Name: Tecniche per lo studio dellanatomia del sistema visivo Ant (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 56 s
Description: Scopri tecniche di microscopia a luce ed elettronica per studiare l'anatomia del sistema visivo delle formiche. Questi metodi permettono di ottenere informazioni dettagliate sulla morfologia oculare e stimare parametri visivi.

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Siamo grati a Jochen Zeil, Paul Cooper e Birgit Greiner per condividere le loro conoscenze in anatomia degli insetti e per dimostrare alcune delle tecniche che abbiamo descritto qui. Siamo grati per il personale di talento e di supporto al centro per microscopia avanzata alle ANU e la microscopia Unit presso MQU. Questo lavoro è stato supportato da una borsa di studio laureato a FRE e sovvenzioni da Australian Research Council (DE120100019, FT140100221, DP150101172).

<ol><li>Zeil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visual+homing%3A+an+insect+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Visual homing: an insect perspective.</a> Curr. Opin. Neurobiol. 22, 285-293 (2012).</li>
<li>Wehner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desert+ant+navigation%3A+how+miniature+brains+solve+complex+tasks%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Desert ant navigation: how miniature brains solve complex tasks.</a> J. Comp. Physiol. A. 189, 579-588 (2003).</li>
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<li>Warrant, E. J., Dacke, M. <a target="_blank" href="http://physiologyonline.physiology.org/content/31/3/182">Visual navigation in nocturnal Insects.</a> Physiology. 31, 182-192 (2016).</li>
<li>Taylor, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dual+function+of+Orchid+bee+ocelli+as+revealed+by+x-ray+microtomography%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">The dual function of Orchid bee ocelli as revealed by x-ray microtomography.</a> Curr. Biol. 26, 1-6 (2016).</li>
<li>Hölldobler, B., Wilson, E. O. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aH%C3%B6lldobler%2C+B+%22The+Ants%22">The Ants</a>. , Springer-Verlag. Berlin Heidelberg. (1990).</li>
<li>Ali, T. M. M., Urbani, C. B., Billen, J. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF01140185">Multiple jumping behaviors in the ant Harpegnathos saltator.</a> Naturwissen. 79, 374-376 (1992).</li>
<li>Weiser, M. D., Kaspari, M. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.0307-6946.2006.00759.x/abstract">Ecological morphospace of New World ants.</a> Ecol. Entomol. 31, 131-142 (2006).</li>
<li>Bulova, S., Purce, K., Khodak, P., Sulger, E., O'Donnell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Into+the+black+and+back%3A+the+ecology+of+brain+investment+in+Neotropical+army+ants+%28Formicidae%3A+Dorylinae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Naturwissen%22%5BJournal%5D)">Into the black and back: the ecology of brain investment in Neotropical army ants (Formicidae: Dorylinae).</a> Naturwissen. 103, 3-4 (2016).</li>
<li>Narendra, A., Reid, S. F., Hemmi, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+twilight+zone%3A+ambient+light+levels+trigger+activity+in+primitive+ants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+R.+Soc.+B%22%5BJournal%5D)">The twilight zone: ambient light levels trigger activity in primitive ants.</a> Proc. R. Soc. B. 277, 1531-1538 (2010).</li>
<li>Narendra, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caste-specific+visual+adaptations+to+distinct+daily+activity+schedules+in+Australian+Myrmecia+ants%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+R.+Soc.+B%22%5BJournal%5D)">Caste-specific visual adaptations to distinct daily activity schedules in Australian Myrmecia ants.</a> Proc. R. Soc. B. 278, 1141-1149 (2011).</li>
<li>Moser, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.treesearch.fs.fed.us/pubs/9853">Eye size and behaviour of day-and night-flying leafcutting ant alates.</a> J. Zool. 264, 69-75 (2004).</li>
<li>Stöckl, A. L., Ribi, W. A., Warrant, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptations+for+nocturnal+and+diurnal+vision+in+the+hawkmoth+lamina%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Adaptations for nocturnal and diurnal vision in the hawkmoth lamina.</a> J. Comp. Neurol. 524, 160-175 (2016).</li>
<li>Zeil, J. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF00605027">Sexual dimorphism in the visual system of flies: the compound eyes and neural superposition in Bibionidae (Diptera).</a> J. Comp. Physiol. A. 150, 379-393 (1983).</li>
