Name: Analisi automatizzata di andatura in topi con lesione da costrizione cronica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Scopri l'analisi automatizzata dell'andatura per valutare l'allodinia meccanica in topi con lesione da costrizione cronica. Questo metodo sensibile permette di studiare la funzione sensoriale dopo lesione del nervo periferico.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questa ricerca è stata sostenuta da Chungnam National University, Korea Institute di medicina orientale (KIOM) e una sovvenzione della Corea salute tecnologia R &#38; D progetto attraverso Corea salute industria Development Institute (KHIDI), finanziato dal Ministero della salute &#38; Benessere, Repubblica di Corea (concessione numero: HI15C0007).

tutti gli esperimenti sono stati condotti in conformità con le linee guida etiche dell'associazione internazionale per lo studio del dolore e sono stati approvati dal comitato di uso e cura degli animali istituzionale presso l'Università nazionale di Chungnam ( Daejeon, Corea del Sud).
 1. induzione di CCI sul nervo sciatico <ol><li>topi ICR maschii di casa pesa 20-25 g sotto un ciclo luce/buio di 12 h a temperatura ambiente controllata (mantenuta a 20-25 ° C) e umidità (40-60%), con libero accesso al cibo e acqua. Consentire un periodo di acclimatazione per topi in camera cura degli animali di almeno 1 settimana prima dell'intervento chirurgico.
	<ol><li>Durante l'alloggiamento, osservare l'aspetto e il comportamento dei topi e non utilizzare topi risultati anormali attività locomotrice. 
		Nota: Un giorno prima dell'intervento CCI, misurare la sensibilità meccanica della zampa posteriore applicando filamenti di von Frey ed eseguire l'analisi di andatura automatizzati per ottenere valori basali normali. Quindi, assegnare casualmente topi di controllo e nei gruppi sperimentali.</li>
	</ol></li> <li>Il giorno dell'intervento, anestetizzare topi iniettando 2,2,2-tribromoethanol (250 mg/kg, intraperitoneale (IP)). 
	Nota: Indossare dispositivi di protezione individuale come camice chirurgico, guanti e maschera.
	<ol><li>Pesare 2,5 g di 2,2,2-tribromoethanol e aggiungere 2-metil-2-buthanol al volume finale di 5 mL. Mantenere la soluzione lontano dalla luce (ad esempio, utilizzare un contenitore scuro o avvolgere in un foglio).</li>
		<li>Attendere che i reagenti per sciogliere completamente da riscaldamento a 40 ° C e mescolare per 10-30 min.</li>
		<li>Aggiungere acqua distillata fino al volume finale di 200 mL e mescolare fino a quando mescolati bene.</li>
		<li>Conservare le aliquote a 4 ° C e tenere all'oscuro. Dopo due settimane, l'anestetico deve essere sostituito con nuove aliquote.</li>
		<li>Iniettare un volume di 20 µ l per peso corporeo di 1 g. Ad esempio, se il peso del corpo del mouse 25g, dare 500 µ l di soluzione. La durata tipica di questa anestesia è 1 h. 
		Nota: Questa soluzione diventa tossica quando esposto alla luce e/o calore quindi state attenti a evitare l'esposizione alla luce e al calore. Una route di iniezione IP è altamente raccomandata.</li>
	</ol></li> <li>Quando il mouse cade in anestesia profonda, metterla sul tavolo operatorio con il lato dorsale alto (cioè, posizione prona) e sterilizzare l'area metà coscia esterna del lato destro con un tampone di alcool al 70%. 
	Nota: Confermare l'anestesia profonda controllando la mancanza di risposta a pizzicare o pressione stimolo sulla zampe posteriori o coda.</li>
	<li>Indurre il CCI sul nervo sciatico destro del mouse.
	<ol><li>Fare un'incisione sulla pelle intorno alla zona di metà coscia di 1.0-1.5 cm di lunghezza con una lama per bisturi.</li>
		<li>Senza mezzi termini sezionare i muscoli della coscia con il micro-zanzara pinza emostatica per esporre il nervo sciatico.</li>
		<li>Legare il nervo sciatico esposto 3 volte con intervalli di 1.0-1.5 mm utilizzando una sutura in catgut cromico 4-0. 
		Nota: Assicurarsi di legature sciolti legando fuori il nervo sciatico fino a lieve agitazione sulla zampa posteriore ipsilateral. Il gruppo sham dei topi ha ricevuto la stessa apertura chirurgica in condizioni simili tranne senza legatura del nervo.</li>
	</ol></li> <li>Chiudere l'apertura chirurgica con 3-4 i suturare interrotti semplici usando la seta di 5-0 e sterilizzare con povidone iodio per la disinfezione della zona esterna della chirurgia.</li>
	<li>Dopo l'intervento chirurgico, posizionare il mouse in una gabbia pulita su un rilievo di riscaldamento. Quando gli animali vengono recuperati dall'anestesia, restituirli alla loro gabbia casa. 
