Il dosaggio di ricostituzione di Organoid (ORA) per l'analisi funzionale di nicchia cellule staminali intestinale e

L'obiettivo generale del saggio di ricostituzione degli organoidi è l'analisi funzionale dei due componenti principali della nicchia di cellule staminali intestinali Lgr5 positivi nelle cellule di Paneth attraverso la loro modificazione genetica o biochimica seguita dalla ricostituzione in organoidi auto-rinnovanti. Questo metodo consente di affrontare questioni chiave specifiche nel campo delle cellule staminali intestinali, come la modificazione genetica o biochimica nelle cellule staminali e di nicchia. Il vantaggio principale di questa tecnica è che, a differenza di altri saggi che utilizzano intere cripte, impiega cellule staminali e di nicchia selezionate, consentendo così l'analisi specifica del tipo di cellula.

dimostrazione video di questo metodo è fondamentale, soprattutto quando si tratta delle fasi di dissociazione dei tessuti e di manipolazione delle cellule. Se non eseguiti correttamente, questi passaggi porteranno a una scarsa vitalità cellulare, soprattutto dopo lo smistamento dei fatti. Inizia questa procedura con la preparazione dei materiali e il sacrificio di un mouse Lgr5 su uno sfondo C57BL/6J come descritto nel protocollo di testo.