Cardiovascular Medicine</a>. Ardehali, H. , Wiley, J., & Sons. 164-169 (2014).</li>
<li>Patten, R. D., Hall-Porter, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+heart+failure.+Development+of+novel+therapies%2C+past+and+present%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Heart+Fail%22%5BJournal%5D)">Small animal models of heart failure. Development of novel therapies, past and present.</a> Circ. Heart Fail. 2 (2), 138-144 (2009).</li>
<li>Rockman, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88 (18), Erratum in: Proc. Natl. Acad. Sci. USA Page 9907 8277-8281 (1991).</li>
<li>Barrick, C. J., Rojas, M., Schoonhoven, R., Smyth, S. S., Threadgill, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+response+to+pressure+overload+in+129S1%2FSvImJ+and+C57BL%2F6J+mice%3A+temporal-+and+background-dependent+development+of+concentric+left+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiac response to pressure overload in 129S1/SvImJ and C57BL/6J mice: temporal- and background-dependent development of concentric left ventricular hypertrophy.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292 (5), 2119-2130 (2007).</li>
<li>Deschepper, C. F., Olson, J. L., Otis, M., Gallo-Payet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+blood+pressure+and+morphological+traits+in+cardiovascular-related+organs+in+13+different+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Characterization of blood pressure and morphological traits in cardiovascular-related organs in 13 different inbred mouse strains.</a> J. Appl. Physiol. 97 (1), 369-376 (2004).</li>
<li>Almeida, A. C., van Oort, R. J., Wehrens, X. H. T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3164086/">Transverse aortic constriction in mice.</a> J. Vis. Exp. (38), April 21 (2010).</li>
<li>Hu, P., Zhang, D., Swenson, L., Chakrabarti, G., Abel, E. D., Litwin, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+aortic+banding+in+mice%3A+effects+of+altered+cardiomyocyte+insulin+signaling+during+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive aortic banding in mice: effects of altered cardiomyocyte insulin signaling during pressure overload.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 285 (3), 1261-1269 (2003).</li>
<li>Faerber, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20447656">Induction of heart failure by minimally invasive aortic constriction in mice: Reduced peroxisome proliferator-activated receptor ϒ coactivator levels and mitochondrial dysfunction.</a> J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 141 (2), 492-500 (2011).</li>
<li>Andersen, N. M., Tang, R., Li, L., Javan, H., Zhang, X. Q., Selzman, C. H. <a target="_blank" href="http://pubmedcentralcanada.ca/pmcc/articles/PMC3402700/">IKK-β inhibition prevents adaptive left ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 178 (1), 105-109 (2012).</li>
<li>Nemska, S., Monassier, L., Gassmann, M., Frossard, N., Tavakoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+mRNA+profiling+in+a+rat+model+of+left+ventricular+hypertrophy+reveals+early+expression+of+chemokines+and+their+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Kinetic mRNA profiling in a rat model of left ventricular hypertrophy reveals early expression of chemokines and their receptors.</a> PLoS ONE. 11 (8), 0161273(2016).</li>
<li>Liao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Echocardiographic+assessment+of+LV+hypertrophy+and+function+in+aortic-banded+mice%3A+necropsy+validation%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Echocardiographic assessment of LV hypertrophy and function in aortic-banded mice: necropsy validation.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (5), 1703-1708 (2002).</li>
<li>Stansfield, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+model+to+independently+study+regression+of+ventricular+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">Characterization of a model to independently study regression of ventricular hypertrophy.</a> J. Surg. Res. 142 (2), 387-393 (2007).</li>
<li>Beetz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+biglycan+attenuates+cardiac+hypertrophy+and+fibrosis+after+left+ventricular+pressure+overload%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Cell.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Ablation of biglycan attenuates cardiac hypertrophy and fibrosis after left ventricular pressure overload.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 101, December 145-155 (2016).</li>
</ol>

Gli autori non hanno alcun conflitto di interessi di divulgare.

L'obiettivo di questo protocollo è di presentare un'illustrazione passo passo della tecnica chirurgica per mininvasiva trasversale aortica costrizione in topi. Descrizione tecnica dettagliata di costrizione trasversale aortica nei topi è stato segnalato da altri autori2,8. Tuttavia, questi ricercatori eseguono un intervento chirurgico dopo l'intubazione e la ventilazione degli animali. L'uso di un ulteriore passaggio di intubazione-ventilazione aumenta la comples...

