Name: Iniezione idrodinamica pelvi renale per Non virali espressione delle proteine nel rene (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: Impara l'iniezione idrodinamica pelvi renale per espressione proteica specifica nel rene di topo adulto. Questo metodo offre un approccio riproducibile per studi di nefrologia e terapia genica mirata.

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Il Career Development Award dal Department of Veterans Affairs [BX002797] supportati L.E.W. e il National Institutes of Health [R01-DK095867] e American Heart Association [15GRNT25700209] supportati J.C. Il National Institutes of Health [DK093660], Department of Veterans Affairs [BX002190] e centro del Vanderbilt per la malattia renale supportati M.H.W. Questo materiale è il risultato di lavoro sostenuto con risorse e utilizzo di servizi VA Tennessee Valley Healthcare System.

<ol><li>Liu, F., Song, Y., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamics-based+transfection+in+animals+by+systemic+administration+of+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamics-based transfection in animals by systemic administration of plasmid DNA.</a> Gene Ther. 6 (7), 1258-1266 (1999).</li>
<li>Zhang, G., Budker, V., Wolff, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+levels+of+foreign+gene+expression+in+hepatocytes+after+tail+vein+injections+of+naked+plasmid+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">High levels of foreign gene expression in hepatocytes after tail vein injections of naked plasmid DNA.</a> Human Gene Therapy. 10, 1735-1737 (1999).</li>
<li>Fumoto, S., Nishimura, K., Nishida, K., Kawakami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-Dimensional+Imaging+of+the+Intracellular+Fate+of+Plasmid+DNA+and+Transgene+Expression%3A+ZsGreen1+and+Tissue+Clearing+Method+CUBIC+Are+an+Optimal+Combination+for+Multicolor+Deep+Imaging+in+Murine+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Three-Dimensional Imaging of the Intracellular Fate of Plasmid DNA and Transgene Expression: ZsGreen1 and Tissue Clearing Method CUBIC Are an Optimal Combination for Multicolor Deep Imaging in Murine Tissues.</a> PLoS One. 11 (1), e0148233(2016).</li>
<li>Yoshino, H., Hashizume, K., Kobayashi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naked+plasmid+DNA+transfer+to+the+porcine+liver+using+rapid+injection+with+large+volume%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Naked plasmid DNA transfer to the porcine liver using rapid injection with large volume.</a> Gene Ther. 13 (24), 1696-1702 (2006).</li>
<li>Kamimura, K., Suda, T., Xu, W., Zhang, G., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-guided%2C+lobe-specific+hydrodynamic+gene+delivery+to+swine+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Image-guided, lobe-specific hydrodynamic gene delivery to swine liver.</a> Mol Ther. 17 (3), 491-499 (2009).</li>
<li>Kamimura, K., Zhang, G., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-guided%2Cintravascular+hydrodynamic+gene+delivery+to+skeletal+muscle+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Image-guided,intravascular hydrodynamic gene delivery to skeletal muscle in pigs.</a> Mol Ther. 18 (1), 93-100 (2010).</li>
<li>Suda, T., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamic+gene+delivery%3A+its+principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.Ther%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamic gene delivery: its principles and applications.</a> Mol.Ther. 15 (12), 2063-2069 (2007).</li>
<li>Alino, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naked+DNA+delivery+to+whole+pig+cardiac+tissue+by+coronary+sinus+retrograde+injection+employing+non-invasive+catheterization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gene+Med%22%5BJournal%5D)">Naked DNA delivery to whole pig cardiac tissue by coronary sinus retrograde injection employing non-invasive catheterization.</a> J Gene Med. 12 (11), 920-926 (2010).</li>
<li>Suda, T., Gao, X., Stolz, D. B., Liu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+impact+of+hydrodynamic+injection+on+mouse+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Structural impact of hydrodynamic injection on mouse liver.</a> Gene Ther. 14 (2), 129-137 (2007).</li>