	Nota: In questo studio, gli antibiotici non sono stati usati. CCI + GBP gruppo ricevuto IP gabapentin (GBP) ad una dose di 50 mg/kg una volta al giorno come controllo positivo.</li>
</ol> 2. Misurazione di allodinia meccanica (Test di von Frey) Nota: valutare la frequenza della risposta agli stimoli meccanici ritiro utilizzando 1 g di filamento di von Frey sulla superficie plantare della zampa posteriore ipsilateral.
<ol><li>Su ogni giorno di prova, portare i topi in camera test comportamentali e acclimatare i topi nella propria gabbia a casa per almeno 30 minuti prima del test. 
	Nota: Indossare dispositivi di protezione individuale come camice chirurgico, guanti e maschera.</li>
	<li>Mettere il mouse in una scatola trasparente acrilico al piano di maglia metallica e acclimatazione il mouse per 30 min.</li>
	<li>Applicare delicatamente 1 g di filamento di von Frey alla superficie plantare della zampa posteriore, fino a quando il filamento piega.</li>
	<li>Stimolazione filamento applica a ipsilateral hind zampa 10 volte con intervalli di almeno 10 s e registrare il risultato. 
	Nota: In questo studio, il numero di risposte di ritiro della zampa da 10 prove è indicato come percentuale della frequenza di ritiro della zampa (PWF, %). Il test di von Frey è stato effettuato ogni due giorni dopo l'intervento chirurgico CCI.</li>
</ol> 3. Esecuzione di analisi di andatura automatizzato Nota: il sistema di analisi di andatura Visualizza ogni stampa zampa mentre l'animale sta camminando e analizza automaticamente i vari parametri di andatura, tali come stampa, della zampa zampa intensità, lunghezza della falcata, posizione fase, sequenza di passi, swing, swing velocità, ecc In questo studio, abbiamo dimostrato che cambiare area di stampa della zampa e singola posizione dopo aver convertito i dati in percentuale tra controlaterale sinistra contro zampa destra posteriore ipsilateral. Così, un risultato del 50% indica che la dimensione della stampa zampa e la durata della zampa zona a contatto con la terra, tra i lati destro e sinistro sono gli stessi. Inoltre, valori di dati inferiori si avvicina 0% indicano che la dimensione e la durata del contatto sono diminuiti nella zampa posteriore ipsilaterale rispetto al lato controlaterale (vedi pannello B della Figura 2 e Figura 3).
<ol><li>Per acclimatazione, tenere i topi all'interno del dispositivo di analisi di andatura per 10 minuti una volta al giorno iniziando 5 giorni prima dell'intervento CCI. 
	Nota: Prova di analisi di andatura tra cui acclimatazione deve essere eseguita al buio.</li>
	<li>Portare i topi per la camera di prova per l'analisi di andatura e ambientarsi nella loro gabbia a casa per almeno 30 minuti prima del test.
	<ol><li>Nella scheda di impostazione del menu del programma, impostare il &#34; lunghezza passerella &#34; a 30 cm e insieme la &#34; corsa durata massima &#34; a 5 s e il &#34; corsa variazione massima &#34; al 50%.</li>
		<li>Selezionare una telecamera registrata dal &#39; installazione &#39; scheda del &#39; programma &#39; menu.</li>
		<li>Selezionare &#34; aprire acquisizione &#34; dalla &#39; acquisire &#39; scheda del &#39; programma &#39; menu.</li>
		<li>Dopo il messaggio di stato, fare clic il &#39; sfondo a scatto &#39; pulsante per scattare una foto di sfondo della passerella vuota (cioè, spazio in bianco).</li>
	</ol></li> <li>Scegliere la &#39; Avvia acquisizione &#39; pulsante e posizionare un mouse sulla passerella; la registrazione si avvia automaticamente in base al movimento del mouse. 
	Nota: Quando il mouse entra chiaramente attraversare il passaggio pedonale, il programma classifica automaticamente questa mossa come &#34; Compliant eseguire &#34; con un'icona verde. Se il software non è riuscito a rilevare la stampa del piede, lo sperimentatore verrà visualizzata un'icona rossa e dovrà ripetere la registrazione. Almeno cinque piste compatibile con successo sono necessari per l'analisi.</li>
	<li>Dopo il test, selezionare &#39; classificare corre &#39; dalla scheda di acquisizione della &#39; programma &#39; menu.</li>
	<li>Selezionare le esecuzioni per analisi e clicca la &#39; auto classificare &#39; pulsante. 
	Nota: Dopo la classificazione, tutti i parametri di statistica vengono salvati automaticamente e lo sperimentatore può trovare i risultati cliccando &#34; Vista eseguire statistiche &#34; dal menu Analizza.</li>
</ol>