Negli ultimi anni, lo studio dell'insufficienza cardiaca è stato condotto in modelli animali vitali1. Rispetto ai grandi modelli animali di infarto, piccoli modelli animali presentano numerosi vantaggi potenziali. Al lato di minori costi di custodia e manutenzione, piccoli modelli animali sono accessibili ai ricercatori più dovuto il meno complesso di strutture necessarie2.
Modelli murini di insufficienza cardiaca offrono molti degli stessi vantaggi come i modelli di ratto. Inoltre alloggiamento a ridotto Costa3, modelli murini beneficino dalla disponibilità di rilevanti transgenici e knockout (KO) ceppi. La possibilità di cella KO di tipo-specific, inducibile o transgeniche strategie rendono il mouse un prezioso strumento per studiare la patogenesi dell'insufficienza cardiaca e per tentare di identificare nuovi regimi terapeutici3.
Fra il mouse attualmente4sono utilizzati modelli di insufficienza cardiaca, restringimento aortico trasversa (TAC) che in primo luogo è stato descritto da Rockman5 è il modello preferito per generare pressione indotta da sovraccarico ipertrofia ventricolare sinistra (LVH)1 , 3. il grande vantaggio di questo modello è la capacità di consentire la stratificazione di LVH2, sebbene ventricolare sinistra rimodellamento in risposta alla TAC è variabile tra diversi ceppi di topi diversi. In particolare, i topi C57BL/6 sviluppano rapida dilatazione di LV dopo la TAC che non può verificarsi con altri ceppi4,6,7.
L'improvvisa comparsa di ipertensione raggiunto con TAC cause un circa 50% aumento di LV massa entro 2 settimane, permettendo di esaminare rapidamente l'attività degli interventi farmacologici o molecolari allo scopo di modulare lo sviluppo di LVH4. L'induzione acuta di ipertensione severa di TAC non esattamente riprodurre l'ipertrofia ventricolare di sinistra progressiva e rimodellamento osservato nella regolazione clinica di stenosi aortica o ipertensione arteriosa. Tuttavia, questo modello viene utilizzato da molti ricercatori per identificare e modificare i nuovi bersagli terapeutici nell'insufficienza cardiaca4.
Esecuzione di TAC nei topi richiede una maggiore esperienza chirurgica di quella richiesta per altre tecniche utilizzate per indurre LVH e conseguente insufficienza cardiaca2. Maggior parte degli autori per eseguire questa procedura intubating e ventilazione l'animale2,8, che rende questa procedura più esigente e che richiede tempo e aggiunge al carico chirurgico per l'animale. Solo pochi ricercatori hanno utilizzato mininvasiva TAC nel loro studio con breve accenno alla procedura chirurgica9,10,11.
L'obiettivo di questo protocollo è di descrivere passo passo una tecnica semplificata e facile da usare di mininvasiva costrizione trasversale aortica nei topi, evidenziando le fasi critiche della procedura. Seguendo questi passaggi chiavi, uno può facilmente eseguire questa tecnica.