<li>Dacke, M., Nordström, P., Scholtz, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twilight+orientation+to+polarised+light+in+the+crepuscular+dung+beetle+Scarabaeus+zambesianus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Twilight orientation to polarised light in the crepuscular dung beetle Scarabaeus zambesianus.</a> J. Exp. Biol. 206, 1535-1543 (2003).</li>
<li>Greiner, B., Ribi, W. A., Warrant, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+and+optical+adaptations+for+nocturnal+vision+in+the+halictid+bee+Megalopta+genalis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tiss+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal and optical adaptations for nocturnal vision in the halictid bee Megalopta genalis.</a> Cell Tiss Res. 316, 377-390 (2004).</li>
<li>Warrant, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nocturnal+vision+and+landmark+orientation+in+a+tropical+halictid+bee%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Nocturnal vision and landmark orientation in a tropical halictid bee.</a> Curr. Biol. 14, 1309-1318 (2004).</li>
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<li>Ribi, W. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRibi%2C+WA+%22A+Handbook+in+Biological+Electron+Microscopy%22">A Handbook in Biological Electron Microscopy</a>. , 1-106 (1987).</li>
<li>Narendra, A., Ramirez-Esquivel, F., Ribi, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compound+eye+and+ocellar+structure+for+walking+and+flying+modes+of+locomotion+in+the+Australian+ant%2C+Camponotus+consobrinus%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Compound eye and ocellar structure for walking and flying modes of locomotion in the Australian ant, Camponotus consobrinus.</a> Sci. Rep. 6, 22331(2016).</li>
<li>Narendra, A., Greiner, B., Ribi, W. A., Zeil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+and+dark+adaptation+mechanisms+in+the+compound+eyes+of+Myrmecia+ants+that+occupy+discrete+temporal+niches%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Light and dark adaptation mechanisms in the compound eyes of Myrmecia ants that occupy discrete temporal niches.</a> J. Exp. Biol. 219, 2435-2442 (2016).</li>
<li>Ribi, W. A., Zeil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+visual+system+of+the+Australian+%26%2334%3BRedeye%26%2334%3B+cicada+%28Psaltoda+moerens%29%5BTitle%5D)+AND+%22Arthr.+Struct.+Dev%22%5BJournal%5D)">The visual system of the Australian &#34;Redeye&#34; cicada (Psaltoda moerens).</a> Arthr. Struct. Dev. 44, 574-586 (2015).</li>
<li>Ribi, W. A., Warrant, E. J., Zeil, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+organization+of+honeybee+ocelli%3A+regional+specializations+and+rhabdom+arrangements%5BTitle%5D)+AND+%22Arthr.+Struct.+Dev%22%5BJournal%5D)">The organization of honeybee ocelli: regional specializations and rhabdom arrangements.</a> Arthr. Struct. Dev. 40, 509-520 (2011).</li>
<li>Ribi, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colour+receptors+in+the+eye+of+the+digger+wasp%2C+Sphex+cognatus+Smith%3A+evaluation+by+selective+adaptation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tiss.+Res%22%5BJournal%5D)">Colour receptors in the eye of the digger wasp, Sphex cognatus Smith: evaluation by selective adaptation.</a> Cell Tiss. Res. 195, 471-483 (1978).</li>
<li>Ribi, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+and+migration+of+screening+pigments+in+the+retina+of+Pieris+rapae+L.+%28Lepidoptera%2C+Pieridae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tiss.+Res%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure and migration of screening pigments in the retina of Pieris rapae L. (Lepidoptera, Pieridae).</a> Cell Tiss. Res. 191, 57-73 (1978).</li>
<li>Lau, T., Gross, E., Meyer-Rochow, V. B. <a target="_blank" href="https://www.eje.cz/pdfs/eje/2007/03/14.pdf">Sexual dimorphism and light/dark adaptation in the compound eyes of male and female Acentria ephemerella (Lepidoptera: Pyraloidea: Crambidae).</a> Eur. J. Entomol. 104, 459-470 (2007).</li>
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<li>Streinzer, M., Brockmann, A., Nagaraja, N., Spaethe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+and+caste-specific+variation+in+compound+eye+morphology+of+five+honeybee+species%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Sex and caste-specific variation in compound eye morphology of five honeybee species.</a> PLoS ONE. 8, e57702(2013).</li>
<li>Somanathan, H., Warrant, E. J., Borges, R. M., Wallén, R., Kelber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+and+sensitivity+of+the+eyes+of+the+Asian+honeybees+Apis+florea%2C+Apis+cerana+and+Apis+dorsata%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Resolution and sensitivity of the eyes of the Asian honeybees Apis florea, Apis cerana and Apis dorsata.</a> J. Exp. Biol. 212, 2448-2453 (2009).</li>
</ol>