<ol><li>Loeser, J. D., Treede, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Kyoto+protocol+of+IASP+Basic+Pain+Terminology%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">The Kyoto protocol of IASP Basic Pain Terminology.</a> Pain. 137 (3), 473-477 (2008).</li>
<li>Colloca, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Dis+Primers%22%5BJournal%5D)">Neuropathic pain.</a> Nat Rev Dis Primers. 3, 17002(2017).</li>
<li>Vranken, J. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20021340">Mechanisms and treatment of neuropathic pain.</a> Cent Nerv Syst Agents Med Chem. 9 (1), 71-78 (2009).</li>
<li>DeLeo, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+neuropathic+pain+model%3A+sciatic+cryoneurolysis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of a neuropathic pain model: sciatic cryoneurolysis in the rat.</a> Pain. 56 (1), 9-16 (1994).</li>
<li>Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+for+peripheral+neuropathy+produced+by+segmental+spinal+nerve+ligation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat.</a> Pain. 50 (3), 355-363 (1992).</li>
<li>Seltzer, Z., Dubner, R., Shir, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+behavioral+model+of+neuropathic+pain+disorders+produced+in+rats+by+partial+sciatic+nerve+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A novel behavioral model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury.</a> Pain. 43 (2), 205-218 (1990).</li>
<li>Bennett, G. J., Xie, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peripheral+mononeuropathy+in+rat+that+produces+disorders+of+pain+sensation+like+those+seen+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man.</a> Pain. 33 (1), 87-107 (1988).</li>
<li>Dixon, W. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7387124">Efficient analysis of experimental observations.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 20, 441-462 (1980).</li>
<li>Bonin, R. P., Bories, C., De Koninck, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+up-down+method+%28SUDO%29+for+measuring+mechanical+nociception+in+rodents+using+von+Frey+filaments%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">A simplified up-down method (SUDO) for measuring mechanical nociception in rodents using von Frey filaments.</a> Mol Pain. 10, 26(2014).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J Neurosci Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Chen, H., Du, J., Zhang, Y., Barnes, K., Jia, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+a+Reliable+Gait+Evaluation+Method+for+Rodent+Studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishing a Reliable Gait Evaluation Method for Rodent Studies.</a> J Neurosci Methods. , (2017).</li>
<li>Kang, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinociceptive+Profile+of+Levo-tetrahydropalmatine+in+Acute+and+Chronic+Pain+Mice+Models%3A+Role+of+spinal+sigma-1+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antinociceptive Profile of Levo-tetrahydropalmatine in Acute and Chronic Pain Mice Models: Role of spinal sigma-1 receptor.</a> Sci Rep. 6, 37850(2016).</li>
<li>Huehnchen, P., Boehmerle, W., Endres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+paclitaxel+induced+sensory+polyneuropathy+with+%26%2334%3BCatwalk%26%2334%3B+automated+gait+analysis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Assessment of paclitaxel induced sensory polyneuropathy with &#34;Catwalk&#34; automated gait analysis in mice.</a> PLoS One. 8 (10), e76772(2013).</li>
<li>Vrinten, D. H., Hamers, F. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%27CatWalk%27+automated+quantitative+gait+analysis+as+a+novel+method+to+assess+mechanical+allodynia+in+the+rat%3B+a+comparison+with+von+Frey+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">'CatWalk' automated quantitative gait analysis as a novel method to assess mechanical allodynia in the rat; a comparison with von Frey testing.</a> Pain. 102 (1-2), 203-209 (2003).</li>
<li>Martinov, T., Mack, M., Sykes, A., Chatterjea, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+changes+in+tactile+sensitivity+in+the+hind+paw+of+mice+using+an+electronic+von+Frey+apparatus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Measuring changes in tactile sensitivity in the hind paw of mice using an electronic von Frey apparatus.</a> J Vis Exp. (82), e51212(2013).</li>
<li>Ferland, C. E., Laverty, S., Beaudry, F., Vachon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gait+analysis+and+pain+response+of+two+rodent+models+of+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Gait analysis and pain response of two rodent models of osteoarthritis.</a> Pharmacol Biochem Behav. 97 (3), 603-610 (2011).</li>
<li>Mogil, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypolocomotion%2C+asymmetrically+directed+behaviors+%28licking%2C+lifting%2C+flinching%2C+and+shaking%29+and+dynamic+weight+bearing+%28gait%29+changes+are+not+measures+of+neuropathic+pain+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">Hypolocomotion, asymmetrically directed behaviors (licking, lifting, flinching, and shaking) and dynamic weight bearing (gait) changes are not measures of neuropathic pain in mice.</a> Mol Pain. 6, 34(2010).</li>
<li>Ferreira-Gomes, J., Adaes, S., Castro-Lopes, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+movement-evoked+pain+in+osteoarthritis+by+the+knee-bend+and+CatWalk+tests%3A+a+clinically+relevant+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pain%22%5BJournal%5D)">Assessment of movement-evoked pain in osteoarthritis by the knee-bend and CatWalk tests: a clinically relevant study.</a> J Pain. 9 (10), 945-954 (2008).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Attualmente, la misura di allodinia meccanica utilizzando filamenti di von Frey è il più usato metodo in modelli animali di dolore per dimostrare ipersensibilità tattile. Come modelli animali di dolore neuropatico hanno continuato ad essere sviluppato, la metodologia di valutazione per la funzione sensitiva è stata anche migliorata8,9,10,15. In tali rapporti, è stato suggerito che queste modifi...