<table><tbody><tr><td>Microscopio operatorio</td><td>Olympus</td><td>SZX2-TR30</td><td></td></tr><tr><td>Rasoio</td><td>Rowenta</td><td>Nomad TN3650FO</td><td></td></tr><tr><td>Suture:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polipropilene 7/0</td><td>Ethicon</td><td>BV-1X</td><td></td></tr><tr><td>Polipropilene 6/0</td><td>BBraun</td><td>C0862061</td><td></td></tr><tr><td>Seta 6/0 legatura&nbsp;</td><td>FST</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>Polipropilene 4/0</td><td>Ethicon</td><td>8683</td><td></td></tr><tr><td>Polipropilene 5/0</td><td>Ethicon</td><td>Z303</td><td></td></tr><tr><td><forte>Farmaci:</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Merial</td><td>Imalg... ne 1000, LBM154AD</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>Bayer</td><td>Rompun 2%, KP09PPC</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Ceva</td><td>Vetergesic, 072013</td><td></td></tr><tr><td>Instruments:&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tronchesi ossei</td><td>Strumenti chirurgici fini</td><td>16101-10</td><td></td></tr><tr><td>Ausilio per la legatura</td><td>Strumenti chirurgici fini</td><td>18062-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per legatura</td><td>Strumenti chirurgici fini</td><td>18026-10</td><td></td></tr><tr><td>Porta aghi Strumenti chirurgici fini in legno Crile</td><td></td><td>12003-15</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per microchirurgia&nbsp;</td><td>Strumenti chirurgici di precisione</td><td>11003-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per microchirurgia&nbsp;</td><td>Strumenti chirurgici di precisione</td><td>11002-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per tessuti</td><td>Strumenti chirurgici di precisione</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Porta aghi per microchirurgia</td><td>Strumenti chirurgici di precisione</td><td>12076-12</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per microchirurgia</td><td>Strumenti chirurgici di precisione</td><td>91501-09</td><td></td></tr><tr><td>Forbici Mayo</td><td>Strumenti chirurgici di precisione</td><td>14511-15</td><td></td></tr><tr><td>Coltello a 11 lame</td><td>Chirurgia fine Strumenti</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Estrazione dell'RNA e qPCR:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TriReagent</td><td>Euromedex</td><td>TR-118-200</td><td></td></tr><tr><td>Rneasy Mini kit</td><td>Qiagen</td><td>74704</td><td></td></tr><tr><td>Qubit Saggio fluorimetrico dell'RNA</td><td>Fisher Scientific</td><td>10034622</td><td></td></tr><tr><td>kit RNA 6000 Nano</td><td>Agilent</td><td>5067-1511</td><td></td></tr><tr><td>Kit cDNA ad alta capacità</td><td>Fisher</td><td>Scientific 10400745</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Master Mix</td><td>Fisher Scientific</td><td>10157154</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Primer BNP</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01255770_g1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman ANP primer</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01255747_g1&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Primer Taqman ACE Fisher</td><td>Scientific</td><td>Mm00802048_m1</td><td></td></tr><tr><td>Primer Taqman Col1a1&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm00801666_g1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman TGFb primer</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm01178820_m1</td><td></td></tr><tr><td>Taqman Gapdh primer</td><td>Fisher Scientific</td><td>Mm99999915_g1</td><td></td></tr><tr><td>ABIPrism&nbsp; Thermocycler</td><td>Applied Biosystems</td><td>7000</td><td></td></tr><tr><td>Software:</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism GraphPad</td><td></td><td>Prism 7</td><td></td></tr><tr><td>Cibo per animali</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dieta completa per ratti/topi adulti</td><td></td><td>Safe UB220610R</td><td></td></tr></tbody></table>

tecnica di costrizione aortico trasversale mininvasiva in topi per induzione dell'ipertrofia ventricolare sinistra

Technique of Minimally Invasive Transverse Aortic Constriction in Mice for Induction of Left Ventricular Hypertrophy

Restringimento aortico trasversa (TAC) in topi è una delle tecniche chirurgiche più comunemente usate per prove sperimentali di pressione indotta da sovraccarico lasciato l'ipertrofia ventricolare (LVH) e della sua evoluzione verso lo scompenso cardiaco. Nella maggior parte delle indagini segnalate, questa procedura viene eseguita con intubazione e ventilazione dell'animale che rende impegnativo e che richiede tempo e aggiunge al carico chirurgico per l'animale. L'obiettivo di questo protocollo è di descrivere una tecnica semplificata di mininvasiva TAC senza intubazione e ventilazione dei topi. Al fine di raggiungere la mortalità bassa ed alta efficienza nell'induzione LVH sono dati risalto a fasi critiche della tecnica.
Topi maschii C57BL/6 (10-settimana-vecchio, 25-30 g, n = 60) sono stati anestetizzati con una singola iniezione intraperitoneale di una miscela di ketamina e xilazina. In una respirazione spontanea animale seguendo una sternotomia parziale superiore 3-4 mm, un segmento di sutura seta 6/0 threaded attraverso l'occhio di un aiuto di legatura era passato sotto l'arco aortico e legato sopra un ago calibro 27 smussato. Falsità-azionati gli animali hanno subito la stessa preparazione chirurgica ma senza costrizione aortica. L'efficacia della procedura nell'induzione LVH è attestata da un significativo aumento del rapporto peso cuore/corpo. Questo rapporto è ottenuto a giorni 3, 7, 14 e 28 dopo la chirurgia (n = 6-10 in ogni gruppo e ogni punto di tempo). Utilizzando la nostra tecnica, LVH è osservata in TAC rispetto agli animali di sham dal giorno 7 attraverso il giorno 28. Operativa e tardo (oltre 28 giorni) mortalità sono entrambi molto bassa all'1,7%.
In conclusione, la nostra tecnica economica di TAC mininvasiva in topi trasporta bassissima mortalità operativa e post-operatorio ed è altamente efficace nell'indurre LVH. Semplifica la procedura attiva e riduce lo sforzo messo sull'animale. Può essere facilmente eseguita seguendo i passaggi critici descritti nel presente protocollo.