<li>Skrypnyk, N. I., Harris, R. C., de Caestecker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia-reperfusion+model+of+acute+kidney+injury+and+post+injury+fibrosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Ischemia-reperfusion model of acute kidney injury and post injury fibrosis in mice.</a> J Vis Exp. (78), (2013).</li>
<li>Woodard, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kidney-specific+transposon-mediated+gene+transfer+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Kidney-specific transposon-mediated gene transfer in vivo.</a> Sci Rep. 7, 44904(2017).</li>
<li>Liang, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+glutathione+S-transferase+A4+accelerates+obstruction-induced+tubule+damage+and+renal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Loss of glutathione S-transferase A4 accelerates obstruction-induced tubule damage and renal fibrosis.</a> Journal of Pathology. 228 (4), 448-458 (2012).</li>
<li>Liang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+insulin-like+growth+factor-1+receptor+in+endothelial+cells+against+unilateral+ureteral+obstruction-induced+renal+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Protective role of insulin-like growth factor-1 receptor in endothelial cells against unilateral ureteral obstruction-induced renal fibrosis.</a> Am J Pathol. 185 (5), 1234-1250 (2015).</li>
<li>Corridon, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+to+facilitate+and+monitor+expression+of+exogenous+genes+in+the+rat+kidney+using+plasmid+and+viral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">A method to facilitate and monitor expression of exogenous genes in the rat kidney using plasmid and viral vectors.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 304 (9), F1217-F1229 (2013).</li>
<li>Wallace, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+kidney+volume+in+mice+with+polycystic+kidney+disease+by+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Tracking kidney volume in mice with polycystic kidney disease by magnetic resonance imaging.</a> Kidney Int. 73 (6), 778-781 (2008).</li>
<li>Woodard, L. E., Wilson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((piggyBac-ing+models+and+new+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">piggyBac-ing models and new therapeutic strategies.</a> Trends Biotechnol. 33 (9), 525-533 (2015).</li>
<li>Yeikilis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamics+based+transfection+in+normal+and+fibrotic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamics based transfection in normal and fibrotic rats.</a> World J Gastroenterol. 12 (38), 6149-6155 (2006).</li>
<li>Thalhofer, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+transgenic+Leishmania+parasites+in+a+live+host%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of transgenic Leishmania parasites in a live host.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li>
<li>Wooddell, C. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+damage+after+delivery+of+naked+plasmid+DNA+into+skeletal+muscles+is+batch+dependent%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Muscle damage after delivery of naked plasmid DNA into skeletal muscles is batch dependent.</a> Hum Gene Ther. 22 (2), 225-235 (2011).</li>
<li>Crespo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamic+liver+gene+transfer+mechanism+involves+transient+sinusoidal+blood+stasis+and+massive+hepatocyte+endocytic+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamic liver gene transfer mechanism involves transient sinusoidal blood stasis and massive hepatocyte endocytic vesicles.</a> Gene Ther. 12 (11), 927-935 (2005).</li>
<li>Rocca, C. J., Ur, S. N., Harrison, F., Cherqui, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((rAAV9+combined+with+renal+vein+injection+is+optimal+for+kidney-targeted+gene+delivery%3A+conclusion+of+a+comparative+study%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">rAAV9 combined with renal vein injection is optimal for kidney-targeted gene delivery: conclusion of a comparative study.</a> Gene Ther. 21 (6), 618-628 (2014).</li>
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Gli autori non hanno nulla di divulgare e non dichiarare alcun conflitto di interessi.