Alterazioni patologiche del sistema nervoso indotto da disfunzione metabolica, infiammazione, infezione, trauma, ischemia, o malattia autoimmune occasionalmente provocare dolore neuropatico, che è definito come un dolore derivanti come conseguenza diretta di una lesione o malattia che interessano il sistema somatosensoriale1. Il dolore neuropatico è solito insopportabile e purtroppo, analgesici convenzionali generalmente non producono sufficiente dolore sollievo2. Delle principali caratteristiche del dolore neuropatico contiene spontanei ed evocato da stimolazione dolori (cioè, allodinia e iperalgesia). Allodynia è una risposta nocicettiva che si verifica a stimoli normalmente non doloroso, come tocco leggero o stimolazione calda. Iperalgesia indica una risposta avanzata dolore a stimoli nocivi di meccanica e/o termica3. Anche se questi due sintomi sia criticamente compromettere la qualità della vita del paziente, allodinia meccanica evocata dalla stimolazione tattile delicata è il sintomo più aggravante perché contatto soffice è difficile da evitare nella vita quotidiana.
Per studiare il meccanismo sottostante e nuovi analgesici per il trattamento del dolore neuropatico, la misura precisa della risposta dolore è essenziale. Numerosi modelli animali di dolore neuropatico hanno sviluppato risposte nocicettive su hind zampa zona a causa della sua elevata accessibilità4,5,6,7. Così, la maggior parte delle valutazioni di risposta di dolore sono stata effettuata sulla superficie plantare o dorsale della zampa posteriore mediante l'applicazione di stimoli meccanici utilizzando strumenti speciali, come filamenti di von Frey. Uno del metodo più frequentemente usato è il su e giù metodo descritto da Dixon8 e la successiva modifica versioni9,10. Tuttavia, gli sperimentatori molto qualificati, esperti sono necessari per eseguire il test di von Frey e i risultati possono essere soggettivi.
Il sistema di analisi automatizzata di andatura può indagare disturbi neurologici e neuromuscolari misurando vari parametri di camminare liberamente commoventi roditori. In una varietà di modelli animali di lesione del nervo, il grado di nocicezione e l'effetto antinocicettivo di parecchi trattamenti può essere valutati senza l'aggiunta di un dolore stimolazione11,12,13, 14. questo sistema di analisi in grado di rilevare i parametri statici e dinamici di andatura, come: zampa stampa area (area di stampa completa zampa che entra in contatto con il pavimento), paw intensità (l'intensità media della zona come contattare zampa), (la lunghezza della falcata atteggiamento di distanza tra successivi posizionamenti della zampa stessa), fase (la durata del contatto con il terreno per una sola zampa posteriore), sequenza di passi (l'ordine in cui i quattro zampe sono collocati al piano), (la durata della fase dinamica) e velocità (calcolata di rotazione dalla lunghezza della falcata swing durata ed espressi in pixel al secondo). Questo documento viene illustrato l'utilizzo di un sistema di analisi e fornisce un breve confronto dei dati con il test di von Frey utilizzando topi costrizione cronica lesioni (CCI).