Operativa e tardiva sopravvivenza La sopravvivenza operativa era molto alta, 98,3% (59 su 60) per l'intera serie (TAC e animali falsità-azionati). La morte solo attiva era a causa di una complicazione di spurgo in un mouse piallato per operazione finta. Sopravvivenza post-operatorio durante il periodo di osservazione di 28 giorni era anche eccellente, da 98,3% (58/59). La morte postoperatoria soltanto in ritardo si è verificato in un mouse TAC giorno (D) 16, possibilme...

L'obiettivo di questo protocollo è di descrivere passo passo la tecnica di costrizione aortico trasversale mininvasiva (TAC) in topi. Dall'eliminazione di intubazione e la ventilazione che sono obbligatori per la procedura standard comunemente utilizzata, TAC mininvasiva semplifica la procedura operativa e riduce lo sforzo messo sull'animale.

Tecnica di costrizione aortico trasversale mininvasiva in topi per induzione dell'ipertrofia ventricolare sinistra

Transverse aortic constriction (TAC) in mice is one of the most commonly used surgical techniques for experimental investigation of pressure ...

L'obiettivo generale di questo protocollo è stabilire una costrizione trasversale aortica minimamente invasiva nei topi. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali sull'implementazione della costrizione trasversale aortica nei topi, ad esempio su come creare un passaggio sotto l'arco aortico. I principali vantaggi di questa tecnica sono la sua semplicità, facilità d'uso e l'eliminazione della necessità di intubare e ventilare i topi.Dimostrerò la procedura insieme alla nostra ricercatrice postdottorato Simona Nemska, che eseguirà le fasi di preparazione animale preoperatoria e di sorveglianza postoperatoria. Nel giorno della procedura, rasare il collo e il torace di un topo anestetizzato e disinfettare la cute esposta con etanolo al 70%. Dopo aver verificato il livello adeguato di sedazione mediante pinzatura del dito del piede, fissare l'animale in posizione supina su un piano di lavoro pulito in sughero.Successivamente, utilizzare una lama da bisturi numero 11 per eseguire un'incisione cervicale mediana longitudinale di 10 millimetri, dalla fossetta giugulare fino alla metà del torace, per esporre lo sterno. Utilizzando una pinza per ago Crile-Wood, inserir

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Restringimento aortico trasversale (TAC) nel topo è un modello comunemente usato sperimentale per studiare meccanismi che sottendono l'ipertrofia cardiaca e scompenso cardiaco sviluppo. Qui si descrivono le modalità per costrizione dell'aorta per creare un grado riproducibile di ipertrofia cardiaca nei topi.

Aortica costrizione trasversale nei topi

La procedura chirurgica utilizzata per indurre infarto miocardico sperimentale in topi inizia con toracotomia sinistra tra il terzo e il quarto nervature per visualizzare la superficie anteriore del cuore e polmone sinistro. Coronaria sinistra viene ligato, il torace è chiuso e il mouse viene consentito di recuperare spontaneamente.

Tecnica modificata di legatura dell&#39;arteria coronarica in Mouse

In questo video, dimostriamo un protocollo sperimentale per la costrizione aortica trasversa minimamente invasiva nei topi per esaminare l'insufficienza cardiaca indotta da sovraccarico di pressione.