Gli autori non dichiarano interessi concorrenti.

La suite dei metodi descritti sopra consentono un'efficace indagine il sistema ottico di formiche e altri insetti. Queste tecniche di informare la nostra comprensione della risoluzione di campionamento, sensibilità ottica e potenziale sensibilità di polarizzazione dell'occhio in fase di studio. Questa conoscenza fornisce una base importante per indagini fisiologiche e comportamentali nella loro capacità visiva. Inoltre, mentre i metodi descritti qui sono concentrati su sistemi visivi formica, queste tecniche possono esse...

Vision è una modalità sensoriale importante per la maggior parte degli animali. Visione è fondamentale soprattutto nel contesto della navigazione per individuare obiettivi, che istituisce e aderendo alle rotte e come ottenere informazioni bussola1,2. Insetti di rilevare informazioni visive usando un paio di occhi composti e, in alcuni casi, da uno a tre posti dorsalmente semplici occhi chiamato ocelli3,4,5.
Gli occhi di formiche sono di particolare interesse perché, mentre le formiche sono meravigliosamente diversificate, conservano alcune caratteristiche chiave tra le specie. Nonostante la drammatica variazione in anatomia, dimensioni e l'ecologia, la maggior parte delle specie è eusociali e vive in colonie; di conseguenza, diverse specie affrontano sfide simili visual in termini di navigazione avanti e indietro tra un posto centrale e risorse. Attraverso le formiche la stessa base occhio bauplan può essere osservata in animali che vanno da 0,5-26 mm in lunghezza del corpo, da esclusivamente diurno di specie strettamente notturne e da lento a piedi sotterraneo leaping visual predatori6,7, 8,9,10. Tutte queste differenze sconcertante in ecologia e comportamento dar luogo a innumerevoli permutazioni delle stesse strutture di base dell'occhio per adattarsi a diversi ambienti, stili di vita e dimensioni del corpo11,12. Di conseguenza, studiando l'ecologia visiva di formiche fornisce un vero e proprio tesoro di possibilità per l'investigatore risoluto.
Capire il sistema visivo degli insetti è essenziale a comprendere un loro funzionalità comportamentale. Questo è evidente da studi integrativa che ben combinano anatomia con ecologia e il comportamento di un grande successo in alcuni gruppi di insetti (per esempio, riferimenti13,14,15,16, 17). anche se il campo di navigazione di formica e il comportamento della formica, in generale, è stato molto efficace, pochissima enfasi è stata posta sulla visione di formica di fuori di alcune specie selezionate. Qui, ci soffermeremo sulle tecniche coinvolte nell'inchiesta di disegno dell'occhio di formiche. Mentre ci si concentrerà sulle formiche, queste tecniche possono essere applicate, con lievi modifiche, agli altri insetti, troppo.

<table><tbody><tr><td>Formica</td><td>Myrmecia midas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscopio</td><td>Leica M205 FA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sputter coater</td><td>Pro Sci Tech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanolo</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Piastra di Petri</td><td>ProSciTech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio da dissezione</td><td>Leica MZ6</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Insect Pin</td><td>ProSciTech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Smalto per unghie incolore</td><td>Non di marca: in qualsiasi negozio</td><td></td><td></td>di</tr><tr><td>cosmetici Vetrino</td><td>ProSciTech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lama di rasoio</td><td>ProSciTech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Foreceps</td><td>ProSciTech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vetrino coprioggetti</td><td>ProSciTech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscopio composto</td><td>Leica DM5000 B</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldeide</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformalydehyde</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di Potassio (KCl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>di-Sodium Idrogeno fosfato (Na2HPO4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Potassio di-idrogeno fosfato (KH2PO4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodium Cloruro (NaCl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Osmio tetrossido</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Araldite Resina epossidica</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipetta</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Toluidie Blue</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hotplate</td><td>Riechert HK120</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tecniche per lo studio dell'anatomia del sistema visivo ant