<table><tbody><tr><td>0,9% soluzione salina</td><td>JW Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td>veicolo per farmaci</td></tr><tr><td>siringa da 1 ml</td><td>BD Plastipak</td><td>300013</td><td>Dispositivo di iniezione</td></tr><tr><td>2, 2, 2-tribromoetanolo (purezza 97%)</td><td>Sigma</td><td>T48402</td><td>Anestetico</td></tr><tr><td>2-metil-2-butanolo (purezza 99%)</td><td>Sigma</td><td>152463</td><td>Solvente per passerella 2, 2, 2-tribromoetanolo</td></tr><tr><td>Sistema automatizzato di analisi dell'andatura</td><td>Noldus</td><td>N/A</td><td>Software di analisi automatica dell'andatura aniaml</td></tr><tr><td>Catgut cromico (spessore 4-0)</td> <td>AILEE</td><td>C442</td><td>Legatura per fare lesioni da costrizione cronica sul nervo sciatico</td></tr><tr><td>Gabapentin</td><td>Sigma</td><td>Y0001280</td><td>Analgeisc, usato come farmaco di controllo positivo in questo studio</td></tr><tr><td>Graefe Forcipe</td><td>FST</td><td>11051-10</td><td>Cuscinetto</td></tr><tr><td>riscaldante</td> per strumenti chirurgici<td>DAESHIN ELECTRONICS</td><td>M-303AT</td><td>Regolazione della temperatura corporea</td></tr><tr><td>ICR Topo</td><td>Samtaco</td><td>N/A</td><td>Animale da esperimento</td></tr><tr><td>Mersilk (spessore 3-0)</td><td>ETHICON</td><td>W598H</td><td>Materiale di sutura per chiusura chirurgica della pelle</td></tr><tr><td>Micro-Mosquito</td><td>F.S.T</td><td>13010-12</td><td>Strumento chirurgico</td></tr><tr><td>Micro-forbici</td><td>F.S.T</td><td>14090-09</td><td>Chirurgico strumento</td></tr><tr><td>Porta aghi</td><td>F.S.T</td><td>12002-12</td><td>Strumento chirurgico</td></tr><tr><td>Povidone Iodio</td><td>Firson</td><td>N/A</td><td>Disinfettante per prevenire l'infezione dopo l'intervento chirurgico</td></tr><tr><td>Lama del bisturi</td><td>F.S.T</td><td>10010-00 (#10)</td><td>Strumento chirurgico per praticare un'incisione</td></tr><tr><td>Manico per bisturi</td><td>F.S.T</td><td>10003-12 (#3)</td><td>Strumento chirurgico per praticare un'incisione</td></tr><tr><td>Filamenti Von-Frey</td><td>North Coast</td><td>NC12775-99</td><td>Dispositivo di misurazione per testare la funzione sensoriale per la stimolazione meccanica</td></tr></tbody></table>