In questo protocollo è descritto un metodo affidabile per la realizzazione di espressione genica riproducibile in particolare nel rene. Nelle mani di un chirurgo esperto moderatamente abbiamo trovato la percentuale dei topi transfettati con questa tecnica per essere nella gamma di 50-100%, a seconda dell'età del mouse e la sensibilità di lettura del transgene. Il livello di espressione di gene della luciferasi era sopra priorità bassa per parecchi mesi in topi che ricevono piggyBac trasposoni e completamente man...

La tecnica di iniezione della vena della coda idrodinamica è diventato un modo comunemente usato per raggiungere elevati livelli di espressione genica nei mouse del fegato1,2. I reni sono anche trasfettati con questa tecnica ad un livello più basso, circa 100 volte meno3. L'iniezione idrodinamica pelvi renale descritto qui fornisce un modo semplice per controllare la specificità di espressione organo attraverso mezzi fisici utilizzando gli stessi principi idrodinamici che sono stati stabiliti in precedenza nel fegato4,5 , muscolo6e altri organi7,8. Questo metodo transfects cellule in animali vivi in vivo mediante pressione e velocità per forzare il fluido contenente DNA nelle cellule, allo stesso tempo inducendo danni all'organo che è rapidamente risolto9. Usando le tecniche chirurgiche consolidate per visualizzare il rene attraverso un' incisione di fianco10 insieme con una singola iniezione con una siringa di insulina, abbiamo trovato successo transfezione di vari tipi di cellule renali, principalmente interstiziale fibroblasti, tubuli e raccolta del condotto11. Dissezione di questi topi ha dimostrato che altri organi non transfected a livelli abbastanza in alto per visualizzare di luciferasi11di tecniche di imaging. Poiché la tecnica è non-virale, uso del DNA del plasmide per la transfezione permette facile e veloce preparazione dei reagenti necessari per l'iniezione.
Abbiamo usato iniezioni localizzate di idrodinamiche per esprimere l'antiossidante glutatione S-transferasi A4, il recettore del fattore di crescita 1 insulino-simile e l'eritropoietina dell'ormone nel rene, tutte dotate di effetti biologici previsti11, 12 , 13. valutazione dettagliata della via di somministrazione, volume di iniezione, dosaggio di DNA e la scelta del promotore è stata effettuata11. Inoltre, entrambi i piggyBac trasposone sistema trattamento e/o ciclofosfamide per sopprimere la reazione immunitaria per il transgene hanno dimostrato di migliorare i risultati a lungo termine espressione di gene11. Altri ricercatori hanno utilizzato un approccio della vena renale nel ratto con successo, raggiungere la transfezione alta efficienza per periodi di tempo superiori a un mese14. Tuttavia, correzione genetica dei fenotipi che imita la malattia umana vengono solitamente eseguiti in topi prima come un proof-of-concept poiché modelli genetici più mammiferi sono modelli murini. Abbiamo confrontato ad iniezione della vena renale alla pelvi renale iniezione e trovato che iniezione nella pelvi renale era superiore alla vena renale per l'espressione genica (circa dieci volte superiore) e sopravvivenza11. La pelvi renale è un percorso ideale di entrata nel rene, perché è abbastanza flessibile da tollerare fluttuazioni della produzione di urina e spesso è in grado di mantenere la sua integrità strutturale anche quando dilatato durante idronefrosi. Inoltre, iniezione nella pelvi renale consentito l'accesso al rene senza perforare la capsula del rene, permettendo il visibilmente trattenuto dal rene meglio di intraparenchymal iniezione del fluido iniettato. Altri organi del mouse non si dispone di un percorso di ingresso diverso da quello del sistema vascolare, ma lo spazio urinario del rene è un sito di iniezione ideale. Inoltre, iniezione nella vena renale ha provocato perdite di sangue nella cavità addominale. Il volume totale del rene dei reni di selvaggio-tipo di mouse è stato stimato dalla risonanza magnetica per essere circa 0,2 cm3, quindi il volume di un singolo rene è approssimativamente uguale alla quantità di liquido iniettato dal bacino renale idrodinamico iniezione (100 µ l)15. Qui, abbiamo messo a disposizione tutte le sfumature dettagliate del protocollo iniezione idrodinamica pelvi renale per raggiungere transfezione riproducibile del rene.