Techniques for Investigating the Anatomy of the Ant Visual System

Questo articolo viene descritta una suite di tecniche in microscopia (LM) e microscopia elettronica (EM) che può essere utilizzata per studiare l'anatomia interna ed esterna dell'occhio degli insetti. Questi includono tecniche istologiche tradizionali ottimizzato per il lavoro sugli occhi di formica e adattato a lavorare di concerto con altre tecniche quali la microscopia elettronica a trasmissione (TEM) e microscopia elettronica a scansione (SEM). Queste tecniche, sebbene notevolmente utile, possono essere difficile per il microscopista novizio, quindi grande enfasi è stata posta in questo articolo sulla risoluzione dei problemi e ottimizzazione per diversi esemplari. Forniamo informazioni su tecniche di imaging per l'intero campione (foto-microscopia e SEM) e discutere i vantaggi e svantaggi. Evidenziamo la tecnica utilizzata nel determinare i diametri della lente per l'occhio intero e discutere nuove tecniche per il miglioramento. Infine, verranno illustrate tecniche coinvolte nella preparazione dei campioni per LM e TEM, sezionamento, colorazione e questi campioni di imaging. Discutiamo le transenne che uno potrebbe venire da altra parte quando preparare campioni e il modo migliore per navigare intorno a loro.

I metodi descritti qui abilitare studio dettagliato dei semplici e occhi composti di formiche. Vista dorsale della testa usando Z-stack fotomicrografia tecniche di imaging permette di ottenere una panoramica del layout del sistema visivo (Figura 1). Si tratta di una buona preparazione per dissezioni e per determinare l'angolo di taglio desiderato. Questa tecnica è anche utile per effettuare le misurazioni come larghezza della testa, occhio lunghezza e diametr...

Questo articolo viene descritta una suite di tecniche in luce e la microscopia elettronica per studiare l'anatomia interna ed esterna dell'occhio degli insetti. Questi includono diverse tecniche tradizionali ottimizzate per il lavoro su occhi di formica, dettagliati risoluzione dei problemi e suggerimenti per l'ottimizzazione per diversi esemplari e aree di interesse.

Tecniche per lo studio dell'anatomia del sistema visivo Ant

This article outlines a suite of techniques in light microscopy (LM) and electron microscopy (EM) which can be used to study the internal and external eye ...