analisi automatizzata di andatura in topi con lesione da costrizione cronica

Automated Gait Analysis in Mice with Chronic Constriction Injury

Il test di von Frey è un metodo classico che è stato ampiamente utilizzato per esaminare la funzione sensoriale degli animali di dolore neuropatico. Tuttavia, essa ha alcuni svantaggi come dati soggettivi e il requisito di uno sperimentatore qualificato, con esperienza. Ad oggi, una varietà di modifiche hanno migliorato il metodo di von Frey, ma ha ancora alcuni limiti. I rapporti recenti hanno suggerito che l'analisi di andatura produce dati più accurati e oggettivi dagli animali neuropatici. Questo protocollo viene illustrato come eseguire l'analisi automatizzata di andatura per determinare il grado di dolore neuropatico nei topi. Dopo diversi giorni di acclimatazione, i topi sono stati permessi camminare liberamente il piano di vetro per illuminare le impronte. Allora, quantificazione delle impronte e andatura sono stati effettuati attraverso video clip con analisi automatica dei vari parametri a piedi, come zona di zampa stampa, swing tempo, angolo di zampa, ecc.
Lo scopo principale di questo studio è di descrivere la metodologia di analisi automatizzata di andatura e brevemente confrontarlo con i dati della prova sensoriale classica utilizzando filamento di von Frey.

Abbiamo eseguito il test di von Frey e analisi di andatura in topi CCI automatizzata fino a 10 giorni dopo l'intervento chirurgico CCI. Per l'analisi statistica, le misure ripetute di analisi della varianza (ANOVA) bidirezionale determina gli effetti complessivi e analisi post-hoc di Dunnett è stato effettuato per determinare il valore di p tra i gruppi sperimentali.
I risultati mostrati nella Figur...

La valutazione precisa della risposta di dolore in un modello animale neuropatico è fondamentale per studiare la fisiopatologia di malattie dolore e sviluppare nuovi analgesici. Presentiamo un metodo sensibile e oggettivo per determinare la funzione sensoriale del roditore posteriore della zampa di un sistema di analisi automatizzata di andatura.

Analisi automatizzata di andatura in topi con lesione da costrizione cronica

The von Frey test is a classical method that has been widely used to examine the sensory function of neuropathic pain animals. However, it has some ...