<table><tbody><tr><td>AnaSed Xylazine</td><td>Patterson Veterinary</td><td>07-808-1947</td><td>Anestetico - Sostanza non controllata</td></tr><tr><td>BD Siringa da insulina 0,5 mL 29G 1/2 pollice</td><td>Cardinal Health</td><td>309306</td><td>Siringhe necessarie</td></tr><tr><td>Buprenex</td><td>Farmacista/Veterinario</td><td></td><td>Analgesia - Sostanza controllata</td></tr><tr><td>Dynarex Telo per asciugamani monouso</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>19-310-671</td><td>Posizionare sul termoforo</td></tr><tr><td>EndoFree Plasmid Maxi Kit</td><td>Qiagen</td><td>12362</td><td>Utilizzare solo DNA plasmidico privo di endotossine</td></tr><tr><td>Endosafe Gel-Clot LAL Rapid Positive Control</td><td>Charles River</td><td>PC200</td><td>Controllo positivo per il test delle endotossine</td></tr><tr><td>Endosafe Gel-Clot LAL Rapid Single Test Vial</td><td>Charles River</td><td>R13500</td><td>Test delle endotossine</td></tr><tr><td>Forbici per micro dissezione extra fini</td><td>Roboz Surgical Strumento</td><td>RS-5882</td><td>Strumento chirurgico</td></tr><tr><td>Fisherbrand Busta di sterilizzazione a tenuta istantanea - 9"</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>01-812-51</td><td>Per la sterilizzazione in autoclave degli strumenti chirurgici</td></tr><tr><td>Pompa di calore</td><td>Gaymar Paragon Medical</td><td>TP-700</td><td>Pompa di calore a circolazione d'acqua</td></tr><tr><td>Germinatore 500</td><td>Strumento chirurgico Roboz</td><td>DS-401</td><td>Per riutilizzare gli strumenti chirurgici durante l'intervento</td></tr><tr><td>Graefe Pinze</td><td>Roboz Strumento chirurgico</td><td>RS-5136</td><td>Strumento chirurgico</td></tr><tr><td>Graefe Tissue Pinze</td><td>Roboz Strumento chirurgico</td><td>RS-5153</td><td>Strumento chirurgico</td></tr><tr><td>Halsey Needle Holder, 5" di lunghezza</td><td>Strumento chirurgico Roboz</td><td>RS-7841</td><td>Strumento chirurgico</td></tr><tr><td>Cuscinetti termici - 15" x 21" - necessari almeno 3</td><td>Paragon Medical</td><td>TP22G</td><td>Per l'uso con la pompa</td></tr> <tr><td>di calore GaymarIsoFlo (Isoflurano, USP)</td><td>Abbott Animal Health</td><td>5260-04-05</td><td>Per l'imaging e l'eutanasia</td></tr><tr><td>Isotec Sistema di somministrazione di isoflurano Vaporizzatore</td><td>Smiths Medical</td><td>VCT3K2</td><td>Per imaging ed eutanasia</td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Farmacista/Veterinario</td><td></td><td>Anestetico - Sostanza controllata</td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly-Clark Professional</td><td>34120</td><td>Tessuti da laboratorio</td></tr><tr><td>Software Living Image</td><td>Caliper Life Sciences</td><td></td><td>Per l'imaging di animali vivi</td></tr><tr><td>Luciferin</td><td>Perkin Elmer</td><td>122796 Per l'imaging</td><td>di animali vivi</td></tr><tr><td>Spettrofotometro Nanodrop 2000</td><td>Thermo Scientific</td><td>ND-2000-US-CAN</td><td>per la misurazione del DNA</td></tr><tr><td>Tamponi prevantics Thermo</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-100-110</td><td>Per la preparazione alla chirurgia della pelle</td></tr><tr><td>Suture Prolene 5-0 Taper 30"</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NC0256891</td><td>Suture non assorbibili per la pelle</td></tr><tr><td>Puralube Brand Opthalmic</td><td>Ungment Patterson Veterinary</td><td>07-888-2572</td><td>Per mantenere gli occhi umidi durante l'intervento chirurgico</td></tr><tr><td>Trans IT - QR Hydrodynamic Delivery Solution</td><td>Mirus Bio</td><td>MIR-5240</td><td>Buffer di rilascio idrodinamico per diluire il DNA</td></tr><tr><td>Vicryl 5-0 Sutures J303H</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>NC9816710</td><td>Suture riassorbibili per lo strato muscolare</td></tr><tr><td>Wahl Mini Arco Clipper</td><td>Med-Vet International</td><td>8787-1550</td><td>Rasoio per la preparazione della pelle</td></tr><tr><td>Xenogen IVIS 200</td><td>Caliper Life Sciences</td><td></td><td>Per l'imaging di animali vivi</td></tr></tbody></table>

iniezione idrodinamica pelvi renale per non virali espressione delle proteine nel rene

