Valutazione della risposta di Dictyostelium discoideum alla stimolazione meccanica acuta

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di esaminare l'attività di vari componenti della rete di trasduzione del segnale intracellulare a seguito di brevi perturbazioni meccaniche. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della migrazione cellulare, come ad esempio il modo in cui le cellule percepiscono e migrano direzionalmente verso diversi segnali ambientali, inclusi gli stimoli meccanici. Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente l'esame della risposta iniziale allo stimolo meccanico senza il contributo confondente della motilità o della polarità alla risposta.

Abbiamo avuto l'idea di questo metodo per la prima volta quando abbiamo testato la risposta delle cellule aderenti al chemioattrattivo che è stato somministrato con una leggera agitazione e abbiamo notato una robusta risposta delle cellule stimolate con il controllo del veicolo. Per iniziare, preparare Klebsiella aerogenes inoculando un piccolo numero di cellule da stock congelati in terreno HL5 senza antibiotici e incubare la coltura durante la notte. La crescita di Dictyostelium in presenza di batteri Klebsiella aerogenes ridurrà il numero di macropinosomi che miglioreranno la risposta delle cellule agli stimoli esterni.