L'obiettivo generale di questa suite di tecniche di microscopia è quello di ottenere informazioni anatomiche dettagliate del sistema visivo della formica. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo dell'ecologia visiva, per stimare vari parametri visivi, come la sensibilità ottica, l'acuità visiva e la dimensione del campo visivo. Il vantaggio principale di questa tecnica è che fornisce una panoramica completa di un determinato sistema visivo.Può anche essere adattato per l'uso con molte specie diverse. Per realizzare le repliche della cornea, utilizzare formiche conservate in etanolo o montate su uno spillo, o in plastilina. Se la testa è relativamente grande, le parti del corpo rimanenti possono essere rimosse.Per iniziare, stendere rapidamente lo smalto incolore ad asciugatura rapida sull'occhio, usando uno stuzzicadenti, senza graffiare l'occhio. Lascia riposare lo smalto a temperatura ambiente. Quindi, usa una sottile spilla per insetti per sollevare delicatamente la replica dalla capsula della testa che circonda l'occhio.E usando il forcipe afferra la parte della replica che copre la testa, ma non l'occhio. Quindi, posiziona la replica su un vetrino. Lì, usa una lama di rasoio per tagliare con cura il materiale in eccesso intorno all'occhio, fissando la replica.Prima di posizionare un vetrino coprioggetti sulla replica, potrebbe essere necessario fare tre o quattro fette radiali parziali fini per appiattirla. Quando si posiziona il vetrino coprioggetto, documentare l'orientamento della replica sul vetrino. Quindi, sigillare il vetrino coprioggetti, utilizzando piccoli tocchi di smalto sugli angoli, assicurandosi che il liquido non tocchi la replica.Il vetrino è quindi pronto per l'imaging utilizzando un microscopio composto. Per iniziare, anestetizza la formica e mettila in una capsula di Petri. Se il colorante deve essere adattato per condizioni luminose o puntiformi, questo dovrebbe essere fatto per alcune ore prima della dissezione.Se le condizioni del punto sembrano essere mantenute, la dissezione deve essere eseguita con la luce rossa. Per prima cosa, rimuovi le antenne usando una pinza. Quindi, rimuovere le parti della bocca usando una lama di rasoio affilata.Negli esemplari di grandi dimensioni, tagliare la parte anteriore dell'occhio. In un piccolo esemplare, tagliare il più vicino possibile agli occhi, senza tirare il cervello, poiché ciò potrebbe strappare la retina. Successivamente, orientare la testa e praticare un'incisione trasversale, che rimuove la parte ventrale della testa, che può includere parte dell'occhio ventrale.Quindi, staccare la capsula cranica con un'incisione coronale, appena dietro l'occhio composto. In questo esempio, le incisioni trasversali e coronali vengono eseguite contemporaneamente. Infine, trasferire la capsula della testa sezionata con gli occhi composti su un fissativo ghiacciato.È importante eseguire questi passaggi rapidamente, per evitare che il tessuto si degradi, quindi il tessuto dovrebbe entrare nel fissativo entro due minuti dalla prima incisione. Seguendo il protocollo di testo, preparare il campione e scolare la resina in eccesso. Quindi, posizionare il campione sul blocco in posizione verticale e, se necessario, utilizzare un po' di resina in eccesso per fissarlo lì.Etichettare il blocco con etichette di carta incorporate nella resina o attaccate al blocco. Quindi, polimerizza la resina in un forno a 60 gradi Celsius, per 12-14 ore. Una volta indurito, caricare il campione in una busta pulita.Quindi, montare il blocco su un mandrino per microtomo. Prima di sezionare, assicurarsi che l'orientamento del provino sia appropriato per il piano di sezionamento. Sotto un microscopio da dissezione, taglia il blocco di resina usando una lama di rasoio.Quindi, rimontare il mandrino sul braccio del microtomo e inclinare il campione. Quindi, riempire la barca a coltello con acqua distillata utilizzando una siringa con un filtro da 0,45 micron. Caricare l'acqua fino al bordo del coltello.In alcune sedi il menisco può essere convesso. Quindi, scolare la barca fino a quando il menisco è leggermente concavo, ma raggiunge ancora il bordo del coltello. Ora, lentamente e con attenzione, porta il coltello verso l'esemplare e allinea il blocco al coltello.Effettuare controlli frequenti tramite l'oculare. Quando il coltello è vicino ma non ha ancora tagliato il campione, iniziare a far girare la ruota del microtomo per completare l'avvicinamento. Quindi, quando ci si avvicina alla regione di interesse nel blocco, regolare lo spessore di raccolta della sezione.In questo caso, viene utilizzato un coltello diamantato per realizzare sezioni da un micron. Quindi, dalla siringa dotata di filtro, posizionare una serie di piccole goccioline di acqua distillata su un vetrino. Per raccogliere una sezione di interesse, raccoglila usando uno strumento per ciglia.E con attenzione, fai galleggiare la sezione raccolta su una goccia d'acqua. Continua a caricare su ogni diapositiva il maggior numero possibile di sezioni. Quando uno scivolo è completamente carico, trasferirlo su una piastra calda a 60 gradi Celsius per far evaporare l'acqua e far aderire le sezioni allo scivolo.Questo dura circa 15-20 minuti. Quindi, utilizzare un'altra siringa dotata di filtro per depositare una goccia di colorante blu di toluidina sul vetrino. Posiziona la goccia su un'estremità del vetrino e stendila usando il bordo di un ago senza toccare o raschiare le sezioni.Quindi, posizionare il vetrino sulla piastra riscaldante per 20-60 secondi. Successivamente, spruzzare il vetrino con acqua distillata da un flacone di lavaggio e utilizzare la piastra riscaldante per asciugarlo. Successivamente, controlla i vetrini al microscopio composto e poi acquisiscili per l'immagine.Le tecniche descritte consentono uno studio dettagliato degli occhi semplici e composti delle formiche. L'imaging della vista dorsale della testa utilizzando la fotomicrografia Z-Stack fornisce una panoramica del layout del sistema visivo utile per effettuare misurazioni grossolane. L'imaging SEM fornisce i dettagli necessari per risolvere gli occhi piccoli e i dettagli necessari per identificare la forma di ciascuna lente.Le sezioni semisottili analizzate con la microscopia ottica mostrano l'anatomia interna di un occhio. Le dimensioni della lente, del cono cristallino e del rabdomero possono essere misurate a questa risoluzione e ingrandimento. Possono essere studiate anche le cellule del pigmento, la presenza del tratto conico e le distribuzioni della forma del rabdome.Le sezioni ultrasottili riprodotte dalla TEM forniscono informazioni sull'ultrastruttura, come l'orientamento dei microvillari e, ad esempio, la larghezza del tratto conico cristallino ristretto. Quando si tenta questa tecnica, è davvero importante essere pazienti, utilizzare strumenti puliti e utilizzare soluzioni appena fatte. A seguito di questi esperimenti, è possibile effettuare ulteriori esperimenti comportamentali o fisiologici.Questi esperimenti ci informeranno sulle capacità visive funzionali dell'animale, in relazione all'anatomia dell'occhio. L'uso di queste tecniche ci permette di esplorare la diversità dei sistemi visivi e come si sono evoluti per adattarsi a diversi stili di vita e diverse ecologie, in diverse specie di formiche. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sul sistema visivo delle formiche, può anche essere utilizzato per studiare il sistema visivo di altri insetti e di altri tessuti nervosi.Non dimenticare che lavorare con fissativi e resine è estremamente pericoloso e devono essere sempre prese precauzioni come lavorare nella cappa aspirante e indossare guanti in nitrile.