Hydrodynamic Renal Pelvis Injection for Non-viral Expression of Proteins in the Kidney

Iniezione idrodinamica crea un ambiente locale, ad alta pressione di transfect vari tessuti con il DNA del plasmide ed altre sostanze. Iniezione della vena della coda idrodinamica, ad esempio, è un metodo ben stabilito che il fegato può essere transfected. Questo manoscritto descrive un'applicazione di principi idrodinamici per iniezione del rene del mouse direttamente con il DNA del plasmide per l'espressione genica del rene-specifica. Topi sono anestetizzati e rene è esposto da un'incisione del fianco seguita da una rapida iniezione di una soluzione contenente DNA plasmidico direttamente nella pelvi renale. L'ago è mantenuto sul posto per dieci secondi e il sito di incisione viene suturato. Il giorno seguente, immagini animali dal vivo, Western blot, o immunohistochemistry può essere usato per analisi di espressione genica o altri dosaggi adatti per il transgene di scelta vengono utilizzati per il rilevamento della proteina di interesse. Metodi pubblicati per prolungare l'espressione genica comprendono trattamento di integrazione e ciclofosfamide transgene transposon-mediata per inibire la risposta immunitaria per il transgene.

La tecnica di iniezione e chirurgia sono semplici da eseguire una volta masterizzato, che non richiede grandi attrezzature o materiali costosi. Se nuovo in chirurgia renale incisione a fianco, una giornata di formazione su diversi topi prevista per l'eutanasia dovrebbe essere consentita in cui i topi non sono recuperata dopo chirurgia perché il primo tentativo di questo tipo di chirurgia può richiedere molto più tempo rispetto al normale. In alternativa, gli investigatori hanno familiari ...

Questo protocollo descrive un metodo per iniettare DNA plasmidico in rene del mouse tramite la pelvi renale per produrre l'espressione del transgene in particolare nel rene.

Iniezione idrodinamica pelvi renale per Non virali espressione delle proteine nel rene

Hydrodynamic injection creates a local, high-pressure environment to transfect various tissues with plasmid DNA and other substances. Hydrodynamic tail ...

L'obiettivo generale di questa procedura chirurgica è quello di produrre l'espressione proteica dal DNA plasmidico nel rene del topo adulto. Questo metodo è un nuovo strumento per affrontare questioni chiave in nefrologia, come ad esempio il modo in cui l'espressione di una proteina di interesse influisce sul rene adulto. Il vantaggio principale di questa tecnica è che produce l'espressione proteica in modo riproducibile, in particolare nel rene, a differenza di altri metodi che possono produrre anche l'espressione genica in altri organi.La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto l'iniezione della pelvi renale richiede un'attenta esposizione e deve essere eseguita rapidamente affinché il DNA plasmatico possa entrare nelle cellule. Inizia risospendendo il DNA plasmidico nel tampone di consegna idrodinamico. Su un termoforo a circolazione d'acqua coperto da un pad blu, posizionare il mouse.Utilizzando un rasoio progettato per la toelettatura degli animali domestici, radere il lato sinistro della parte posteriore del mouse dalla spalla alla groppa e dal fianco alla colonna vertebrale. Pulisci i capelli sciolti e i detriti e applica un unguento veterinario in ent

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Fonte: Gupta, K., et al. Iniezione intrarenale di Escherichia coli in un modello ratto di pielonefrite.  J. Vis. Esp. (2017).Questo video mostra l'iniezione intrarenale di E. coli nel bacino renale di un ratto anestetizzato per indurre un'infezione renale localizzata, modellando la pielonefrite acuta. Mette in evidenza le principali fasi chirurgiche e le tecniche asettiche necessarie per stabilire un modello di infezione riproducibile in vivo per l'analisi a valle.

Iniezione intrarenale di E. coli nel bacino renale di un ratto

Source: Van Lidth de Jeude, et al. A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids. J. Vis. Exp. (2015).This video demonstrates the process of producing viral particles through transfection of embryonic kidney cells with plasmid–polyethylenimine complexes, which leads to viral genome expression, particle assembly, and virus collection in the medium.