Banding dell'arco aortico trasverso in modello murino: una tecnica minimamente invasiva nei topi per l'induzione di alta pressione nel ventricolo sinistro

Descriviamo una procedura graduale per la creazione di sovraccarico di pressione e ipertrofia ventricolare sinistra in ratti Wistar dalla costrizione dell'aorta ascendente con una piccola clip metallica. Questo modello è ampiamente utilizzato per studiare i cambiamenti di rimodellamento durante l'ipertrofia cardiaca e per identificare e valutare le strategie per la regressione di tali cambiamenti.

Crescente aortica Costrizione in ratti per la creazione di sovraccarico di pressione cardiaca Ipertrofia Modello

L'obiettivo di questo protocollo è quello di valutare in modo non invasivo i cambiamenti strutturali e funzionali cardiaci in un modello murino della malattia di cuore creato da trasversali costrizione aortica, con B e M-mode ecocardiografia e colore / impulsi di imaging onda Doppler.

Valutazione del Cardiac morfologiche e funzionali Variazioni modello murino di trasversale aortica costrizione da parte ecocardiografica Imaging

Minimamente invasiva trasversale costrizione aortica (MTAC) conserva gli elementi essenziali di regolare costrizione aortica trasversale (TAC), eliminando l'uso di un ventilatore con intubazione tracheale. Esso dimostra di essere un metodo altamente desiderabile per studi ad elevata capacità di sovraccarico del ventricolo sinistro, soprattutto negli studi traslazionali.

Minimamente invasiva trasversale aortica costrizione nei topi

Qui, presentiamo un protocollo di costrizione trasversale aortica (TAC) tramite un thoracotomy laterale. Questa tecnica è una procedura chirurgica mini-invasiva, chiuso il petto con l'obiettivo di simulare sovraccarico pressorio e insufficienza cardiaca nei topi utilizzando le impostazioni standard di Laboratorio TAC.

Un modello chiuso-cassa per indurre costrizione trasversale aortica in topi

Qui, forniamo un approccio utile per studiare il meccanismo del fallimento ventricolare destro. Un approccio più conveniente ed efficiente alla costrizione dell'arteria polmonare viene stabilito utilizzando strumenti chirurgici realizzati internamente. Inoltre, vengono forniti metodi per valutare la qualità di questo approccio mediante ecocardiografia e cateterizzazione.

Induzione del fallimento ventricolare destro da parte della costrizione dell'arteria polmonare e valutazione della funzione ventricolare destra nei topi

Qui descriviamo un protocollo passo-passo di scioglimento dell'aorta chirurgica nel consolidato modello di topi di costrizione aortica. Questa procedura non solo consente di studiare i meccanismi alla base del rimodellamento inverso ventricolare sinistro e della regressione dell'ipertrofia, ma anche di testare nuove opzioni terapeutiche che potrebbero accelerare il recupero del miocardio.

Studiare il rimodellamento inverso ventricolare sinistro mediante lo scioglimento aortico nei roditori

Questo protocollo presenta un metodo migliorato per ottenere ipertrofia miocardica transitoria con sutura assorbibile, simulando la diminuzione dell'ipertrofia ventricolare sinistra dopo aver rimosso il sovraccarico di pressione. Potrebbe essere prezioso per gli studi sulla precondizione ipertrofica miocardica.

Constrizione aortica trasversale operativa con sutura assorbibile per ottenere ipertrofia miocardica transitoria

Il presente protocollo descrive una tecnica modificata e semplificata con una procedura di costrizione aortica trasversale mini-invasiva (TAC) utilizzando un divaricatore autocostruito. Questa procedura può essere condotta senza un ventilatore o un microscopio e introduce un sovraccarico di pressione, portando infine a ipertrofia cardiaca o insufficienza cardiaca.

Una tecnica modificata per la costrizione aortica trasversale nei topi

Impara la tecnica di costrizione aortica trasversale mininvasiva nei topi per indurre ipertrofia ventricolare sinistra. Questo metodo semplificato elimina intubazione e ventilazione, riducendo lo stress animale.

Tecnica di costrizione aortico trasversale mininvasiva in topi per induzione dell'ipertrofia ventricolare sinistra

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