L'obiettivo generale di questa procedura è analizzare l'allodinia meccanica di topi con una lesione da costrizione cronica utilizzando un sistema automatizzato di analisi dell'andatura. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della ricerca sul dolore misurando la funzione sensoriale dopo una lesione dei nervi periferici nei roditori. Il vantaggio principale di questa tecnica è che il sistema di analisi è veloce e facile da usare e assegna automaticamente un punteggio a vari parametri dell'andatura.Per questo studio, i topi ICR maschi ospitano topi ICR di peso compreso tra 20 e 25 grammi in condizioni standard per almeno una settimana. Seleziona i topi in base al loro aspetto e comportamento. Non utilizzare topi che mostrano aspetti o comportamenti anormali come perdita di capelli, cicatrici e meno movimento.Utilizzando i topi selezionati, a partire da cinque giorni prima dell'intervento, raccogliere dati automatizzati sull'andatura su base giornaliera per avere una misurazione di base. Un giorno prima dell'intervento chirurgico eseguire il test di Von Frey con un filamento di un grammo su una zampa posteriore per ottenere una risposta di base. Bilancia le risposte tra il gruppo lesionato e il gruppo fittizio.In ogni giorno del test, portare i topi nella sala dei test comportamentali e acclimatare i topi nella propria gabbia domestica per almeno 30 minuti prima del test. A giorni alterni dopo l'intervento, misurare l'allodinia meccanica utilizzando un test di Von Frey. Metti il mouse in una scatola acrilica trasparente pulita su un pavimento di rete metallica e lascialo acclimatare alla scatola per 30 minuti.Quindi, applicare delicatamente un filamento di Von Frey da un grammo sulla superficie plantare della zampa posteriore omolaterale fino a quando il filamento non si piega. Ripetere questo schema di stimolazione 10 volte osservando i ritiri della zampa. Attendere almeno 10 secondi tra le stimolazioni.Registra il numero di prelievi e valuta la loro frequenza per l'analisi. A giorni alterni, esegui anche il test di analisi del cammino che deve essere fatto al buio. Ancora una volta, acclimata i topi alla stanza del test nella loro gabbia domestica per almeno 30 minuti.Per impostare il dispositivo di analisi dell'andatura, accedere al controllo software. Nella scheda di configurazione, impostare la lunghezza della passerella su 30 centimetri, impostare la durata massima della corsa su cinque secondi e impostare la variazione massima della corsa su 50%Quindi, selezionare una telecamera registrata dalla scheda di configurazione del menu del programma, quindi selezionare Apri acquisizione dalla scheda di acquisizione. Dopo il messaggio di stato, fai clic sul pulsante di scatto dello sfondo per scattare una foto di sfondo della passerella vuota.Ora posiziona un mouse sulla passerella e lascialo acclimatare al dispositivo per 10 minuti. L'apparecchio deve essere sempre lavato con alcool tra i topi. Dopo che il mouse si è acclimatato al dispositivo, fare clic sul pulsante di avvio dell'acquisizione.La registrazione si avvia automaticamente in base al movimento del mouse. Quando il mouse attraversa chiaramente la passerella, il programma classificherà automaticamente le corse conformi con un'icona verde. Se il software non riesce a rilevare le impronte, si accenderà un'icona rossa.Dopo aver raccolto almeno cinque esecuzioni conformi, selezionare l'opzione Classifica esecuzioni dalla scheda Acquisisci del menu del programma. Selezionare l'esecuzione da analizzare e fare clic sul pulsante di classificazione automatica. I risultati vengono salvati automaticamente.Per visualizzare i risultati, fare clic su visualizza statistiche di esecuzione dal menu Analizza. Il test di Von Frey e l'analisi automatizzata dell'andatura sono stati utilizzati per valutare i topi sottoposti all'intervento chirurgico CCI per 10 giorni consecutivi dopo l'intervento. La frequenza del ritiro della zampa è aumentata due giorni dopo l'intervento ed è stata sostenuta per 10 giorni.Questo effetto potrebbe essere significativamente ridotto con iniezioni giornaliere post-operatorie di gabapentin. Utilizzando il software di analisi dell'andatura, è stato possibile confrontare le dimensioni delle impronte delle zampe posteriori sinistra e destra. Normalmente le aree sono le stesse, che è indicato da un valore del 50%.L'intervento chirurgico CCI ha avuto un effetto significativo sull'impronta della zampa e tale effetto potrebbe essere significativamente ridotto utilizzando il gabapentin. Il software di analisi dell'andatura è anche in grado di rilevare il cambiamento di durata della singola posizione quando il mouse è in grado di sostenere il peso su una sola zampa posteriore. Questo viene calcolato e mostrato come variazione percentuale.Questa metrica mostra lo stesso effetto per la chirurgia CCI e i trattamenti con gabapentin. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare e analizzare i sistemi automatizzati di analisi dell'andatura per indagare la fisiopatologia del dolore neuropatico in modelli animali come la lesione da costrizione cronica.

automated-gait-analysis-in-mice-with-chronic-constriction-injury

Research

Ricerca

JoVE Journal

Neuroscience

Neuroscienze

Analisi cinematica di andatura nel piano sagittale produce informazioni molto precise sulle modalità di esecuzione del movimento. Descriviamo l'applicazione di queste tecniche per identificare i deficit di andatura per topi sottoposti a demielinizzazione autoimmune-mediata. Questi metodi possono anche essere usati per caratterizzare i deficit di andatura per altri modelli di mouse con alterata locomozione.