Polyethylenimine-Mediated Transfection of Embryonic Kidney Cells for Recombinant Virus Production

In questo video, presentiamo il protocollo per l'iniezione idrodinamica di plasmidi nella pelvi renale del rene di topo per la trasfezione dell'acido nucleico. Questa tecnica consente la somministrazione organo-specifica di plasmidi utilizzando il principio dell'alta pressione idrostatica, che spinge con forza i plasmidi nel sito specifico senza causare lesioni tissutali.

Iniezione idrodinamica della pelvi renale: una tecnica per fornire direttamente il DNA nelle cellule renali del modello murino

In questo video, dimostriamo la somministrazione intra-renale di farmaci nei ratti attraverso l'arteria renale. Questo metodo è utile per migliorare il targeting dei farmaci, la potenza dei farmaci e ridurre al minimo la tossicità sistemica.

Somministrazione intrarenale di farmaci nei ratti: un metodo per somministrare farmaci terapeutici nel rene di ratto tramite iniezione intra-arteriosa

Qui, presentiamo un protocollo per utilizzare mappe del destino e traccianti di lignaggio per indirizzare le iniezioni nei singoli blastomeri che danno origine al rene degli embrioni di Xenopus laevis.

Tecnica a Target microiniezione per lo sviluppo<em&gt; Xenopus</em&gt; Kidney

lesioni renali sostenuti da nefrotossine, che comprendono farmaci che vanno dagli antibiotici ai chemioterapici, può portare a disturbi complessi, la cui patogenesi rimane completamente sconosciuto. Questo protocollo dimostra come zebrafish può essere utilizzato per la malattia modellazione di queste condizioni, che possono essere applicati alla individuazione di misure renoprotettivi.

Nefrotossina microiniezione in Zebrafish per creare un modello danno renale acuto

La somministrazione di farmaci per il recupero della funzione renale richiede il controllo della localizzazione e distribuzione del composto terapeutico. Qui, descriviamo in dettaglio una semplice tecnica per la consegna intrarenale di farmaci nei ratti. Questa procedura può essere eseguita facilmente senza mortalità ed elevata riproducibilità.

Consegna intravascolare di Biologics al rene di ratto

Questo manoscritto descrive un modello chirurgico di pielonefrite su ratto utilizzando l'infezione intra-renale diretta da Escherichia coli nella pelvi renale. La procedura sperimentale può essere utilizzata per studiare la patogenesi della pielonefrite, nonché l'infiammazione e la fibrosi associate.

Iniezione intrarenale di<emescherichia coli> In un modello di ratto di pielonefriti</emescherichia>

Questo manoscritto descrive un metodo per la consegna mirata a un singolo rene tramite un catetere posto nell'aorta addominale infrarenale nel topo.

Consegna diretta di farmaci ai reni attraverso l'arteria renale

Qui, forniamo miRNA esogeni sintetizzati artificialmente al rene tramite iniezione di vena della coda di un vettore non virale e nanoparticelle di polietilenimina in diversi modelli murini di malattie renali. Ciò ha portato a una significativa sovraespressione del miRNA bersaglio nel rene, con conseguente progressione inibita della malattia renale in diversi modelli murini.

Rilascio di miRNA esogeno sintetizzato artificialmente al rene utilizzando nanoparticelle di polietilenimina in diversi modelli murini di malattie renali

Questo rapporto descrive in dettaglio il metodo di iniezione localizzato dei vettori AAV attraverso la pelvi renale per un trasferimento genico efficace e sicuro nel rene di topo.

Consegna efficace e sicura del gene al rene di topo tramite iniezione lenta retrograda della pelvi renale di vettori virali adeno-associati

Impara l'iniezione idrodinamica pelvi renale per espressione proteica specifica nel rene di topo adulto. Questo metodo offre un approccio riproducibile per studi di nefrologia e terapia genica mirata.

Iniezione idrodinamica pelvi renale per Non virali espressione delle proteine nel rene

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