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Questo protocollo descrive tre fasi per preparare i lobi ottici larvali e adulti di Drosophila per l'imaging: 1) dissezioni cerebrali, 2) immunoistochimica e 3) montaggio. L'accento è posto sul passaggio 3, poiché sono necessari orientamenti di montaggio distinti per visualizzare specifiche strutture del lobo ottico.

dissezione, immunoistochimica e montaggio di cervelli larvali e adulti di Drosophila per la visualizzazione del lobo ottico

L'attuale protocollo dimostra un metodo semplice per tracciare le proiezioni del glutammato dell'area tegmentale ventrale (VTA) all'ippocampo. La fotostimolazione dei neuroni del glutammato VTA è stata combinata con la registrazione CA1 per dimostrare come i terminali del glutammato VTA modulano la presunta velocità di attivazione piramidale di CA1 in vivo.

Tracciato anatomico e funzionale combinato in vivo dei terminali del glutammato dell'area tegmentale ventrale nell'ippocampo

Questo protocollo descrive la procedura di dissezione, le condizioni di coltura e l'imaging dal vivo di un sistema di espianto antenna-cervello per lo studio dell'assemblaggio del circuito olfattivo.

Un sistema di espianto per studi di imaging time-lapse dell'assemblaggio di circuiti olfattivi in Drosophila

Il protocollo qui descrive la misurazione dell'organizzazione spaziale degli assi visivi degli occhi delle mosche domestiche, mappati da un dispositivo automatico, utilizzando il fenomeno pseudopupil e il meccanismo pupillare delle cellule fotorecettori.

Creazione automatica di grafici dello spazio visivo degli occhi composti di Housefly

Descriviamo qui i metodi per indurre e analizzare il rimodellamento olfattivo dipendente dall'esperienza dei glomeruli sinaptici del lobo antennale nel cervello giovanile di Drosophila .

Rimodellamento dipendente dall'esperienza del cervello giovanile, neurone sensoriale olfattivo, connettività sinaptica in un periodo critico della prima infanzia

Scopri tecniche di microscopia a luce ed elettronica per studiare l'anatomia del sistema visivo delle formiche. Questi metodi permettono di ottenere informazioni dettagliate sulla morfologia oculare e stimare parametri visivi.

Tecniche per lo studio dell'anatomia del sistema visivo Ant

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