Piano sagittale cinematica Gait Analysis nei topi C57BL/6 sottoposti a MOG35-55 indotto encefalomielite Autoimmune Sperimentale

In questo studio, dimostriamo l'uso dell'analisi cinematica andatura basato su piano ventrale di imaging per monitorare i cambiamenti sottili nella coordinazione motoria, come pure la neurodegenerazione con l'avanzare dell'età in modelli murini (ad es., endophilin mutante linee del mouse).

Analisi del passo di età-dipendente motorie in topi con il Neurodegeneration

Presentato qui è un protocollo per raccogliere e analizzare la cinematica tridimensionale della locomozione quadrupede nei roditori per studi preclinici.

3D Kinematic Gait Analysis for Preclinical Studies in Rodents

L'analisi dell'impronta è un'alternativa a basso costo ai programmi di analisi dell'andatura digitalizzata per i ricercatori che quantificano le anomalie di movimento nei topi. A causa della sua velocità, semplicità e potenziale longitudinale, è ideale per la fenotipizzazione comportamentale dei modelli murini.

Analisi dell'andatura a basso costo per la fenotipizzazione comportamentale dei modelli murini delle malattie neuromuscolari

L'analisi automatizzata dell'andatura è uno strumento fattibile per valutare il recupero funzionale nei modelli di roditori di lesioni nervose periferiche e lesioni da contusione del midollo spinale. Mentre richiede una sola configurazione per valutare la funzione locomotoria in vari modelli sperimentali, è molto importante una meticolosa regolazione e formazione di prodotti duri e morbidi degli animali.

Analisi automatizzata dell'andatura per valutare il recupero funzionale nei roditori con lesione da contusione del nervo periferico o del midollo spinale

Forniamo un protocollo per la valutazione del comportamento motorio tramite una batteria di test comportamentale nei ratti dopo una lesione da schiacciamento del nervo sciatico.

Valutazione multifattoriale del comportamento motorio nei ratti dopo la lesione unilaterale da schiacciamento del nervo sciatico

Il presente protocollo descrive il tracciamento / valutazione del movimento tridimensionale per rappresentare l'alterazione del movimento dell'andatura dei ratti dopo l'esposizione a un ambiente di disuso simulato.

Comprensione completa dell'alterazione dell'andatura indotta dall'inattività nei roditori

Viene fornita una pipeline sperimentale per descrivere quantitativamente il modello locomotore dei topi che camminano liberamente utilizzando il toolbox MouseWalker (MW), che va dalle registrazioni video iniziali e dal tracciamento all'analisi post-quantificazione. Un modello di lesione da contusione del midollo spinale nei topi viene impiegato per dimostrare l'utilità del sistema MW.

Utilizzo di MouseWalker per quantificare la disfunzione locomotoria in un modello murino di lesione del midollo spinale

Questo protocollo stabilisce una pipeline di valutazione cinematica degli arti posteriori del ratto utilizzando un test su tapis roulant senza marker con auto-etichettatura multiarticolare guidata dal deep learning, che consente la quantificazione riproducibile del movimento.

Tracciamento sincrono multiarticolare basato su deep learning per la quantificazione oggettiva della cinematica locomotoria degli arti posteriori nei ratti

Abbiamo sviluppato un programma per computer per analizzare la morfologia neuronale. In combinazione con due strumenti source aperta esistente analisi, il nostro programma esegue l'analisi Sholl e determina il numero di neuriti, punti di ramificazione, e suggerimenti dei neuriti. Le analisi vengono eseguite in modo che i cambiamenti nella morfologia locale neurite può essere osservato.

Analisi automatizzata Sholl di Digitized morfologia neuronale a scale multiple

Scopri l'analisi automatizzata dell'andatura per valutare l'allodinia meccanica in topi con lesione da costrizione cronica. Questo metodo sensibile permette di studiare la funzione sensoriale dopo lesione del nervo periferico.

Analisi automatizzata di andatura in topi con lesione da costrizione cronica

Esplora altri video